PROGRAM STUDI FARMASI

FAKULTAS ILMU KESEHATAN

UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH MALANG

TELAAH JURNAL
Metabolomik untuk tujuan standarisasi bahan baku
unggul (HPLC/GC)

Nama kelompok :
1. Anita Purnamasari
2. Lailatul Ramadhaniah
3. Ikke Nur Vitasari
4. Fitria Indahsari Siregar
5. Intan Solihah Kabalmay
(201610410311001)
(201610410311016)
(201610410311034)
(201610410311047)
(201610410311229)
 ANALISIS JURNAL

JUDUL JURNAL PENDAHULUAN

01 02
KESIMPULAN PERMASALAHAN
YANG DITELITI

06 03
HASIL & DISKUSI METODE & LANGKAH-
LANGKAH

05 04
JURNAL 1
“Metabolomik berbasis 1H NMR dikombinasikan dengan HPLC-PDA-MSS
PE-NMR untuk penyelidikan persiapan standarisasi Ginkgo biloba”

Sediaan komersial Ginkgo biloba a
01 dalah campuran yang sangat komplek
s yang dibuat dari ekstrak daun menta
h dengan serangkaian langkah ekstrak
si dan prepurifikasi. Aktivitas farmako
logis dikaitkan dengan sejumlah gliko
sida flavonoid dan trilakton terpene un
ik (TTL), dengan sebagian besar profi
l farmakologis yang tidak dikarakteris
asi pada target yang terlibat dalam gan
gguan neurologis.
Oleh karena itu penting untuk melengkapi metod
02 e analisis bertarget yang ada untuk analisis persia
pan Ginkgo biloba dengan platform teknologi alt
ernatif untuk karakterisasi komprehensif dan glob
al mereka. Dalam karya ini, 1H NMR berbasis m
etabolisme dan hyphenation dari kromatografi ca
ir kinerja tinggi, deteksi foto-dioda array, spektro
metri massa, ekstraksi fase padat, dan spektrosko
pi resonansi magnetik nuklir (HPLC-PDA-MS-S
PE-NMR) digunakan untuk penyelidikan 16 persi
apan Ginkgo biloba yang tersedia secara komersi
al. Ekstrak terstandarisasi berasal dari Denmark,
Italia, Swedia, dan Inggris.
Ekstrak daun Ginkgo biloba adalah salah satu dari persiap
an herbal terlaris di seluruh dunia. Awalnya, hanya biji ya
ng digunakan dalam pengobatan Cina tradisional, tetapi p
ada tahun 1960 ditemukan bahwa ekstrak daun meningkat
kan sirkulasi darah pusat dan perifer .
A
B D
Sejak itu, minat terhadap ekstrak kasar serta ekstr
ak Ginkgo biloba terstandarisasi telah meningkat
C Konstituen utama dari ekstrak daun terstandarisasi
secara dramatis, dan serangkaian ulasan yang san
gat baik tentang kimia dan biologi, farmakologi,
metode analitik, dan sifat kromatografi dan spekt
roskopi telah dipublikasikan.
Ekstrak terstandar antara lain digunakan untuk pe
ngobatan simtomatik demensia, penyakit Alzheimer,
penyakit arteri oklusif perifer, dan tinnitus, dan TTL
dan glikosida flavonoid dianggap berkontribusi terha
dap efek neuroprotektif.
adalah flavonol glikosida .Kelas utama senyawa la
in yang ditemukan dalam ekstrak terstandarisasi a
dalah proanthocyanidins, asam karboksilat, dan gl
ikosida non-flavonoid, sedangkan biflavon dan alk
ilfenol dihilangkan selama proses pembuatan.
 1H NMR spektrum ekstrak persiapan G. biloba dicatat pada 25 C mengguna
1 kan spektrometer Bruker Avance (frekuensi resonansi 1H 600,13 MHz) yang
dilengkapi dengan probe 5 mm 1H {13C}.

Eksperimen HPLC -PDA-MS-SPE-NMR dilakukan pada sistem yang ter

diri dari sistem Agilent 1100 LC, pompa Wellchrom Knauer K100, peran
2 gkat ekstraksi fase-padat Prospekt 2, spektrometer massa perangkap ion
EsquireLC, dan di atas disebutkan spektrometer Bruker Avance yang dile
ngkapi dengan probe aliran 30 ll 1H {13C}
Eksperimen NMR

analisis data multivariat

sonication selama 20
dilarutkan 50 mg ekstrak secara berurutan dalam
menit, sampel
dalam 1 ml aseton-d6 interval waktu 48 jam
disentrifugasi pada
yang mengandung dengan sampel
13000 rpm selama 1
0,02% TMS. disiapkan segera
menit
sebelum akuisisi data.

Untuk setiap sampel,

256 transien dicatat
Semua spektrum secara FID kumulatif adalah
sebagai 64 k titik data
manual dikoreksi fase, Fourier
dengan lebar spektral 20
dikoreksi baseline, dan ditransformasikan ke
ppm menggunakan 30
dikalibrasi ke TMS (d 128 k titik data
pulsa, waktu akuisisi
0,0) dalam XWIN-NMR menggunakan perluasan
2,73 detik, dan
versi garis 0,1 Hz.
penundaan antar-pulsa
2,84 detik
Analisis HPLC-PDA-MS-SPE-NMR

ekstrak gabungan Delapan pemisahan berulang

Bahan diekstraksi 3 kali
dengan sonication dan
100 ml MeOH 70%
selama 30 menit
kemudian disaring
dipisahkan pada suhu
menggunakan campuran air-
asetonitril 95: 5 + 0,1% asam
format (eluen A) dan
asetonitril-air 95: 5 + Asam
format 0,1% (eluen B)
dilakukan dengan
menggunakan profil gradien
berikut: 0 menit, 0% B; 10 mnt,
10% B; 70 mnt, 40% B; 75 mnt,
100% B; 77 mnt, 100% B; 80
mnt, 0% B; 90 mnt, 0% B.

