Accelerat ing t he world's research.

Metode Isolasi dan Identifikasi

Struktur Senyawa Organik Bahan
Alam
putri kartika

Related papers Download a PDF Pack of t he best relat ed papers 

ISOLASI SENYAWA METABOLIT SEKUNDER PADA DAUN SRIKAYA

Zelit a Ent e

KBHL
Ririn Nurul Hasanah

isolasi dan ident ifikasi senyawa met abolit sekunder dari t alus lichen usnea sp. fraksi kloroform dan uji …
Rini Ayrin
 0HWRGH,VRODVLGDQ,GHQWLÀNDVL6WUXNWXU6HQ\DZD2UJDQLN%DKDQ$ODP

Sri Atun
Jurusan Pendidikan Kimia, FMIPA, Universitas Negeri Yogyakarta
Email : Atun_1210@yahoo.com

Abstrak: Beberapa penelitian etnomedika yang tercatat dalam dokumen kuno dari beberapa wilayah Indonesia
menunjukkan adanya beberapa jenis tumbuhan yang dapat digunakan sebagai obat untuk menyembuhkan berbagai
penyakit, maupun dapat diterapkan pada benda yang mengalami permasalahan akibat aktivitas suatu organisme.
Senyawa bioaktif dapat berkhasiat sebagai anti bakteri, anti jamur, anti serangga dan lain-lain. Namun demikian,
agar tumbuhan tersebut dapat dikembangkan dan dilestarikan perlu dilakukan penelitian yang berkelanjutan,
sehingga dapat diketahui jenis senyawa bioaktifnya. Untuk mengetahui kandungan senyawa aktif dari tumbuhan
perlu dilakukan isolasi, sehingga diperoleh senyawa murni. Selanjutnya dari senyawa murni yang diperoleh belum
memiliki makna apabila belum diketahui struktur molekulnya. Dalam artikel ini akan dibahas mengenai metode
isolasi dan penentuan struktur senyawa alam.

.DWDNXQFL,VRODVL,GHQWLÀNDVL6HQ\DZDELRDNWLI

Abstract: Some ethno-medical studies, which have been written in ancient documents from several regions in
Indonesia, shows that there are several types of plant used as medicines to cure diseases as well as to be applied in an
object that has problem with organism’s growth. The bioactive compound could be used as anti-bacteria, anti-fungi,
anti-insect, etc. Nevertheless, continuous study is needed to investigate the type of its bioactive compound. Thus,
the plant could be developed and preserved. In identifying the active compound from a plant, isolation is needed to
JDLQSXUHFRPSRXQG7KHSXUHFRPSRXQGKDVQRPHDQLQJLI LWVPROHFXODUVWUXFWXUHKDVQRWEHHQLGHQWLÀHG7KH
article discuss about isolation methodology and determination on the structure of natural compound.

