Mencuci plate 2x sebelum menambah standar, sampel, dan
kontrol (kosong) pada wells
Menambah 100 μL standar/sampel pada tiap wells untuk 90
menit pada 370C
Menambah 100 μL Biotin-detection antibody pad tiap wells
untuk 60 menit pada 370C
Aspirate dan cuci 3x
Menambah 100 μL SABC pada tiap wells. Inkubasi 30 menit
pada 370C
Aspirate dan cuci 5x
Menambah 90 μL substrat TMB. Inkubasi 15-30 menit pada
370C
Menambah 50 μL larutan Stop.
Baca pada 450 nm
RINGKASAN FERRITIN ELISA Mencuci plate 2x sebelum menambah standar, sampel, dan kontrol (kosong) pada wells
Menambah 100 μL standar/sampel pada tiap wells untuk 90
menit pada 370C
Aspirate dan cuci 2x
Menambah 100 μL Biotin-detection antibody pad tiap wells
untuk 60 menit pada 370C
Aspirate dan cuci plate sebanyak 3x
Menambah 100 μL SABC pada tiap wells. Inkubasi 30 menit
pada 370C
Aspirate dan cuci plate sebanyak 5x
Menambah 90 μL substrat TMB. Inkubasi 15-30 menit pada
370C
Menambah 50 μL larutan Stop.
Baca pada 450 nm
Prosedur Pengujian IL-6 Sebelum menambahkan reagen ke wells, seimbangkan SABC dan substrat TMB setidaknya 30 menit pada suhu kamar (37 ° C). Ketika melarutkan sampel dan reagen, mereka harus dicampur merata. Disarankan untuk memplot kurva standar untuk setiap tes. 1) Tetapkan standar, sampel uji dan kontrol (nol) wells pada pre-coated pelat kemudian catat posisi mereka. Disarankan untuk mengukur setiap standar dan sampel dalam 2 ulangan. Cuci plate 2 kali sebelum menambahkan standar, sampel, dan kontrol (nol) wells. 2) Aliquot 0,1 ml of4000pg / ml, 2000pg / ml, 1000pg / ml, 500pg / ml, 250pg / ml, 125pg / ml, 62,5pg / ml, larutan standar ke dalam standar wells. 3) Tambahkan 0,1 ml Sampel / standar buffer pengencer ke dalam wells kontrol (nol) dengan baik. 4) Tambahkan 0,1 ml sampel diencerkan dengan benar (serum Rat, plasma, homogenat jaringan dan lainnya cairan biologis.) ke dalam sampel uji wells. 5) Tutup pelat dengan penutup dan inkubasi pada suhu 37 ° C selama 90 menit. 6) Lepaskan penutup dan buang isi plate, tepuk pelat pada filter penyerap kertas atau bahan penyerap lainnya. JANGAN membiarkan wells benar-benar kering. Jangan Cuci Plate! 7) Tambahkan 0,1 ml larutan Biotin-detection antibody ke dalam wells di atas (standar, contoh uji & zero wells). Tambahkan slarutan di bagian bawah setiap wells tanpa menyentuh dinding samping. 8) Tutup pelat dengan penutup dan inkubasi pada suhu 37 ° C selama 60 menit. 9) Lepaskan penutup, dan cuci plate 3 kali dengan pencuci. 10) Tambahkan 0,1 ml larutan SABC ke dalam setiap wells, tutup pelat dan inkubasi 37 ° C selama 30 menit. 11) Lepaskan penutup dan cuci plate 5 kali dengan buffer pencuci, dan setiap mencuci biarkan buffer pencuci berada di dalam wells selama 1-2 menit. 12) Tambahkan 90 μl substrat TMB ke dalam setiap wells, tutup plate dan inkubasi pada 37 ° C pada ruangan gelap dalam waktu 15-30 menit. Warna biru dapat dilihat di 3-4 wells pertama (dengan larutan standar IL-6 yang paling terkonsentrasi), wells lainnya tidak terlihat jelas warnanya. 13) Tambahkan 50 μl larutan Stop ke setiap wells dan aduk rata. Warna berubah menjadi kuning.. 14) Baca absorbansi OD pada 450 nm. Prosedur Pengujian Ferritin Sebelum menambahkan reagen ke wells, seimbangkan substrat TMB setidaknya 30 menit pada suhu kamar (37 ° C). Ketika melarutkan sampel dan reagen, mereka harus dicampur merata. Disarankan untuk memplot kurva standar untuk setiap tes. 1. Tetapkan standar, sampel uji dan kontrol (nol) wells pada pre-coated pelat kemudian catat posisi mereka. Disarankan untuk mengukur setiap standar dan sampel dalam 2 ulangan. Cuci plate 2 kali sebelum menambahkan standar, sampel, dan kontrol (nol) wells. 2. Aliquot 0,1 ml of 200pg / ml, 100pg / ml, 50pg / ml, 25pg / ml, 12.5pg / ml, 6.25pg / ml, 3.125pg / ml, larutan standar ke dalam standar wells. 3. Tambahkan 0,1 ml Sampel / larutan standar buffer ke dalam kontrol (nol) wells. 4. Tambahkan 0,1 ml sampel yang diencerkan dengan benar (Ratserum, plasma, homogenat jaringan dan lainnya cairan biologis) ke dalam sampel uji wells. 5. Tutup pelat dengan penutup dan inkubasi pada suhu 37 ° C selama 90 menit. 6. Lepaskan penutup dan buang isi plate dan cuci plate 2 kali dengan Buffer pencuci. JANGAN biarkan wells kering. 7. Tambahkan 0,1 ml Biotin-labeled antibody di atas wells (standar, uji contoh & zero wells). Tambahkan larutan di bagian bawah setiap wells tanpa menyentuh sisi samping wells.. 8. Tutup pelat dengan penutup dan inkubasi pada suhu 37 ° C selama 60 menit. 9. Lepaskan penutup, dan cuci plate3 kali dengan Buffer pencuci, dan biarkan buffer pencuci berada dalam wells selama 1 menit setiap kali pencucian. 10. Tambahkan 0,1 ml SABC ke setiap wells, tutup pelat dan inkubasi 37 ° C selama 30 menit. 11. Lepaskan penutup dan cuci plate 5 kali dengan Buffer pencuci, dan biarkan buffer pencuci berada di wells selama 1-2 menit setiap kali pencucian. 12. Tambahkan 90μl Substrat TMB ke dalam masing-masing wells dengan baik, tutup plate dan inkubasi pada 37 ° C pada ruangan gelap selama15-30 menit. Warna biru akan nampak di 3-4 wells pertama (dengan FE terkonsentrasi paling banyak solusi standar), wells lainnya mungkin tidak menampilkan warna yang jelas. 13. Tambahkan 50μl larutan Stop ke setiap wells dan aduk hingga merata. Warna berubah menjadi kuning. 14. Baca OD absorbansi di 450 nm dalam Pembaca Microplate segera setelah menambahkan larutan Stop.