Replikasi dna itu rumit , membutuhkan peran serta sejumlah besar protein .

Dna sintesis terus menerus pada untai keturunan yang diperpanjang pada keseluruhan 5 � � � 3 arah
, sedimentasi tetapi pada untai tumbuh di daerah secara keseluruhan 3 � � � 5 arah .
Rantai dna baru yang diprakarsai oleh pendek primer rna disintesis oleh primase dna .
Dna itu sintesis catalyzed oleh enzim yang disebut dna polymerases .
Semua dna polymerases membutuhkan sebuah untai primer , yang panjang , dan satu untai template ,
yang telah disalin .Semua dna polymerases yang tidak memiliki syarat untuk secara bebas 3 -oh pada
untai primer , dan semua dna sintesis yang terjadi di 5 3 ke arah .

Para 3 � � � 5 exonuclease kegiatan polymerases proofread dna lahir seperti helai mereka adalah
robot , menghapus mispaired salah satu nukleotida pada 3 termini dari untai primer .
Enzim dna-binding dan protein yang terlibat dalam replikasi merakit kedalam sebuah pada setiap
replisome replikasi garpu dan bertindak dalam konser sebagai garpu bergerak]]

Macam2 replikasi ada 3,

Asal mula replikasi, prokariot 1 replicon, eukariot byk replicon
Replikasi 2 arah,
Replikasi pd prokariot
Sintesis dna arah 5 -> 3
DNA ligase mengkatalisis penutupan kovalen dari celah di DNA.
Energi yang dibutuhkan untuk membentuk hubungan ester disediakan oleh salah adenosin trifosfat
(ATP) atau nicotinamide-adenine dinukleotida (NAD), tergantung pada spesies.
Most of the information about DNA replication has resulted from studies of E. coli and some of its
viruses. Less information is available about DNA replication in eukaryotic organisms. However,
enough information is available to conclude that most aspects of DNA replication are similar in
prokaryotes and eukaryotes, including humans.
RNA primers and Okazaki fragments are shorter in eukaryotes than in prokaryotes, but the leading and
lagging strands replicate by continuous and discontinuous mechanisms, respectively, in eukaryotes just
as in prokaryotes. Nevertheless, a few aspects of eukaryotic DNA replication are unique to these
structurally more complex species. For example, DNA synthesis takes place within a small portion of
the cell cycle in eukaryotes, not continuously as in prokaryotes.
Sebagian besar informasi tentang replikasi DNA telah dihasilkan dari studi E. coli dan beberapa virus
nya. sedikit informasi yang tersedia tentang replikasi DNA di eukariotik
organisme. Namun, informasi yang cukup tersedia untuk menyimpulkan bahwa sebagian besar aspek
replikasi DNA serupa di prokariota dan eukariota, termasuk manusia.
RNA primer dan fragmen Okazaki lebih pendek pada eukariota daripada di prokariota, tetapi helai the
leading and lagging mereplikasi oleh mekanisme terus menerus dan terputus-putus, masing-masing, di
eukariota seperti di prokariota. Namun demikian, beberapa aspek dari replikasi DNA eukariotik yang
unik untuk spesies struktural lebih kompleks. Misalnya, sintesis DNA terjadi dalam sebagian kecil dari
siklus sel pada eukariota, tidak terus menerus seperti pada prokariota.

The giant DNA molecules present in eukaryotic chromosomes would take much too long to replicate
if each chromosome contained a single origin. Thus, eukaryotic chromosomes contain multiple origins
of replication. Rather than using two catalytic complexes of one DNA polymerase to replicate the
leading and lagging strands at each replication fork, eukaryotic organisms utilize two or more different
polymerases.