Spektra 1H NMR diperoleh

menggunakan urutan
NOESYPRESAT dengan
Bahan yang diadsorpsi dielusi menggunakan absorbansi
presaturasi ganda resonansi
ke probe aliran NMR dengan berbasis ambang pada 254 nm
pelarut (H2O dan
aseton-d6. untuk pemilihan analit
CD2HCOCD3) selama waktu
pencampuran (100 ms) dan
penundaan relaksasi (2,4 detik).
 Berdasarkan penyelidikan 1H
NMR sebelumnya dari ekstrak
Ginkgo biloba (van Beek et al.
1993; Choi et al. 2003; Li et al.
2004), spektrum semua sampel
diperoleh dalam aseton-d6
dengan penundaan antar-pulsa
2,84 detik. , yang menjamin
relaksasi penuh magnetisasi di
antara rangsangan. Spektra
merupakan set data untuk
analisis data multivariat, dan
gambaran umum spektrum
Penugasan resonansi 1H NMR individu GA, GB, GC, GJ, dan BB
ditunjukkan pada Gambar. 2.
dilakukan dengan perbandingan dengan spektrum sampel otentik serta
dengan data literatur (van Beek 2005). Karena kurangnya senyawa
referensi, identifikasi glikosida flavonoid dan penetapan resonansi NMR
1H dilakukan dengan menggunakan HPLC-PDA-MS-SPE-NMR.
Dengan demikian, metode HPLC fase terbalik berbasis gradien
dikembangkan dan data HPLC-PDA tunggal dari setiap persiapan
diperoleh.
Untuk perbandingan dengan data yang diperoleh oleh 1H NMR, model
PCA berdasarkan jejak HPLC-UV sejajar pada 254 nm (Gambar 1)
dibuat. Plot skor PC1 vs PC2 ditunjukkan pada Gambar 6 dan
menampilkan beberapa karakteristik yang sama dengan Gambar 4
 Dengan demikian, persiapan 2, 5, 6, 9, 11, 12, 13, dan 14 memiliki tingkat yang lebih
tinggi quercetin dari preparasi 1, 3, 15, dan 16. Selain itu, preparasi 12 dan 13 dipisahkan
dari yang lain karena jumlah relatif rutin yang jauh lebih tinggi. Namun, skor tidak
dipengaruhi oleh TTL dan konstituen lain yang tidak menyerap pada 254 nm. Di sisi lain,
HPLC memungkinkan analisis terperinci dari distribusi flavonoid, dan bentuk sidik jari
kromatografi secara luas digunakan untuk penilaian kualitas ekstrak kompleks. Namun,
kedua analisis sidik jari HPLC dan metode pengenalan pola berdasarkan model PCA data
HPLC-DAD menderita dari konten informasi struktural terbatas spektrum UV, yang
membuat identifikasi konstituen individu sulit tanpa akses ke sampel otentik. Masalah-
masalah ini dapat diatasi dengan menggunakan teknik HPLC-PDA-MS-SPE-NMR seperti
yang ditunjukkan dalam pekerjaan ini dengan identifikasi flavonoid, meskipun analisis
terbatas pada delapan konstituen utama 1-8 karena keterbatasan sensitivitas klinis.
Sebagai kesimpulan, karya ini menunjukkan bahwa 1H NMR
berbasis metabolisme dikombinasikan dengan HPLC-PDA-MS-
SPE-NMR adalah platform teknologi yang menarik untuk
karakterisasi komprehensif dari komposisi global persiapan
standarisasi Ginkgo biloba

Spektroskopi 1H NMR secara intrinsik tidak selektif dan kaya

informasi, dan oleh karena itu analisis PCA dari spektrum 1H
NMR memungkinkan penilaian simultan TTL dan glikosida
flavonoid

Analisis menunjukkan adanya konstituen yang biasanya tidak

dipertimbangkan dalam protokol standardisasi (asam shikimic
dan asam 3,4-dihidroksi benzoat) serta eksipien (gliserol dan
asam sitrat). Semua fitur ini kemungkinan penting dalam
kaitannya dengan pengalaman konsumen dengan produk
Gingko serta untuk studi farmakologis atau klinis menggunakan
ekstrak Ginkgo.
JURNAL 2
“Strategi Berbasis Metabolomik untuk Kontrol Kualitas Pengobatan

Tradisional Tiongkok: Injeksi Shengmai sebagai Studi Kasus”

 Traditional Chinese medicine (TCM)
01 semakin besar penerimaan di seluruh dun
ia, terutama di Negara barat, untuk menin
gkatkan kesehatan dan mencegah atau m
enyembuhkan penyakit. Baru-baru ini, p
roduk obat herbal tradisional diproduksi
di Cina bernama Diao Xin Xue Kang, dig
unakan untuk mengobati iskemia miokar
d, telah disetujui untuk dijual di Indones
ia Eropa. TCM terdiri dari lebih dari satu
ramuan, dan kualitas dan kandungan h
erbal sangat bervariasitergantung pada as
al geografis, iklim, penanaman, dan taha
p pertumbuhan saat dipanen.
Efek terapeutik TCM didasarkan pada efek
02 sinergis dari kompleksnya komponen, yang
berbeda dari pengobatan barat. Namun, saat
ini tidak ada data yang cukup tentang TCM
karena kurangnya pendekatan modern dan il
miah untukstandardisasi. Metode tradisional
untuk menentukan kualitas dan keaslian oba
t herbal yang kompleks atau persiapan adala
h untuk menilai sejumlah bioaktif yang dite
ntukan komponen atau konstituen farmakol
ogis.
 Kualitas- kontrol terhadap TCM terus menjadi tantangan dan membatasi pengembang

03 an TCM di seluruh dunia. Arus kriteria yang tercantum dalam farmakope atau kriteria lain
yang dikeluarkan oleh Departemen Kesehatan China biasanya menggunakan konsentrasi b
eberapa bahan utama atau konten totalnya untuk mengontrol kualitas dan memastikan
kemanjuran klinis yang dapat direproduksi. Meskipun konsentrasi setiap komponen bioak
tif atau total konsentrasi semua komponen dapat memenuhi persyaratan dari kriteria, sering t
erjadi variasi dalam konsentrasimasing-masing komponen bioaktif ini antara batch. Sel
anjutnya, dalam beberapa kasus satu atau lebih bioaktif komponen mungkin tidak ada dal
am persiapan, tetapi total konten masih dapat memenuhi kriteria yang ditentukan. Ini b
erharga mencatat bahwa konsentrasi proporsi yang berbeda konstituen massa dalam pengobat
an herbal dapat menghasilkan perbedaan efek terapi
 Pada tahun 2004, State Food and Drug Adminis
tration (SFDA) China mengharuskan suntikan
yang terbuat dari obat-obatan herbal atau bahan
bakunya harus distandarisasi dengan sidik jari
kromatografi
B D
Namun, metode sidik jari yang divalidasi belum
diterima dalam standar kontrol kualitas umum he
rbal obat-obatan sampai sekarang. Salah satu kes
ulitan utama adalah kurangnya metode analisis u
ntuk mengevaluasi secara ilmiah kromatogram k
ompleks obat-obatan herbal. teknik menggunaka
n konsep tradisional farmasi analisis dan mengga
bungkannya dengan analisis kromatografi puncak
.
Oleh karena itu, metode kontrol kualitas yang efe
ktif untuk TCM atau obat-obatan herbal harus dikem
bangkan lebih lanjut dalam mengembangkan standar
disasi dan modernisasi mereka.
A
C teknik analisis sidik jari saat ini tidak mengoreksi
pergeseran kromatografi di antara yang berbeda b
erjalan atau dari berbagai kondisi percobaan dan ti
dak bisa membandingkan sidik jari TCM dari berb
agai spesies tumbuh-tumbuhan, tumbuh di lokasi
yang berbeda, dari panen yang berbeda musim, at
au diekstraksi dan diproses menggunakan metode
yang berbeda.
 Sebanyak 22 Shengmai injections diperoleh dari 4 produsen yang berbeda
1 di Cina dianalisis dengan HPLC-TOFMS Analysis untuk mendapatkan profil
metabolisme.

