Tugas Makalah Penentuan Struktur Molekul

Analisis Hidrokuinon Secara Spektrofotometri Sinar Tampak Dalam

sediaan Krim Malam NC-16 Dan NC-74 Dari Klinik Kecantikan
LSC Surabaya

Disusun Oleh:
Windi Riyadi (1113096000037)
Yuke Puspita(1113096000040)
Noor Syifa(1113096000053)

PROGRAM STUDI KIMIA

FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI
UNIVERSITAS ISLAM NEGERI SYARIF HIDAYATULLAH
JAKARTA
2016/1437 H

BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Sediaan kosmetik yang berfungsi sebagai pemutih kulit masih beredar sebagai
kosmetik yang digemari, oleh karena itu bahan-bahan yang dapat digunakan sebagai
pemutih kulit banyak diteliti dan dikembangkan. Salah satu bahan pemutih kulit yang
terkenal dan telah banyak digunakan adalah hidrokuinon (Draelos, 2006 dan Zhai, 2009).
Hidrokuinon sebagai bahan aktif pemutih kulit bekerja melalui mekanisme efek toksik
hidrokuinon terhadap melanosit (sel tempat sintesis melanin/pigmen hitam pada kulit)
dan melalui penghambatan melanogenesis (proses pembentukan melanin) (Westerhof
dan Kooyers, 2005).
Peraturan BPOM dalam surat PUBLIC WARNING/PERINGATAN Nomor:
KH.00.01.43.250-3 tanggal 11 Juni 2009 mengenai kosmetik mengandung bahan
berbahaya/bahan dilarang termasuk Hidrokuinon, dimana penggunaan bahan tersebut
dalam sediaan kosmetik dapat membahayakan kesehatan dan dilarang digunakan.
Hidrokuinon termasuk golongan obat keras yang hanya dapat digunakan berdasarkan
resep dokter. Bahaya pemakaian obat keras ini tanpa pengawasan dokter dapat
menyebabkan iritasi kulit, kulit menjadi merah dan rasa terbakar juga dapat
menyebabkan kelainan pada ginjal, kanker darah dan kanker sel hati (Ditjen POM RI,
2009).
Spektrofotometri merupakan salah satu metode dalam kimia analisis yang digunakan
untuk menentukan komposisi suatu sampel baik secara kuantitatif dan kualitatif yang
didasarkan pada interaksi antara materi dengan cahaya. Sedangkan peralatan yang digunakan
dalam spektrofometri disebut spektrofotometer. Cahaya yang dimaksud dapat berupa cahaya
visibel, UV dan inframerah, sedangkan materi dapat berupa atom dan molekul namun yang
lebih berperan adalah elektron yang adapada atom ataupun molekul yang bersangkutan.
Para kimiawan telah lama menggunakan bantuan warna sebagai bantuan dalam
mengenali zat-zat kimia. Spektrofotometri dapat dianggap sebagai suatu perluasan
pemeriksaan visual yang dengan studi lebih mendalam dari absorpsi energi radiasi oleh
macam-macam zat kimia memperkenankan dilakukannya pengukuran ciri-ciri serta
kuantitatifnya dengan ketelitian lebih besar (Day dan Underwood, 1993).

1.2 Tujuan Penulisan

Tujuan penulisan dalam pembuatan makalah ini yaitu:
1. Melakukan pemeriksaan terhadap kadar hidrokuinon secara spektrofotometri
sinar tampak yang didahului dengan validasi metode analisis yang meliputi:
akurasi, presisi, lineritas, LLOD dan LLOQ (Lower Limit of Detection dan Lower

Limit of Quantitation) untuk penetapan kadar hidrokuinon dalam sediaan krim

malam NC-16 dan NC-74 dari klinik kecantikan LSC Surabaya menggunakan
alat Spektrofotometer UV-Vis
2. Mengetahui Komponen Spektrofotometer UV-VIS
3. Mengetahui Fungsi dari Bagian-Bagian Spektrofotometer UV-VIS
4. Mengetahui Cara Kerja Spektrofotometer UV-VIS
5. Mengetahui Keuntungan Analisis Secara Spektrofotometer UV-VIS

1.3 Manfaat Penulisan

Manfaat dari penulisan makalah ini akan memberikan informasi kepada dosen dan
teman-teman mahasiswa tentang Melakukan pemeriksaan terhadap kadar hidrokuinon
secara spektrofotometri sinar tampak yang didahului dengan validasi metode analisis
dengan menggunakan alat Spektrofotometer UV-Vis.

BAB II
TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Spektrofotometri
Spektrofotometri merupakan salah satu metode dalam kimia analisis yang digunakan
untuk menentukan komposisi suatu sampel baik secara kuantitatif dan kualitatif yang
didasarkan pada interaksi antara materi dengan cahaya. Peralatan yang digunakan dalam
spektrofotometri disebut spektrofotometer. Cahaya yang dimaksud dapat berupa cahaya
visibel, UV dan inframerah, sedangkan materi dapat berupa atom dan molekul namun yang
lebih berperan adalah elektron valensi.
Sinar atau cahaya yang berasal dari sumber tertentu disebut juga sebagai radiasi
elektromagnetik. Radiasi elektromagnetik yang dijumpai dalam kehidupan sehari-hari adalah
cahaya matahari.
Dalam interaksi materi dengan cahaya atau radiasi elektromagnetik, radiasi
elektromagnetik kemungkinanan dihamburkan, diabsorbsi atau dihamburkan sehingga
dikenal adanya spektroskopi hamburan, spektroskopi absorbsi ataupun spektroskopi emisi.
Pengertian spektroskopi dan spektrofotometri pada dasarnya sama yaitu di dasarkan pada
interaksi antara materi dengan radiasi elektromagnetik. Namun pengertian spektrofotometri
lebih spesifik atau pengertiannya lebih sempit karena ditunjukan pada interaksi antara materi
dengan cahaya (baik yang dilihat maupun tidak terlihat). Sedangkan pengertian spektroskopi
lebih luas misalnya cahaya maupun medan magnet termasuk gelombang elektromagnetik.