Molekul DNA hadir di kromosom eukariotik akan mengambil terlalu lama untuk meniru jika setiap
kromosom yang terkandung asal tunggal. Dengan demikian, kromosom eukariotik berisi beberapa asal
replikasi. Daripada menggunakan dua kompleks katalitik dari satu polimerase DNA untuk mereplikasi
helai terkemuka dan tertinggal pada setiap garpu replikasi, organisme eukariotik memanfaatkan dua
atau lebih polimerase.
As we discussed in Chapter 9, eukaryotic DNA is packaged in histone-containing structures called
nucleosomes. Do these nucleosomes impede the movement of replication forks? If not, how does a
replisome move past a nucleosome? Is the nucleosome completely or partially disassembled, or does
the fork somehow slide past the nucleosome as the replisome duplicates the DNA molecule while it is
still present on the surface of the nucleosome? Lastly, eukaryotic chromosomes contain linear DNA
molecules, and the discontinuous replication of the ends of linear DNA molecules creates a special
problem. We will address these aspects of chromatin replication in eukaryotes in the final sections of
this chapter.
Sebagaimana kita bahas pada Bab 9, DNA eukariotik dikemas dalam struktur histone yang
mengandung disebut nukleosom. Apakah nukleosom ini menghambat pergerakan garpu replikasi?
Jika tidak, bagaimana replisome sebuah bergerak melewati nukleosom? Adalah nukleosom
sepenuhnya atau sebagian dibongkar, atau apakah garpu entah bagaimana geser masa lalu nukleosom
sebagai replisome yang duplikat molekul DNA sementara masih hadir di
permukaan nukleosom itu? Terakhir, kromosom eukariotik mengandung molekul DNA linier, dan
replikasi terputus dari ujung molekul DNA linier menciptakan masalah khusus. Kami akan membahas
aspek-aspek replikasi kromatin pada eukariota di bagian akhir dari bab ini.

Siklus sel
When bacteria are growing on rich media, DNA replication occurs nonstop throughout the cell cycle.
However, in eukaryotes, DNA replication is restricted to the S phase (for synthesis; Chapter 2). Recall
that a normal eukaryotic cell cycle consists of G1 phase (immediately following the completion of
mitosis; G for gap), S phase, G2 phase (preparation for mitosis), and M phase (mitosis) (see Chapter 2
for details). In rapidly dividing embryonic cells, G1 and G2 are very short or nonexistent. In all cells,
decisions to continue on through the cell cycle occur at two points: (1) entry into S phase and (2) entry
into mitosis. These checkpoints help to ensure that the DNA replicates once and only once during each
cell division.
Ketika bakteri tumbuh pada media yang kaya, replikasi DNA terjadi tanpa henti sepanjang siklus sel.
Namun, pada eukariota, replikasi DNA terbatas pada fase S (untuk sintesis; Bab 2). Ingatlah bahwa
siklus sel eukariotik normal terdiri dari fase G1 (segera setelah selesainya mitosis; G untuk gap), S fase,
fase G2 (persiapan untuk mitosis), dan fase M (mitosis) (lihat Bab 2 untuk rincian). Dalam cepat
membagi sel embrio, G1 dan G2 sangat pendek atau tidak ada. Di semua sel, keputusan untuk
melanjutkan melalui siklus sel terjadi pada dua poin: (1) masuk ke fase S dan (2) masuk ke mitosis.
pemeriksaan ini membantu untuk memastikan bahwa DNA bereplikasi sekali dan hanya sekali selama
setiap pembelahan sel.

MULTIPLE REPLICONS PER CHROMOSOME (Replikon GANDA PER KROMOSOM)

The giant DNA molecules in the largest chromosomes of Drosophila melanogaster contain about 6.5
107 nucleotide pairs. The rate of DNA replication in Drosophila is about 2600 nucleotide pairs per
minute at 25C. A single replication fork would therefore take about 17.5 days to replicate one of these
giant DNA molecules. With two replication forks moving bidirectionally from a central origin, such a
DNA molecule could be replicated in just over 8.5 days. Given that the chromosomes of Drosophila
embryos replicate within 3 to 4 minutes and the nuclei divide once every 9 to 10 minutes during the
early cleavage divisions, it is clear that each giant DNA molecule must contain many origins of
replication. Indeed, the complete replication of the DNA of the largest Drosophila chromosome within
3.5 minutes would require over 7000 replication forks distributed at equal intervals along the molecule.
Thus, multiple origins of replication are required to allow the very large DNA molecules in eukaryotic
chromosomes to replicate within the observed cell division times.
Molekul-molekul DNA raksasa di kromosom terbesar dari Drosophila melanogaster
mengandung sekitar 6.5? 107 pasang nukleotida. Tingkat replikasi DNA di Drosophila adalah sekitar
2.600 pasang nukleotida per menit pada 25? C. Garpu replikasi tunggal karena itu akan memakan
waktu sekitar 17,5 hari untuk meniru salah satu molekul DNA raksasa ini. Dengan dua garpu replikasi
bergerak dua arah dari asal pusat, seperti molekul DNA bisa direplikasi hanya dalam waktu 8,5 hari.
Mengingat bahwa kromosom embrio Drosophila mereplikasi dalam waktu 3 sampai 4 menit dan inti
membagi setiap 9-10 menit sekali selama divisi pembelahan awal, jelas bahwa setiap molekul DNA
raksasa harus mengandung banyak asal replikasi. Memang, replikasi lengkap dari DNA dari kromosom
Drosophila terbesar dalam waktu 3,5 menit akan membutuhkan lebih dari 7000 garpu replikasi
didistribusikan pada interval yang sama di sepanjang molekul. Dengan demikian, asal-usul beberapa
replikasi diperlukan untuk memungkinkan molekul DNA yang sangat besar dalam kromosom
eukariotik untuk meniru dalam diamati kali pembelahan sel.
The first evidence for multiple origins in eukaryotic chromosomes resulted from pulse-labeling
experiments with Chinese hamster cells growing in culture. In 1968, when Joel Huberman and Arthur
Riggs pulse-labeled cells with 3H-thymidine for a few minutes, extracted the DNA, and performed
autoradiographic analysis of the labeled DNA, they observed tandem arrays of exposed silver grains
(

