MAKALAH ANALISIS INSTRUMEN 1

SPEKTROSKOPI SERAPAN MOLEKUL UV-VIS

KELOMPOK :4
ANGGOTA : 1. RIZKI GUNAWAN
2. SITI VEREN JOANA SURI
3. WINA RIANI MELISKA
DOSEN : Dr. Mawardi, M. Si.

JURUSAN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS NEGERI PADANG
2019
 DAFTAR ISI

COVER.......................................................................................................... i
DAFTAR ISI..................................................................................................ii
BAB 1. PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang..........................................................................................1
1.2 Rumusan Masalah.....................................................................................1
1.3 Tujuan........................................................................................................2
BAB 2. Tinjauan Pustaka
2.1 Spesies Penyerap.......................................................................................3
2.1.1 Penyerapan oleh Senyawa Organik........................................................4
2.1.2 Penyerapan oleh Spesies Anorganik......................................................6
2.1.3 Penyerapan Transfer Muatan.................................................................7
2.2 Aplikasi Kualitatif Spektroskopi Ultraviolet/Visible...............................8
2.2.1 Pelarut....................................................................................................9
2.2.2 Pengaruh Lebar Celah...........................................................................10
2.2.3Pengaruh Radiasi Liar pada Ekstrem Panjang Gelombang dari sebuah
Spektrofotometer...................................................................................10
2.3 Aplikasi Kuantitatif..................................................................................12
2.3.1 Cakupan.................................................................................................12
2.3.2 Detail Prosedur......................................................................................14
2.3.3 Pengaruh Ketidakpastian Instrumental..................................................19
BAB 3. PENUTUP
3.1 Kesimpulan...............................................................................................24
3.2 Saran..........................................................................................................24
DAFTAR
PUSTAKA.......................................................................................................25

ii
 BAB 1
PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Pembuatan kaca adalah salah satu teknologi tertua, yang berasal dari periode
Neolitikum hampir 10.000 tahun yang lalu. Kaca biasa transparan karena elektron
valensi dalam struktur silikat tidak menerima energi yang cukup dari cahaya
tampak untuk dapat ditarik dari keadaan dasarnya di pita valensi struktur silikat ke
pita konduksi. Dimulai dengan orang Mesir pada milenium kedua SM, pembuat
kaca belajar menambahkan berbagai senyawa ke dalam gelas untuk menghasilkan
kaca berwarna. Aditif ini sering mengandung logam transisi untuk menyediakan
tingkat energi yang dapat diakses sehingga penyerapan cahaya terjadi, dan kaca
yang dihasilkan berwarna. Kaca berwarna digunakan secara luas dalam seni dan
arsitektur seperti, misalnya, di jendela kaca patri yang ditunjukkan di sini.
Spektroskopi optik digunakan untuk mengkarakterisasi kacamata berwarna
dengan merekam spektrum serapannya. Informasi ini digunakan dalam beberapa
bidang yang berbeda. Misalnya, dalam sejarah seni, spektrum serapan digunakan
untuk mengkarakterisasi, mengidentifikasi, dan melacak asal dan perkembangan
karya seni, dalam spektrum arkeologi digunakan untuk mengeksplorasi asal-usul
manusia, dan dalam forensik mereka digunakan untuk menghubungkan bukti
dalam investigasi kejahatan .
Penyerapan ultraviolet, radiasi tampak, dan inframerah banyak digunakan
untuk mengidentifikasi dan menentukan banyak spesies anorganik, organik, dan
biokimia. Spektroskopi penyerapan molekul uv-vis digunakan terutama untuk
analisis kuantitatif dan mungkin diterapkan lebih luas di laboratorium kimia dan
klinis daripada teknik tunggal lainnya. Spektroskopi serapan inframerah adalah
alat yang sangat bagus untuk menentukan identitas dan struktur senyawa
anorganik dan organik. Selain itu, sekarang memainkan peran penting dalam
analisis kuantitatif, khususnya di bidang pencemaran lingkungan.

1.2 Rumusan Masalah

a. Apa saja spesies penyerapan dari spektroskopi UV-Vis?

1
b. Bagaimana aplikasi kualitatif spektroskopi ultraviolet / visible.
c. Bagaimana aplikasi kuantitatif spektroskopi ultraviolet / visible.

1.3 Tujuan
a. Mengetahui spesies penyerapan dari spektroskopi UV-Vis,
b. Mengetahui aplikasi kualitatif spektroskopi ultraviolet / visible.
c. Mengetahui aplikasi kuantitatif spektroskopi ultraviolet / visible.
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA

2. Spektroskopi Serapan Molekul UV-Vis

Beberapa jenis spesies molekul menyerap radiasi ultraviolet dan sinar
tampak. Penyerapan molekuler oleh spesies ini dapat digunakan untuk analisis
kualitatif dan kuantitatif. Absorpsi UV-visible juga digunakan untuk memantau
titrasi dan mempelajari komposisi ion kompleks. Penggunaan spektrometri
serapan untuk mengikuti kinetika reaksi kimia untuk tujuan kuantitatif dijelaskan
pada Bab 30.