2.2 Radiasi Elektromagnetik

Radiasi elektromagnetik memiliki sifat ganda yang disebut sebagai sifat dualistik cahaya
yaitu:

1) Sebagai gelombang
2) Sebagai partikel energi yang disebut foton.
Karena sifat tersebut maka beberapa parameter perlu diketahui misalnya panjang
gelombang, frekuensi dan energi tiap foton. Panjang gelombang (l) didefinisikan sebagai
jarak antara dua puncak.

Gambar 1. Puncak yang terbentuk berdasarkan Hubungan antara Panjang Gelombang dengan
Jarak
Hubungan dari ketiga parameter di atas dirumuskan oleh Planck yang dikenal
dengan persamaan Planck. Hubungan antara panjang gelombang frekuensi dirumuskan
sebagai
c = . v atau = c/v atau v = c/
Persamaan Planck: hubungan antara energi tiap foton dengan frekuensi
E=h.v
E = h . c/
dimana
E = energi tiap foton
h = tetapan Planck (6,626 x 10-34 J.s),
v = frekuensi sinar
c = kecepatan cahaya (3 x 108m.s-1).

Dari rumus di atas dapat diketahui bahwa energi dan frekuensi suatu foton akan
berbanding terbalik dengan panjang gelombang tetapi energi yang dimiliki suatu foton akan
berbanding lurus dengan frekuensinya.
Misalnya: energi yang dihasilkan cahaya UV lebih besar dari pada energi yang dihasilkan
sinar tampak. Hal ini disebabkan UV memiliki panjang gelombang () yang lebih pendek
(100400 nm) dibanding panjang gelombang yang dimiliki sinar tampak (400800 nm).
Berbagai satuan energi beserta faktor konversinya dapat dilihat pada Tabel 1:
Tabel 1. Satuan Energi beserta Faktor Konversinya
Erg

Joule

Kalori

1 atm

E voult

1 erg = 1

10-7

2,390110-8

9,86871010

6,24181011

J joule = 107

2,390110-1

9,868710-3

6,24181018

1 kalori 4,1849107

4,1840

4,129110-2

2,61161019

1 atm = 1,0133109

1,0133102

24,218

16,62481020

1 E.volt = 1,602110-12

1,6021x-19

3,829110-20

1,561110-20

Interaksi antara materi dengan cahaya disini adalah terjadi penyerapan cahaya, baik
cahaya Uv-vis maupun Ir oleh materi sehingga spektrofotometri disebut juga
sebagai spektroskopi absorbsi.
Dari 4 jenis spektrofotometri ini (UV, Vis, UV-Vis dan Ir) memiliki prinsip kerja yang
sama yaitu adanya interaksi antara materi dengan cahaya yang memiliki panjang gelombang
tertentu. Perbedaannya terletak pada panjang gelombang yang digunakan.
Secara sederhana Instrumen spektrofotometri yang disebut spektrofotometer terdiri dari :
sumber cahaya monokromator sel sampel detektor read out (pembaca).

Gambar 2. Komponen-komponen Instrumen Spektrofotometri UV VIS

Fungsi masing-masing bagian:

1. Sumber sinar polikromatis berfungsi sebagai sumber sinar polikromatis dengan berbagai
macam rentang panjang gelombang. Untuk sepktrofotometer
UV menggunakan lampu deuterium atau disebut juga heavy hidrogen
VIS menggunakan lampu tungsten yang sering disebut lampu wolfram.
UV-VIS menggunan photodiode yang telah dilengkapi monokromator.
Infra merah, lampu pada panjang gelombang IR.
2. Monokromator berfungsi sebagai penyeleksi panjang gelombang yaitu mengubah cahaya
yang berasal dari sumber sinar polikromatis menjadi cahaya monokromatis. Jenis
monokromator yang saat ini banyak digunakan adalan gratting atau lensa prisma dan
filter optik.
Jika digunakan grating maka cahaya akan dirubah menjadi spektrum cahaya. Sedangkan
filter optik berupa lensa berwarna sehingga cahaya yang diteruskan sesuai dengan warnya
lensa yang dikenai cahaya. Ada banyak lensa warna dalam satu alat yang digunakan sesuai
dengan jenis pemeriksaan.
Pada gambar 3 disebut sebagai pendispersi atau penyebar cahaya dengan adanya
pendispersi hanya satu jenis cahaya atau cahaya dengan panjang gelombang tunggal yang
mengenai sel sampel. Pada gambar ini hanya cahaya hijau yang melewati pintu keluar. Proses
dispersi atau penyebaran cahaya seperti yang tertera pada gambar 3.