Radix Ginseng , diukur secara kuantitatif untuk menentukan Pengobatan

2 Pelengkap dan Alternatif Berbasis Bukti.
Diagram skematis dari strategi yang digunakan untuk pengendalian kualitas pengobatan Tiongkok tradisional (TCM)

(4) File data

(2) Data pretreatment
(1) Analisis LC-TOF-MS
diperoleh dari analisis
dariTCM
LC-TOF-MS
Exported.xml dianalisis
(3) Ekspor data menggunakan paket
menggunakan perangkat XCMS open source
lunak untuk memilih,
meluruskan, dan
mengukur fitur

(6) .xls file data (5). E. Matriks 3D yang

kemudian diekspor ke dihasilkan berisi puncak
(8) Standar yang
(7) Standar kontrol perangkat lunak SIMCA- yang ditetapkan secara
ditetapkan digunakan
kualitas kemudian P 12.0 (Umetrics, sewenang-wenang
untuk kualitaskontrol
ditetapkan Umeå,Swedia) untuk indeks, waktu retensi,
TCM.
analisis statistik dan nilai kelimpahan (file
multivariat .xls)
 Analisis
Kuantitatif
Ginsenosides di
Shengmai Kontrol Kualitas
Injeksi Shengmai
 Menggunakan metode LC-TOF-MS kami yang dioptimalkan, koefisien regresi
yang tinggi (>) untuk setiap kalibrasi kurva dari delapan standar berduri
diperoleh, menunjukkan linearitas yang baik dalam penelitian ini (Tabel 1). Ini
kuantitatif hasil analisis ginsenosides dalam batch berbeda satu pabrikan dan
dari pabrikan berbeda terdaftar pada Tabel 2.

Analisis
Kandungan Rg2 relatif rendah di suntikan dan di bawah LOQ, dan karenanya
Kuantitatif hanya tujuh ginsenosides dihitung (Tabel 2). Tingkat ketujuh ginsenosides dari
Ginsenosides di semua sampel sebanding dan bertemu persyaratan kriteria yang dikeluarkan
Shengmai oleh Departemen Kesehatan China, yang menetapkan bahwa tingkat Rg1
harus lebih tinggi dari 80 ng / mL dan level Re setidaknya harus40 ng / mL
[22]. Namun, konsentrasi Rg1 dan Re secara signifikan berbeda antara
beberapa batch satuprodusen serta antara produsen yang berbeda,meskipun
mereka semua memenuhi kriteria untuk penggunaan klinis.

Namun ,karena perbedaan konsentrasi ginsenoside dalam preparansi dari

empat produsen, kemanjuran perbedaan klinis adiharapkan. Selanjutnya
variasi dalamkonsentrasi antar batch besar, menunjukkan hal reproduktifitas
produk buruk. Karena prosedur persiapan standar, perbedaan mungkin
menjadi hasil dari variabilitas bahan baku yang digunakan.
 hasil analisis kuantitatif 22 batch sampel Shengmai (Tabel 2) diimpor ke SIMCA P
12.0 perangkat lunak untuk menentukan hasil kontrol kualitas. Menggunakan
konsentrasi senyawa standar (konsentrasi rata-rata tujuh ginsenosida dari 22
kelompok Shengmai sampel) sebagai pusat, semua produk yang memenuhi syarat
akan termasuk dalam ruang lingkup spasial (Gambar 5) dan produk yang tidak
berkualitas akan berada di luar lingkup.

Sampel C(titik hitam) memenuhi semua persyaratan, sampel A (titik biru) memenuhi
sebagian besar persyaratan, dan sampel B dan D (hijau dan titik merah, resp.)
Kontrol berada di luar standar yang ditetapkan.
Kualitas Injeksi
Shengmai

Ini jelas menunjukkan bahwa ada perbedaan di antara keduanya produk yang
diperoleh dari berbagai produsen juga kumpulan produk berbeda yang dihasilkan
oleh satu produsen.Menggunakan standar yang ditetapkan, beberapa sampel
ditemukan menjadi produk yang tidak berkualitas, meskipun semuanya memenuhi
arus standar.

Oleh karena itu, data ini menunjukkan bahwa metode ini akan
melakukannyamembantu menjamin kualitas, reproduksibilitas, dan
kemanjuranproduk-produk yang terbuat dari tumbuh-tumbuhan alami.
 Kromatogram ion yang diekstraksi dari delapan ginsenosides,
termasuk Rg1, Rb1, Re, Rb2, Rg2, Rf, Rd, dan Rc.
kelompok / produk dinyatakan sebagai titik hijau, hitam, dan biru
berada dalam ruang lingkup kualitas yang dapat diterima. Sebaliknya,
titik merah mewakili sampel yang tidak memenuhi kriteria kualitas.
Kromatogram arus ion total (TIC) dari
empat sampel injeksi Shengmai
produk herbal yang rumit, mudah dikendalikan konsentrasi beberapa
bahan utama untuk mencapai standar. Namun, sulit untuk
menjagaporsi bahan utama yang berbeda dalam rentang yang
sebanding.

Strategi kami yang diusulkan dalam penelitian ini akan memungkinkan

kita untuk mengukur profil persiapan metabolit global dan secara
bersamaan mengukur bahan-bahan utama untuk memastikan perawatan
kemanjuran dan meminimalkan kemungkinan efek samping, yang akan
sangatmeningkatkan evaluasi farmakologis.

