MAKALAH

ANALISIS INSTRUMEN

Kelompok 6

M. Gani Ariski

Melly Susanti

Muthiara Wahyuni
 KATA PENGANTAR

Puji dan syukur kami panjatkan kehadirat Tuhan yang maha esa, karena
atas berkat dan rahmatNya, kami dapat menyelesaikan makalah ini.
Kami sebagai penulis menyadari bahwa makalah ini ddiselesaikan dengan
tidak dengan usaha kami sendiri, melainkan dengan bantuan dari berbagai pihak.
Oleh karena itu kami sebagai penulis menyampaikan rasa terima kasih kami
kepada semua yang telah membantu kami da;am menyelaesaikan malakah ini.
Akhirnya demi kesempurnaan malakah ini baik isi maupun bentuknya,
kami sebagai penulis mengharapkan kritik dan saran dari semua pihak yang
membangun demi kesempurnaan makalah kami ke depannya. Akhir kata kami
mengucapkan terima kasih.

i
 DAFTAR ISI

KATA PENGANTAR i
DAFTAR ISI ........................................................................................................................................... ii
BAB I PENDAHULUAN ...................................................................................................................... 1
1.1. Latar Belakang ........................................................................................................................ 1
1.2. Tujuan ..................................................................................................................................... 1
1.3. Rumusan Masalah ................................................................................................................... 2
BAB II TINJAUAN PUSTAKA ............................................................................................................. 3
2.1. Teori Fluoresensi Molekul ...................................................................................................... 3
2.1.1 Proses Relaksasi .............................................................................................................. 3
2.1.2 Spesies fluoresensi .......................................................................................................... 6
2.2. Efek Konsentrasi pada Intensitas Fluoresensi ......................................................................... 8
2.3. Instrumentasi Fluoresensi ...................................................................................................... 10
2.4. Penerapan Metode Fluoresensi.............................................................................................. 13
2.4.1 Metode untuk Spesies Anorganik.................................................................................. 15
2.4.2 Metode untuk Spesies Organik dan Biokimia ............................................................... 15
2.5. Spektroskopi Fosfosforensi Molekul .................................................................................... 16
2.6. Metode Chemiluminescence ................................................................................................. 17
BAB III PENUTUP............................................................................................................................... 19
3.1. Kesimpulan ........................................................................................................................... 19
3.2. Saran...................................................................................................................................... 19
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................................................... 20

ii
 BAB I PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang

Spektroskopi adalah ilmu yang mempelajari materi dan atributnya berdasarkan

cahaya, suara atau partikel yang dipancarkan, diserap atau dipantulkan oleh materi tersebut.
Spektroskopi juga dapat didefinisikan sebagai ilmu yang mempelajari interaksi antara cahaya
dan materi. Dalam catatan sejarah, spektroskopi mengacu kepada cabang ilmu dimana
"cahaya tampak" digunakan dalam teori-teori struktur materi serta analisa kualitatif dan
kuantitatif. Dalam masa modern, definisi spektroskopi berkembang seiring teknik-teknik baru
yang dikembangkan untuk memanfaatkan tidak hanya cahaya tampak, tetapi juga bentuk lain
dari radiasi elektromagnetik dan non-elektromagnetik seperti gelombang mikro, gelombang
radio, elektron, fonon, gelombang suara, sinar x dan lain sebagainya.
Spektroskopi umumnya digunakan dalam kimia fisik dan kimia analisis untuk
mengidentifikasi suatu substansi melalui spektrum yang dipancarkan atau yang diserap. Alat
untuk merekam spektrum disebut spektrometer. Spektroskopi juga digunakan secara intensif
dalam astronomi dan penginderaan jarak jauh. Kebanyakan teleskop-teleskop besar
mempunyai spektrograf yang digunakan untuk mengukur komposisi kimia dan atribut fisik
lainnya dari suatu objek astronomi atau untuk mengukur kecepatan objek astronomi
berdasarkan pergeseran Doppler garis-garis spektral. Salah satu jenis spektroskopi adalah
spektroskopi fluoresensi atom (AFS).
Spektroskopi Fluoresensi merupakan suatu metode yang didasarkan pada penyerapan
energi oleh suatu materi sama seperti metode spektroskopi lainnya. Bedanya terletak pada
energi yang dibebaskannya setelah terjadi peristiwa pengujaan (eksitasi). Dengan
Spektroskopi Fluoresensi, energi yang dipancarkan lebih kecil dari energi untuk eksitasi,
karena sebagian energi yang digunakan misalnya untuk getaran (vibrasi), Akibat panjang
gelombang untuk eksitasi berbeda dengan panjang gelombng untuk pancaran (emisi) dan
perubahan panjang gelombang.
1.2. Tujuan

Tujuan dari makalah ini untuk mengetahui pengertian dari Spektroskopi Fluoresensi,
Efek konsentrasi pada intensitas Fluoresensi, Efek konsentrasi pada intensitas Fluoresensi,
Instrumentasi Fluoresensi, Penerepan metode fluoresensi, dan Metode Chemiluminescence.

