Nama : FENI SARI AFRIANI

NIM : H031181029
Kalkulator Amonium Sulfat

Pengendapan Amonium Sulfat adalah cara yang sederhana dan efektif untuk memecah
protein. Hal ini didasarkan pada fakta bahwa pada konsentrasi garam yang tinggi,
kecenderungan alami protein untuk tidak beragregasi dapat diatasi, karena muatan permukaan
dinetralkan. Netralisasi muatan berarti bahwa protein akan cenderung untuk mengikat
bersama, membentuk kompleks yang besar dan karenanya mudah diendapkan dengan
sentrifugasi ringan. Karena setiap protein akan mulai berkumpul pada konsentrasi garam
yang khas, pendekatan ini memberikan cara sederhana untuk memperkaya protein tertentu
dalam suatu campuran, dan digunakan, misalnya, untuk mengisolasi imunoglobulin dari
serum. Sangat mudah untuk membuat sediaan menjadi 50% jenuh hanya dengan
menambahkan volume yang sama dari Amonium Sulfat jenuh. Ini lebih merupakan masalah
untuk membuat larutan dengan persentase saturasi yang lebih tinggi karena Anda mungkin
harus menambahkan Ammonium Sulfat jenuh dalam volume yang sangat besar. Biasanya
lebih mudah untuk menambahkan Amonium Sulfat padat ke sampel Anda, tetapi menghitung
berapa banyak yang harus ditambahkan agak memakan waktu. Program di bawah ini
menghitung berapa banyak Amonium Sulfat padat yang perlu Anda tambahkan ke volume
tertentu dari suatu larutan untuk mendapatkan persentase saturasi tertentu pada suhu tertentu;

Pilih suhu tempat Anda bekerja (25oC adalah default): 0 oC 4 oC 10 oC 20 oC 25 oC

Masukkan volume awal larutan (ml):
Persentase saturasi akhir Ammonium Sulfat:
Persentase saturasi awal Amonium Sulfat:
Protokol Pengendapan Amonium Sulfat: Anda dapat mencampur sediaan protein dengan
larutan Amonium Sulfat 100%, atau dapat menambahkan Amonium Sulfat padat untuk
membuat konsentrasi persentase yang diinginkan menggunakan program di atas. Protokol
tipikal adalah seperti di bawah ini:
1. Siapkan larutan jenuh Amonium Sulfat, misalnya ~ 550g yang dibuat untuk air suling 1L.
Panaskan perlahan untuk melarutkan semua Amonium Sulfat dan biarkan dingin hingga
mencapai suhu kerja pada pengaduk magnet. Kristal amonium sulfat akan terbentuk dan akan
memberi tahu Anda bahwa larutan tersebut benar-benar jenuh.
2. Tambahkan volume Amonium Sulfat jenuh atau Amonium Sulfat padat yang sesuai ke
sampel untuk mendapatkan konsentrasi yang diinginkan. Aduk selama 1 jam hingga benar-
benar seimbang.
3. Sentrifugasi pada 10.000 g selama 15 menit untuk mengeluarkan protein.
4. Tambahkan lebih banyak amonium sulfat jenuh atau amonium sulfat padat untuk membuat
konsentrasi berikutnya, ulangi pengadukan dan sentrifugasi.
5. Larutkan pelet dalam PBS untuk menganalisis protein. Tergantung pada apa langkah Anda
selanjutnya, mungkin perlu untuk mendialisis Amonium Sulfat.
Cara kerja program: Amonium Sulfat sangat larut dalam air sehingga amonium sulfat jenuh
adalah larutan 4.1M pada 25oC; 4,06M pada 20oC; 3,97M pada 10oC; 3,93M pada 4oC dan
3,9M pada 0oC. Rumus molekul amonium sulfat (NH4)2SO4 dan berat molekul 132,14,
sehingga terjadi kejenuhan pada 541,8 g/L pada 25oC; 536,49 g/L pada 20oC; 524,6 g/L pada
10oC; 519,1 g/L pada 4oC dan 515,35 g/L pada 0oC. Volume spesifik amonium sulfat juga
tergantung pada suhu tetapi sekitar 0,54 ml/g, artinya jika Anda menambahkan 1 g amonium
sulfat ke larutan berair, volumenya akan meningkat sekitar 0,54 ml. Jadi jika Anda
menambahkan jumlah yang Anda butuhkan untuk menjenuhkan 1L air pada 25 oC ke 1L air,
yaitu 541,8 g amonium sulfat, Anda tidak akan mendapatkan larutan jenuhnya. 1L air
ditambah 541,8 g Amonium Sulfat menghasilkan 1L ditambah 541,8 * 0,54 ml, sama dengan
1.293 ml volume akhir, sehingga larutan akan jenuh 1.000/1.293 * 100 persen, yaitu sekitar
77%. Dan jika Anda ingin membuat, misalnya, larutan 25% hingga 50% dengan
menambahkan amonium sulfat padat, perhitungan itu juga tidak sesederhana yang Anda
bayangkan, karena amonium sulfat menyumbang begitu banyak volume ekstra sehingga
Anda membutuhkan lebih banyak amonium padat sulfat untuk mengambil larutan dari
saturasi 25% menjadi saturasi 50% daripada yang Anda butuhkan untuk menaikkannya dari
0% menjadi 25% saturasi. Karena itu, kebanyakan orang menggunakan tabel atau nomogram
untuk mengetahui berapa banyak amonium sulfat yang harus ditambahkan. Anda dapat
menemukan tabel untuk melakukan ini di banyak tempat (misalnya lihat bab oleh Englard
dan Seifter dalam Metode dalam Enzimologi volume 182, diterbitkan pada tahun 1990, juga
lihat Cakupan, RK "Pemurnian Protein: Prinsip dan Praktik", Springer-Verlag New York,
1994). Atau Anda dapat menggunakan program online unik kami (sejauh yang kami ketahui)
yang akan dengan mudah menghitung jumlah yang diperlukan untuk Anda. Tabelnya bagus
untuk mendapatkan jumlah yang perlu Anda tambahkan ke 1L atau 100 ml larutan, dan Anda
kemudian harus menghitung volume yang sebenarnya Anda miliki dari sana. Program kami
juga memperhitungkan volume yang Anda kerjakan, menghemat perhitungan lebih lanjut
sehingga Anda dapat langsung menuju ke saldo. Program kami menggunakan persamaan;
G = Sat (M2-M1)/(SatM- (SpecVol/1000 * 132,14 * Sat M * M2))