Kami percaya ini pendekatan akan membantu untuk prefek kontrol

kualitas saat ini metode yang digunakan untuk bahan atau obat herbal
yang rumit,meningkatkan kualitas TCM, dan memastikan
kemanjuranproduk yang digunakan di klinik.
JURNAL 3
 Pangan merupakan kebutuhan esensial bagi setiap
01 manusia. Namun, ketika pangan tersebut terkontaminas
i mikroba maka pangan tersebut juga dapat menyebabk
an penyakit bagi yang mengkonsumsinya. Salah satu b
akteri yang dapat menyebabkan penyakit yaitu bakteri
Staphylococcus aureus (bakteri gram positif). Bakteri S
taphylococcus aureus umumnya dapat ditemukan pada
produk pangan yang kaya protein, misalnya seperti dag
ing, ikan, unggas, susu dan produk-produk turunan dari
susu (FDA, 2010). Bakteri ini dapat dihambat pertumb
uhannya dengan komponen antibakteri dari tanaman te
rtentu. Kecombrang (Etlingera elatior) merupakan sala
h satu tanaman lokal Indonesia. Kecombrang termasuk
dalam family Zingiberaceae, genus Etlingera, dan spesi
es Etlingera elatior (Khaw, 2001).
Beberapa penelitian menununjukkan bahwa bun
02
ga kecombrang memiliki aktivitas antibakteri ter
hadap bakteri Staphylococcus aureus (Ghasemz
adeh et al., 2015, Wijekoon et al., 2013, Abdelw
ahab et al., 2010, Lachumy et al., 2010, Naufali
n et al., 2005). Namun, identifikasi komponen a
ktif antibakteri dari bunga kecombrang belum di
lakukan. Oleh karena itu, perlu adanya penelitia
n mengenai identifikasi komponen aktif yang m
emiliki aktivitas antibakteri terhadap pertumbuh
an bakteri Staphylococcus aureus dari ekstrak b
unga kecombrang. Tahap awal penelitian dapat
dengan mengidentifikasi terlebih dahulu waktu r
etensi komponen antibakteri dengan menggunak
an analisis HPLC (profil kimia)
 Identifikasi komponen bioaktif dari bahan alam um
umnya dilakukan dengan metode isolasi senyawa bi
oaktif. Isolasi senyawa bioaktif merupakan metode i
dentifikasi dengan teknik isolasi senyawa yang beru
lang-ulang dengan dipandu bioaktivitas hingga men
dapatkan senyawa murni.
A bolomik.
B D
Metabolomik merupakan analisis komprehensif komp
onen dari suatu organisme pada waktu atau kondisi ter
tentu (Hall, 2006). Metabolomik dapat diaplikasikan u
C al ini digunakan untuk mendapatkan penyebaran senyawa
ntuk mempelajari korelasi antara bioaktivitas dan prof
il kimia dan pada akhirnya dapat digunakan untuk me
ngidentifikasi komponen bioaktif pada tanaman (Yuli
ana et al., 2011b).
Metode isolasi berulang-ulang untuk mendapatkan se
nyawa murni ini memakan banyak waktu dan biaya. Oleh
karena itu, perlu alternatif dalam mengidentifikasi kompo
nen bioaktif yaitu dengan menggunakan pendekatan meta
Metode ini dilakukan dengan ekstraksi sampel secara ko
mprehensif dengan menggunakan kombinasi pelarut pada
tingkat kepolaran yang berbeda (Yuliana et al., 2011a). H
yang baik pada setiap ekstrak. Ekstrak yang dihasilkan sel
anjutnya digunakan untuk analisis bioaktivitas dan profil
kimia dari ekstrak tanaman. Instrumen yang paling baik u
ntuk pengidentifikasian dalam aplikasi matabolomik pada
saat ini adalah nuclear magnetic resonance spectroscopy (
NMR). Hanya saja, penggunaan NMR memerlukan biaya
yang tinggi. Salah satu instrumen yang lebih terjangkau d
an dapat digunakan adalah high performance liquid chro
matography (HPLC).
Persiapan Sampel dan Ekstraksi
Bunga kecombrang segar disortir, dicuci, dikupas, dikeringkan dengan peng
ering oven pada suhu 50 oC selama 12 jam, ditepungkan dengan mengguna
kan blender dan disaring dengan penyaring 30 mesh. Ekstraksi dilakukan pa
da 50 g tepung bunga kecombrang dengan etanol 80 % dengan cara divorte
1
ks, disentrifugasi dengan kecepatan 2000 rpm selama 30 menit, disaring, da
n diambil filtratnya. Sebagian hasil ekstraksi dikeringkan dengan mengguna
kan rotary evaporator pada suhu 40 ºC dan sebagian lagi dilakukan fraksina
si bertingkat dengan n-heksan, kloroform, dan aquades. Proses fraksinasin p
2
ertama kali dilakukan dengan menggunakan pelarut n-heksan. Hasil fraksi n
on polar dikeringkan, dan fraksi polar difraksinasi lagi dengan pelarut kloro
form. Prosedur fraksinasi diulang untuk pelarut terakhir yaitu aquades. Hasi
l ekstraksi dan fraksinasi dikeringkan dengan menggunakan rotary evaporat
or dengan suhu 40 ºC. Proses ekstraksi dan fraksinasi dilakukan dalam 3 kal
i ulangan.
 Uji Aktivitas Antibakteri
Pengujian aktivitas antibakteri pada hasil ekstraksi dilakukan dengan meto
de difusi sumur yang dimodifikasi (Clinical Laboratory Standards Institute,
2008). Ekstrak dan fraksi dilarutkan dalam DMSO dengan konsentrasi 500
mg/mL. Sebanyak 500 mL media NA yang telah disterilisasi dituang ke dal
1
am cawan sebanyak 25 ± 2 mL. Cawan yang berisi media tersebut kemudia
n didiamkan selama 1 jam hingga memadat. Pada media padat tersebut dibu
at tiga buah lubang berdiameter 6 mm. Langkah selanjutnya sebanyak 60 μ
L ekstrak dan fraksi dituangkan ke dalam satu sumur, selain itu dibuat juga
2
sumur untuk kontrol positif dan kontrol negatif. DMSO digunakan sebagai
kontrol negatif dan Maser et al., ALCHEMY Jurnal Penelitian Kimia, Vol. 1
3 (2017), No. 2 , Hal. 241-251 245 chloramphenicol (25 mg/mL) digunakan
sebagai kontrol positif. Kultur bakteri Staphylococcus aureus, masing-masi
ng diambil satu ose kemudian di gores pada media tersebut. Media kemudia
n diinkubasi pada suhu 37 oC selama 48 jam. Aktivitas antibakteri dihitung
berdasarkan DIZ (diameter of inhibition zone). Pengujian dilakukan dalam
3 kali ulangan
 Analisis Profil Kimia dengan HPLC
Analisis profil kimia ekstrak dan fraksi bunga kecombrang diawali dengan melarut
kan ekstrak dan fraksi bunga kecombrang dalam DMSO dengan konsentrasi 0,8 µg
/mL dan divorteks. Sebanyak 1 mL larutan ekstrak dan fraksi bunga kecombrang di
saring dengan penyaring regenerated membrane dan ditransfer ke vial. Sampel sela
njutnya disuntikkan ke dalam HPLC sebanyak 40 µL. HPLC yang digunakan adala
1
h HPLC Perkin Elmer Series 200 dengan Detektor UV-VIS 785A dengan kolom C
18, 4 µm, 150x3,9 mm. Ekstrak diukur pada panjang gelombang 250 nm, 270 nm,
290 nm, 310 nm, 330 nm, dan 350 nm. HPLC dioperasikan pada suhu ruang denga
n laju alir 1 mL/menit. Fase gerak yang digunakan adalah fase gerak A 90 % laruta
2
n asam asetat 0,1 % sebanyak dan fase gerak B 10 % asetonitril. Elusi dilakukan se
cara gradien dalam waktu 25 menit. Hasil kromatogram ekstrak dan fraksi dengan
data serapan UV (250 nm, 270 nm, 290 nm, 310 nm, 330 nm, dan 350 nm) pada w
aktu-waktu retensi dikorelasikan dengan aktivitas antibakteri yang diketahui. Krom
atogram yang dihasilkan dari 3 kali ulangan ekstrak E (etanol), fraksi K (kloroform
), dan fraksi A (air) dengan 6 serapan UV adalah sebanyak 54 kromatogram. Data p
rofil kimia dari kromatogram ditunjukkan dengan selang waktu retensi setiap 0,16
menit. Data profil kimia akan dikorelasikan dengan data aktivitas antibakteri meng
gunakan analisis OPLS.
Uji Aktivitas Antibakteri Ekstraksi 150 g tepung bunga kecombrang dengan
menggunakan etanol menghasilkan ekstrak E (etanol) berupa gum berwarna
coklat (3,80 g). Hasil fraksinasi hanya diperoleh 0,2 g dari fraksi K (kloroform)
dan 5 g dari fraksi A (air). Hasil pengujian aktivitas antibakteri ekstrak dan
fraksi bunga kecombrang yang ditunjukkan pada Tabel 1. Daya hambat (DIZ)
pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus dengan konsentrasi 500 mg/mL
diketahui hanya ada pada fraksi kloroform dengan rata-rata penghambatan
sebesar 3,78 mm. Kloramfenikol dengan konsentrasi 25 mg/mL menujukkan
daya hambat yang sangat besar sebesar 8,34 mm dan DMSO tidak
menunjukkan adanya penghambatan. Penggunaan DMSO sebagai kontrol
negatif juga dilakukan oleh Ghasemzadeh et al. (2015), Susanti et al. (2013),
dan Abdelwahab et al. (2010).
Penelitian Susanti et al. (2013) menunjukkan bahwa konsentrasi 10 μL ekstrak
bunga kecombrang dapat memberikan daya hambat sebesar 3 mm pada bakteri
Staphylococcus aureus. Menurut Ghasemzadeh et al. (2015), ekstrak bunga
kecombrang
Kelantan pada konsentrasi 10 mg/mL memberikan daya hambat sebesar 8,4
mm, pada konsentrasi yang sama ekstrak bunga kecombrang Johor memberikan
daya hambat sebesar 4,0 mm, dan ekstrak bunga kecombrang Pahang
memberikan daya hambat sebesar 9,2 mm. Perbedaan pada kondisi cuaca atau
gizi dan jenis tanah tempat tumbuhnya kecombrang dapat mempengaruhi
konsentrasi dan jenis komponen penyusun aktif pada bunga kecombrang
(Ghasemzadeh et al., 2015). Hal ini dapat memberikan pengaruh terhadap
aktivitas penghambatan ekstrak bunga kecombrang pada bakteri Staphylococcus
aureus. Selain itu, penelitian Abdelwahab et al. (2010) juga menunjukkan
adanya aktivitas penghambatan dari ekstrak seluruh bagian tanaman
kecombrang pada konsentrasi 100 mg/mL terhadap bakteri Staphylococcus
aureus dengan daya hambat sebesar 4,5 mm.
Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa aplikasi metabolomik berbasis
HPLC dapat secara cepat digunakan untuk mengidentifikasi komponen
aktif dari ektrak dan fraksi tanaman. Uji aktivitas antibakteri terhadap
pertumbuhan Staphylococcus aureus menunjukkan adanya daya
hambat (DIZ) pada fraksi kloroform rata-rata sebesar 3,78 mm dengan
konsentrasi 500 mg/mL.
JURNAL 4
Potylgonum orientale L. “Studi metabolomik tentang efek intervensi Formula Shuihonghuazi (sebuah
formula Obat Tradisional Cina, pada tikus hepatoseluler karsinoma (HCC)
menggunakan kinerja HPLC / ESI-TOFMS”
 Metabolomik, sebagai pendekatan sistemik, itu mengadopsi strategi 'top-down' untuk mencerminkan fungsi

