2.

2 Persiapan Tetes Mata Nepafenac

Nepafenac (18 mg) ditambahkan ke 6 mL larutan 15%
γ-CD / 8% HP-βCD (w / v) cairan mengandung polimer
yang berbeda (Tabel 2), 0,1% (w / v) EDTA, 0,02% (w /
v) BAK, dan 0,04% (w / v) NaCl.
Selanjutnya, suspensi ditempatkan dalam penangas air ultrasonik (Branson
3510 Ultrasonic Cleaner, Marshall Scientific, Hampton, NH, USA) pada
suhu 60◦C selama 60 menit. Mereka didinginkan ke kamar suhu dan
disimpan dalam pengocok (Unitronic, JP Selecta, Spanyol) di bawah agitasi
konstan selama 7 hari di 37◦C. Setelah ini, suspensi disaring (Acrodisc®
Syringe Filter, 0,22 µm; GHP Minispike, Waters) dan disentrifugasi pada
4000 rpm selama 15 menit pada 25◦C (model centrifuge 5804R, Eppendorf
AG, Jerman), dan supernatan diencerkan dengan air Milli-Q. Kelarutan
nepafenac jelas ditentukan dengan spektroskopi UV-Vis pada 254 nm
menggunakan kurva kalibrasi standar yang sebelumnya divalidasi dalam
rangkap tiga dalam kisaran 3–25 µg / mL.
2.7 Ex Vivo kornea dan permeabilitas skleral
Studi ex vivo kornea dan permeabilitas skleral dari formulasi nepafenac terpilih dilakukan
keluar menggunakan mata sapi segar dari rumah jagal lokal. Mata disimpan dalam buffer fosfat
larutan garam (PBS) dengan antibiotik yang sebelumnya ditambahkan (penisilin 100 IU / mL dan streptomisin) 100 µg /
mL) dan dipertahankan dalam penangas es selama pengangkutan. Kornea dan skleranya diisolasi, dicuci dengan PBS,
dan ditempatkan pada sel Franz difusi vertikal. Fase reseptor dan donor terisi dengan buffer karbonat, pH 7,2,
mengikuti protokol opasitas dan permeabilitas kornea sapi (BCOP), ditempatkan dalam bak mandi pada suhu 37◦C, dan
disimpan di bawah pengadukan magnet selama 1 jam untuk menyeimbangkan jaringan mata. Setelah ini, penyangga
dalam ruang donor dihilangkan seluruhnya dan diganti dengan formulasi (2 mL). Ruang ditutup dengan parafilm untuk
mencegah penguapan (tersedia untuk area 0,785 cm2 perembesan). Sampel (1 mL) dikeluarkan dari ruang reseptor
pada 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, dan 6 jam, mengganti volume yang sama dengan buffer karbonat setiap kali, dan berhati-hati
dalam menghilangkan gelembung sel difusi. Semua percobaan dilakukan dalam rangkap tiga.
Nepafenac yang meresap diukur pada 254 nm menggunakan sistem HPLC Jasco (autosampler AS-4140,
Pompa PU-4180, kotak antarmuka LC-NetII / ADC, oven kolom CO-4060, susunan fotodioda MD-4010
detektor), dengan kolom C18 (Waters Symmetry C18, 5 µm, 3.9 × 150 mm) dan perangkat lunak ChromNAV.
Fase gerak terdiri dari asetonitril: air (50:50) dengan laju alir 1 mL / menit dan 90 µL untuk
volume injeksi dan waktu retensi 1,9 menit. Setelah 6 jam uji permeasi, alikuot dari ruang donor diambil untuk analisis
HPLC. Kornea dan sklera yang telah diinjeksi sebelumnya dipotong dan kandungan nepafenac diekstraksi dalam tabung
dengan 3 mL campuran etanol / air (50:50 v / v) selama 24 jam pada suhu 37◦C, dan sonikasi diaplikasikan untuk 90
menit dalam rendaman ultrasound pada 37 37C. Setelah itu, tabung disentrifugasi (1000 rpm, 5 menit, 25◦C), dan
supernatan disaring (Acrodisc® syringe filter, 0.22 µm GHP Minispike, Waters) menjadi kecil Eppendorfs, disentrifugasi
kembali (14.000 rpm, 20 menit, 25◦C), dan disaring untuk diukur dengan HPLC. Koefisien permeabilitas semu (Papp)
dihitung dari fluks (J) menurut
Persamaan (3):
di mana J adalah fluks, dihitung sebagai kemiringan (Q / t) dari penampang
linier jumlah obat diruang reseptor (Q) versus waktu (t), dan C0 adalah
konsentrasi awal nepafenac di donor tahap. Setiap percobaan dilakukan
dalam rangkap tiga dan hasilnya dilaporkan sebagai nilai rata-rata ± deviasi
standar (SD).