Gambar 3. Proses Dispersi ( Penyebaran Cahaya) pada Monokromator

3. Sel sampel berfungsi sebagai tempat meletakan sampel
a. UV, VIS dan UV-VIS menggunakan kuvet sebagai tempat sampel. Kuvet
biasanya terbuat dari kuarsa atau gelas, namun kuvet dari kuarsa yang terbuat
dari silika memiliki kualitas yang lebih baik. Hal ini disebabkan yang terbuat dari
kaca dan plastik dapat menyerap UV sehingga penggunaannya hanya pada
spektrofotometer sinar tampak (VIS). Cuvet biasanya berbentuk persegi panjang
dengan lebar 1 cm.
b. IR, untuk sampel cair dan padat (dalam bentuk pasta) biasanya dioleskan pada
dua lempeng natrium klorida. Untuk sampel dalam bentuk larutan dimasukan ke
dalam sel natrium klorida. Sel ini akan dipecahkan untuk mengambil kembali
larutan yang dianalisis, jika sampel yang dimiliki sangat sedikit dan harganya
mahal.
4. Detektor berfungsi menangkap cahaya yang diteruskan dari sampel dan
mengubahnya menjadi arus listrik. Syarat-syarat sebuah detektor :
Kepekaan yang tinggi
Perbandingan isyarat atau signal dengan bising tinggi
Respon konstan pada berbagai panjang gelombang.
Waktu respon cepat dan signal minimum tanpa radiasi.
Signal listrik yang dihasilkan harus sebanding dengan tenaga radiasi.
Macam-macam detektor :
Detektor foto (Photo detector)
Photocell, misalnya CdS.
Phototube
Hantaran foto
Dioda foto
Detektor panas
5. Read out merupakan suatu sistem baca yang menangkap besarnya isyarat listrik yang
berasal dari detektor.

2.3 Proses Absorbsi Cahaya Pada Spektrofotometri

8

Ketika cahaya dengan panjang berbagai panjang gelombang (cahaya polikromatis)

mengenai suatu zat, maka cahaya dengan panjang gelombang tertentu saja yang akan diserap.
Di dalam suatu molekul yang memegang peranan penting adalah elektron valensi dari setiap
atom yang ada hingga terbentuk suatu materi. Elektron-elektron yang dimiliki oleh suatu
molekul dapat berpindah (eksitasi), berputar (rotasi) dan bergetar (vibrasi) jika dikenai suatu
energi.
Jika zat menyerap cahaya tampak dan UV maka akan terjadi perpindahan elektron dari
keadaan dasar menuju ke keadaan tereksitasi. Perpindahan elektron ini
disebut transisi elektronik. Apabila cahaya yang diserap adalah cahaya inframerah maka
elektron yang ada dalam atom atau elektron ikatan pada suatu molekul dapat hanya akan
bergetar (vibrasi). Sedangkan gerakan berputar elektron terjadi pada energi yang lebih rendah
lagi misalnya pada gelombang radio.
Atas dasar inilah spektrofotometri dirancang untuk mengukur konsentrasi suatu suatu
yang ada dalam suatu sampel. Dimana zat yang ada dalam sel sampel disinari dengan cahaya
yang memiliki panjang gelombang tertentu. Ketika cahaya mengenai sampel sebagian akan
diserap, sebagian akan dihamburkan dan sebagian lagi akan diteruskan.
Pada spektrofotometri, cahaya datang atau cahaya masuk atau cahaya yang mengenai
permukaan zat dan cahaya setelah melewati zat tidak dapat diukur, yang dapat diukur adalah
It/I0 atau I0/It (perbandingan cahaya datang dengan cahaya setelah melewati materi (sampel)).
Proses penyerapan cahaya oleh suatu zat dapat dilihat pada gambar 4:

Gambar 4. Proses Penyerapan Cahaya oleh suatu zat

Proses penyerapan cahaya oleh zat dalam sel sampel. dari gambar terlihat bahwa zat
sebelum melewati sel sampel lebih terang atau lebih banyak di banding cahaya setelah
melewati sel sampel.
Cahaya yang diserap diukur sebagai absorbansi (A) sedangkan cahaya yang hamburkan
diukur sebagai transmitansi (T), dinyatakan dengan hukum lambert-beer atau Hukum Beer,
berbunyi: jumlah radiasi cahaya tampak (ultraviolet, inframerah dan sebagainya) yang
diserap atau ditransmisikan oleh suatu larutan merupakan suatu fungsi eksponen dari
konsentrasi zat dan tebal larutan.

Berdasarkan hukum Lambert-Beer, rumus yang digunakan untuk menghitung banyaknya

cahaya yang hamburkan :

dimana I0 merupakan intensitas cahaya datang dan I t atau I1 adalah intensitas cahaya setelah
melewati sampel.

Rumus yang diturunkan dari Hukum Beer dapat ditulis sebagai:

A = a . b . c atau A = . b . c
dimana:
A = absorbansi
b atau terkadang digunakan l = tebal larutan (tebal kuvet diperhitungkan juga umumnya 1
cm)
c = konsentrasi larutan yang diukur
= tetapan absorptivitas molar (jika konsentrasi larutan yang diukur dalam molar)
a = tetapan absorptivitas (jika konsentrasi larutan yang diukur dalam ppm).
Secara eksperimen hukum Lambert-beer akan terpenuhi apabila peralatan yang
digunakan memenuhi kriteria-kriteria berikut:
1. Sinar yang masuk atau sinar yang mengenai sel sampel berupa sinar dengan dengan
panjang gelombang tunggal (monokromatis).
2. Penyerapan sinar oleh suatu molekul yang ada di dalam larutan tidak dipengaruhi oleh
molekul yang lain yang ada bersama dalam satu larutan.
3. Penyerapan terjadi di dalam volume larutan yang luas penampang (tebal kuvet) yang
sama.
4. Penyerapan tidak menghasilkan pemancaran sinar pendafluor. Artinya larutan yang
diukur harus benar-benar jernih agar tidak terjadi hamburan cahaya oleh partikel-partikel
koloid atau suspensi yang ada di dalam larutan.
5. Konsentrasi analit rendah. Karena apabila konsentrasi tinggi akan menggangu kelinearan
grafik absorbansi versus konsntrasi.

10

Faktor-faktor yang sering menyebabkan kesalahan

spektrofotometer dalam mengukur konsentrasi suatu analit:

dalam

menggunakan

1. Adanya serapan oleh pelarut. Hal ini dapat diatasi dengan penggunaan blangko, yaitu
larutan yang berisi selain komponen yang akan dianalisis termasuk zat pembentuk warna.
2. Serapan oleh kuvet. Kuvet yang ada biasanya dari bahan gelas atau kuarsa, namun kuvet
dari kuarsa memiliki kualitas yang lebih baik.
3. Kesalahan fotometrik normal pada pengukuran dengan absorbansi sangat rendah atau
sangat tinggi, hal ini dapat diatur dengan pengaturan konsentrasi, sesuai dengan kisaran
sensitivitas dari alat yang digunakan (melalui pengenceran atau pemekatan).