1
1.3. Rumusan Masalah
1. Pengertian Spektroskopi Fluoresensi.

2. Efek konsentrasi pada intensitas Fluoresensi.

3. Instrumentasi Fluoresensi.

4. Penerepan metode fluoresensi.

5. Spektroskopi Fosforesensi molekul.

6. Metode Chemiluminescence.

2
 BAB II TINJAUAN PUSTAKA

2.1. Teori Fluoresensi Molekul

Fluoresensi molekuler diukur dengan menarik sampel pada panjang gelombang

serapan, juga disebut panjang gelombang eksitasi, dan mengukur emisi pada panjang
gelombang yang lebih panjang yang disebut panjang gelombang emisi atau fluoresensi.
Misalnya, bentuk tereduksi dari koenzim nicontinamide adenine dinucleotide (NADH)
menyerap radiasi pada 340 nm, dan molekul memancarkan radiasi fotoluminesen dengan
emisi maksimum pada 465 nm. Biasanya emisi fotoluminesensi diukur pada sudut kanan
terhadap sinar datang untuk menghindari pengukuran radiasi yang terjadi (ingat Gambar 25-
1b). Emisi berumur pendek yang terjadi disebut fluoresensi, sedangkan pendaran yang lebih
tahan lama disebut fosforensi.

2.1.1 Proses Relaksasi

Gambar 27-1 menunjukkan diagram tingkat energi parsial untuk spesies molekul
hipotetis. Tiga keadaan energi elektronik ditunjukkan, E0, E1, dan E2; kondisi dasar adalah
E0, dan kondisi tereksitasi adalah E1 dan E2. Masing-masing diagram elektronik ditampilkan
memiliki empat tingkat getaran yang kuat. Ketika spesies ini diiradiasi dengan pita panjang
gelombang l1 ke l5 (lihat Gambar 27-1a), lima tingkat getaran dari keadaan elektronik
tereksitasi pertama, E1, dihuni untuk sementara waktu. Demikian pula, ketika molekul-
molekul diiradiasi dengan pita yang lebih energik yang terdiri dari panjang gelombang yang
lebih pendek l19 hingga l59, lima tingkat getaran dari keadaan elektronik energi tinggi E2
menjadi terisi secara singkat.

Setelah molekul tereksitasi ke E1 atau E2, beberapa proses dapat terjadi yang
menyebabkan molekul kehilangan energi berlebihnya. Dua dari proses terpenting ini,
relaksasi nonradiatif dan emisi fluoresensi, diilustrasikan dalam Gambar 27-1b dan c.

Dua metode relaksasi nonradiatif yang paling penting yang bersaing dengan
fluoresensi diilustrasikan pada Gambar 27-1b. Relaksasi getaran, yang digambarkan oleh
panah bergelombang pendek antara tingkat energi getaran, terjadi selama tabrakan antara
molekul tereksitasi dan molekul pelarut. Relaksasi nonradiatif antara tingkat getaran yang
lebih rendah dari keadaan elektronik tereksitasi dan tingkat getaran yang lebih tinggi dari
keadaan elektronik lain juga dapat terjadi. Jenis relaksasi ini, kadang-kadang disebut konversi
internal, digambarkan oleh dua panah bergelombang lagi pada Gambar 27-1b. Konversi

3
internal jauh lebih efisien daripada relaksasi getaran sehingga usia rata-rata keadaan
tereksitasi elektronik antara 10–9 dan 10–6 detik. Mekanisme yang tepat di mana dua proses
relaksasi terjadi saat ini sedang dipelajari, tetapi hasil bersih adalah peningkatan kecil dalam
suhu medium.

Gambar 27-1 Diagram tingkat energi memperlihatkan beberapa proses itu terjadi selama (a)
penyerapan insiden radiasi, (b) relaksasi nonradiatif, dan (c) emisi fluoresensi oleh sebuah
spesies molekuler. Penyerapan biasanya terjadi pada 10215 s, sementara bergetar relaksasi
terjadi pada 10211 hingga 10210 s. Konversi internal antar berbeda keadaan elektronik juga
sangat cepat (10212 s), sementara daya tahan fluoresensi biasanya 10210 hingga 1025 s.