2.1 Spesies Penyerap

penyerapan ultraviolet dan radiasi tampak oleh molekul umumnya terjadi
dalam satu atau lebih pita serapan elektronik, yang masing-masing terdiri dari
banyak garis yang rapat tetapi terpisah. Setiap garis muncul dari transisi elektron
dari keadaan dasar ke salah satu dari banyak keadaan energi getaran dan rotasi
yang terkait dengan setiap keadaan energi elektronik tereksitasi. Karena ada
begitu banyak keadaan getaran dan rotasi ini dan karena energinya hanya sedikit
berbeda, jumlah garis yang terdapat pada pita tipikal cukup besar dan
pemisahannya satu sama lain sangat kecil.
Seperti yang kita lihat sebelumnya pada Gambar 24-14a, spektrum serapan
yang terlihat untuk 1,2,3,4-tetrazine uap memperlihatkan struktur halus yang
disebabkan oleh berbagai tingkat rotasi dan getaran yang terkait dengan keadaan
elektronik tereksitasi dari molekul aromatik ini. Dalam keadaan gas, molekul
tetrazin individu cukup terpisah satu sama lain untuk bergetar dan berputar secara

2
bebas, dan banyak garis penyerapan individu muncul sebagai akibat dari sejumlah
besar keadaan energi getaran dan rotasi. Namun, sebagai cairan atau larutan
murni, molekul tetrazin memiliki sedikit kebebasan untuk memutar, sehingga
garis-garis akibat perbedaan tingkat energi rotasi menghilang. Lebih jauh, ketika
molekul pelarut mengelilingi molekul tetrazin, energi dari berbagai tingkat
getaran dimodifikasi dengan cara yang tidak seragam, dan energi dari keadaan
tertentu dalam sampel molekul terlarut muncul sebagai puncak tunggal yang luas.
Efek ini lebih jelas dalam pelarut polar, seperti air, daripada di media hidrokarbon
nonpolar. Efek pelarut ini diilustrasikan dalam Gambar 24-14b dan 24-14c.

2.1.1 Penyerapan oleh Senyawa Organik

Penyerapan radiasi oleh molekul organik di daerah panjang gelombang antara
180 dan 780 nm dihasilkan dari interaksi antara foton dan elektron yang
berpartisipasi langsung dalam pembentukan ikatan (dan dengan demikian
dikaitkan dengan lebih dari satu atom) atau yang terlokalisasi tentang atom seperti
oksigen, sulfur, nitrogen, dan halogen.
Panjang gelombang penyerapan molekul organik tergantung pada seberapa
erat elektronnya terikat. Elektron bersama dalam ikatan karbon-karbon atau
karbon-hidrogen sangat kuat sehingga eksitasi mereka membutuhkan energi yang
sesuai dengan panjang gelombang di wilayah ultraviolet vakum di bawah 180 nm.
Spektrum ikatan tunggal belum banyak dieksploitasi untuk keperluan analitis

3
karena kesulitan eksperimental bekerja di wilayah ini. Kesulitan-kesulitan ini
terjadi karena kedua komponen kuarsa dan atmosfer menyerap di wilayah ini,
yang mengharuskan spektrofotometer yang dievakuasi dengan optik lithium
fluoride digunakan.
Elektron dalam ikatan rangkap dan rangkap tiga dari molekul organik tidak
memiliki ikatan yang kuat dan karenanya lebih mudah tereksitasi oleh radiasi
elektromagnetik. Dengan demikian, spesies dengan ikatan tak jenuh umumnya
menunjukkan pita serapan yang berguna. Gugus fungsi organik tak jenuh yang
menyerap ultraviolet atau daerah terlihat dikenal sebagai kromofor. Tabel 26-1
mencantumkan kromofor umum dan perkiraan panjang gelombang di mana
mereka menyerap. Data panjang gelombang dan intensitas puncak hanya
merupakan pengarah kasar karena keduanya dipengaruhi oleh efek pelarut serta
rincian struktural molekul. Selain itu, konjugasi antara dua atau lebih kromofor
cenderung menyebabkan pergeseran maksimum penyerapan ke panjang
gelombang yang lebih panjang. Akhirnya, seringkali sulit untuk menentukan
secara tepat maksimum penyerapan karena efek getaran memperluas pita
penyerapan dalam ultraviolet dan daerah yang terlihat. Spektrum khas untuk
senyawa organik ditunjukkan pada Gambar 26-1.

Senyawa organik jenuh yang mengandung heteroatom seperti oksigen,

nitrogen, belerang, atau halogen memiliki elektron yang tidak terikat yang dapat

4
tereksitasi dengan radiasi pada kisaran 170 hingga 250-nm. Tabel 26-2
mencantumkan beberapa contoh senyawa tersebut. Beberapa senyawa ini, seperti
alkohol dan eter, adalah pelarut umum. Penyerapannya di wilayah ini mencegah
pengukuran penyerapan analit yang dilarutkan dalam pelarut ini pada panjang
gelombang lebih pendek dari 180 hingga 200 nm. Kadang-kadang, penyerapan di
wilayah ini digunakan untuk menentukan senyawa halogen dan bantalan belerang.

2.1.2 Penyerapan oleh Spesies Anorganik

Secara umum, ion dan kompleks unsur-unsur dalam dua seri transisi
pertama menyerap pita lebar dari radiasi yang terlihat di setidaknya satu dari
tingkat oksidasi mereka. Hasilnya, senyawa ini diwarnai (lihat, misalnya, Gambar
26-2). Penyerapan terjadi ketika elektron melakukan transisi antara orbital d terisi
dan tidak terisi dengan energi yang bergantung pada ligan yang terikat pada ion
logam. Perbedaan energi antara orbital d-ini (dan dengan demikian posisi
maksimum penyerapan yang sesuai) tergantung pada posisi elemen dalam tabel
periodik, tingkat oksidasi, dan sifat ligan yang terikat padanya.
Spektrum serapan ion dari seri lantanida dan aktinida berbeda secara
substansial dari yang ditunjukkan pada Gambar 26-2. Elektron yang bertanggung
jawab untuk penyerapan oleh unsur-unsur ini (masing-masing 4f dan 5f)
dilindungi dari pengaruh eksternal oleh elektron yang menempati orbital dengan
jumlah kuantum utama yang lebih besar. Akibatnya, pita cenderung sempit dan
relatif tidak terpengaruh oleh spesies yang terikat oleh elektron terluar, seperti
yang ditunjukkan pada Gambar 26-3.

