Anda di halaman 1dari 6

RINGKASAN IL-6 ELISA

Mencuci plate 2x sebelum menambah standar, sampel, dan


kontrol (kosong) pada wells

Menambah 100 μL standar/sampel pada tiap wells untuk 90


menit pada 370C

Menambah 100 μL Biotin-detection antibody pad tiap wells


untuk 60 menit pada 370C

Aspirate dan cuci 3x

Menambah 100 μL SABC pada tiap wells. Inkubasi 30 menit


pada 370C

Aspirate dan cuci 5x

Menambah 90 μL substrat TMB. Inkubasi 15-30 menit pada


370C

Menambah 50 μL larutan Stop.

Baca pada 450 nm


RINGKASAN FERRITIN ELISA
Mencuci plate 2x sebelum menambah standar, sampel, dan
kontrol (kosong) pada wells

Menambah 100 μL standar/sampel pada tiap wells untuk 90


menit pada 370C

Aspirate dan cuci 2x

Menambah 100 μL Biotin-detection antibody pad tiap wells


untuk 60 menit pada 370C

Aspirate dan cuci plate sebanyak 3x

Menambah 100 μL SABC pada tiap wells. Inkubasi 30 menit


pada 370C

Aspirate dan cuci plate sebanyak 5x

Menambah 90 μL substrat TMB. Inkubasi 15-30 menit pada


370C

Menambah 50 μL larutan Stop.

Baca pada 450 nm


Prosedur Pengujian IL-6
Sebelum menambahkan reagen ke wells, seimbangkan SABC dan
substrat TMB setidaknya 30 menit pada suhu kamar (37 °
C). Ketika melarutkan sampel dan reagen, mereka harus dicampur
merata. Disarankan untuk memplot kurva standar untuk setiap tes.
1) Tetapkan standar, sampel uji dan kontrol (nol) wells pada
pre-coated pelat kemudian catat posisi mereka. Disarankan
untuk mengukur setiap standar dan sampel dalam 2
ulangan. Cuci plate 2 kali sebelum menambahkan standar,
sampel, dan kontrol (nol) wells.
2) Aliquot 0,1 ml of4000pg / ml, 2000pg / ml, 1000pg / ml,
500pg / ml, 250pg / ml, 125pg / ml, 62,5pg / ml, larutan
standar ke dalam standar wells.
3) Tambahkan 0,1 ml Sampel / standar buffer pengencer ke
dalam wells kontrol (nol) dengan baik.
4) Tambahkan 0,1 ml sampel diencerkan dengan benar (serum
Rat, plasma, homogenat jaringan dan lainnya cairan biologis.)
ke dalam sampel uji wells.
5) Tutup pelat dengan penutup dan inkubasi pada suhu 37 ° C
selama 90 menit.
6) Lepaskan penutup dan buang isi plate, tepuk pelat pada filter
penyerap kertas atau bahan penyerap lainnya. JANGAN
membiarkan wells benar-benar kering. Jangan Cuci Plate!
7) Tambahkan 0,1 ml larutan Biotin-detection antibody ke dalam
wells di atas (standar, contoh uji & zero wells). Tambahkan
slarutan di bagian bawah setiap wells tanpa menyentuh
dinding samping.
8) Tutup pelat dengan penutup dan inkubasi pada suhu 37 ° C
selama 60 menit.
9) Lepaskan penutup, dan cuci plate 3 kali dengan pencuci.
10) Tambahkan 0,1 ml larutan SABC ke dalam setiap wells,
tutup pelat dan inkubasi 37 ° C selama 30 menit.
11) Lepaskan penutup dan cuci plate 5 kali dengan buffer pencuci,
dan setiap mencuci biarkan buffer pencuci berada di dalam
wells selama 1-2 menit.
12) Tambahkan 90 μl substrat TMB ke dalam setiap wells, tutup
plate dan inkubasi pada 37 ° C pada ruangan gelap dalam
waktu 15-30 menit. Warna biru dapat dilihat di 3-4 wells
pertama (dengan larutan standar IL-6 yang paling
terkonsentrasi), wells lainnya tidak terlihat jelas warnanya.
13) Tambahkan 50 μl larutan Stop ke setiap wells dan aduk
rata. Warna berubah menjadi kuning..
14) Baca absorbansi OD pada 450 nm.
Prosedur Pengujian Ferritin
Sebelum menambahkan reagen ke wells, seimbangkan substrat TMB
setidaknya 30 menit pada suhu kamar (37 ° C). Ketika melarutkan
sampel dan reagen, mereka harus dicampur merata. Disarankan
untuk memplot kurva standar untuk setiap tes.
1. Tetapkan standar, sampel uji dan kontrol (nol) wells pada
pre-coated pelat kemudian catat posisi mereka. Disarankan untuk
mengukur setiap standar dan sampel dalam 2 ulangan. Cuci
plate 2 kali sebelum menambahkan standar, sampel, dan
kontrol (nol) wells.
2. Aliquot 0,1 ml of 200pg / ml, 100pg / ml, 50pg / ml, 25pg / ml,
12.5pg / ml, 6.25pg / ml, 3.125pg / ml, larutan standar ke dalam
standar wells.
3. Tambahkan 0,1 ml Sampel / larutan standar buffer ke dalam
kontrol (nol) wells.
4. Tambahkan 0,1 ml sampel yang diencerkan dengan benar
(Ratserum, plasma, homogenat jaringan dan lainnya cairan
biologis) ke dalam sampel uji wells.
5. Tutup pelat dengan penutup dan inkubasi pada suhu 37 ° C
selama 90 menit.
6. Lepaskan penutup dan buang isi plate dan cuci plate 2 kali
dengan Buffer pencuci. JANGAN biarkan wells kering.
7. Tambahkan 0,1 ml Biotin-labeled antibody di atas wells (standar,
uji contoh & zero wells). Tambahkan larutan di bagian bawah
setiap wells tanpa menyentuh sisi samping wells..
8. Tutup pelat dengan penutup dan inkubasi pada suhu 37 ° C
selama 60 menit.
9. Lepaskan penutup, dan cuci plate3 kali dengan Buffer pencuci,
dan biarkan buffer pencuci berada dalam wells selama 1 menit
setiap kali pencucian.
10. Tambahkan 0,1 ml SABC ke setiap wells, tutup pelat dan
inkubasi 37 ° C selama 30 menit.
11. Lepaskan penutup dan cuci plate 5 kali dengan Buffer pencuci,
dan biarkan buffer pencuci berada di wells selama 1-2 menit
setiap kali pencucian.
12. Tambahkan 90μl Substrat TMB ke dalam masing-masing wells
dengan baik, tutup plate dan inkubasi pada 37 ° C pada ruangan
gelap selama15-30 menit. Warna biru akan nampak di 3-4 wells
pertama (dengan FE terkonsentrasi paling banyak solusi standar),
wells lainnya mungkin tidak menampilkan warna yang jelas.
13. Tambahkan 50μl larutan Stop ke setiap wells dan aduk hingga
merata. Warna berubah menjadi kuning.
14. Baca OD absorbansi di 450 nm dalam Pembaca Microplate
segera setelah menambahkan larutan Stop.