Gambar 27-1c menggambarkan proses relaksasi yang diinginkan: proses fluoresensi.

Fluoresensi hampir selalu diamati dari keadaan tereksitasi elektronik E1 terendah ke keadaan
dasar E0. Juga, fluoresensi biasanya terjadi hanya dari konversi dan proses relaksasi getaran
sangat cepat dibandingkan dengan fluoresensi. Oleh karena itu, spektrum fluoresensi biasanya
hanya terdiri dari satu band dengan banyak garis yang berjarak dekat yang mewakili transisi
dari tingkat getaran terendah E1 ke banyak tingkat getaran E0 yang berbeda.

Garis pada Gambar 27-1c yang mengakhiri pita fluoresensi pada panjang gelombang pendek
atau sisi berenergi tinggi (l1) identik dalam energi dengan garis berlabel l1 dalam diagram
serapan pada Gambar 27-1a. Karena garis fluoresensi pada pita ini berasal dari keadaan
vibrasi terendah E1, semua garis lain pada pita memiliki energi lebih rendah atau panjang

4
gelombang lebih panjang daripada garis yang sesuai dengan l1. Pita fluoresensi molekuler
sebagian besar terdiri dari garis yang panjang gelombangnya lebih panjang, frekuensinya
lebih tinggi, dan dengan demikian lebih rendah energinya daripada pita radiasi yang diserap
yang bertanggung jawab atas eksitasi mereka. Pergeseran ke panjang gelombang ini disebut
pergeseran Stokes.

Hubungan antara Eksitasi Spectra dan Spektrum Fluoresensi

Spektrum fluoresensi untuk 1 ppm antrasena dalam alkohol: (a) spektrum eksitasi; (B) emisi
spektrum.

Karena perbedaan energi antara keadaan getaran hampir sama untuk keadaan dasar
dan tereksitasi, spektrum serapan, atau eksitasi, dan spektrum fluoresensi untuk suatu
senyawa sering muncul sebagai perkiraan gambar cermin satu sama lain dengan tumpang
tindih yang terjadi di dekat transisi asal (0). tingkat getaran E1 hingga 0 tingkat getaran E0).
Efek ini ditunjukkan oleh spektra untuk antrasena yang ditunjukkan pada Gambar 27-2. Ada
banyak pengecualian untuk aturan gambar cermin ini, terutama ketika keadaan tereksitasi dan
tanah memiliki geometri molekul yang berbeda atau ketika pita fluoresensi berbeda berasal
dari bagian yang berbeda.

5
 2.1.2 Spesies fluoresensi

Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 27-1, fluoresensi adalah salah satu dari
beberapa mekanisme yang dengannya molekul kembali ke keadaan dasar setelah tereksitasi
oleh penyerapan radiasi. Semua molekul penyerap memiliki potensi untuk berfluoresensi,
tetapi kebanyakan senyawa tidak karena strukturnya memungkinkan jalur tanpa radiasi untuk
relaksasi terjadi pada tingkat yang lebih besar daripada emisi fluoresensi. Hasil kuantum
fluoresensi molekuler hanyalah rasio dari jumlah molekul yang berfluoresensi terhadap
jumlah total molekul tereksitasi, atau rasio foton yang dipancarkan ke foton yang diserap.
Molekul yang sangat berfluoresensi, seperti fluorescein, memiliki efisiensi kuantum yang
mendekati kesatuan dalam beberapa kondisi. Spesies yang tidak berfluoresensi atau yang
menunjukkan fluoresensi sangat lemah memiliki efisiensi kuantum yang pada dasarnya nol.

Fluoresensi dan Struktur

Senyawa yang mengandung cincin aromatik memberikan emisi fluoresensi molekul

paling intens dan paling berguna. Sementara senyawa karbonil alifatik dan alisiklik tertentu
serta struktur ikatan rangkap sangat terkonjugasi juga berpendar, ada sangat sedikit di
antaranya dibandingkan dengan jumlah senyawa fluoresen yang mengandung sistem
aromatik.