Figure 10.31a). The simplest interpretation of their results is that individual macromolecules of DNA
contain multiple origins of replication. When the pulse-labeling period was followed by a short interval
of growth in nonradioactive medium (pulse-chase experiments), the tandem arrays contained central
regions of high-grain density with tails of decreasing grain density at both ends
(

Figure 10.31b). This result indicates that replication in eukaryotes is bidirectional just as it is in most
prokaryotes. The tails of decreasing grain density result from the gradual dilution of the intracellular
pools of 3H-thymidine by 1H-thymidine as the replication forks move bidirectionally from central
origins toward replication termini
(

Figure 10.31c).
Bukti pertama untuk beberapa asal-usul dalam kromosom eukariotik dihasilkan dari percobaan pulsa-
label dengan sel hamster Cina yang berkembang dalam budaya. Pada tahun 1968, ketika Joel
Huberman dan Arthur Riggs sel berlabel pulsa-dengan 3H-timidin selama beberapa menit, diekstraksi
DNA, dan dilakukan analisis autoradiographic dari DNA berlabel, mereka mengamati array tandem
butir perak terkena (? Gambar 10.31a). Interpretasi sederhana hasil mereka adalah bahwa
makromolekul individu DNA berisi beberapa asal replikasi. Ketika periode pulsa-label diikuti oleh
interval pendek pertumbuhan di media nonradioactive (pulsa-mengejar percobaan), array tandem
terkandung daerah pusat kepadatan tinggi-butir dengan ekor penurunan kepadatan biji-bijian di
kedua ujungnya (? Gambar 10.31b) . Hasil ini menunjukkan bahwa replikasi pada eukariota adalah dua
arah seperti di sebagian besar prokariota. Ekor penurunan hasil kepadatan biji-bijian dari pengenceran
secara bertahap dari kolam intraselular 3H-timidin oleh 1H-timidin sebagai garpu replikasi bergerak
dua arah dari asal sentral terhadap replikasi termini (? Gambar 10.31c).

A segment of DNA whose replication is under the control of one origin and two termini is called a
replicon. In prokaryotes, the entire chromosome is usually one replicon. The existence of multiple
replicons per eukaryotic chromosome has been verified directly by autoradiography and electron
microscopy in several different species. The genomes of humans and other mammals contain about
10,000 origins of replication distributed throughout the chromosomes at 30,000- to 300,000-base-pair
intervals. Clearly, the number of replicons per chromosome is not fixed throughout the growth and
development of a multicellular eukaryote. Replication is initiated at more sites during the very rapid
cell divisions of embryogenesis than during later stages of development. Unfortunately, geneticists
don’t know what factors determine which origins are operational at any given time or in a particular
type of cell. Go to Solve It: Understanding Replication of the Human X Chromosome to test your
comprehensionof the concepts discussed here.
Segmen DNA yang replikasi adalah di bawah kendali satu asal dan dua termini disebut replicon a. Pada
prokariota, seluruh kromosom biasanya satu replicon. Adanya beberapa replikon per kromosom
eukariotik telah diverifikasi langsung oleh autoradiografi dan mikroskop elektron pada beberapa
spesies yang berbeda. Genom manusia dan mamalia lainnya mengandung sekitar 10.000 asal replikasi
didistribusikan ke seluruh kromosom pada 30,000- interval 300.000-base-pair. Jelas, jumlah replikon
per kromosom tidak tetap sepanjang pertumbuhan dan perkembangan eukariota multiseluler.
Replikasi dimulai di situs lebih selama pembelahan sel yang sangat cepat dari embriogenesis daripada
selama tahap akhir pembangunan. Sayangnya, ahli genetika tidak tahu faktor-faktor apa yang
menentukan asal operasional pada waktu tertentu atau jenis tertentu dari sel. Pergi ke Memecahkan
Ini: Replikasi Pemahaman tentang Kromosom Manusia X untuk menguji comprehensionof Anda
konsep yang dibahas di sini.