5
6
2.1.3 Penyerapan Transfer Muatan
Penyerapan transfer muatan sangat penting untuk analisis kuantitatif
karena absorptivitas molar luar biasa besar (e> 10.000 L mol1 cm1), yang
mengarah pada sensitivitas tinggi. Banyak kompleks anorganik dan organik
menunjukkan jenis penyerapan ini dan karenanya disebut kompleks transfer-
muatan.
Kompleks transfer-muatan terdiri dari kelompok donor-elektron yang terikat
pada akseptor elektron. Ketika produk ini menyerap radiasi, sebuah elektron dari
donor ditransfer ke sebuah orbital yang sebagian besar terkait dengan akseptor.
Keadaan tereksitasi dengan demikian merupakan produk dari semacam proses
oksidasi / reduksi internal. Perilaku ini berbeda dari kromofor organik di mana
elektron tereksitasi berada dalam orbital molekul yang dibagi oleh dua atau lebih
atom.
Contoh-contoh kompleks transfer-pengalihan yang lazim termasuk kompleks
fenolik dari besi (III), kompleks 1,10-fenantrolin dari besi (II), kompleks iodida
dari iodin molekuler, dan kompleks ferro / ferricyanide yang bertanggung jawab
atas warna biru Prusia . Warna merah kompleks besi (III) / tiosianat adalah contoh
lain dari penyerapan transfer-biaya. Penyerapan foton menghasilkan transfer
elektron dari ion tiosianat ke orbital yang sebagian besar terkait dengan ion besi
(III). Produk ini merupakan spesies tereksitasi yang melibatkan sebagian besar
besi (II) dan SCN radikal thiocyanate. Seperti jenis eksitasi elektronik lainnya,
elektron dalam kompleks ini biasanya kembali ke keadaan semula setelah periode
singkat. Namun, terkadang, kompleks yang tereksitasi dapat berdisosiasi dan
menghasilkan produk oksidasi / reduksi fotokimia. Tiga spektrum kompleks
transfer-biaya ditunjukkan pada Gambar 26-4.
Di sebagian besar kompleks transfer muatan yang mengandung ion logam,
logam berfungsi sebagai akseptor elektron. Pengecualian adalah kompleks 1,10-
fenantrolin dari besi (II) (lihat Bagian 38N-2) dan tembaga (I), di mana ligan
adalah akseptor dan ion logam pendonor. Beberapa contoh tambahan dari jenis
kompleks ini diketahui.

7
2.2. Aplikasi Kualitatif Spektroskopi Ultraviolet / Visible
Pengukuran spektrofotometri dengan radiasi ultraviolet berguna untuk
mendeteksi gugus kromoforik, seperti yang ditunjukkan pada Tabel 26-1.2 Karena
sebagian besar molekul organik paling kompleks sekalipun transparan terhadap
radiasi lebih dari 180 nm, penampilan satu atau lebih pita serapan pada daerah
dari 200 hingga 400 nm adalah indikasi yang jelas tentang keberadaan kelompok
tak jenuh atau atom seperti belerang atau halogen. Seringkali, Anda bisa
mendapatkan ide mengenai identitas kelompok penyerap dengan membandingkan
spektrum analit dengan molekul sederhana yang mengandung berbagai kelompok
kromoforik. Namun, biasanya, spektrum ultraviolet tidak memiliki struktur halus
yang cukup untuk memungkinkan analit untuk diidentifikasi secara jelas. Dengan
demikian, data kualitatif ultraviolet harus dilengkapi dengan bukti fisik atau kimia
lainnya seperti inframerah, resonansi magnetik nuklir, dan spektrum massa serta
kelarutan dan informasi titik leleh dan titik didih.

2.2.1 Pelarut

8
 Spektrum ultraviolet untuk analisis kualitatif biasanya diukur menggunakan
larutan encer analit. Namun, untuk senyawa volatil, spektrum fase gas sering lebih
berguna daripada spektrum fase-cair atau larutan (misalnya, bandingkan Gambar
24-14a dan 24-14b). Spektrum fase-gas sering dapat diperoleh dengan
membiarkan setetes atau dua cairan murni menguap dan menyeimbangkan dengan
atmosfer dalam kuvet yang tertutup.
Pelarut untuk spektroskopi ultraviolet / visible harus transparan di wilayah
spektrum di mana zat terlarut menyerap. Analit harus cukup larut dalam pelarut
untuk memberikan analit yang terdefinisi dengan baik. Selain itu, kita harus
mempertimbangkan kemungkinan interaksi pelarut dengan spesies penyerap.
Misalnya, pelarut polar, seperti air, alkohol, ester, dan keton, cenderung
melenyapkan struktur halus getaran dan karenanya harus dihindari untuk menjaga
detail spektral. Spektrum dalam pelarut nonpolar, seperti sikloheksana, seringkali
lebih dekat mendekati spektrum fase-gas (bandingkan, misalnya, tiga spektrum
pada Gambar 24-14). Selain itu, polaritas pelarut sering mempengaruhi posisi
penyerapan maksimum. Untuk analisis kualitatif, spektrum analit harus
dibandingkan dengan spektrum senyawa yang diketahui diambil dalam pelarut
yang sama.
Tabel 26-3 mencantumkan pelarut umum untuk studi di daerah ultraviolet dan
terlihat dan perkiraan batas panjang gelombangnya lebih rendah. Batas-batas ini
sangat tergantung pada kemurnian pelarut. Misalnya, pelarut etanol dan
hidrokarbon sering terkontaminasi dengan benzena, yang menyerap di bawah 280
nm.