.H\ZRUGV,VRODWLRQ,GHQWLÀFDWLRQ%LRDFWLYHFRPSRXQG

Pendahuluan bahan bangunan maupun yang lainnya. Sebagian

Indonesia termasuk salah satu negara
“megadiversity” yang kaya keanekaragaman hayati. Di
dunia terdapat kurang lebih 250.000 jenis tumbuhan tinggi,
dan lebih dari 60 % dari jumlah ini merupakan tumbuhan
tropika. Diperkirakan sekitar 30.000 tumbuhan ditemukan
di dalam hutan hujan tropika, dan sekitar 1.260 spesies di
antaranya diketahui berkhasiat sebagai obat. Namun, baru
sekitar 180 spesies yang telah digunakan untuk berbagai
keperluan industri obat dan jamu, dan baru beberapa
spesies saja yang telah dibudidayakan secara intensif [1].
Keanekaragaman hayati Indonesia tersebut terutama
tersebar di setiap pulau besar, seperti Kalimantan, Papua,
Sumatra dan Jawa. Di samping itu terdapat organisme
lain seperti jamur maupun mikroba yang belum banyak
tersentuh oleh peneliti. Keanekaragaman hayati tersebut
merupakan sumber biomolekul senyawa-senyawa organik
yang tidak terbatas jumlahnya [1].
Sejak dahulu kala, nenek moyang kita telah
mengetahui sifat-sifat yang berguna dari berbagai
jenis tumbuhan untuk mengobati penyakit,
pembunuh jamur maupun pengawet kayu sebagai
informasi tersebut ada yang tercatat dalam dokumen
kuno yang berasal dari beberapa wilayah Indonesia,
namun ada juga yang hanya sebagai cerita dari mulut
ke mulut. Namun demikian, agar tumbuhan tersebut
dapat dikembangkan dan dilestarikan perlu dilakukan
penelitian yang berkelanjutan, sehingga dapat
diketahui jenis senyawa bioaktifnya serta khasiatnya
untuk mengobati penyakit-penyakit tersebut maupun
sebagai bahan pengawet kayu maupun yang lainnya
[2-4].
Penerapan bahan aktif dari tumbuhan tidak
terbatas pada pengobatan terhadap penyakit manusia.
Khasiat bioaktif tersebut selain sebagai obat pada
penyakit manusia juga dapat diterapkan pada benda
yang mengalami permasalahan akibat aktivitas suatu
organisme. Senyawa bioaktif dapat berkhasiat sebagai
anti bakteri, anti jamur, anti serangga dan lain-
lain. Salah satu material yang terancam pelapukan
akibat aktivitas organisme adalah benda-benda cagar
budaya. Cagar budaya merupakan tinggalan budaya
yang memiliki nilai penting sehingga perlu untuk

53
 Atun 0HWRGH,VRODVLGDQ,GHQWLÀNDVL6WUXNWXU6HQ\DZD2UJDQLN%DKDQ$ODP.....

dilestarikan, umumnya sudah berumur tua dan telah

lapuk. Pelestarian cagar budaya dapat dilakukan H3C
O O H
O
dengan mengendalikan faktor-faktor perusaknya, O
dengan cara-cara konservasi menggunakan berbagai O N
H O H
O
bahan termasuk bahan tradisional. Masyarakat O H
H
O O O C
H
tradisional selain meninggalkan cagar budaya dalam 3
O
O
bentuk benda, juga mewariskan berbagai praktek
yang bertujuan memelihara atau mengawetkan
Taxol
benda-benda tersebut. Cara-cara tradisional tersebut
menggunakan bahan-bahan alam termasuk dari H3C
tumbuh-tumbuhan. Penelitian mengenai isolasi C
H 3

O C
H H3C
senyawa aktif pada tumbuhan yang digunakan sebagai 3
O H
O
O O
bahan konservan tradisional pada cagar budaya juga
O N
H O
penting untuk dilakukan. H
O
O H
Perkembangan dalam penelitian bahan alam O O
H
O H
C 3
mengalami kemajuan yang semakin cepat dengan O
O
ditemukannya teknik-teknik pemisahan secara
Taxoter
NURPDWRJUDÀ GDQ SHQHQWXDQ VWUXNWXU PROHNXO VHFDUD
spektroskopi pada pertengahan abad ke-20. Dengan spesies berasal dari Indonesia, di antaranya obat anti
menggunakan metode tersebut beberapa struktur kanker vinblastin dan vinkristine dan obat hipertensi
senyawa bioaktif berhasil ditemukan, misalnya UHVHUSLQH \DQJ EHUDVDO GDUL SXODL SDQGDN 5DXYROÀD
penemuan alkaloid seperti vinblastin dan vinkristin serpentina). Pada tahun 1983–1994 lebih dari 40%
dari tumbuhan Catharanthus roseus (tapak dara) obat baru yang disetujui oleh FDA adalah senyawa
sebagai obat kanker. Demikian juga penemuan taksol alam, dan saat ini lebih dari 30% bahan obat yang
dari tumbuhan Taxus brevifolia, serta taxoter hasil beredar diperdagangan juga berasal dari senyawa
PRGLÀNDVLQ\D \DQJ GDSDW GLJXQDNDQ VHEDJDL REDW alam. Dengan demikian, di masa yang akan datang
kanker kandungan. Hal ini mendorong perusahaan- akan lebih banyak lagi ditemukan obat-obat baru
perusahaan farmasi untuk mengeksplorasi senyawa- yang berasal dari alam, baik dari tumbuhan, hewan,
senyawa bioaktif dari tumbuhan sebagai lead maupun organism[5].
compounds penemuan obat baru[3-5]. Hasil metabolisme suatu organisme hidup
Di Amerika Serikat terdapat sekitar 45 macam (tumbuhan, hewan, mikroorganisme) berupa
obat penting berasal dari tumbuhan obat tropika, 14 metabolit primer dan sekunder. Senyawa metabolit
primer umumnya sama untuk setiap organisme, terdiri
dari molekul-molekul besar seperti polisakarida,
H
O protein, asam nukleat, dan lemak. Fungsi senyawa
N
metabolit primer adalah sebagai sumber energi untuk
kelangsungan hidup organisme atau sebagai cadangan
N N energi bagi organisme itu sendiri. Metabolit sekunder
e
M
O
C
H EHUXSD PROHNXOPROHNXO NHFLO EHUVLIDW VSHVLÀN
H
O
artinya tidak semua organisme mengandung senyawa
sejenis, mempunyai struktur yang bervariasi, setiap
H
O 3C N c
A
O
H senyawa memiliki fungsi atau peranan yang berbeda-
R C
e
M
O
beda[6].
R = Me, Vinblastin Pada umumnya senyawa metabolit sekunder
R = CHO, Vinkristin
berfungsi untuk mempertahankan diri atau untuk