TWO OR MORE DNA POLYMERASES AT A SINGLE REPLICATION FORK

Given the complexity of the replisome in the simple bacterium E. coli (see Figures 10.28 and 10.29), it
seems likely that the replication apparatus is even more complex in eukaryotes. Although knowledge
of the structure of the replicative machinery in eukaryotes is still limited, many features of DNA
replication are similar in eukaryotes and prokaryotes.
As in the case of prokaryotes, much of the information about DNA synthesis in eukaryotes has come
from the development and dissection of in vitro DNA replication systems. Studies of the replication of
DNA viruses of eukaryotes have proven informative, and of these viruses, Simian virus 40 (SV40) has
proven particularly useful.
The replication of SV40 is carried out almost entirely by the host cell’s replication apparatus. Only one
viral protein, the so-called T antigen, is required for replication of the SV40 chromosome. As in
prokaryotes, the unwinding of the parental DNA strands requires a DNA topoisomerase and a DNA
helicase. The unwound strands are kept in the extended state by a single-strand DNA-binding protein
called replication protein A (Rp-A). However, unlike the process in prokaryotes, the replication of
chromosomal DNA in eukaryotes requires the activity of three different DNA polymerases—
polymerase (Pol ), polymerase (Pol ), and polymerase ε (Pol ε). At least two polymerases, perhaps all
three, are present in each replication fork (replisome), and each polymerase contains multiple subunits.
Also, whereas the E. coli replisome contains 13 known proteins, the replisomes of yeast and mammals
contain at least 27 different polypeptides.

DUA ATAU LEBIH DNA polimerase AT A REPLIKASI FORK TUNGGAL

Mengingat kompleksitas replisome dalam bakteri sederhana E. coli (lihat Gambar 10.28
dan 10,29), tampaknya mungkin bahwa aparat replikasi bahkan lebih kompleks dalam
eukariota. Meskipun pengetahuan tentang struktur mesin replikatif pada eukariota masih
terbatas, banyak fitur replikasi DNA serupa pada eukariota dan prokariota.

Seperti dalam kasus prokariota, banyak informasi tentang sintesis DNA pada eukariota berasal
dari pengembangan dan diseksi in vitro replikasi DNA sistem. Studi dari replikasi virus DNA
eukariota telah membuktikan informatif, dan virus ini, virus Simian 40 (SV40) telah terbukti
sangat berguna.
Replikasi SV40 dilakukan hampir seluruhnya oleh aparat replikasi sel inang. Hanya satu
protein virus, yang disebut antigen T, diperlukan untuk replikasi kromosom SV40.
Seperti di prokariota, unwinding untai DNA orangtua membutuhkan topoisomerase DNA dan
helikase DNA. Untaian dibatalkan disimpan di negara diperpanjang oleh untai tunggal DNA-
binding protein yang disebut protein replikasi A (Rp-A). Namun, tidak seperti proses di
prokariota, replikasi DNA kromosom pada eukariota membutuhkan aktivitas tiga DNA yang
berbeda polimerase-polymerase? (Pol?), Polimerase? (Pol?), Dan polymerase ε (Pol ε).
Setidaknya dua polimerase, mungkin ketiga, yang hadir di setiap garpu replikasi (replisome),
dan masing-masing polimerase berisi beberapa subunit. Juga, sedangkan E. coli replisome
mengandung 13 protein diketahui, replisomes ragi dan mamalia mengandung setidaknya 27
polipeptida yang berbeda.
In eukaryotes, Pol is required for the initiation of replication at origins and for the priming of
Okazaki fragments during the discontinuous synthesis of the lagging strand. Pol exists in a
stable complex with DNA primase; indeed, they copurify during isolation. The primase
synthesizes the RNA primers, which are then extended with deoxyribonucleotides by Pol to
produce an RNA–DNA chain about 30 nucleotides in total length. These RNA–DNA primer
chains are then extended by Pol. Pol
completes the replication of the lagging strand, while polymerase ε catalyzes the replication
of the leading strand. Pol must interact with proteins PCNA (proliferating cell nuclear antigen)
and replication factor C (Rf-C) to be active
(