01 organisme dari gejala terminal dari jaringan metabolik dan memahami jaringan target obat yang disebabkan ole
02
h intervensi dalam konteks holistik (13). Sifat ini sejalan dengan kemanjuran holistik Pengobatan Tradisional Ci
na (TCM), yang menunjukkan bahwa metabolomik memiliki potensi untuk mempengaruhi pemahaman teori TC
M (14, 15). Metabolit penanda dapat menjadi target terapi juga (16). Kanker hati adalah salah satu kanker palin
g mematikan yang membuatnya menjadi penyebab kematian kanker yang paling sering ketiga pada pria dan k
eenam pada wanita (17, 18). Kanker hati terdiri dari beberapa keganasan hati primer yang berbeda secara hist
ologis, seperti kolangiokarsinoma, hepatoblastoma, dan haemangiosarcoma, tetapi karsinoma hepatoseluler (H
CC) merupakan jenis yang paling umum, terhitung 70% -85% kasus (19). Model hewan untuk HCC manusia d
apat membantu memahami mekanisme yang mendasari pengobatan SHHZF dari HCC. Bahan kimia dapat me
nginduksi HCC pada hati tikus (20-22), dan dietilnitrosamin (DEN) dan aflatoksin B1 adalah yang paling sering
digunakan hepatocarcinogens pada tikus (22, 23). Dalam penelitian ini, karsinogen genotoksik, DEN digunakan
sebagai mutagen HCC pada tikus. Kemoterapi, terapi ablasi dan terapi radiasi adalah metode utama dalam pe
ngobatan kanker. Tetapi metode ini berbiaya tinggi dan tingkat kelangsungan hidup rendah.
 Formula Shuihonghuazi (SHHZF), formula TCM, telah digunakan secara efisien dan luas
02
03 sebagai pengobatan dini untuk karsinoma hepatoseluler (HCC) selama lebih dari tiga
puluh tahun di Cina. Formula ini terdiri dari empat obat herbal: Polygoni orientalis fructus,
Ophicalcitum, Coicis Semen dan Imperatae Rhizoma, dan bahan aktifnya diklarifikasi
dalam referensi . Meskipun SHHZF telah digunakan untuk menyembuhkan pasien
kanker hati secara klinis, mekanismenya masih belum jelas. Kemajuan terbaru dari
instrumentasi dan komputasi memungkinkan analisis simultan dari sejumlah besar
metabolit. HPLC digabungkan dengan MS merupakan kombinasi yang efektif untuk
identifikasi dan kuantifikasi metabolit karena resolusi dan sensitivitasnya yang sangat
baik. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mendapatkan pandangan sistematis tentang
diseksi mekanisme SHHZF sebagai pengobatan yang efektif untuk HCC serta
mengidentifikasi beberapa metabolit yang dapat memfasilitasi pemahaman tentang
tindakan SHHZF dan membantu penggabungan mereka ke dalam perbaikan terapi TCM
di masa depan. Dengan demikian, sebuah sistem penghubung Agilent HPLC-ESI-TOF-
MS yang dilengkapi dengan kolom Agilent Poroshell 120 SB-C18 dengan ukuran partikel
2,7 μm dan perangkat lunak Agilent MPP 12.1 digunakan dan dirancang untuk
menjelaskan pengobatan untuk SHHZF pada Tikus dengan DEN yang diinduksi HCC .
 Analisis HPLC-ESI-TOF-MS. Analisis HPLC-MS dilakukan pada sistem Agilent 1100
1 HPLC (Agilent Corporation, USA) yang digabungkan dengan waktu Agilent dari Mass
Spectrometer penerbangan yang dilengkapi dengan ionisasi electrospray.

2 Pemeriksaan Histopatologis
2
 Hewan
Tikus Sprague-Dawley jantan dengan berat
130-150 g disimpan dalam kondisi standar
(cahaya dari jam 6 pagi sampai 6 sore, 21
± 1 ◦C) dengan makanan dan air yang
disediakan ad libitum.
B D
A
Bahan kimia &
C Reagen
Asetonitril dan metanol (kadar HPLC),air suling, asam format
grade HPLC. Polygoni orientalis fructus, Ophicalcitum, Coicis
Semen dan Imperatae Rhizoma. Semua obat mentah
diautentikasi oleh Prof. Yanjun Zai, Departemen Kedokteran
Tradisional Cina Universitas Liaoning. SHHZF disiapkan di
laboratorium kami dan kemudian diproses menjadi gram oleh
Kota Qinhuangdao Taiji Ring Nano Products Co, Ltd.
 Pengambilan sampel dan
penanganan hewan.