2.2.2 Pengaruh Lebar Celah

Efek variasi dalam lebar celah, dan karenanya bandwidth efektif,

9
diilustrasikan oleh spektrum pada Gambar 26-5. Keempat jejak menunjukkan
bahwa ketinggian puncak dan pemisahan puncak terdistorsi pada bandwidth yang
lebih luas. Untuk menghindari distorsi jenis ini, spektrum untuk aplikasi kualitatif
harus diukur dengan lebar celah terkecil yang menyediakan rasio sinyal-ke-noise
yang memadai.

2.2.3 Pengaruh Radiasi Liar pada Ekstrem Panjang Gelombang dari sebuah
Spektrofotometer
Sebelumnya, kami menunjukkan bahwa radiasi yang menyimpang dapat
menyebabkan penyimpangan instrumental dari hukum Beer (lihat Bagian 24C-3).
Efek lain yang tidak diinginkan dari jenis radiasi ini adalah bahwa kadang-kadang
menyebabkan puncak palsu muncul ketika spektrofotometer dioperasikan pada
panjang gelombang ekstremnya. Gambar 26-6 menunjukkan contoh perilaku
tersebut. Kurva B adalah spektrum sejati untuk solusi cerium (IV) yang
diproduksi dengan spektrofotometer berkualitas riset yang responsif hingga 200
nm atau kurang. Kurva A diperoleh untuk solusi yang sama dengan instrumen
murah yang dioperasikan dengan sumber tungsten yang dirancang untuk bekerja
di wilayah yang terlihat saja. Puncak palsu sekitar 360 nm secara langsung
disebabkan oleh radiasi liar, yang tidak diserap karena terdiri dari panjang
gelombang lebih dari 400 nm. Dalam sebagian besar keadaan, radiasi
menyimpang tersebut memiliki efek yang dapat diabaikan karena kekuatannya
hanya sebagian kecil dari total daya balok yang keluar dari monokromator.

10
Namun, pada pengaturan panjang gelombang di bawah 380 nm, radiasi dari
monokromator sangat dilemahkan sebagai hasil penyerapan oleh komponen kaca
optik dan kuvet. Selain itu, baik output dari sumber dan sensitivitas transduser
turun secara dramatis di bawah 380 nm. Faktor-faktor ini bergabung untuk
menyebabkan sebagian besar dari absorbansi yang diukur disebabkan oleh radiasi
liar dari panjang gelombang yang cerium (IV) transparan. Hasil maksimum
penyerapan yang salah. Efek yang sama ini kadang-kadang diamati dengan
instrumen ultraviolet / terlihat ketika upaya dilakukan untuk mengukur absorbansi
pada panjang gelombang lebih rendah dari sekitar 190 nm.

11
2.3 Aplikasi Kuantitatif
Aplikasi kuantitatif Ultraviolet dan spektroskopi serapan molekul terlihat
adalah salah satu alat yang paling berguna yang tersedia untuk analisis kuantitatif.
Karakteristik penting dari metode spektrofotometri dan fotometri adalah

● Penerapan yang luas. Mayoritas spesies anorganik, organik, dan

biokimiawi menyerap radiasi ultraviolet atau sinar tampak dan dengan
demikian dapat menerima penentuan kuantitatif langsung. Banyak spesies
yang tidak menyerap juga dapat ditentukan setelah konversi kimia menjadi
turunan yang menyerap. Dari penentuan yang dilakukan di laboratorium
klinis, sebagian besar didasarkan pada spektroskopi penyerapan ultraviolet
dan terlihat.

● Sensitivitas tinggi. Batas deteksi tipikal untuk rentang spektroskopi

absorpsi dari 1024 hingga 1025 M. Kisaran ini seringkali dapat
diperpanjang hingga 1026 atau bahkan 1027 M dengan modifikasi
prosedural.

● Selektivitas sedang hingga tinggi. Seringkali panjang gelombang dapat

ditemukan di mana analit itu sendiri menyerap. Lebih lanjut, di mana pita
absorpsi yang tumpang tindih terjadi, koreksi berdasarkan pengukuran
tambahan pada panjang gelombang lain kadang-kadang menghilangkan
perlunya langkah pemisahan. Ketika pemisahan diperlukan,
spektrofotometri sering menyediakan sarana untuk mendeteksi spesies
yang terpisah (lihat Bagian 33A-5).

● Akurasi yang bagus. Kesalahan relatif dalam konsentrasi yang dihadapi

dengan prosedur spektrofotometri atau fotometrik tipikal berkisar antara
1% hingga 5%. Kesalahan semacam itu sering kali dapat dikurangi hingga
beberapa persepuluh persen dengan tindakan pencegahan khusus.

● Kemudahan dan kenyamanan. Pengukuran spektrofotometri dan

fotometrik mudah dan cepat dilakukan dengan instrumen modern. Selain
itu, metode yang digunakan cukup otomatis.
2.3.1 Cakupan