Figure 10.32). PCNA is the sliding clamp that tethers Pol

to the DNA to allow processive replication (to prevent the polymerase from falling off the
template); PCNA is equivalent to the subunit of DNA polymerase III in E. coli (see Figure
10.25). Rf-C is required for PCNA to load onto DNA. PCNA is a trimeric protein that forms a
closed ring; Rf-C induces a change in the conformation of PCNA that allows it to encircle
DNA, providing the essential sliding clamp.
Pada eukariota, Pol? diperlukan untuk inisiasi replikasi pada asal-usul dan untuk priming
fragmen Okazaki selama sintesis terputus dari untai tertinggal. Pol? ada di kompleks stabil
dengan Primase DNA; memang, mereka copurify selama isolasi. Primase yang mensintesis
primer RNA, yang kemudian diperpanjang dengan deoksiribonukleotida oleh Pol? untuk
menghasilkan rantai RNA-DNA sekitar 30 nukleotida panjang total. rantai RNA-DNA primer
ini kemudian diperpanjang oleh Pol?. Pol? melengkapi replikasi untai lagging, sementara
polymerase ε mengkatalisis replikasi terkemuka untai. Pol? harus berinteraksi dengan protein
PCNA (berkembang biak sel antigen nuklir) dan faktor replikasi C (Rf-C) untuk aktif (?
Gambar 10.32).
PCNA adalah penjepit geser yang tethers Pol? DNA untuk memungkinkan replikasi processive
(untuk mencegah polimerase dari jatuh dari template); PCNA setara dengan subunit DNA
polymerase III di E. coli (lihat Gambar 10.25). Rf-C diperlukan untuk PCNA untuk memuat
ke DNA. PCNA adalah protein trimerik yang membentuk cincin tertutup; Rf-C menginduksi
perubahan konformasi PCNA yang memungkinkan untuk mengelilingi DNA, menyediakan
klem geser penting
Polymerases and ε both contain the
3

→
5

exonuclease activity required for proofreading (see Figure 10.27). However, they do not have
5

→
3

exonuclease activity; thus, they cannot remove RNA primers like DNA polymerase I of E. Coli
does. Instead, the RNA primers are excised by two nucleases, ribonuclease H1 (which degrades
RNA present in RNA–DNA duplexes) and ribonuclease FEN-1 (F1 nuclease 1). Pol then fills
in the gaps, and DNA ligase seals the nicks, producing covalently closed progeny strands. As
mentioned earlier, there are at least 15 different DNA polymerases—, , , ,ε, , , ,
, , , , , , and Rev1—in eukaryotes. DNA polymerase is
responsible for the replication of DNA in mitochondria, and the other DNA polymerases have
important roles in DNA repair and other pathways (Chapter 13).
Polimerase? dan ε keduanya mengandung 3? → 5? Kegiatan exonuclease diperlukan untuk
proofreading (lihat Gambar 10.27). Namun, mereka tidak memiliki 5? → 3? exonuclease
aktivitas; dengan demikian, mereka tidak dapat menghapus primer RNA seperti DNA
polimerase I dari E.coli tidak. Sebaliknya, primer RNA yang dipotong oleh dua nucleases,
ribonuklease H1 (yang
mendegradasi RNA hadir dalam kopel RNA-DNA) dan ribonuklease FEN-1 (nuklease F1
1). Pol? kemudian mengisi kekosongan, dan DNA ligase segel torehan, memproduksi kovalen
helai keturunan tertutup. Seperti disebutkan sebelumnya, setidaknya ada 15 yang berbeda
polymerases- DNA ?,,,?,ε,,,?,?,,?,?,?,?, dan Rev 1-pada eukariota. DNA polimerase
bertanggung jawab
untuk replikasi DNA di mitokondria, dan DNA polimerase lainnya memiliki peran penting
dalam perbaikan DNA dan jalur lainnya (Bab 13).
DUPLICATION OF NUCLEOSOMES AT REPLICATION FORKS (GANDA nukleosom
AT FORKS REPLIKASI)
As we discussed in Chapter 9, the DNA in eukaryotic interphase chromosomes is packaged in
approximately 11-nm beads called nucleosomes. Each nucleosome contains 166 nucleotide
pairs of DNA wound in two turns around an octamer of histone molecules. Given the size of
nucleosomes and the large size of DNA replisomes, it seems unlikely that a replication fork
can move past an intact nucleosome. Yet, electron micrographs of replicating chromatin in
Drosophila clearly show nucleosomes with approximately normal structure and spacing on
both sides of replication forks
(

