Bahan dan metode

Desain studi
Penelitian ini disetujui oleh dewan etika institusi Rumah Sakit Renmin Universitas Wuhan
(No.WDRY2020-K066). Semua pasien (n = 102) dengan COVID-19 yang terdaftar dalam penelitian
ini didiagnosis dengan infeksi SARS-CoV-2 dan dirawat di Rumah Sakit Renmin Universitas Wuhan
(Wuhan, Cina) antara Jan 2020 dan Feb 2020. Semua sampel serum dikumpulkan segera setelah
masuk rumah sakit dan selanjutnya dibagi menjadi kategori sedang (n = 42), parah (n = 43) dan kritis
(n = 17) menurut diagnosis dan pedoman pengobatan novel coronavirus China (edisi ke-5). Beberapa
dari mereka (29 sedang, 23 parah dan 14 kritis) terdaftar dalam studi longitudinal, dan sampel serum
dikumpulkan beberapa kali selama rawat inap. Kriteria rinci tercantum sebagai berikut:
- Kelompok sedang : Demam; gejala pernapasan; temuan pencitraan pneumonia.
- Kelompok berat : pasien mengalami salah satu dari kondisi berikut: Gangguan pernapasan,
RR ≥30 kali / menit; Saturasi oksigen (SpO2) ≤93% saat istirahat; Tekanan parsial oksigen
(PaO2) / konsentrasi oksigen (FiO2) dalam darah arteri ≤300 mmHg; > 50% kemajuan
pencitraan paru dalam jangka pendek dalam 24-48 jam.
- Kelompok kritis : pasien memiliki salah satu dari kondisi berikut: Kegagalan pernapasan dan
ventilasi mekanis diperlukan; Syok; Menggabungkan kegagalan organ lainnya, diperlukan
unit perawatan intensif.
- Sampel serum yang dikumpulkan dari 45 relawan sehat disajikan sebagai kontrol.
- Semua orang yang termasuk dalam penelitian ini telah dikonfirmasi tidak ada infeksi
mikroorganisme patogen lain seperti, virus pernapasan selain SARS-CoV-2, HBV, HCV dan
HIV.

Pemeriksaan laboratorium sampel darah

Sekitar 3-5 ml darah tepi diperoleh dengan tabung pengumpul dari subjek di setiap kelompok,
sampel serum dipisahkan dengan sentrifugasi 2000 rpm / 20 menit. Sitokin serum diuji menggunakan
sitometer aliran BD FACSCalibur (BD FACSCalibur, BD Bioscience, CA) dan kit sitokin Th1 / Th2
manusia yang berasal dari instruksi pabrik. Singkatnya, 25ul sampel serum dicampur dengan
komponen penangkap antibodi berpasangan, dan kemudian 25ul antibodi deteksi berlabel fluoresen.
Sampel dicampur dan diinkubasi pada suhu kamar di tempat gelap. Setelah 2,5 jam inkubasi,
komponen tersebut dicuci dan disuspensi kembali dengan PBS. Standar protein rekombinan untuk
setiap sitokin yang menyediakan kontrol internal disertakan. Deteksi dilakukan dengan flowcytometer
BD FACSCalibur. Rentang deteksi setiap sitokin adalah 2,5 pg / ml hingga 5000 pg / ml. Protein C-
reaktif (CRP) diuji menggunakan i-CHROMA immunofluorescence analyzer dan kit pendukung
(iCHROMA Reader, Boditech Med Inc, Korean).
Analisis statistik
Software statistik SPSS 22.0 digunakan untuk analisis statistik. Data hitungan dianalisis
dengan uji χ2, data pengukuran berdistribusi tidak normal dinyatakan sebagai median (p25, p75) dan
dianalisis dengan uji nonparametrik Mann-Whitney U-test atau uji Wilcoxon signed-rank. Data
pengukuran yang terdistribusi normal dinyatakan sebagai mean ± SD dan dianalisis dengan analisis
varians. Korelasi antara data berpasangan dianalisis dengan menggunakan koefisien korelasi rank
Spearman. Nilai P <0,05 menunjukkan signifikansi statistik.