• Sebanyak 90 tikus dibagi menjadi empat kelompok. 30 di kelompok kontrol, 30 di kelompok model, 15 di
kelompok SHHZF, dan 15 di kelompok CTX.
• Semua tikus kecuali tikus dalam kelompok kontrol diberi DEN dengan dosis 70 mg / kg (Sigma, AS) dan
dilarutkan dalam larutan NaCl 0,9% (salin) dari hari pertama hingga 14 minggu percobaan setiap hari.
• Setelah 7 minggu, tikus dalam kelompok SHHZF dan CTX mulai memberikan SHHZF (757mg / kg, dilarutkan
dalam PEG-400) dan siklofosfamid (CTX, 10,5 mg / kg, dilarutkan dalam larutan garam) sekali sehari sampai
minggu ke-16.
• Tikus dalam kelompok kontrol dan model dikorbankan pada minggu ke 2, 4, 8, 11, 15, dan 16 secara acak (3
tikus kelompok kontrol dan 3 tikus kelompok model), hati dikumpulkan dalam larutan paraformaldehyde untuk
pemeriksaan histopatologis.
• Semua tikus dikorbankan pada minggu terakhir dan sebagian hati juga digunakan untuk pemeriksaan
histopatologis.
• Jaringan hati yang tersisa disimpan pada suhu −80 ◦C untuk analisis metabolik. Jaringan hati hancur dan
diekstraksi dari 80% metanol dan disentrifugasi pada 13000 rpm selama 15 menit pada suhu 4 ◦C dan
disimpan pada suhu −80 ◦C untuk analisis metabolisme.
 Analisis histopatologi.

• Sampel-sampel hati diproses dan tertanam dalam blok parafin.

• Blok jaringan bagian dipasang pada slide, dideparfininasi dalam xylene,
didehidrasi dalam alkohol, dan bagian dengan ketebalan 5 μm
disiapkan.
• Kemudian, bagian tersebut diwarnai dengan hematoxylin dan eosin
(H&E).
• Perubahan patologis hati dan luasnya tumor hati diamati dan
didiagnosis di bawah mikroskop oleh ahli histopatologi.
Analisis HPLC-ESI-TOF-
MS.

• Analisis HPLC-MS dilakukan pada sistem Agilent 1100 HPLC (Agilent Corporation, USA) yang digabungkan
dengan waktu Agilent dari Mass Spectrometer penerbangan yang dilengkapi dengan ionisasi electrospray.
Agilent Poroshell 120 SB-C18 kolom (100 mm × 4,6 mm i.d., 2,7 μm, Agilent Corp, USA) digunakan untuk
analisis.
• Suhu kolom dipertahankan pada 35 ◦C; laju aliran fase gerak adalah 1,0 ml / menit dan volume injeksi adalah
4 μL.
• Fase gerak terdiri dari 0,1% asam format dalam air (A) dan asetonitril (B). Kolom dielusi dengan gradien linier
10-30% B lebih awal hingga 2,0 menit, 30–70% B lebih dari 2,0–5,0 menit, 70–80% B selama 5,0–12,0 menit,
80–98% B lebih dari 12,0– 14,0 mnt dan ditahan pada 98% B selama 3,0 mnt, dikembalikan ke 10% B selama
0,5 mnt dan kemudian ditahan selama 2,5 mnt pada laju aliran eluen 1,0 ml / mnt.
• Untuk analisis HPLC-TOF-MS, kondisi optimal adalah sebagai berikut: sumber ion adalah Dual ESI, tegangan
kapiler 3500V, suhu gas 250 ◦C, gas pengeringan 9 L / menit, nebulizer 45 psig, tegangan fragmentor dari 120
V, tegangan skimmer 65 V, tegangan OCT 1RF Vpp 250 V,. Suntikan dengan mode pencuci jarum digunakan
pada auto-sampler. Data spektrometri massa diperoleh dalam mode dari 50 hingga 1050 m / z dengan laju
akuisisi 1,5 spektra / s. Data dikoreksi dan diperoleh selama akuisisi menggunakan larutan campuran koreksi
(Agilent, USA, m / z = 112.985587, m / z = 1033.988109) untuk memastikan akurasi selama analisis MS.
 Pemrosesan data dan
analisis data multivarian.

• Data massa yang diperoleh diimpor ke perangkat lunak Analisis Kualitatif Agilent (versi
B.04.00, Agilent Corporation, USA) dalam Molecular Feathers Extraction (MFE) untuk deteksi
puncak dan perhitungan massa.
• Matriks data yang dihasilkan diperkenalkan ke perangkat lunak Agilent MPP (versi 12.1,
Agilent Corporation, USA) untuk penyelarasan, normalisasi, signifikansi, PLS-DA, dan
analisis jalur.
• Marker potensial diekstraksi dari analisis PLS-DA, dan marker yang dipilih memiliki arti
penting dalam proyeksi (VIP)> 2. Marker potensial yang dihasilkan diidentifikasi dengan ID
Browser, kemudian analisis MS / MS dengan menggunakan Waters Xevo G2 QTOF.
• Puncak metabolit diinterpretasikan dengan database biokimia yang tersedia, seperti HMDB,
http://www.hmdb.ca/; KEGG, http://www.genome.jp/kegg/; METLIN, http://metlin.scripps.edu/;
Pemeriksaan
Histopatologis Analisis
Metabolomik
Pemeriksaan Histopatologis
Temuan kotor permukaan hati tikus (A. kelompok
kontrol; B. HCC yang diinduksi DEN 2 minggu; C.
HCC yang diinduksi DEN 4 minggu; D. HCC yang
diinduksi DEN 8 minggu; E. HEN yang diinduksi DEN
11 minggu; E. HEN yang diinduksi HEN 11 minggu; ;
F. DCC yang diinduksi DEN 15 minggu; G. HCC yang
diinduksi DEN 16 minggu; kelompok H. SHHZF; I.
kelompok CTX). Semua nodul hati yang terlihat
secara makroskopik lebih besar dari diameter sekitar
1mm dihitung. Dengan periode percobaan
pertumbuhan tumor dan nodul lebih besar sampai
integrasi penuh hati. Tidak ada atau lebih sedikit
nodul yang ditemukan di permukaan hati tikus pada
kelompok yang diobati SHHZF dibandingkan dengan
yang ada dalam kelompok model DEN. Nodul
ternyata lebih sedikit pada kelompok yang diobati
dengan CTX (kelompok kontrol positif) dibandingkan
dengan kelompok yang diobati dengan SHHZF.
Temuan histopatologis pada tumor hati yang
diwarnai dengan HE: (A1, A2) bagian bernoda HE
dari kelompok kontrol (10 × dan 40 ×); (B1, B2)
Bagian yang diwarnai HE HCC yang diinduksi DEN
2 minggu (10 × dan 40 ×); (C1, C2) Bagian yang
diwarnai HE dari HEN yang diinduksi DEN 4 minggu
(10 × dan 40 ×); (D1, D2) Bagian yang diwarnai HE
dari HEN yang diinduksi DEN 8 minggu (10 × dan 40
×); (E1, E2) Bagian yang diwarnai HE dari HEN yang
diinduksi DEN 11 minggu (10 × dan 40 ×); (F1, F2)
Bagian bernoda HE dari HEN yang diinduksi DEN 15
minggu (10 × dan 40 ×); (G1, G2) Bagian yang
diwarnai HE dari HEN yang diinduksi DEN 16
minggu (10 × dan 40 ×); (H1, H2) Bagian bernoda
HE dari kelompok SHHZF (10 × dan 40 ×); (I1, I2)
Bagian bernoda HE dari kelompok CTX (10 × dan 40
×). Hati hewan kelompok kontrol menunjukkan
arsitektur hepatoseluler normal. Hewan yang diobati
dengan SHHZF dan CTX menunjukkan lebih sedikit
sel neoplastik, arsitektur mendekati normal, dan
peningkatan signifikan dalam histopatologi hati
dibandingkan dengan kelompok model.
Pertimbangan komprehensif: efek terhambatnya
perkembangan tumor SHHZF lebih baik.
Analisis Metabolomik
Kromatogram ion total representatif
(TIC) yang berasal dari HPLC-ESI-
TOF-MS. (A. Kelompok kontrol; B.
Kelompok model; Kelompok
C.SHHZF; Kelompok D.CTX)
 Spektrum MS / MS dari biomarker potensial dan
struktur fragmennya (A.Inosine; B. Xanthosin; CL-
Trytophan; D. Asam taurocholic; E.Glycocholic acid;
F.cis-11,14,17-Eicosatrienoic acid;
G.Glycerylphosphorylethanolamine; H.PI (18: 0/0: 0);
I.LysoPE (16: 0/0: 0); J.N-acetyl-LTE4; K.Adrenic
acid; L.PE (18: 0/0 : 0); M.EPA; N.PC (18: 0/0: 0);
asam O.Docosahexaenoic; P. Asam arakidonat; Q.
Asam linoleat; R. (7Z, 10Z, 13Z, 16Z, 19Z) - asam
docosapentaenoic)
Hasil model PLS-DA untuk semua kelompok.
Perbedaan metabolisme yang signifikan
ditunjukkan antara kelompok kontrol dan
model. Satu titik data adalah singkatan dari
satu subjek (□, grup kontrol; △, grup model; ○,
grup SHHZF; ◇, grup CTX). Resimen SHHZF
mengembangkan kecenderungan jauh ke
beragam kelompok model, menunjukkan
bahwa SHHZF dapat memiliki beberapa efek
terapi pada HCC.
 Memuat plot PLS-DA dari HCC. Plot
pemuatan mewakili dampak metabolit pada
hasil pengelompokan. Plot pemuatan PLS-DA
menampilkan variabel-variabel yang
berkorelasi positif dengan plot skor. Metabolit
yang berbeda secara statistik dan signifikan
yang bertanggung jawab atas diskriminasi
kelompok diidentifikasi. R2X, R2Y, dan Q2
(cum).
Protokol DEN digunakan untuk menentukan efek
terapi pada hepatokarsinogenesis SHHZF in vivo dan
kemudian mekanisme metabolisme dieksplorasi.
Hasilnya menunjukkan bahwa SHHZF dapat
mengaktifkan berbagai faktor yang terlibat dalam
metabolisme lipid, metabolisme asam empedu dan
metabolisme asam amino, dll. Analisis metabolik dari
HCC yang diobati dengan SHHZF disimpulkan dari
perubahan zat antara selama metabolisme zat dalam
penelitian ini. Analisis lebih lanjut mengungkapkan
bahwa metabolit yang diidentifikasi bersama adalah
penting untuk HCC yang diobati SHHZF melalui
metabolisme lipid, metabolisme asam empedu dan
metabolisme asam amino, dll.
Tingkat ekspresi diferensial (Log (A / Amean)) dari
biomarker potensial dalam kelompok yang berbeda.
(hitam, kelompok kontrol; merah, kelompok model;
biru, kelompok SHHZF; hijau, kelompok CTX)
Jalur metabolisme korelatif PE
Model HCC telah di konstruksi, dan profil metabolik diselidiki oleh
HPLC-ESI-TOF-MS dikombinasikan dengan analisis statistik
multivariat, biomarker potensial dari kontribusi signifikan ditandai
23 karakteristik dalam mode negatif. Yang perlu diingat, resimen
SHHZF mengembangkan kecenderungan yang jauh ke beragam
kelompok model dan dapat diatur kembali ke tingkat garis dasar
mereka ke kelompok kontrol, yang menunjukkan bahwa SHHZF
dapat memiliki peran terapeutik yang baik dari HCC dan menjaga
kesamaan pada situasi normal hewan.