Figure 10.33a); that is, nucleosomes appear to have the same structure and spacing immediately
behind a replication fork (postreplicative DNA) as they do in front of a replication fork
(prereplicative DNA). This observation suggests that nucleosomes must be disassembled to let
the replisome duplicate the DNA packaged in them and then be quickly reassembled; that is,
DNA replication and nucleosome assembly must be tightly coupled.
Since the mass of the histones in nucleosomes is equivalent to that of the DNA, large quantities
of histones must be synthesized during each cell generation in order for the nucleosomes to
duplicate. Although histone synthesis occurs throughout the cell cycle, there is a burst of
histone biosynthesis during S phase that generates enough histones for chromatin duplication.
When density-transfer experiments were performed to examine the mode of nucleosome
duplication, the nucleosomes on both progeny DNA molecules were found to contain both old
(prereplicative) histone complexes and new (postreplicative)
Sebagaimana kita bahas pada Bab 9, DNA dalam kromosom interfase eukariotik dikemas
dalam sekitar 11-nm manik-manik yang disebut nukleosom. Setiap nukleosom berisi 166
pasang nukleotida DNA luka di dua putaran di sekitar octamer molekul histon. Mengingat
ukuran nukleosom dan ukuran besar replisomes DNA, tampaknya tidak mungkin bahwa garpu
replikasi dapat bergerak melewati sebuah nukleosom utuh. Namun, mikrograf elektron dari
mereplikasi kromatin di Drosophila jelas menunjukkan nukleosom dengan struktur mendekati
normal dan jarak di kedua sisi garpu replikasi (Gambar 10.33a?); yaitu, nukleosom tampaknya
memiliki struktur yang sama dan jarak segera balik replikasi fork (DNA postreplicative) seperti
yang mereka lakukan di depan garpu replikasi (DNA prereplicative). Pengamatan ini
menunjukkan bahwa nukleosom harus dibongkar untuk membiarkan replisome duplikat DNA
dikemas dalam mereka dan kemudian dengan cepat dipasang kembali; yaitu, replikasi DNA
dan perakitan nukleosom harus digabungkan erat. Karena massa histon di nukleosom adalah
setara dengan DNA, jumlah besar histon harus disintesis selama setiap generasi sel dalam
rangka untuk nukleosom untuk menduplikasi. Meskipun sintesis histone terjadi sepanjang
siklus sel,
ada ledakan biosintesis histone selama fase S yang menghasilkan cukup histon untuk kromatin
duplikasi.
When density-transfer experiments were performed to examine the mode of nucleosome
duplication, the nucleosomes on both progeny DNA molecules were found to contain both old
(prereplicative) histone complexes and new (postreplicative) complexes. Thus, at the protein
level, nucleosome duplication appears to occur by a dispersive mechanism.
A number of proteins are involved in the disassembly and assembly of nucleosomes during
chromosome replication in eukaryotes. Two of the most important are nucleosome assembly
protein-1 (Nap-1) and chromatin assembly factor-1 (CAF-1). Nap-1 transports histones from
their site of synthesis in the cytoplasm to the nucleus, and CAF-1 carries them to the
chromosomal sites of nucleosome assembly
(

