DEPARTEMEN

No. : P-MB-001 Rev.00

QUALITY CONTROL
Mengganti :
Tgl Berlaku : 04 Januari 2015
PROSEDUR TETAP
Halaman : 1 dari 3
PENGUJIAN MPN
( Most Probable Number)
Coliform , Eschericia coli

Disusun Oleh: Diperiksa Oleh: Disetujui Oleh:

Drs. Bambang Rijanto, Apt.

Edy Purwanto Bakty Y, S.Farm.,Apt.
QA Manager
Supervisor QC Kabag QC

METODE Tabung Ganda

RUANG LINGKUP Prosedur ini digunakan untuk menetapkan MPN Coliform, identifikasi
E.coli dalam sample air untuk uji mikrobiologi di laboratorium PT.PIM
Pharmaceuticals dan PT.Helmigs Prima Sejahtera

PRINSIP Adanya bakteri Coliform , E. coli dalam sample air akan memfermentasi
lactosa sehingga terbentuk gas dalam media (dalam tabung durham).

BAHAN LB (Lactosa Broth)

BGLB (Brilliant Green Lactose bile Broth)
EMB (Eosin Methyline Blue)

ALAT Tabung reaksi

Tabung durham
Pipet ukur 1 ml, 10 ml
Ose bulat
LAF (Laminar Air Flow)

PROSEDUR 1. Tes Perkiraan (Presumptive Test)

a. Disiapkan 2 tabung reaksi masing – masing berisi 10 ml media LB
, susun dalam rak tabung.
b. Disiapkan pula 5 tabung reaksi masing – masing berisi 5 ml media
LB III .
c. Tabung diberi penandaan.

Dilarang memperbanyak dokumen ini tanpa ijin tertulis dari QA Manager

 PROSEDUR TETAP

PROSEDUR PENGUJIAN MPN ( Most Probable Number)

Coliform , Eschericia coli

No. Dokumen / Revisi : P-MB-001 /00 Halaman 2 dari 3

d. Dengan pipet steril ambil sample yang telah disiapkan

* 0,1 ml kedalam tabung 1.
* 1 ml kedalam tabung 2.
* masing – masing 10 ml kedalam tabung 3 s/d tabung 7.
e. Larutan dalam tabung tersebut dihomogenkan dengan cara digoyang
atau diputar.
f. Diinkubasi pada temperatur 35-37°C selama 24 jam.

Keterangan :
Jika dalam waktu 24 jam tidak terbentuk gas, inkubasi lagi selama 24
jam dengan suhu 35-37°C. Diamati adanya gas.
g. Semua tabung yang menunjukkan fermentasi lactosa / tes positif
(adanya gas dalam tabung durham) dicatat kemudian dilanjutkan ke
Tes Penegasan.

2. Tes Penegasan (Confirmative Test)

a. Dari tiap-tiap tabung yang positif dari tes perkiraan,
dipindahkan 1-2 ose ke dalam tabung yang berisi 10 ml BGLB.
Keterangan :
Satu tabung LB yang positif diinokulasikan ke satu tabung BGLB.
b. Diinkubasi 35-37°C selama 24 jam.
c. Diamati adanya gas dalam tabung durham.
Keterangan :
Jika dalam waktu 24 jam tidak terbentuk gas, inkubasi lagi selama 24
jam dengan suhu 35-37°C. Diamati adanya gas.
d. Tabung yang menunjukkan gas positif dicatat dan dibaca
pada tabel MPN.

3. Identifikasi E.coli
a. Dari tabung yang menunjukkan tes positif pada tes penegasan
( BGLB ) , dipilih 1 atau 2 tabung BGLB dengan gas terbesar.
b. Diambil 1 atau 2 mata ose dan diinokulasikan ke media EMB.
c. Diinkubasi 35-37°C selama 24 jam.
Diamati koloni yang tumbuh. Ciri-ciri koloni E. coli adalah bulat,
besar, cembung, tepi koloni rata, warna hitam dan permukaan
berwarna metalicin (kilap logam).

PERHITUNGAN MPN : lihat tabel MPN.

Dilarang memperbanyak dokumen ini tanpa ijin tertulis dari QA Manager

 PROSEDUR TETAP

PROSEDUR PENGUJIAN MPN ( Most Probable Number)

Coliform , Eschericia coli

No. Dokumen / Revisi : P-MB-001 /00 Halaman 3 dari 3

TABEL MPN

Ragam : 0,1 ml x 1 ; 1 ml x 1 ; 10 ml x 5

VOLUME
0,1 1 10
1 0
0 1
1 1
0 0
1 0
0 1
1 1
0 0
1 0
0 1
1 1
0 0
1 0
0 1
1 1
0 0
1 0
0 1
1 1
0 0
1 0
0 1
1 1
MPN/100 ml
0 2
0 2
0 1
1 2,2
1 4,4
1 4,4
1 6,7
2 5
2 7,5
2 7,6
2 10
3 8,8
3 12
3 12
3 16
4 15
4 20
4 21
4 27
5 38
5 96
5 240
5 > 240

Dilarang memperbanyak dokumen ini tanpa ijin tertulis dari QA Manager