12
 Aplikasi pengukuran penyerapan molekuler tidak hanya banyak tetapi juga
menyentuh pada setiap bidang di mana informasi kuantitatif dicari. Anda bisa
mendapatkan gagasan tentang ruang lingkup spektrofotometri dengan
berkonsultasi dengan monografi khusus pada subjek.
Aplikasi untuk Menyerap Spesies. Tabel 26-1 (halaman 724)
mencantumkan banyak kromofor organik yang umum. Penentuan
spektrofotometri senyawa organik yang mengandung satu atau lebih dari gugus-
gugus ini dengan demikian memungkinkan, banyak aplikasi seperti itu dapat
ditemukan dalam literatur. Sejumlah spesies anorganik juga menyerap. Kami telah
mencatat bahwa banyak ion logam transisi diwarnai dalam larutan dan karenanya
dapat ditentukan dengan pengukuran spektrofotometri. Selain itu, sejumlah
spesies lain menunjukkan pita serapan yang khas, termasuk ion nitrit, nitrat, dan
kromat, oksida nitrogen, unsur halogen, dan ozon.
Aplikasi untuk Spesies yang Tidak Menyerap. Banyak analit yang tidak
menyerap dapat ditentukan secara fotometrik dengan membuatnya bereaksi
dengan pereaksi kromoforik untuk menghasilkan produk yang menyerap kuat di
daerah ultraviolet dan terlihat. Aplikasi yang sukses dari pereaksi pembentuk
warna ini biasanya mensyaratkan bahwa reaksi mereka dengan analit dipaksa
untuk hampir selesai kecuali jika metode seperti metode kinetik (lihat Bab 30)
digunakan.
Reagen anorganik yang khas meliputi yang berikut ini: ion tiosianat untuk
besi, kobalt, dan molibdenum; hidrogen peroksida untuk titanium, vanadium, dan
kromium; dan ion iodida untuk bismut, paladium, dan telurium. Pereaksi
pengkelat organik yang membentuk kompleks berwarna stabil dengan kation
bahkan lebih penting. Contoh umum termasuk diethyldithiocarbamate untuk
penentuan tembaga, diphenylthiocarbazone untuk timah, 1,10-phenanthroline
untuk besi (lihat plat warna 15), dan dimethylglyoxime untuk nikel; Gambar 26-7
menunjukkan reaksi pembentukan warna untuk dua reagen pertama. Struktur
kompleks 1,10-fenantrolin dari besi (II) ditunjukkan pada halaman 503, dan reaksi
nikel dengan dimetilglioksim untuk membentuk endapan merah dijelaskan pada
halaman 294 (lihat juga pelat warna 7). Dalam penerapan reaksi
dimethylglyoxime terhadap penentuan fotometrik nikel, larutan kation diekstraksi

13
dengan larutan zat pengkhelat dalam cairan organik yang tidak bercampur.
Absorbansi dari lapisan organik merah terang yang dihasilkan berfungsi sebagai
ukuran konsentrasi logam.
Reagen lain tersedia yang bereaksi dengan gugus fungsi organik untuk
menghasilkan warna yang berguna untuk analisis kuantitatif. Sebagai contoh,
warna merah dari kompleks 1: 1 yang terbentuk antara alkohol alifatik dengan
massa molekul rendah dan cerium (IV) dapat digunakan untuk estimasi kuantitatif
alkohol ini.

Gambar 26-7 Reagen chelating tipikal untuk spektrofotometri serapan.

(a) Diethyldithiocarbamate. (B) Diphenylthiocarbazone.

Model molekuler diphenylthiocarbazone.

Spektrum serapan dipengaruhi oleh variabel-variabel seperti suhu, pH, konsentrasi

elektrolit, dan adanya gangguan.

2.3.2 Detail Prosedur

14
 Langkah pertama dalam setiap analisis fotometrik atau spektrofotometri
adalah pengembangan kondisi yang menghasilkan hubungan yang dapat
direproduksi (lebih disukai linier) antara absorbansi dan konsentrasi analit.

Seleksi panjang gelombang. Untuk mewujudkan sensitivitas maksimum,

pengukuran absorbansi spektrofotometri biasanya dilakukan pada panjang
gelombang penyerapan maksimum karena perubahan absorbansi per unit
konsentrasi paling besar pada titik ini. Selain itu, kurva absorpsi seringkali rata
pada tingkat maksimum, yang mengarah pada kepatuhan yang baik terhadap
hukum Beer (lihat Gambar 24-17) dan lebih sedikit ketidakpastian dari kegagalan
untuk mereproduksi dengan tepat pengaturan panjang gelombang instrumen.
Variabel Yang Mempengaruhi Penyerapan. Variabel umum yang
mempengaruhi spektrum penyerapan suatu zat meliputi sifat pelarut, pH larutan,
suhu, konsentrasi elektrolit yang tinggi, dan adanya zat-zat yang mengganggu.
Efek dari variabel-variabel ini harus diketahui dan kondisi untuk penentuan yang
dipilih sedemikian rupa sehingga absorbansi tidak akan dipengaruhi secara
material oleh variasi kecil yang tidak terkontrol.
Hubungan antara Absorbansi dan Konsentrasi. Standar kalibrasi untuk
metode fotometrik atau spektrofotometri harus mendekati sedekat mungkin
komposisi keseluruhan sampel aktual dan harus mencakup kisaran konsentrasi
analit yang wajar. Kurva kalibrasi absorbansi vs konsentrasi beberapa standar
biasanya diperoleh untuk mengevaluasi hubungan. Jarang, jika pernah, aman
untuk mengasumsikan bahwa hukum Beer berlaku dan hanya menggunakan
standar tunggal untuk menentukan absorptivitas molar. Kecuali tidak ada pilihan
lain, tidak pernah merupakan ide yang baik untuk mendasarkan hasil dari tekad
semata-mata pada nilai literatur untuk absorptivitas molar. Dalam kasus di mana
efek matriks menjadi masalah, metode penambahan standar dapat meningkatkan
hasil dengan memberikan kompensasi untuk beberapa efek ini.
Metode Penambahan Standar. Idealnya, komposisi standar kalibrasi harus
mendekati komposisi sampel yang akan dianalisis. Ini berlaku tidak hanya untuk
konsentrasi analit tetapi untuk konsentrasi spesies lain dalam matriks sampel.
Mendekati komposisi sampel harus meminimalkan efek berbagai komponen
sampel pada absorbansi yang diukur. Sebagai contoh, absorbansi banyak