Hidrokarbon aromatik yang paling tidak tersubstitusi dalam larutan, dengan efisiensi
kuantum meningkat dengan jumlah cincin dan tingkat kondensasi mereka. Heterosiklik yang
paling sederhana, seperti piridin, furan, tiofena, dan pirol, tidak menunjukkan fluoresensi
molekuler (lihat Gambar 27-3), tetapi struktur cincin leburan yang mengandung cincin ini
sering dilakukan (lihat Gambar 27-4). Substitusi pada cincin aromatik menyebabkan
pergeseran panjang gelombang maksimum penyerapan dan perubahan yang sesuai pada pita
fluoresensi. Selain itu, penggantian sering mempengaruhi efisiensi fluoresensi. Efek-efek ini
ditunjukkan oleh data pada Tabel 27-1.

Gambar 27-3 Khas aromatik molekul yang tidak berfluoresensi.

6
 Gambar 27-4 Khas aromatik senyawa yang berfluoresensi.

Pengaruh Kekakuan Struktural

Eksperimen menunjukkan bahwa fluoresensi sangat disukai dalam molekul kaku.

Sebagai contoh, di bawah kondisi pengukuran yang sama, efisiensi kuantum fluorene hampir
1,0 sedangkan bifenil sekitar 0,2 (lihat Gambar 27-5). Perbedaan perilaku adalah hasil dari
peningkatan kekakuan yang diberikan oleh bridging methylene group dalam fluorene.
Kekakuan ini menurunkan tingkat relaksasi nonradiatif ke titik di mana relaksasi oleh
fluoresensi memiliki waktu untuk terjadi. Ada banyak contoh serupa dari jenis perilaku ini.
Selain itu, peningkatan emisi sering terjadi ketika pewarna berpendar diadsorpsi pada
permukaan padat. Sekali lagi, kekakuan tambahan yang disediakan oleh padatan dapat
menjelaskan efek yang diamati. Pengaruh kekakuan juga menjelaskan peningkatan fluoresensi
agen pengkelat organik tertentu ketika mereka dikomplekskan dengan ion logam. Sebagai
contoh, intensitas fluoresensi 8-hydroxyquinoline jauh lebih sedikit dibandingkan dengan
kompleks seng (lihat Gambar 27-6).

Gambar 27-5 Pengaruh kekakuan molekuler pada hasil kuantum. Molekul fluorin dipegang
teguh oleh cincin pusat, sehingga fluoresensi ditingkatkan. Bidang-bidang dari dua cincin
benzena dalam bifenil dapat berputar relatif satu sama lain, sehingga fluoresensi ditekan.

7
Gambar 27-6 Pengaruh kekakuan pada hasil kuantum di kompleks. Molekul 8-hidroksiokolin
bebas dalam larutan mudah dinonaktifkan melalui tabrakan dengan molekul pelarut dan tidak
berfluoresensi. Kekakuan kompleks Zn-8-hydroxyquinoline meningkatkan fluoresensi.

Efek Suhu dan Pelarut

Dalam kebanyakan molekul, efisiensi kuantum fluoresensi berkurang dengan meningkatnya

suhu karena meningkatnya frekuensi tabrakan pada suhu tinggi meningkatkan kemungkinan
relaksasi tumbukan. Penurunan viskositas pelarut mengarah ke hasil yang sama.

2.2. Efek Konsentrasi pada Intensitas Fluoresensi

Kekuatan radiasi fluoresensi yang dipancarkan F sebanding dengan kekuatan radiasi

dari berkas eksitasi yang diserap oleh sistem:

(27-1)

di mana P0 adalah kekuatan radiasi dari insiden balok pada larutan dan P adalah kekuatannya
setelah melewati panjang b medium. Konstanta Kr tergantung pada efisiensi kuantum

8
fluoresensi. Untuk menghubungkan F dengan konsentrasi c dari partikel berfluoresensi, kami
menulis hukum Beer dalam bentuk

(27-2)

di mana e adalah absorptivitas molar dari spesies fluorescing dan ebc adalah absorbansi.
Dengan mengganti Persamaan 27-2 menjadi Persamaan 27-1, kita memperoleh

(27-3)

Ekspansi istilah eksponensial dalam Persamaan 27-3 mengarah ke

(27-4)

Ketika εbc = A <0,05, istilah pertama di dalam tanda kurung, 2.3εbc, jauh lebih besar
daripada istilah berikutnya, dan kita bisa menulis

(27-5)

atau ketika kekuatan insiden P0 konstan,

(27-6)

Dengan demikian, sebidang kekuatan fluoresensi yang dipancarkan versus konsentrasi

spesies yang memancarkan harus linier pada konsentrasi rendah. Ketika c menjadi cukup
besar sehingga absorbansi melebihi sekitar 0,05 (atau transmitansi lebih kecil dari sekitar 0,9),
hubungan yang diwakili oleh Persamaan 27-6 menjadi nonlinier, dan F terletak di bawah
ekstrapolasi plot linier. Efek ini adalah hasil dari penyerapan primer di mana sinar datang
diserap dengan sangat kuat sehingga fluoresensi tidak lagi sebanding dengan konsentrasi
seperti yang ditunjukkan pada Persamaan 27-4 yang lebih lengkap. Pada konsentrasi yang
sangat tinggi, F mencapai maksimum dan bahkan mungkin mulai berkurang dengan
meningkatnya konsentrasi karena penyerapan sekunder.