Figure 10.33b). CAF-1 delivers histones to the sites of DNA replication by binding to PNCA
(proliferating cell nuclear antigen)—the clamp that tethers DNA polymerase
to the DNA template (see Figure 10.32). CAF-1 is an essential protein in Drosophila, but not
in yeast where other proteins can perform some of its functions.
Many other proteins affect nucleosome structure. Some are involved in chromatin
remodeling—changing nucleosome structure in ways that activate or silence the expression of
the genes packaged therein. Others modify nucleosome structure by adding methyl or acetyl
groups to specific histones. In addition, eukaryotes contain several minor histones with
structures slightly different from the major histones, and the incorporation of these minor
histones into nucleosomes can change their structure. In Drosophila, for example, the
incorporation of histone H3.3 into nucleosomes results in high levels of transcription of the
genes therein. Thus, nucleosome structure is not invariant; to the contrary, it plays an important
role in modulating gene expression (see On the Cutting Edge: Chromatin Remodeling and Gene
Expression in Chapter 11 and the section Chromatin Remodeling in Chapter 19).
Ketika percobaan kepadatan transfer dilakukan untuk memeriksa modus duplikasi nukleosom,
nukleosom pada kedua molekul DNA keturunan ditemukan mengandung baik lama
(prereplicative) kompleks histon dan baru (postreplicative) kompleks. Dengan demikian, pada
tingkat protein, duplikasi nukleosom tampaknya terjadi dengan mekanisme dispersif. Sejumlah
protein yang terlibat dalam pembongkaran dan perakitan nukleosom selama replikasi
kromosom pada eukariota. Dua yang paling penting adalah nukleosom perakitan protein-1
(Nap-1) dan kromatin perakitan faktor-1 (CAF-1). Nap-1 mengangkut histon dari situs mereka
sintesis dalam sitoplasma ke inti, dan CAF-1 membawa mereka ke situs kromosom perakitan
nukleosom (? Gambar 10.33b). CAF-1 memberikan histon ke situs replikasi DNA dengan
mengikat PNCA (berkembang biak sel antigen nuklir) -yang penjepit yang tethers DNA
polimerase? untuk template DNA (lihat Gambar 10.32). CAF-1 merupakan protein penting
dalam Drosophila, tapi tidak dalam ragi di mana protein lain dapat melakukan beberapa fungsi.
Banyak protein lain mempengaruhi struktur nukleosom. Beberapa terlibat dalam struktur
nukleosom kromatin renovasi berubah dengan cara yang mengaktifkan atau membungkam
ekspresi gen dikemas di dalamnya. Lainnya memodifikasi struktur nukleosom dengan
menambahkan metil atau asetil kelompok untuk histon tertentu. Selain itu, eukariota
mengandung beberapa histon kecil dengan struktur yang sedikit berbeda dari histon utama, dan
penggabungan ini histon kecil menjadi nukleosom dapat mengubah struktur mereka. Pada
Drosophila, misalnya, penggabungan histone H3.3 ke hasil nukleosom di tingkat tinggi
transkripsi gen di dalamnya. Dengan demikian, struktur nukleosom tidak invarian; sebaliknya,
memainkan peran penting dalam modulasi ekspresi gen (lihat Di Cutting Edge: kromatin
Renovasi dan Ekspresi Gen dalam Bab 11 dan bagian kromatin Renovasi di Bab 19).
TELOMERASE: REPLICATION OF CHROMOSOME TERMINI
We discussed the unique structures of telomeres, or chromosome ends, in Chapter 9. An early
reason for thinking that telomeres must have special structures was that DNA polymerases
cannot replicate the terminal DNA segment of the lagging strand of a linear chromosome. At
the end of the DNA molecule being replicated discontinuously, there would be no DNA strand
to provide a free
3

-OH (primer) for polymerization of deoxyribonucleotides after the RNA primer of the terminal
Okazaki fragment has been excised
(

Figure 10.34a). Either (1) the telomere must have a unique structure that facilitates its
replication or (2) there must be a special enzyme that resolves this enigma of replicating the
terminus of the lagging strand. Indeed, evidence has shown that both are correct. The special
structure of telomeres provides a neat mechanism for the addition of telomeres by an RNA-
containing enzyme called telomerase. This unique enzyme was discovered in 1985 by Elizabeth
Blackburn and Carol Greider. They shared the 2009 Nobel Prize in Physiology or Medicine
with Jack Szostak, who, along with Blackburn, determined how the unique structures of
telomeres protected them from degradation.
Telomerase: REPLIKASI kromosom TERMINI
Kami membahas struktur unik telomere, atau kromosom berakhir, pada Bab 9. Alasan awal
untuk berpikir bahwa telomere harus memiliki struktur khusus adalah bahwa polimerase DNA
tidak bisa meniru segmen DNA terminal untai tertinggal dari kromosom linear. Pada akhir
molekul DNA direplikasi terputus-putus, tidak akan ada untai DNA untuk menyediakan gratis
3? -OH (Primer) untuk polimerisasi deoksiribonukleotida setelah primer RNA dari terminal
Fragmen Okazaki telah dipotong (? Gambar 10.34a) . Baik (1) telomer harus memiliki struktur
yang unik yang memfasilitasi replikasi atau (2) harus ada enzim khusus yang dapat
memecahkan teka-teki ini mereplikasi ujung untai tertinggal. Memang, bukti menunjukkan
bahwa keduanya benar. Struktur khusus telomere menyediakan mekanisme rapi untuk
penambahan telomere oleh enzim RNA yang mengandung disebut telomerase. enzim yang
unik ini ditemukan pada tahun 1985 oleh Elizabeth Blackburn dan Carol Greider. Mereka
berbagi 2009 Penghargaan Nobel dalam Fisiologi atau Kedokteran dengan Jack Szostak, yang,
bersama dengan Blackburn, ditentukan bagaimana struktur unik telomere melindungi mereka
dari degradasi.
The telomeres of humans, which contain the tandemly repeated sequence TTAGGG, will be
used to illustrate how telomerase adds ends to chromosomes
(