15
kompleks berwarna dari ion logam berkurang dengan adanya ion sulfat dan fosfat
karena kecenderungan anion ini untuk membentuk kompleks tidak berwarna
dengan ion logam. Akibatnya, reaksi pembentukan warna sering kurang lengkap,
dan absorbansi sampel diturunkan. Efek matriks sulfat dan fosfat sering dapat
diatasi dengan memasukkan jumlah standar dari dua spesies yang mendekati
jumlah yang ditemukan dalam sampel. Sayangnya, ketika bahan kompleks seperti
tanah, mineral, dan abu tanaman sedang dianalisis, menyiapkan standar yang
sesuai dengan sampel seringkali tidak mungkin atau sangat sulit. Ketika hal ini
terjadi, metode penambahan standar dapat membantu dalam menangkal efek
matriks.
Metode penambahan standar dapat mengambil beberapa bentuk sebagaimana
dibahas dalam Bagian 8D-3; metode titik-tunggal dijelaskan dalam Contoh 8-8.6
Metode penambahan-ganda sering dipilih untuk analisis fotometrik atau
spektrofotometri, dan metode ini dijelaskan di sini. Dalam teknik penambahan
ganda, beberapa penambahan solusi standar ditambahkan ke sampel alikuot
dengan ukuran yang sama. Setiap larutan kemudian diencerkan ke volume yang
tetap sebelum mengukur absorbansi. Ketika jumlah sampel terbatas, penambahan
standar dapat dilakukan dengan penambahan bertahap dari standar ke alikuot
terukur tunggal yang tidak diketahui. Pengukuran dilakukan pada solusi asli dan
setelah setiap penambahan analit standar.
Asumsikan bahwa beberapa alikuot identik Vx dari larutan yang tidak
diketahui dengan konsentrasi cx dipindahkan ke labu volumetrik yang memiliki
volume Vt. Ke masing-masing labu ini ditambahkan volume variabel Vs mL
larutan standar analit yang diketahui memiliki konsentrasi cs. Reagen
pengembangan warna kemudian ditambahkan, dan setiap larutan diencerkan ke
volume. Jika sistem kimia mengikuti hukum Beer, daya serap larutan dijelaskan
oleh

16
di mana k adalah konstanta sama dengan eb / Vt. Sebidang As sebagai fungsi
Vs harus menghasilkan garis lurus dari formulir

di mana kemiringan m dan intersep b diberikan oleh

Dan

Analisis kuadrat-terkecil (lihat Bagian 8D-2) dari data dapat digunakan untuk
menentukan m dan b. Konsentrasi yang tidak diketahui cx kemudian dapat
dihitung dari rasio dua kuantitas ini dan nilai Vx dan V yang diketahui.
Demikian,

yang mengatur ulang ke

Jika kita mengasumsikan bahwa ketidakpastian dalam cs, Vs, dan Vt dapat
diabaikan sehubungan dengan yang di m dan b, standar deviasi dalam cx dapat
diperkirakan. Maka mengikuti bahwa varians relatif dari hasil (sc / cx) 2
adalah jumlah dari varian relatif m dan b, yaitu,

17
 di mana sm dan sb adalah standar deviasi kemiringan dan intersep. Dengan
mengambil akar kuadrat dari persamaan ini, kita dapat menyelesaikan untuk
deviasi standar dalam konsentrasi, sc:

Analisis Campuran. Total absorbansi larutan pada panjang gelombang

tertentu sama dengan jumlah absorbansi masing-masing komponen dalam larutan.
Hubungan ini pada prinsipnya memungkinkan untuk menentukan konsentrasi
masing-masing komponen campuran walaupun setiap spektrum tumpang tindih
sepenuhnya. Sebagai contoh, Gambar 26-9 menunjukkan spektrum larutan yang
mengandung campuran spesies M dan spesies N serta spektrum serapan. Untuk
komponen individu. Jelas bahwa tidak ada panjang gelombang di mana
absorbansi hanya disebabkan oleh salah satu komponen ini. Untuk menganalisis
campuran, molar absorptivitas untuk M dan N pertama kali ditentukan pada
panjang gelombang ℷ 1 dan ℷ 2. Konsentrasi larutan standar M dan N harus
sedemikian rupa sehingga sesuai dengan hukum Beer dipatuhi rentang absorbansi
yang mencakup absorbansi sampel. Seperti ditunjukkan pada Gambar 26-9,
panjang gelombang harus dipilih sehingga absorpsi molar dari dua komponen
berbeda secara signifikan. Jadi, pada ℷ 1, absorptivitas molar komponen M jauh
lebih besar dari itu untuk komponen N. Kebalikannya berlaku untuk ℷ2. Untuk
menyelesaikan analisis, absorbansi campuran ditentukan pada saat yang sama dua
panjang gelombang. Dari absorptivitas molar yang diketahui dan panjang lintasan,
persamaan berikut ini berlaku
A1 = ∈M1bcM + ∈N1bcN (26-5)

A2 = ∈M2bcM + ∈N1bcN (26-6)

Dimana persamaan I menunjukkan pengukuran di ℷ 1, dan persamaan 2

menunjukkan pengukuran ℷ2. Dengan nilai e dan b yang diketahui, Persamaan 26-
5 dan 26-6 adalah dua persamaan yang tidak diketahui (cm dan cn) dan dapat
diselesaikan seperti yang ditunjukkan pada contoh campuran yang mengandung
lebih dari dua spesies penyerap dapat dianalisis, pada prinsipnya setidaknya, jika