9
 2.3. Instrumentasi Fluoresensi

Dalam metode Spektroskopi Fluoresensi ini, alat yang digunakan disebut dengan
Spektrofotometer Fluoresensi. Komponen-komponen yang penting dari suatu instrumen untuk
pengukuran Fluoresensi ditunjukkan dalam gambar dibawah ini, perhatikan bahwa komponen
(sumber, monokromator, dan sebagainya) yang sama terdapat juga dalam spektrofotometer.

Dasar set-up untuk sebuah alat untuk mengukur kondisi maupun fluoresensi
ditampilkan pada gambar

Terdiri dari sumber cahaya (biasanya xenon atau lampu merkuri), sebuah
monokromator / atau filter untuk memilih panjang gelombang eksitasi; tempat sampel;
detektor, yang mengubah cahaya yang dipancarkan ke listrik sinyal, dan unit untuk
pembacaan data dan analisis.

Ada beberapa jenis instrumen fluoresensi. Semua ikuti diagram blok umum pada
Gambar 25-1b. Diagram optik instrumen khas ditunjukkan pada Gambar 27-8. Jika kedua
penyeleksi panjang gelombang keduanya adalah filter, instrumen tersebut disebut fluorometer.
Jika kedua penyeleksi panjang gelombang adalah monokromator, instrumen tersebut adalah
spektrofluorometer.

10
 Gambar 27-7 Kurva kalibrasi untuk penentuan spektrofluorometrik triptofan dalam protein
larut dari lensa mata mamalia.

Beberapa instrumen adalah hibrida dan menggunakan filter eksitasi bersama dengan
monokromator emisi. Instrumen fluoresensi dapat menggabungkan desain balok ganda untuk
mengkompensasi perubahan kekuatan sumber radiasi dengan waktu dan panjang gelombang.
Instrumen yang mengoreksi distribusi spektral sumber disebut spektrofluorometer yang
dikoreksi.

11
Gambar 27-8 Instrumen fluoresensi yang umum. Filter fluorometer ditunjukkan pada (a).
Perhatikan bahwa emisi diukur pada sudut kanan ke sumber lampu busur merkuri. Radiasi
fluoresensi dipancarkan ke segala arah, dan geometri 90 derajat menghindari detektor yang
melihat sumber. Spektrofluorometer (b) menggunakan dua monokromator kisi dan juga
melihat emisi pada sudut kanan. Kedua monokromator memungkinkan pemindaian spektra
eksitasi (panjang gelombang eksitasi yang dipindai pada panjang gelombang emisi tetap),
spektrum emisi (panjang gelombang emisi yang dipindai pada panjang gelombang eksitasi
tetap), atau spektra sinkron (kedua panjang gelombang dipindai dengan offset panjang
gelombang tetap di antara kedua monokromator) .

Sumber radiasi untuk fluoresensi biasanya lebih kuat daripada sumber penyerapan
tipikal. Dalam fluoresensi, daya radiasi yang dipancarkan berbanding lurus dengan intensitas
sumber (Persamaan 27-5), tetapi absorbansi pada dasarnya independen intensitas sumber
karena terkait dengan rasio kekuatan radiasi seperti yang ditunjukkan pada Persamaan 27-7.

12
 (27-7)

Sebagai hasil dari ketergantungan yang berbeda-beda ini pada intensitas sumber,
metode fluoresensi umumnya satu hingga tiga urutan besarnya lebih sensitif daripada metode
berdasarkan penyerapan. Lampu busur merkuri, lampu busur xenon, lampu busur merkuri
xenon, dan laser adalah sumber fluoresensi yang khas. Monokromator dan transduser
biasanya serupa dengan yang digunakan dalam spektrofotometer serapan. Photomultipliers
masih banyak digunakan dalam spektrofluorometer sensitivitas tinggi, tetapi CCD dan array
fotodioda telah menjadi populer dalam beberapa tahun terakhir. Kecanggihan, karakteristik
kinerja, dan biaya fluorometer dan spektrofluorometer sangat bervariasi seperti halnya
spektrofotometer serapan. Umumnya, instrumen fluoresensi lebih mahal daripada instrumen
penyerapan dengan kualitas yang sesuai.