Di mana G = berat Amonium Sulfat yang akan ditambahkan dalam gram per liter, Sat adalah
jumlah gram/Liter dalam larutan jenuh Amonium Sulfat, M 2 = molaritas yang ingin Anda
capai, M1 = molaritas awal, SatM adalah molaritas larutan jenuh Amonium Sulfat. SpecVol
adalah volume spesifik Amonium Sulfat, yang merupakan jumlah volume 1 g yang akan
ditambahkan ke larutan berair, yaitu sekitar 0,54 ml. Sat, SatM dan SpecVol semuanya
bervariasi dengan suhu, dan program memperhitungkannya. Angka 132,14 adalah berat
molekul Amonium Sulfat. Persamaan dan berbagai faktor yang digunakan didasarkan pada
yang dipublikasikan dalam suplemen 13, bagian A.3F.1 dari "Protokol Lancar dalam Ilmu
Protein", diedit oleh Coligan et al., John Wiley (1998).

Program ini dan berbagai publikasi yang tercantum di atas mungkin memberikan hasil yang
sedikit berbeda, jadi siapa yang benar? Ada banyak alasan mengapa perhitungan yang
berbeda memberikan hasil yang agak berbeda, jadi lebih baik tetap menggunakan satu tabel
atau protokol yang Anda tahu berfungsi, karena apakah Anda benar-benar memiliki
Ammonium Sulfat 50% atau 50,8% jenuh tidak terlalu penting, asalkan Anda dapat membuat
konsentrasi apa pun yang sesuai untuk apa pun yang Anda lakukan.
Penafian: Program ini dibuat terutama untuk menghemat waktu bagi para peneliti yang sibuk
di seluruh dunia. Kami berharap ini bermanfaat bagi Anda, dan kami yakin bahwa ini akurat
dan dapat diandalkan. Namun, kami tidak bertanggung jawab atas masalah yang mungkin
timbul akibat penggunaan program ini.