SHHZF dapat meningkatkan penyerapan dan pemanfaatan asam linoleat

dan asam oleat, yang dapat meningkatkan kekebalan organisme tikus
kanker. Dan juga bisa menambah konten PC (18: 0/0: 0) dan surut PE (18:
0/0: 0), GPE, 5-methylTHF dan sebagainya. Hasil ini berimplikasi pada efek
antitumor SHHZF dan bertindak melalui mediasi aktivitas PEMT,
lisofosfatidik, dan MTHFR.

SHHZF dapat memediasi dan bermain bersama dengan banyak

jalur metabolisme, seperti metabolisme lipid, metabolisme asam
empedu dan metabolisme asam amino, dll. Ini memberikan bukti
kuat bahwa efek antitumor dari SHHZF terjadi pada tingkat
metabolisme global.
JURNAL 5
Metabolomics Berbasis FTIR dan Ekstrak Daun Yacon HPLC
 Smallanthus sonchifolius [Poepp. & Endl.] H. Robinson atau Yacon adalah tanaman abadi dari keluarga Ast

01 eraceae asli, yang terletak di wilayah Andes di Amerika Selatan, yang membentang dari Kolombia ke Argentina
02
. Tanaman yang dibudidayakan secara global ini juga ditemukan di Eropa, Selandia Baru dan bahkan Asia (Jep
ang dan Indonesia) [1]. Dibudidayakan di Lembang, Provinsi Jawa Barat, dan di Indonesia Wonosobo, Provinsi
Jawa Tengah; Yacon telah banyak digunakan sebagai obat tradisional untuk mengobati diabetes di Indonesia.
Saat ini, daunnya banyak digunakan sebagai obat herbal untuk mengobati diabetes, sering diberikan dalam be
ntuk simplisia tunggal atau dicampur dengan simplisia lain dalam bentuk kapsul atau teh celup.
 Kehadiran konstituen fenolik dalam Yacon telah dikaitkan dengan efek antidiabetik
02
03 (hipoglikemik) dan antihipertensi [2]. Studi oleh banyak peneliti juga telah melaporkan
kapasitas anti-inflamasinya, diamati melalui profil metabolik dari senyawanya [3], dan
aktivitas antidiabetik melalui penghambatan α-glukosidase [4]. Meskipun beberapa
penelitian tentang kandungan phytochemical dari Yacon, belum ada laporan tentang
perbandingan dan diferensiasi profil metabolit Yacon, tumbuh dan diperoleh dari lokasi
yang berbeda di Pulau Jawa. Perbandingan dan diferensiasi seperti itu diperlukan untuk
memastikan kualitas efek potensial yang telah disebutkan di atas, karena kemungkinan
menyelidiki dan membuktikan variasi kimia sebagai akibat dari perbedaan geografis,
mungkin juga memiliki potensi dalam bidang pharmaco-botani, menuju mencapai
pertumbuhan optimal Yacon untuk menunjukkan potensi tertentu yang diinginkan.
 Metode FTIR
1