2.4. Penerapan Metode Fluoresensi

Spektroskopi fluoresensi bukan alat analisis struktural atau kualitatif utama karena
molekul dengan perbedaan struktural yang halus sering memiliki spektrum fluoresensi yang
serupa. Juga, pita fluoresensi dalam larutan relatif luas pada suhu kamar. Namun, fluoresensi
telah terbukti menjadi alat yang berharga dalam identifikasi tumpahan minyak. Sumber
tumpahan minyak sering dapat diidentifikasi dengan membandingkan spektrum emisi
fluoresensi sampel tumpahan dengan sumber yang dicurigai. Struktur getaran hidrokarbon
polisiklik yang ada dalam minyak memungkinkan jenis identifikasi ini.

Metode fluoresensi digunakan untuk mempelajari keseimbangan kimia dan kinetika

dengan cara yang hampir sama dengan spektrofotometri serapan. Seringkali, dimungkinkan
untuk mempelajari reaksi kimia pada konsentrasi yang lebih rendah karena sensitivitas yang
lebih tinggi dari metode fluoresensi. Dalam banyak kasus di mana pemantauan fluoresensi
tidak memungkinkan, probe atau tag fluoresens dapat diikat secara kovalen ke lokasi spesifik
dalam molekul seperti protein, sehingga membuatnya dapat dideteksi melalui fluoresensi. Tag
ini dapat digunakan untuk memberikan informasi tentang proses transfer energi, polaritas
protein, dan jarak antara situs reaktif (lihat misalnya gambar 27-1).

13
 Gambar 27-9 Beberapa agen chelating fluorometrik untuk kation logam. Alizarin garnet R
dapat mendeteksi Al31 pada level serendah 0,007 mg / mL. Deteksi F2 dengan alizarin garnet
R didasarkan pada pendinginan fluoresensi kompleks Al31. Flavanol dapat mendeteksi Sn41
pada tingkat 0,1-mg / mL

Metode fluoresensi kuantitatif telah dikembangkan untuk spesies anorganik, organik,

dan biokimia. Metode fluoresensi anorganik dapat dibagi menjadi dua kelas: metode langsung
dan metode tidak langsung. Metode langsung didasarkan pada reaksi analit dengan zat
pengompleks untuk membentuk kompleks fluoresen. Metode tidak langsung tergantung pada
penurunan fluoresensi, juga disebut pendinginan, sebagai hasil dari interaksi analit dengan
pereaksi fluoresen. Metode pendinginan terutama digunakan untuk penentuan anion dan
oksigen terlarut. Beberapa reagen fluoresensi untuk kation ditunjukkan pada Gambar 27-9.

Relaksasi nonradiatif dari chelate logam transisi sangat efisien sehingga spesies ini
jarang berfluoresensi. Perlu dicatat bahwa sebagian besar logam transisi menyerap dalam UV
atau daerah yang terlihat, sedangkan ion nontransisi-logam tidak. Untuk alasan ini, fluoresensi
sering dianggap sebagai pelengkap penyerapan untuk penentuan kation...
14
 Jumlah penerapan metode fluoresensi untuk masalah organik dan biokimia sangat
mengesankan. Di antara jenis senyawa yang dapat ditentukan oleh fluoresensi adalah asam
amino, protein, koenzim, vitamin, asam nukleat, alkaloid, porphryin, steroid, flavonoid, dan
banyak metabolit.2 Karena kepekaannya, fluoresensi banyak digunakan sebagai teknik deteksi
untuk metode kromatografi cair (lihat Bab 33), untuk metode analisis aliran, dan untuk
elektroforesis. Selain metode yang didasarkan pada pengukuran intensitas fluoresensi, ada
banyak metode yang melibatkan pengukuran masa hidup fluoresensi. Beberapa instrumen
telah dikembangkan yang menyediakan gambar mikroskopis spesies tertentu berdasarkan
masa hidup fluoresensi.

2.4.1 Metode untuk Spesies Anorganik

Pereaksi fluorometrik yang paling berhasil untuk penentuan kation adalah senyawa
aromatik yang memiliki dua atau lebih gugus fungsi donor yang membentuk kelat dengan ion
logam. Contoh tipikal adalah 8-hidroksiquinolin, strukturnya diberikan dalam Bagian 12C-3.
Beberapa pereaksi fluorometrik lainnya dan aplikasinya dapat dilihat pada Tabel 27-2.
Dengan sebagian besar pereaksi ini, kation diekstraksi menjadi larutan pereaksi dalam pelarut
organik yang tidak bercampur, seperti kloroform. Fluoresensi larutan organik kemudian
diukur. Untuk ringkasan yang lebih lengkap dari metode fluorometrik untuk zat anorganik.