BAB III
METODELOGI PENELITIAN

3.1 Alat dan Bahan

3.1.1 Alat
Spektrofotometer (Cintra 101), Alat-alat gelas (labu ukur, beaker glass, gelas ukur
dan pipet volume dengan bebagai ukuran) (Iwaki pyrex), Timbangan analitik Sartorius
BL 2105 dan Sartorius CP 2250, Silika gel 60 F254 (Merck),Termometer, Penangas air.
Bejana (chamber) pengembang, Lampu UV (Camag).

3.1.2 Bahan
Hidrokuinon (p.a) (Merck), Krim malam pemutih NC-16 dan NC-74 dari Klinik
Kecantikan LSC, Reagen FeCl 3 (Merck), Reagen Benedict (Natrium sitrat, Natrium
Karbonat, CuSO4), Etanol 96% (p.a) (Mallinckrodt), Floroglusinol (p.a) (Merck), NaOH
(p.a) (Merck), Metanol (p.a) (Merck), Kloroform (p.a) (Merck), N-Heksan (p.a)
(Merck), Aseton (p.a) (Merck), Aquabidestilata (Otsuka)

3.2 Cara Kerja

11

3.2.1

Identifikasi bahan aktif (hidrokuinon)

Reaksi warna hidrokuinon menggunakan FeCl 3 terbentuk warna hijau

reagent benedict akan berwarna merah.
3.2.2

Pembuatan Pereaksi

Pembuatan Larutan Floroglusinol 1%

Floroglusinol ditimbang secara seksama sebanyak 1,0 gram kemudian

dimasukkan ke dalam labu ukur 100 mL. Selanjutnya ditambahkan etanol 96%
hingga volumenya tepat 100,0 mL (Departemen Kesehatan RI, 1995).

Pembuatan Larutan NaOH 0,5 N

NaOH ditimbang secara seksama sebanyak 20,0 gram kemudian dimasukkan ke

dalam labu ukur 1000 mL. Selanjutnya ditambahkan aquabidestilata hingga
volumenya tepat 1000,0 mL (Departemen Kesehatan RI, 1995).

3.2.3

Pembuatan Eluen

1. Sistem A, dibuat dari campuran metanol dan kloroform dengan perbandingan

1:1 (FI IV, 1995 dan Odumosu, 2010).
2. Sistem B, dibuat dari campuran n-heksan dan aseton dengan perbandingan
3:2 (BPOM, 2011 dan Siddique et al, 2012).
3. Sistem C, dibuat dari campuran metanol dan air dengan perbandingan 45:55
(Siddique et al, 2012).
Campuran larutan dari masing-masing sistem dimasukkan ke dalam bejana lalu
bejana tersebut ditutup. Selanjutnya fase gerak tersebut didiamkan hingga bejana
terjenuhi oleh fase gerak.

3.2.4

Pembuatan Larutan Baku

Hidrokuinon baku dibuat dengan konsentrasi 1000 bpj, dari larutan baku ini
dibuat larutan baku dibuat pengenceran 5 konsentrasi baku kerja.
3.2.5

Ekstraksi sampel
Sampel sebanyak 1,5 gram di dalam beaker glass 25 mL. Tambahkan 15,0 mL

12

dan

etanol 96% v/v sedikit demi sedikit, kemudian campur. Homogenkan dalam tangas
ultrasonik selama 10 menit. Setelah homogen tuang ke dalam labu ukur 25 mL. dan
diambahkan etanol 96% v/v sampai tanda, lalu dihomogenkan. Selanjutnya
letakkan labu ukur dalam tangas es hingga terjadi pemisahan lemak selama lebih
kurang 10 menit. Saring melalui kertas saring (BPOM, 2011).
3.2.6

Uji Kualitatif Hidrokuinon metode Kromatografi Lapis Tipis (ASEAN,

2005 dan BPOM, 2011)
1. Aktifkan lempeng pada suhu 100 C selama 10 menit.
2. Jenuhkan bejana kromatografi dengan masing-masing larutan
pengembang.
3. Totolkan secara terpisah, sejumlah volume sama (20 L) larutan
baku, dan larutan uji. Penotolan dapat dilakukan dua kali.
4. Kembangkan lempeng dalam bejana kromatografi di ruang
gelap pada suhu ruang hingga jarak rambat mencapai lebih
kurang 15 cm dari titik penotolan.
5. Pindahkan lempeng, dan keringkan pada suhu ruang.
6. Amati lempeng di bawah penyinaran lampu UV 254 nm, dan
tandai posisi bercak.
7. Hitung nilai Rf untuk masing-masing bercak.
8. Bandingkan nilai Rf bercak yang diperoleh dari larutan uji
dengan larutan baku.
3.2.7 Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Hidrokuinon dengan
Penambahan Pereaksi Floroglusinol dalam NaOH 0,5 N
Larutan baku kerja hidrokuinon sebanyak 0,5 mL ditambahkan dengan 2,0
mL pereaksi floroglusinol 1% dan 1,0 mL NaOH 0,5 N, kemudian dipanaskan dalam
o
penangas air pada suhu 70 C selama 50 menit. Tabung reaksi kemudian didinginkan
o
dalam air bersuhu 25 C, kemudian campuran larutan ditambahkan NaOH 0,5 N
hingga volumenya 5,0 mL. Larutan dikocok hingga tercampur sempurna.
Selanjutnya absorbansi larutan tersebut dibaca pada panjang gelombang 400-800
nm. Panjang gelombang maksimum dipilih berdasarkan nilai absorbansi tertinggi.
3.2.8