2 metode HPLC
Bahan daun Yacon dikumpulkan
dari Perkebunan Najwa Herbal di
Wonosobo, Jawa Tengah dan
Perkebunan Manoko di
Lembang, Jawa Barat Etanol, A
asetonitril (kadar HPLC), dan
asam format dibeli dari Merck,
Darmstadt, Jerman. Sementara
B D
kalium bromida untuk
spektroskopi dibeli dari Sigma
C \
Aldrich, St. Louis, AS.
 Preparasi dan
ekstraksi sampel.
• Daun Yacon dikeringkan, digiling, dan diayak dengan ayakan 40 mesh. Sekitar 20
g bubuk daun Yacon diekstraksi menggunakan 100 mL etanol 95%, setelah itu
ekstrak dikumpulkan dari campuran yang disaring. Residu diekstraksi dua kali
dengan ultrasonication selama 30 menit menggunakan ± 50 mL etanol 95%, yang
membawa total volume pelarut yang digunakan menjadi 200 mL. Semua ekstrak
dikumpulkan, sedangkan pelarut residu diuapkan menggunakan vacuum rotary
evaporator, setelah itu ekstraknya kemudian dikeringkan menggunakan freeze
dryer. Demikian pula, prosedur yang sama diulang untuk etanol dan air 50%.
Sepuluh replikasi dibuat sehingga 60 fraksi diperoleh. Ekstrak yang dihasilkan
diberi nama sesuai dengan asal, pelarut ekstraksi dan nomor ulangan, misalnya:
B91 = Yacon dari Lembang diekstraksi dengan 95% replikasi etanol 1, JW1 =
Yacon dari Wonosobo diekstraksi dengan replikasi air 2.
 Pengukuran spektrum FTIR
Spektrum

• FTIR diperoleh dari setiap ekstrak, dengan dua (2) pengukuran sekitar 2 mg
setiap ekstrak daun Yacon, dicampur secara homogen dengan 0,2 g kalium
bromida, selanjutnya ditekan untuk membentuk tablet. Menggunakan perangkat
lunak OPUS 4.2 (Bruker Optik GmbH, Karlsruhe, Jerman), spektrum FTIR diukur
di wilayah 4000-400 cm-1
HPLC analysis

Analisis HPLC dilakukan sebagai berikut: C18 fase diam, detektor UV

254 nm, 1 mL / menit debit; Volume injeksi 20 μL dengan teknik
gradien elusi menggunakan komposisi fase gerak yang berasal dari 0–5
menit (ACN 15%), 5–15 menit (ACN 15–50%), 15–30 menit (ACN 50–
70%), 30 –45 menit (ACN 70–85%), dan 45–60 menit (ACN 85-95%)
dengan debit 1 mL / menit dengan waktu analisis 60 menit. Kolom
perairan, kolom × pengantin, dimensi (4,6 mm × 150 mm × 5 m), yang
diperoleh dari Waters Corporation, 34 Maple Street, Milford,
Massachusetts, AS.
Spektra FTIR dari
Ekstrak Daun
Yacon Spektra PCA FTIR-Data dan
PCA HPLC-Data
 Spektra FTIR dari
Ekstrak Daun Yacon
Spektra
Hasil dari spektrum FTIR menunjukkan bahwa sampel dari
kedua daerah, yang diekstraksi menggunakan pelarut yang
sama, menunjukkan spektrum yang sama. pola secara
kualitatif meskipun nilai intensitas penyerapan berbeda. Oleh
karena itu, disimpulkan secara langsung
Pengamatan kualitatif terhadap spektrum tidak memadai untuk
mengungkapkan perbedaan dalam asal-usul geografis
tanaman dan kesimpulan lain terhadap variasi komposisi kimia
sampel.
PCA FTIR-Data
Sampel ekstrak etanol 95% menunjukkan absorbansi yang lebih tinggi di suatu daerah dalam kisaran
2700-1700 cm-1, yang ditafsirkan memiliki serapan yang lebih tinggi dari gugus hidroksil dari asam (OH
dalam kisaran 2500 –2700 cm – 1), alkana (C – H, dalam kisaran 2850–3000 cm – 1), peregangan CH
(1450–1470) dan gugus fungsional karbonil (C = O) dari asam aldehida / keton / karboksilat (1675–1740
cm -1) dan –C – O – C dari eter (1230–1270). Sementara itu, 50% sampel ekstrak etanol menunjukkan
absorbansi lebih rendah dalam kisaran 1700-400 cm -1, menunjukkan adanya kelompok metil (-CH3
dalam kisaran 1470–1340 cm – 1), alkena (C – H dalam kisaran 995–675 cm – 1), gugus fungsi C-O
alkohol, eter, asam karboksilat dan ester [12], dibandingkan dengan kelompok lain. Temuan ini
beresonansi dengan banyak temuan sehubungan dengan sampel ekstrak etanol 50% menyerupai sampel
ekstrak etanol 95%, kecuali dalam kisaran bilangan gelombang 1700-1500 cm -1 yang dapat dikaitkan
dengan penyerapan primer dan gugus fungsional amina sekunder N – H, pembengkokan amina (1575–
1650 cm – 1) C = N: imina, oksim (1640–1690 cm – 1), C = O: amida (1640–1670 cm – 1) dan dalam
kisaran 2853–2929 cm – 1. Namun, ekstrak etanol 50% menunjukkan penyerapan yang lebih rendah dari
kelompok fungsional alkana C-H peregangan, dibandingkan dengan sampel ekstrak etanol 95%.
Khususnya, sampel ekstrak air juga menunjukkan penyerapan terendah pada kisaran tersebut di atas.
PCA HPLC-Data
Profil kromatogram HPLC dari ekstrak daun Yacon dari kedua sampel ,
menunjukkan kesamaan dengan perincian berikut; 36 puncak terdeteksi pada
setiap ekstrak kromatogram, namun dalam ekstrak etanol 50% dan 95% Yacon B,
angka puncak: 5 dan 30 (P5 dan P30) terdeteksi dengan nilai area 0,000%.
Khususnya, kesamaan dan jumlah puncak membuat profil kromatogram sulit
dibedakan secara visual. Oleh karena itu, penyelidikan lebih lanjut dilakukan
dengan menggunakan PCA untuk membedakan profil sampel.
Kromatogram terukur menjadi sasaran pra-pemrosesan data dan PCA, mirip
dengan spektra FTIR. PCA yang dihasilkan memiliki 3 komponen dan menangkap
variasi 85% dengan nilai Q2 pada 0,68, yang menunjukkan bahwa transformasi
tersebut dapat diandalkan. Seperti yang diilustrasikan oleh plot skor PCA, sampel
dapat dibedakan berdasarkan asal geografis dan pelarut yang digunakan. PCA
biplot menunjukkan bahwa puncak berkorelasi dengan kelompok asal geografis,
sebagai sampel
 Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa FTIR dan
Metabolomics Berbasis HPLC didukung oleh Principal
Component Analysis (PCA), yang dilakukan Untuk menangkap
dan membedakan asal geografis unik daun Yacon dan
karakteristik pelarut yang menyertainya untuk ekstraksi, akan
sulit dilakukan hanya melalui pengamatan dan perbandingan
visual langsung. Khususnya, FTIR mampu mengelompokkan
sampel Yacon berdasarkan pelarut, tetapi tidak mampu
mengklasifikasikannya berdasarkan asal geografisnya. Namun,
HPLC mampu secara jelas mengelompokkan sampel Yacon
berdasarkan pada pelarut dan asal geografis. Demonstrasi
kemampuan tersebut dapat digunakan untuk menyusun
hipotesis dan evaluasi untuk penelitian masa depan,
sehubungan dengan variasi senyawa metabolit pada aktivitas
sampel, mis. aktivitas antiinflamasi atau aktivitas antidiabetes,
yang dapat dievaluasi melalui kombinasi FTIR / HPLC dan PCA
untuk investigasi.
Thank you