18
satu pengukuran absorbansi tambahan dilakukan untuk setiap komponen
tambahan. Namun, ketidakpastian dalam data yang dihasilkan menjadi lebih
besar, seiring dengan meningkatnya jumlah pengukuran. Beberapa
spektrofotometer terkomputerisasi mampu meminimalkan ketidakpastian ini
dengan menentukan sistem secara berlebihan. Instrumen ini menggunakan lebih
banyak titik data daripada yang tidak diketahui dan secara efektif cocok dengan
seluruh spektrum yang tidak diketahui semirip mungkin dengan menghitung
spektra sintetis untuk berbagai konsentrasi komponen. Spektrum yang dihitung
kemudian ditambahkan, dan jumlahnya dibandingkan dengan spektrum larutan
analit hingga ditemukan kecocokan yang dekat. Spektrum untuk larutan standar
dari setiap komponen campuran diperoleh dan disimpan dalam penyimpanan
komputer sebelum melakukan pengukuran pada campuran analit.

Gambar 26-9 Spektrum serapan dari campuran dua komponen (M+N), dengan
spectrum Komponen individu M dan N

2.3.3 Pengaruh Ketidakpastian Instrumental

Keakuratan dan ketepatan analisis spektrofotometri seringkali dibatasi oleh
kesalahan tak tentu, atau kebisingan, yang terkait dengan instrumen. Seperti yang
ditunjukkan dalam Bab 25, pengukuran absorbansi spektrofotometri mencakup
tiga langkah: pengaturan atau pengukuran 0% T, pengaturan atau pengukuran
100% T, dan pengukuran % T dari sampel. Kesalahan acak yang terkait dengan
masing-masing langkah ini digabungkan untuk diberikan kesalahan acak bersih
untuk nilai akhir yang diperoleh untuk T. Hubungan antara kebisingan yang

19
ditemukan dalam pengukuran T dan ketidakpastian konsentrasi yang dihasilkan
dapat diturunkan dengan menulis hukum Beer dalam data :

1 -0,434
c=- log log T = ln ln T
ℇb ℇb
Mengambil sebagian turunan dari persamaan ini sambil memegang eb konstan
mengarah ke ekspresi :

-0,434
δc= δT
ℇbT

Dimana δc dapat diartikan sebagai ketidakpastian dalam c yang dihasilkan dari

kebisingan (atau ketidakpastian) dalam T. Membagi persamaan ini dengan yang
sebelumnya memberikan :

δc 0,434 δT
= loglog T ( T ) (26-7)
c

Dimana δT / T adalah kesalahan acak relatif dalam T yang disebabkan oleh

kebisingan dalam ketiganya. Langkah-langkah pengukuran, dan δc / c adalah
kesalahan konsentrasi relatif acak yang dihasilkan. Ukuran terbaik dan paling
berguna dari kesalahan acak δT adalah standar deviasi , yang dapat diukur dengan
jelas untuk instrumen yang diberikan dengan membuat 20 atau lebih mereplikasi
pengukuran transmitansi dari solusi penyerap. Mengganti σT dan σc untuk jumlah
diferensial yang sesuai dalam Persamaan 26-7 mengarah ke

δc 0,434 σT
= loglog T ( T ) (26-8)
c

Di mana σT / T adalah standar deviasi relatif dalam transmitansi dan σc / c

adalah menghasilkan deviasi standar relatif dalam konsentrasi. Persamaan 26-8
menunjukkan bahwa ketidakpastian dalam konsentrasi fotometrik pengukuran
bervariasi dalam cara yang kompleks dengan besarnya transmitansi. Itu situasi
bahkan lebih rumit daripada yang disarankan oleh persamaan, karena
ketidakpastian σT adalah dalam banyak keadaan, juga tergantung pada T. Secara
rinci studi teoritis dan eksperimental, Rothman, Crouch, dan Ingle dijelaskan

20
beberapa sumber kesalahan acak instrumental dan menunjukkan efek bersih dari
kesalahan ini pada ketepatan pengukuran konsentrasi.

Kesalahan Konsentrasi Ketika σT = k1. Untuk banyak fotometer dan

spektrofotometer, deviasi standar dalam pengukuran T adalah konstan dan
independen dari besarnya T. Kita sering melihat jenis kesalahan acak dalam
membaca langsung instrumen dengan pembacaan meter analog, yang memiliki
resolusi agak terbatas. Ukuran skala tipikal adalah sedemikian sehingga
pembacaan tidak dapat direproduksi menjadi lebih baik dari pada beberapa
persepuluh persen dari pembacaan skala penuh, dan besarnya ketidakpastian ini
adalah sama dari satu ujung skala ke ujung lainnya. Untuk tipikal murah
instrumen, kami menemukan penyimpangan standar sekitar 0,003 (σT = ± 0,003).

Data diplot sebagai kurva A pada Gambar 26-10 diperoleh dari perhitungan
mirip dengan yang ada dalam Contoh 26-4. Perhatikan bahwa standar deviasi
relatif dalam konsentrasi melewati minimum pada absorbansi sekitar 0,5 dan naik
dengan cepat ketika absorbansi kurang dari sekitar 0,1 atau lebih besar dari sekitar
1,5.

