Pemisahan pertama dilaporkan oleh para penemu dari DCCC,T animura dkk.

[1], adalah
rcsvlution tinggi dinitrophenyl (DNP) asam amino. Sistem pelarut adalah CHCI, -AcOH-
O.1N HCI (2: 2: 1) digunakan dalam mode menaik. DCCC juga di indikasikan untuk
pemurnian peptida. Okamato dkk. [48] minyak mentah difraksionasi gramicidin menjadi
gramicidins A murni, B dan C dan tyrocidine yang dimurnikan sebagian menjadi tyrocidines
murni A, Band C dengan C6H6 – CHCI3, - MeOH-O IN HCI (1 1: 5: 10: 4), C6 H6, -CHCI3
-MeOH-H2 O (15: 15: 23: 7) atau CHCl3 MeOH- 0. IN HCI (19:19:12). Lapisan bawah adalah
digunakan sebagai fase gerak (mode menurun) dengan laju aliran 12-15 ml / jam. Nakayama dkk.
[49] memperoleh angiotensin unggas murni dari peptida yang dimurnikan sebagian. Kalli-
din, bradikinin dan angiotensin digabungkan dengan sec-BuOH-trifluoroacetic asam- H 2O
(120: 1: 160), fase gerak: lo- lapisan wer [19]. Campuran tiga sama peptida dipisahkan oleh
Takahashi dkk . [50] dengan n-BuOH-AcOH-H2O (4: 1: 5). Itu tampak dari pekerjaan mereka itu
DCCC bisa menjadi metode yang cocok untuk pemisahan oligopeptida sintetis.

Fraksinasi lipid serum manusia telah dilaporkan oleh Konobu dkk. [51]. Dengan
heptana-n-BuOH-CHCII-MeOHAcOH 60% (3: 2: 2: 3: 5), sebuah parasi triolein, asam
palmitat, kaprat asam dan lesitin dicapai oleh metode koping. Dalam perjalanan pengantar dy
dari metabolit Anthoc ~ daris crassispina (landak laut), KITAWAGA et al. [52] mengisolasi
sulfonoglikolipid dari shell dengan penggunaan DCCC dalam kombinasi dengan
kromatografi kolom pada silika gel.

Advantages and Limits of the Method (Keuntungan dan Batasan Metode)

DCCC telah terbukti efisien dan teknik yang dapat direproduksi untuk pemurnian dan
pemisahan produk alami. Kuantitas mulai dari sekitar 1mg hingga 4 g dapat ditangani dengan
mudah. Sejak tidak ada dukungan kuat yang mungkinmenyebabkan adsorpsi ireversibel,
sampel dipulihkan secara kuantitatif. Ini dari minat khusus ketika mengisolasi secara biologis
Senyawa aktif karena aktivitas sering hilang selama penghitungan waktu kromatografi kolom
proses. Berbeda dengan yang konvensional metode distribusi arus balik (CCD), tidak ada
getaran yang terlibat dan karenanya, tidak ada pembentukan busa; selanjutnya, karena tidak
ada ruang untuk atmosfer oksigen dalam peralatan, oksidasi udara senyawa sensitif dapat
dihindari. Ekstrak tanaman mentah dapat disuntikkan tanpa pemurnian awal. Ini akan
menyebabkan kontaminasi kolom jika pemisahan dicapai dengan persiapan HPLC.
 Perlu dicatat bahwa konsumsi pelarut jauh lebih kecil daripada dengan teknik
kromatografi lainnya seperti CCD, HPLC preparatif atau kromatografi kolom terbuka.
Resolusi itu tidak sebanding dengan HPLC, namun 1000-1500 piring teoritis dapat dengan
mudah diperoleh, tergantung pada jumlah kolom yang digunakan. Karena sistem pelarut yang
diberikan. Bisa digunakan baik dalam naik atau dalam moda desenden, bergabung dengan a
sejumlah besar polaritas dapat dipisahkan. Dengan solusi buffer, modifikasi dari pH selama
elusi dimungkinkan [45, 461. Air menjadi komponen pelarut sistem yang digunakan hingga
sekarang, DCCC telah diterapkan terutama untuk glikosida dan senyawa polar lainnya.
Sebuah contoh pemisahan dari diterpene yang lemah kutub dilactones telah dilaporkan [31].
Kami sedang berusaha mencari sistem pelarut tanpa air yang bentuk tetesan yang sesuai.
Sejauh ini, pelarut sistem yang cocok untuk berbagai jenis perpisahan terbentuk dari CHCI,
-Me-OH-H2O dalam proporsi yang berbeda (Tabel I). Daftar beberapa pelarut lain untuk
DCCC telah diterbitkan oleh Ogihara dkk [20]. Sistem yang mengandung butanol adalah
bekerja, tetapi waktu pemisahan meningkat karena viskositas yang tinggi ini pelarut.
Pengoperasian instrumen DCCC sederhana dan membutuhkan sedikit pelatihan.
Ketika pemisahan selesai, bersihkan dibuat dengan menyiram semua tabung dengan fase
diam untuk analisis selanjutnya. Namun, kami mengamati bahwa setelah beberapa bulan,
dengan menggunakan sistem pelarut yang serupa, formasi droplet menjadi miskin. Itu
diperlukan untuk menyiram pipa dengan deterjen yang tepat. Itu tekanan operasi dan laju
aliran bergantung pada sistem pelarut dan sekitar 5-15 kg / cm2 dan 8-25 ml / jam, masing-
masing. Dengan demikian waktu pemisahannya relatif panjang. Operasi, termasuk pengisian
instrumen dengan fase diam, paling sedikit 12-18 jam tergantung pada jumlah kolom yang
digunakan. Bisa berlangsung selama beberapa hari, tetapi seharusnya tidak melebihi satu
minggu. Sistem pelarut yang memberikan perpisahan yang relatif cepat seharusnya dipilih
untuk meminimalkan risiko kerusakan sampel. Saat sampel mengandung senyawa aktif UV,
terus menerus deteksi aliran dapat dengan mudah dilakukan oleh detektor yang tepat.
Penggunaan detektor indeks bias tidak diindikasikan karena kadang-kadang sejumlah kecil
stasioner fase juga dielusi, menghasilkan tidak stabil garis dasar. Dalam proses saponin kami
dan pemisahan iridoid, yang diperoleh fraksi dimonitor oleh TLC, prosedur yang umum
digunakan untuk analisis kromatografi kolom.

Meskipun DCCC sederhana dan terpisah berbagai ripe senyawa dalam suatu
preparatif skala dengan resolusi yang bagus, itu memiliki keterbatasan yang timbul dari fakta
bahwa efisiensi dari metode tergantung
sepenuhnya pada formasi droplet. Untuk tantang masalah ini Fro et al. [5, 6,7,531]
merancang sistem baru hanya berdasarkan partisi cair-cair. Muncul teknik tampaknya
menjadi centrifuge planet koil [53, 541] yang merupakan metode kromatografi counter-saat
menggunakan kolom panjang heliks vertikal tabung di bidang sentrifugal. Perpisahan waktu
dikurangi menjadi beberapa jam, resolusinya tinggi, tetapi instrumentasi lebih rumit.

DCCC menggoda karena kesederhanaannya dan operasi ekonomisnya (tidak mahal

bahan kemasan kolom dan sangat kecil konsumsi pelarut). Itu tidak akan menggantikan
metode kromatografi yang biasa, tapi bersifat komplementer. Digunakan sendiri atau dalam
kombinasi dengan kromatografi kolom dan HPLC, ini sangat membantu untuk persiapan
pemisahan skala kutub alami produk.