2.4.2 Metode untuk Spesies Organik dan Biokimia

Jumlah penerapan metode fluorometrik untuk masalah organik sangat mengesankan.

Dean merangkum yang paling penting dari metode ini dalam sebuah tabel.5 Ada lebih dari
200 entri di bawah judul “Spektroskopi Fluoresensi Beberapa Senyawa Organik,” termasuk
senyawa beragam seperti adenin, asam antranilat, hidrokarbon polisiklik aromatik, sistein,
guanin, isoniazid , nafta, gas syaraf sarin dan tabun, protein, asam salisilat, skatole,
trypotophan, asam urat, dan warfarin (Coumadin). Banyak agen obat yang dapat ditentukan
secara fluorometrik terdaftar, termasuk adrenalin, morfin, penisilin, fenobarbital, prokain,
reserpin, dan asam lisergat dietilamid (LSD). Aplikasi yang paling penting dari fluorometry
meliputi analisis produk makanan, obat-obatan, sampel klinis, dan produk alami. Sensitivitas
dan selektivitas fluoresensi molekuler menjadikannya alat yang sangat berharga dalam bidang
ini.

15
 2.5. Spektroskopi Fosfosforensi Molekul

Phosphorescence adalah fenomena photoluminescence yang sangat mirip dengan

fluorescence. Untuk memahami perbedaan antara dua fenomena ini, kita harus
mempertimbangkan spin elektron dan perbedaan antara keadaan singlet dan keadaan triplet.
Molekul biasa yang bukan radikal bebas ada di keadaan dasar dengan pasangan elektronnya
berpasangan. Keadaan elektronik molekuler di mana semua spin elektron berpasangan
dikatakan sebagai keadaan singlet. Keadaan dasar dari radikal bebas, di sisi lain, adalah
keadaan doublet, karena elektron ganjil dapat mengasumsikan dua orientasi dalam medan
magnet.

Ketika salah satu dari sepasang elektron dalam molekul tereksitasi ke tingkat energi
yang lebih tinggi, singlet atau keadaan triplet dapat diproduksi. Dalam keadaan singlet
tereksitasi, putaran elektron yang dipromosikan masih berlawanan dengan elektron yang
tersisa. Namun, dalam keadaan triplet, putaran kedua elektron menjadi tidak berpasangan dan
dengan demikian paralel. Ini dapat direpresentasikan seperti diilustrasikan pada Gambar 27-
10. Keadaan triplet tereksitasi kurang energik daripada kondisi singlet tereksitasi terkait.

Transisi dari keadaan singlet tereksitasi ke keadaan singlet tanah menghasilkan

fluoresensi molekuler. Transisi singlet-singlet ini sangat memungkinkan, dan dengan
demikian, masa hidup status singlet tereksitasi sangat singkat (10–5 detik atau kurang). Di sisi
lain, transisi dari keadaan triplet tereksitasi ke keadaan singlet tanah menghasilkan
fosfororesensi molekuler. Karena transisi triplet-singlet menghasilkan perubahan spin
elektron, itu jauh lebih kecil kemungkinannya. Akibatnya, status triplet memiliki masa pakai
yang jauh lebih lama (biasanya 1024 hingga 104 detik).

Panjang fosforensi juga merupakan salah satu kelemahannya. Karena keadaan

tereksitasi relatif berumur panjang, proses nonradiasional punya waktu untuk bersaing dengan

16
fosforensi untuk deaktivasi. Oleh karena itu, efisiensi proses pendar, serta intensitas pendar
yang sesuai, relatif rendah. Untuk meningkatkan efisiensi, fosfororesensi biasanya diamati
pada suhu rendah di media kaku, seperti kacamata. Pendekatan lain adalah mengadsorpsi
analit pada permukaan padat atau melampirkannya dalam rongga molekul (rongga misel atau
siklodekstrin), yang melindungi keadaan triplet yang rapuh. Teknik ini dikenal sebagai room
temperature phosphorescence.

Gambar 27-10 Keadaan spin elektronik molekul.