Penentuan Time Scanning

Larutan hidrokuinon sebanyak 0,5 mL dimasukan ke dalam lima tabung

reaksi kemudian ditambahkan dengan 2,0 mL pereaksi floroglusinol 1% dan 1,0 mL,
o
NaOH 0,5 N, kemudian dipanaskan dalam penangas air pada suhu 70 C selama 50
o
menit. Larutan tersebut kemudian didinginkan dalam air bersuhu 25 C, kemudian
campuran larutan ditambahkan dengan NaOH 0,5 N hingga volumenya 5,0 mL dalam
labu ukur. Selanjutnya dilakukan time scanning (gambar 1).
13

3.2.9

Pembuatan Kurva Baku Hidrokuinon

Larutan hidrokuinon baku kerja masing-masing konsentrasi sebanyak 0,5 mL

dimasukkan ke dalam tabung reaksi, kemudian ditambahkan dengan 2,0 mL pereaksi
floroglusinol 1% dan 1,0 mL larutan NaOH 0,5 N, lalu dipanaskan dalam penangas
o
air pada suhu 70 C selama 50 menit. Tabung reaksi kemudian didinginkan dalam air
o
bersuhu 25 C, selanjutnya campuran larutan ditambahkan NaOH 0,5 N hingga
volumenya 5,0 mL lalu didiamkan. Selanjutnya masing- masing larutan dibaca
absorbansinya dengan menggunakan spektrofotometer UV- Vis pada panjang
gelombang maksimum. Hasil absorbansi dari
masing-masing konsentrasi baku
kerja diplotkan kedalam regresi linear, sehingga diproleh persamaan kurva baku y =
bx + a.

3.2.10 Validasi Metode

a. Ketepatan (Accuracy)
Sampel krim ditimbang 50,0 mg, krim yang telah ditimbang disuspensikan
dalam 5,0 mL etanol 96% lalu disaring dengan kertas saring ke dalam labu ukur 10,0
mL. Selanjutnya dipepet sejumlah larutan dan masukkan ke dalam tabung reaksi,
kemudian ditambahkan hidrokuinon baku sebanyak 0,5 mL dengan konsentrasi
tertentu. Selanjutnya ditambahkan dengan 2,0 mL pereaksi floroglusinol 1% dan 1,0
mL NaOH 0,5 N, panaskan diatas tangas air pada suhu 70C selama 50 menit lalu
dinginkan pada air dengan suhu 25C. Selanjutnya campuran larutan tersebut
ditambahkan NaOH 0,5 N hingga volumenya 5,0 mL lalu didiamkan. Baca
absorbansinya menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang
maksimum. Hasil absorbansi kemudian dipakai untuk menghitung nilai perolehan
kembali (persen recovery).

b. Linieritas ( Linearity )
Hasil absorbansi masing-masing konsentrasi pada kurva baku diplotkan ke
dalam regresi linier sehingga diperoleh persamaan kurva baku yaitu Y= bx + a dan
nilai koefisien korelasinya (r). Selanjutnya Linearitas dihiting Vxo. Untuk linieritas,
sebaiknya harga Vxo < 5% (Yuwono dan Indrayanto, 2005).

14

c. LOD dan LOQ (Limit of Detection dan Limit of Quantitation)

Batas deteksi dan batas kuantitasi dapat dihitung secara statistik melalui
persamaan garis linear dari kurva baku. LOD dan LOQ dapat dihitung dengan
menggunakan kurva kalibrasi y = bx + a.

d. Penetapan Kadar Hidrokuinon dalam Sampel Krim NC-16 dan

NC-74
Sampel krim ditimbang 50,0 mg, krim yang telah ditimbang disuspensikan dalam
5,0 mL etanol 96% lalu disaring dengan kertas saring ke dalam labu ukur 10,0 mL.
Selanjutnya dipepet 1,0 mL larutan dan masukkan ke dalam tabung reaksi, kemudian
ditambahkan dengan 2,0 mL pereaksi floroglusinol 1% dan 1,0 mL NaOH 0,5 N,
panaskan diatas tangas air pada suhu 70C selama 50 menit lalu dinginkan pada air
dengan suhu 25C. Selanjutnya campuran larutan tersebut ditambahkan NaOH 0,5 N
hingga volumenya 5,0 mL lalu didiamkan. Baca absorbansinya menggunakan
spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang maksimum.

BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
Identifikasi kualitatif dengan menggunakan reaksi warna pada sampel krim NC16 dan NC-74 dalam etanol direaksikan dengan Benedicts Reagent dan Ferric
Chloride. Krim NC-16 ditambah 3-4 tetes Benedicts Reagent yang menghasilkan
warna merah dan menggunakan Ferric Chloride menghasilkan warna hijau
menandakan adanya gugus fenol (Tabel 1), menunjukkan hasil yang positif sesuai
pustaka. Krim NC-74 dengan Benedicts Reagent tidak terbentuk warna merah dan

15

menggunakan Ferric Chloride tidak menghasilkan warna hijau menunjukkan hasil

yang negatif.