Figure 10.34b). Telomerase recognizes the G-rich telomere sequence on the

3

overhang and extends it

5

→
3

one repeat unit at a time. Telomerase does not fill in the gap opposite the
3

end of the template strand; it simply extends the

3

end of the template strand. The unique feature of telomerase is that it contains a built-in RNA
template. After several telomere repeat units are added by telomerase, DNA polymerase
catalyzes the synthesis of the complementary strand. Without telomerase activity, linear
chromosomes would become progressively shorter. If the resulting terminal deletions extended
into an essential gene or genes, this chromosome shortening would be lethal.
One change observed in many cancer cells is that the genes encoding telomerase are expressed,
whereas they are not expressed in most somatic cells. Thus, one approach to cancer treatments
has been to try to develop telomerase inhibitors, so that the chromosomes in cancer cells will
lose their telomeres and the cells will die. However, other cancer cells do not contain active
telomerase, making this approach problematic.
Telomere manusia, yang berisi tandem diulang urutan TTAGGG, akan digunakan untuk
menggambarkan bagaimana telomerase menambahkan ujung kromosom (? Gambar 10.34b).
Telomerase mengakui urutan telomer kaya G pada 3? overhang dan meluas 5? → 3? satu unit
berulang pada suatu waktu. Telomerase tidak mengisi kesenjangan sebaliknya 3? akhir untai
cetakan; itu hanya meluas 3? akhir untai cetakan. Fitur unik dari telomerase adalah bahwa hal
itu mengandung template RNA built-in. Setelah unit berulang beberapa telomer ditambahkan
oleh telomerase, DNA polimerase mengkatalisis sintesis untai komplementer. Tanpa aktivitas
telomerase, kromosom linearakan menjadi semakin pendek. Jika penghapusan terminal yang
dihasilkan diperpanjang menjadi gen penting atau gen, shortening kromosom ini akan
mematikan.
Salah satu perubahan yang diamati di banyak sel-sel kanker adalah bahwa gen yang mengkode
telomerase disajikan, sedangkan mereka tidak dinyatakan dalam sel yang paling somatik.
Dengan demikian, salah satu pendekatan untuk pengobatan kanker telah mencoba untuk
mengembangkan inhibitor telomerase, sehingga kromosom dalam sel-sel kanker akan
kehilangan telomere mereka dan sel-sel akan mati. Namun, sel-sel kanker lainnya tidak
mengandung telomerase aktif, membuat pendekatan ini bermasalah.
FIGURE 10.34 Replication of chromosome telomeres. (a) Because of the requirement for a
free
3

-OH at the end of the primer strand, DNA polymerases cannot replace an RNA primer that
initiates DNA synthesis close to or at the terminus of the lagging strand. (b) These termini of
chromosomes are replicated by a special enzyme called telomerase, which prevents the ends of
chromosomes from becoming shorter during each replication. The nucleotide sequence at the
terminus of the lagging strand is specified by a short RNA molecule present as an essential
component of telomerase. The telomere sequence shown is that of humans.
GAMBAR 10,34 Replikasi telomere kromosom. (A) Karena kebutuhan untuk bebas 3? -OH
Pada akhir untai primer, DNA polimerase tidak dapat menggantikan primer RNA yang
memulai sintesis DNA dekat dengan atau di ujung untai tertinggal. (B) termini ini kromosom
direplikasi oleh enzim khusus yang disebut telomerase, yang mencegah ujung kromosom dari
menjadi lebih pendek selama setiap replikasi. Nukleotida urutan di ujung untai lagging
ditentukan oleh molekul RNA pendek hadir sebagai komponen penting dari telomerase. Urutan
telomer yang ditampilkan adalah bahwa manusia.

Why must each of the giant DNA molecules in eukaryotic chromosomes ,contain , multiple origins of
replication?

Mengapa harus masing-masing molekul DNA raksasa di kromosom eukariotik, berisi, beberapa asal-
usul replikasi?