Gambar 26-11a adalah plot standar deviasi relatif untuk konsentrasi yang
ditentukan secara eksperimen sebagai fungsi absorbansi. Itu diperoleh dengan
spektrofotometer mirip dengan yang ditunjukkan pada Gambar 25-19 tetapi
dengan yang kuno meter panel analog daripada pembacaan digital. Kesamaan
yang mencolok antara kurva ini dan kurva A pada Gambar 26-10 menunjukkan
bahwa instrumen yang dipelajari terpengaruh oleh kesalahan tak tentu absolut
dalam transmitansi sekitar ± 0,003 dan bahwa kesalahan ini tidak tergantung pada
transmitansi. Sumber ketidakpastian ini mungkin adalah resolusi terbatas dari
skala transmisi manual. Pembacaan digital dengan cukup resolusi, seperti yang
ditunjukkan pada Gambar 25-19, kurang rentan terhadap jenis kesalahan ini.

Banyak spektrofotometer inframerah juga menunjukkan kesalahan tak tentu

yang bergantung pada transmitansi. Sumber kesalahan pada instrumen ini terletak
pada detektor termal. Fluktuasi dalam output dari jenis transduser ini tergantung
pada output; memang, fluktuasi diamati bahkan tanpa adanya radiasi. Plot

21
eksperimental data dari spektrofotometer inframerah serupa di penampilan pada
Gambar 26-11a. Kurva dipindahkan ke atas, karena karakteristik standar deviasi
yang lebih besar dari pengukuran inframerah.

Gambar 26-10 Kurva kesalahan untuk berbagai kategori ketidakpastian

instrumental

Gambar 26-11 Kurva eksperimental yang menghubungkan konsentrasi relatif

uncer tainties dengan absorbansi untuk dua spektrofotometer. Data diperoleh
dengan (a) Spectronic 20, instrumen berbiaya rendah, dan (b) Cary 118, instrumen
kualitas penelitian.

Kesalahan konsentrasi ketika σT = k2 √T 2 + T. Jenis ketidakpastian acak ini

adalah karakteristik spektrofotometer kualitas tertinggi. Berasal dari bunyi
tembakan yang menyebabkan output pengganda foto dan tabung foto berfluktuasi
secara acak tentang nilai rata-rata. Persamaan 26-10 menggambarkan efek noise

22
tembakan pada standar deviasi relatif dari pengukuran konsentrasi. Hubungan ini
muncul sebagai kurva B pada Gambar 26-10. Kami menghitung data ini sebagai
penjumlahan bahwa k2 = ±0,003, nilai yang sejenis untuk spektrofotometer
berkualitas tinggi.
Gambar 26-11b menunjukkan plot analog data eksperimen yang diperoleh
dengan jenis penelitian ultraviolet / spektrofotometer terlihat berkualitas tinggi.
Perhatikan bahwa, berbeda dengan instrumen yang lebih murah, absorbansi 2,0
atau lebih besar dapat diukur di sini tanpa penurunan akurat dalam kualitas data.
Kesalahan konsentrasi ketika σT = k3T . Mengganti σT = k3T ke dalam
persamaan 26-8 mengungkapkan bahwa standar deviasi relatif dalam konsentrasi
dari jenis ketidakpastian ini berbanding terbalik dengan logaritma transmitansi
(Persamaan 26-11 pada Tabel 26-4). Kurva C pada Gambar 26-10, yang
merupakan plot Persamaan 25-11, mengungkapkan bahwa jenis ketidakpastian ini
penting pada absorbansi rendah (transmisi tinggi) tetapi mendekati nol pada
absorbansi tinggi.
Pada absorbansi rendah, presisi yang diperoleh dengan instrumen balok
ganda berkualitas tinggi. Sumber perilaku ini adalah kegagalan posisi sel
direproduksi sehubungan dengan balok selama pengukuran
ulangan.Ketergantungan posisi ini mungkin hasil dari ketidaksempurnaan kecil
dalam sel jendela, yang menyebabkan kerugian reflektif dan transparansi berbeda
dari satu area jendela ke yang lain.
Dimungkinkan untuk mengevaluasi Persamaan 26-11 dengan
membandingkan ketepatan pengukuran absorbansi yang dibuat dengan cara biasa
dengan pengukuran di mana sel dibiarkan tidak terganggu setiap saat dengan
larutan contoh yang diperkenalkan dengan jarum suntik. Eksperimen semacam ini
dengan spektrofotometer berkualitas tinggi dihasilkan nilai 0,013 untuk k3-9 Kurva
C pada Gambar 26-10 diperoleh dengan mensubstitusi nilai numerik ini ke
Persamaan 26-11. Kesalahan penentuan posisi sel mempengaruhi semua jenis
pengukuran spektrofotometri di mana sel diposisikan ulang di antara pengukuran.

23
 BAB III
PENUTUP

3.1 Kesimpulan
1. Spektrometri UV-Vis merupakan pengukuran serapan cahaya di daerah
ultraviolet (200-350 nm) dan sinar tampak (350-800 nm).
2. Penyerapan sinar UV-Vis dapat terjadi pada senyawa organik, anorganik, dan
senyawa yang dapat mentransfer elektronnya yang terikat pada akseptor
elektron.
3. Pengukuran spektrofotometri dengan radiasi ultraviolet berguna untuk
mendeteksi gugus kromoforik.
4. Spektroskopi UV-Vis dapat digunakan untuk analisa kualitatif maupun
kuantitatif.

3.2 Saran
Hendaknya makalah ini menjadi sumber ilmu yang berguna bagi penulis dan
pembaca untuk mengembangkan keterampilannya pada bidang sains maupun
teknologi. selain itu, makalah ini diharapkan juga dapat menambah pengetahuan
untuk digunakan dalam praktek menggunakan instrumen spektrofotometer UV-
Vis itu sendiri.

24
 Daftar Pustaka

Skoog, D.A., West, D.M., Holler, F.J. and Crouch, S.R. 2014. Fundamental of
Analytical Chemistry, 9th Edition. Brooks/Cole, Chengage Learning :
Canada by Nelson Education.

25