Gambar 5. Profil Spektrum Sediaan Krim Malam NC-16 dan NC-74

( maks hidrokuinon = 550 nm)
Pengukuran spektrum hidrokuinon dalam sediaan krim malam NC-16 dan NC74 dengan penambahan 2,0 mL pereaksi floroglusinol 1% dan NaOH 0,5 N diamati
pada daerah sinar tampak. Berdasarkan hasil pengamatan pada profil sediaan krim
malam NC-16 dan NC-74 didapatkan adanya pergeseran batokromik dan
hiperkromik. Yang diduga disebabkan adanya penambahan gugus fungsi ikatan
rangkap yang bersifat kromofor. Pada panjang gelombang 550 nm profil spektrum
hidokuinon murni dan sampel NC-16 terlihat adanya puncak, sedangkan sampel
sediaan krim malam NC-74 pada panjang gelombang 550 nm tidak menunjukkan
puncak (Gambar 5). sehingga dapat disimpulkan berdasarkan identifikasi kualitatif
secara Spektrofotometri sinar tampak sediaan krim malam NC-74 tidak mengandung
hidrokuinon.
Analisis hidrokuinon dengan metode kromatografi lapis tipis, fase diam silica gel
F254 dan 3 sistem fase gerak. Pada sampel NC-74 dengan pembanding hidrokuinon
menggunakan eluen yang sama yaitu dengan eluen sistem A, B dan C memberikan
harga Rf yang berbeda. Hasil penelitian secara KLT, berdasarkan hasil penelitian
sampel krim malam pemutih NC-16 memiliki nilai Rf yang sama dengan baku
hidrokuinon dan NC-74 tidak teridentifikasi adanya hidrokuinon karena memberikan
nilai Rf yang berbeda dengan baku (pembanding), seperti pada Tabel 2.
Identifikasi kuantitatif pada penelitian ini, dilakukan pengukuran hidrokuinon
dengan penambahan reagen floroglusinol dan NaOH 0,5 N. Warna yang dihasilkan
setelah penambahan pereaksi diikuti pemanasan dapat diukur di daerah
spektrofotometri sinar tampak pada panjang 550 nm. Kondisi reaksi optimum

16

0
yang diperoleh pada percobaan adalah pada suhu 70 C dan waktu 50 menit, 2,0 mL
floroglusinol 1% dan 1mL NaOH 0,5 N. Penentuan kestabilan warna menunjukkan
warna stabil sampai 60 menit.

Gambar 6. Kurva Baku Hidrokuinon untuk Penetapan LLOD dan LLOQ pada
Panjang Gleombang Maksimum 550 nm
Uji validasi metode, didapatkan rata-rata persen recovery berturut-turut adalah
104,73%; 98,87% dan 99,57%. Data tersebut menunjukkan bahwa persen recovery
memenuhi persyaratan validasi yaitu 80-120%. Pada percobaan ini diukur larutan
standar 0,50; 1,51 ;2,02 ;3,02 dan 4,03 bpj. Dapat dilihat pada gambar 6, dari hasil
perhitungan kurva baku tersebut diperoleh persamaan regresi hidrokuinon yaitu y =
0.505924939 + 0.078788578x dengan harga koefisien korelasi (r) adalah 0,999 dan
nilai Vxo adalah 1,47% menunjukkan bahwa memenuhi persyaratan validasi
(Nilai Vxo 5%), KV = 0,47% didapatkan nilai LLOD (Lower Limit of Detection) dan
LLOQ (Lower Limit of Quantitation) berturut-turut adalah 0.04 bpj dan 0.14 bpj.
Dari hasil penelitian ini didapatkan metode analsis memenuhi parameter validasi
untuk penetapan kadar hidrokuinon dalam sediaan krim malam NC-16, sehingga
penggunaan krim malam NC-16 harus menggunakan resep dokter karena
hidrokuinon termasuk golongan obat keras.

BAB V
PENUTUP

17

5.1 Kesimpulan
1. Hasil validasi metode diperoleh KV = 0,47% dan persen recovery berturut- turut
104,73%; 98,87% dan 99,57%. Hasil tersebut memenuhi persyaratan validasi
metode analisis.
2. Berdasarkan uji kualitatif, secara organoleptis, reaksi warna dan penentuan profil
hidrokuinon pada sediaan krim malam NC-16 dan NC-74, hanya sediaan NC-16
yang positif mengandung hidrokuinon dan diperoleh kadar hidrokuinon krim
NC-16 adalah 3,71%.

5.2 Saran
Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai kadar hidrokuinon dalam
sediaan krim malam pemutih dari produk-produk kosmetik yang beredar dipasaran
dan penelitian terhadap bahan aktif pemutih kulit berbahaya lainnya seperti merkuri.

18

DAFTAR PUSTAKA

Amponsah D. 2010. Levels Of Mercury And Hydroquinone In Some Skin- Lightening

Creams And Their Potential Risk To The Health Of Consumers In Ghana,Tesis,
Department Of Chemistry: Kwame Nkrumah University Of Science And
Technology.
ASEAN. 2005. Identification and Determination Of Hydroquinone In Cosmetic Products
By TLC and HPLC. ACM INO 03, Page 3 5.
Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia. 2011. Hidrokinon Dalam
Kosmetik.: Jakarta.
Badan Pengawas Obat dan Makanan. 2007. Kosmetik Mengandung Bahan Berbahaya
dan Zat Warna Yang Dilarang : Keputusan Kepala Badan Pengawas Obat dan
Makanan Republik Indonesia No. HK.00.05.42.1018.
Badan Pengawasan Obat dan Makanan. 2011. Hidrokuinon. Jakarta: Sentra Informasi
Keracunan Nasional.
Chan CC, Lam H, Lee YC, dan Zhang XM. 2004. Analytical Methode Validation and
Instrumet Performance Verification, John Wiley & Sons, Inc., Hoboken, New
Jersey, 153.
Charln R, Barcaui CB, Bernard Kawa Kac BK, Soares DB, Fonseca RR, Abulafia LA.
2008. Hydroquinone-Induced Exogenous Ochronosis: A Report Of Four Cases
And Usefulness Of Dermoscopy, International Journal of Dermatology, Vol. 47,
1923.
Day, R. A. dan Underwood, A. L. 2002. Analisis Kimia Kuantitatif. Edisi Keenam.
Jakarta: Penerbit Erlangga. Hal. 394, 396-404.
nd
Deinstrop EH. 2007. Applied Thin-Layer Chromatographyc, 2 editions, Published by
WILEY-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA,Weinheim: German.