Dalam (a), keadaan elektronik ground ditunjukkan. Dalam keadaan energi atau ground
terendah, putaran selalu berpasangan, dan negara adalah keadaan singlet. Dalam (b) dan (c),
status elektronik tereksitasi ditampilkan. Jika putaran tetap dipasangkan dalam keadaan
tereksitasi, molekul dalam keadaan singlet tereksitasi (b). Jika spin menjadi tidak
berpasangan, molekul dalam keadaan triplet tereksitasi (c).

Karena intensitasnya yang lemah, fosforesensi jauh lebih sedikit diterapkan daripada
fluoresensi. Namun, fosforesensi molekuler telah digunakan untuk menentukan berbagai
spesies organik dan biokimia, termasuk asam nukleat, asam amino, piramid dan pirimidin,
enzim, hidrokarbon polisiklik, dan pestisida. Banyak senyawa farmasi menunjukkan sinyal
fosfororesensi yang dapat diukur. Instrumentasi untuk berfluoresensi juga agak lebih
kompleks daripada untuk fluoresensi. Instrumen fosforensi biasanya membedakan fosforensi
dari fluoresensi dengan menunda pengukuran fosforensi hingga fluoresensi membusuk
mendekati nol. Banyak instrumen fluoresensi memiliki lampiran, yang disebut fosforoskopi,
yang memungkinkan instrumen yang sama digunakan untuk pengukuran fosforensi.

2.6. Metode Chemiluminescence

Chemiluminescence diproduksi ketika reaksi kimia menghasilkan molekul tereksitasi

secara elektronik, yang memancarkan cahaya ketika kembali ke keadaan dasar. Reaksi

17
chemiluminescence terjadi di sejumlah sistem biologis, di mana prosesnya sering disebut,
bioluminescence. Contoh spesies yang menunjukkan bioluminesensi meliputi kunang-kunang,
banci laut, ubur-ubur tertentu, bakteri, protozoa, dan krustasea.

Salah satu fitur menarik chemiluminescence untuk keperluan analitis adalah

instrumentasi yang sangat sederhana yang diperlukan. Karena tidak ada sumber radiasi
eksternal yang diperlukan untuk eksitasi, instrumen hanya dapat terdiri dari bejana reaksi dan
tabung photomultiplier. Secara umum, tidak diperlukan perangkat pemilihan panjang
gelombang karena satu-satunya sumber radiasi adalah emisi yang disebabkan oleh reaksi
kimia.

Metode kemiluminesensi dikenal karena sensitivitasnya yang tinggi. Batas deteksi

tipikal berkisar dari bagian per juta hingga bagian per miliar atau lebih rendah.
Aplikasitermasuk penentuan gas, seperti oksida nitrogen, ozon, dan senyawa belerang;
penentuan spesies anorganik, seperti hidrogen peroksida dan beberapa ion logam; teknik
immunoassay; Uji probe DNA; dan metode reaksi berantai polimerase.

18
 BAB III PENUTUP

3.1. Kesimpulan

1. Spektroskopi adalah ilmu yang mempelajari materi dan atributnya berdasarkan

cahaya, suara atau partikel yang dipancarkan, diserap atau dipantulkan oleh materi
tersebut. Spektroskopi juga dapat didefinisikan sebagai ilmu yang mempelajari
interaksi antara cahaya dan materi.

2. Fluoresensi adalah emisi cahaya setelah penyerapan sinar ultraviolet (UV) atau cahaya
tampak oleh molekul fluoresensi atau substruktur disebut fluorophore .

3. Kompenen Spektroskopi Fluoresensi terdiri dari sumber cahaya (biasanya xenon atau
lampu merkuri), sebuah monokromator / atau filter untuk memilih panjang gelombang
eksitasi; tempat sampel; detektor, yang mengubah cahaya yang dipancarkan ke listrik
sinyal, dan unit untuk pembacaan data dan analisis.

3.2. Saran

Hendaknya makalah ini menjadi sumber ilmu yang berguna bagi penulis dan pembaca
untuk mengembangkan keterampilannya pada bidang sains maupun teknologi. selain itu,
makalah ini diharapkan juga dapat menambah pengetahuan untuk digunakan dalam praktek
menggunakan instrumen spektrofotometer Fluoresensi itu sendiri.

19
 DAFTAR PUSTAKA

Skoog, D.A., West, D.M., Holler, F.J. and Crouch, S.R. 2014. Fundamental of Analytical
Chemistry, 9th Edition. Brooks/Cole, Chengage Learning : Canada by Nelson
Education.

Sumber : http://radiograferatrosumbar.blogspot.com/2011/05/spektroskopi-sinar-x-
karakteristik.html (diakses pada 06 Juni, 2012)

20