19

Ditjen POM. 1979. Farmakope Indonesia. Edisi III. Jakarta: Departemen kesehatan
Republik Indonesia. Jakarta. Halaman 288-290,747-748.
Ditjen POM. 1995. Farmakope Indonesia. Edisi IV. Jakarta: Departemen kesehatan
Republik Indonesia. Jakarta. Halaman 167-168,1179.
Department of Health and Human Services. 2009. Hydroquinone . Supporting
Information for Toxicological Evaluation by the National Toxicology Program :
U.S. Food & Drug Administration.
Draelos ZD dan Thaman LA. 2006. Cosmetic Formulation of Skin Care Products, Taylor
and Francis Group, United States of America, 205-206.
Ermer J dan Miller JHMcB. 2005. Method Validation in Pharmaceutical Analysis A
Guide to Best Practice, John Wiley & Sons Ltd,England, 200-212.
Gandjar IG, Rohman A. 2007. Kimia Farmasi Analisis, Pustaka Pelajar, Yogyakarta.
Garca PL, Santoro M.M.I.R, Singh AK, Hackmann ERMK. 2007. Determination of
Optimum Wavelength And Derivative Order In Spectrophotometry For
Quantitation of Hydroquinone In Creams, Brazilian Journal Of Pharmaceutical
Sciences, Departament of Pharmacy, Faculty of Pharmaceutical Sciences,
University of So Paulo vol. 43, no. 3 (online), (http://RFBC.com diakses 30-042014)
Gunzler H. dan Williams A. 2002. Handbook of Analytical Techniques, Weinheim:
WILEY-VCH
Harmita. 2004. Petunjuk Pelaksanaan Validasi Metode dan Cara Perhitunganya.
Review Artikel. Majalah Ilmu Kefarmasian: Volume I(3): hal.117-135.
Harvey D. 2000. Modern Analytical Chemistry, 6
America:The McGraw-Hill Companies, Inc.

th

editions, United States of

Huber L. 2007. Validation and Qualification in Analytical Laboratories, 2

Interpharm, Informa Healthcare, New York, USA,5.

nd

edition,

ICH (International Conference on Harmonization). 2005. Validation of Analytical

Procedures: Text and Methodology Q2(R1), www.ich.org. diakses pada 31 Mei
2014.

20

Ibrahim S, Damayanti S, Riani Y. 2004. Penetapan Kecermatan dan Keseksamaan

Metode Kolorimetri Menggunakan Pereaksi Floroglusin untuk Penetapan Kadar
Hidrokuinon dalam Krim Pemucat. ITB: Bandung.
Indriyanto G. dan Yuwono M. 2003. In Gazales, J.Ed., Encyclopedia of Chromatography
(Marcell Dekker). Suplement.
John A.D. 1999. Lange's Handbook Of Chemistry, 15
York.

th

edition, Mcgraw-Hill, Inc., New

Karamagi C, Owino T dan Katabira ET. 2001. Hydroquinone Neuropathy Following Use
Of Skin Bleaching Creams: Case Report, East African Medical
Journal,
Vol.
78
No.
4,
223-224
(online),
(http://eastafricanmedicaljournal.com diakses 30-04-2014)
Khopkar, S. M. 2003. Konsep Dasar Kimia Analitik. Jakarta: Penerbit Universitas
Indonesia.
Kipngetich TE., Hillary M., Shadrack M. 2013. Baraton Interdisplinary Research
Journal Uv-Vis Analysis And Determination Of Hydroquinone In Body Lotions
And Creams Sold In Retail Outlets In Baraton, KENYA- 3(1), 23- 28.
Kustantinah. 2011. Metode Analisis Kosmetika. Jakarta: Peraturan Kepala BPOM RI.
Moffat, et al. 2004. ClarkeS Analysis Of Drug And Poisons. Thirth edition Vol.2,
London: Pharmaceutical Press: London, 1115.
Ningsih, A. U. 2009. Identifikasi Hidrokuinon dalam Krim Pemutih. Skripsi. Fakultas
MIPA. Medan: USU.
Nyiredy S. 2000. Preparative Thin-Layer (Planar) Chromatography, Academic Press,
Hungary, 888-899.
Olumide YM, Akinkugbe AO, Altraide D, Mohammed T, Ahamefule N, Ayanlowo S,
Onyekonwu C, Essen. 2008. Campaign For Safe Cosmetics - Hydroquinone
"Complications Of Chronic Use Of Skin Lightening Cosmetics", International
Journal of Dermatology ( 4), 344.
Odumosu P.O., T. O. Ekwe. 2010. Identification and spectrophometric determination of
hydroquinone levels in some cosmetic creams, African Journal of Pharmacy and
Pharmacology
Vol.
4(5),
pp.
231-234(online)
http://www.academicjournals.org/ajpp

21

Pamudji, J. S., Slamet, I., Suciati, T., dan Rahmat, M. 2000. Analisis Kualitatif dan
Kuantitatif Senyawa Hidrokuinon dan Raksa dalam Krim Pemutih yang Beredar
di Indonesia, Hasil Penelitian dan Kerja Sama Farmasi, FMIPA. Bandung: ITB
dengan YLKI.
Prabawati, Ayu ID, Fatimawali, Yudistira A. 2012. Analisis Zat Hidrokuinon pada Krim
Pemutih Wajah yang Beredar di Kota Manado. Skripsi Program Studi Farmasi
FMIPA. Manado: Universitas Sumatera.
Qassim BB. dan Omaish SH. 2014. Development Of FIA System For The
Spectrophotometric Determination Of Hydroquinone In Pure Material And
Pharmaceutical Formulations, Journal of Chemical and Pharmaceutical
Research, 6(3):1548-1559.
Ribas J, Schettini APM, Cavalcante MSM. 2010. Exogenous Ochronosis Hydroquinone
Induced: A Report Of Four Cases, An Bras Dermatol, Anais Brasileiros De
Dermatologia,85(5):699-703.
Rouessac F dan Rouessac A. 2007. Chemical Analysis Modern Instrumentation Methods
and Techniques Second Edition, John Wiley & Sons Ltd,England, 681-684.
Salo P. 2007. Thin-Layer Chromatography with Ultraviolet and Mass Spectrometric
Detection: From Preparative-Layer to Miniaturized Ultra- Thin-Layer
Technique. Faculty of Pharmacy. Finland: University of Helsinki.
Seliem A.F. dan Khalil H.M. 2013. Sensative Spectrophotometric Method For
Determination Of Hydroquinone In Some Common Cosmetics In Najran Region
In K.S.A., Ultra Chemistry Vol. 9(2), 221-228 (2013).
Siddique, Saima dkk. 2012. Qualitative and Quantitative Estimation Of Hydroquinone
In Skinwhitening Cosmetics. Scientific Research : Pakistan. Journal Of
Cosmetics, Dermatological Sciences And Applications, 2012, 2, 224-228
Doi:10.4236/Jcdsa.2012.23042
Published
Online
September
2012
(http://www.SciRP.org/journal/jcdsa)
Speight, JG. 2002. Chemical And Process Design Handbook, R. R. Donnelley & Sons,
R. R. Donnelley & Sons:New York, 289-391.
Sweetman SC. 2007. Martindale 35
2123-2124.

th

ed, Published by The Pharmaceutical Press, UK,

Troy David, Beringer Paul. 2006. Remington: The Science and Practice of Pharmacy,
st
21 edition, Lippincott Williams & Wilkins, 699.

22

The United States Pharmacopeia. 2005. The Official Compedia Standards, The USP
XXVII and The National Formulary XXIII. Convention Inc., Philadelphia 7; 929930.
United States Food and Drug Administration. 2006. Skin Bleaching Drug Products for
Over the Counter Product Use, Proposed Rule (Report). 1978N-0065.
Westerhof W Dan Kooyers TJ. 2005. Hydroquinone And Its Analogues In Dermatology
A Potential Health Risk, Journal Of Cosmetic Dermatology, Blackwell
Publishing, (4): 5559.
Zhai, Hongbo., Maibach, Howard I. 2009. Skin Whitening Agent in Handbook of
Cosmetic Science and Tecnology, Barel., Andre O., et all (editor), Informa
HealthCare USA, Inc, 587-597.

23

Lampiran

Tabel 1. Hasil Pemeriksaan Hidrokuinon dalam Sediaan Krim Malam NC-16

dan NC-74
Sediaan
Krim
NC-16
Malam

1.

Benedicts
Reagent

2.

Ferric Chloride

Keterangan

Merah

Hasil
Berdasarkan
Merah
Pustaka*

NC-74

Tidak berwarna

Merah

NC-16

Hijau

Hijau

NC-74

Tidak berwarna

Hijau

Hasil Pengamatan

Keterangan *: Moffat et al.,2004

Tabel 2. Hasil Identifikasi Hidrokuinon dalam Sediaan Krim Malam NC-16 dan
NC-74
Fase Gerak

Zat

Bercak
(cm)

Klorofrom: metanol Baku Hidrokuinon Krim Malam

NC-16 Krim Malam NC-74
(1:1)

5,60
5,60

Baku Hidrokuinon Krim Malam

NC-16 Krim Malam NC-74

2,80
2,80

n-heksan: aseton
(3:2)
metanol: air
(55:45)

Baku Hidrokuinon Krim Malam

NC-16 Krim Malam NC-74

Jarak
Tempuh
Eluen (cm)

Rf

Keterangan

0,80
0,80

+
+

0,40
0,40

+
+

6,00
6,00

0,86

0,86

Tabel 3. Absorbansi Hidrokuinon Dengan Penambahan Reagen

24

Floroglusinol 1% dalam NaOH 0,5 N pada maks 550 nm

Konsentrasi Baku (bpj)
0,40
0,60
0,80
1,21
1,51

Absorbansi
0,533
0,547
0,566
0,597
0,621

maks (nm)
550
550
550
550
550

Tabel 4. Absorbansi Hidrokuinon Pada Berbagai Selang waktu

Waktu (menit)
0
5
10
15
30
40
50
60

Konsentrasi Baku (bpj)

1,51
1,51
1,51
1,51
1,51
1,51
1,51
1,51

Absorbansi
0,617
0,618
0,621
0,630
0,630
0,629
0,631
0,631
SD = 0,006
= 0,626

Gambar 2. Kurva Pengukuran Serapan Hasil Reaksi Hidrokuinon Dengan Floroglusinol pada Berbagai
Selang Waktu

25

Tabel 5. Hasil Perhitungan % Recovery Dalam Sampel Sediaan Krim Malam

NC-74
Kadar baku
sesungguhnya (bpj)

1,00

2,52

3,53

Kadar teramati (bpj)

% Recovery

0,585
0,586
0,586
0,701
0,702
0,702
0,783
0,785
0,785

1,05
1,06
1,06
2,48
2,49
2,49
3,50
3,52
3,52

103,91%
105,14%
105,14%
98,50%
99,06%
99,06%
99,10%
99,81%
99,81%

26

Tabel 6. Hasil Penetapan Kadar Hidrokuinon dalam Sediaan Krim Malam NC-16

Replikasi
1

2
3

Kadar Hidrokuinon
(%)
3,71
3,71
3,71
3,73
3,73
3,72
3,72
3,70
3,70

27

SD

3,71

3,72

0,007

0,18

3,71

0,008

0,21

KV (%)
0