54
Jurnal Konservasi Cagar Budaya Borobudur, Volume 8, Nomor 2, Desember 2014, Hal 53-61
mempertahankan eksistensinya di lingkungan
tempatnya berada. Dalam perkembangannya
senyawa metabolit sekunder tersebut dipelajari
dalam disiplin ilmu tersendiri yaitu kimia bahan alam
(natural product chemistry). Metabolit sekunder
merupakan biomolekul yang dapat digunakan sebagai
lead compounds dalam penemuan dan pengembangan
obat-obat baru.
Metode Isolasi Senyawa Organik Bahan Alam
1. Ekstraksi
Senyawa metabolit sekunder biasanya terdapat
dalam organisme dalam jumlah yang sangat sedikit.
2OHK NDUHQD LWX ELDVDQ\D GDODP SURVHV LVRODVL GLPXODL
dari sampel yang jumlahnya banyak, minimal 2 kg
sampel kering yang sudah dihaluskan. Pekerjaan
isolasi membutuhkan ketrampilan dan pengalaman
dalam memadukan berbagai teknik pemisahan.
Untuk mendapatkan senyawa murni biasanya
peneliti menggunakan beberapa teknik ekstraksi dan
NURPDWRJUDÀ 7HNQLN HNVWUDNVL VHQ\DZD RUJDQLN
bahan alam yang biasa digunakan antara lain maserasi,
perkolasi, infudasi, dan sokhletasi. Sedangkan teknik
NURPDWRJUDÀ \DQJ ELDVDQ\D GLJXQDNDQ DQWDUD ODLQ
biasanya dibutuhkan waktu 1-6 hari. Selain metanol
atau etanol pelarut yang lain yang biasa digunakan
antaralain aseton, klroform, atau sesuai dengan
kebutuhan. Setelah waktu tertentu ekstrak yang
disebut maserat dipisahkan dengan cara penyaringan.
Maserasi biasanya dilakukan pengulangan dengan
penambahan pelarut setelah dilakukan penyaringan
maserat yang pertama yang disebut remaserasi.
Remaserasi biasanya dilakukan tiga kali atau sampai
senyawa yang diinginkan dalam sampel benar-benar
sudah habis. Apabila dalam proses maserasi dilakukan
pengadukan terus menerus maka disebut juga dengan
maserasi kinetik. Sedangkan apabila dalam maserasi
kinetik tersebut dilakukan di atas suhu kamar,
biasanya 40-50 oC disebut digesti. Cara yang biasa
dilakukan adalah dengan menempatkan sejumlah
bahan ditempatkan pada wadah tertutup, ditambah
dengan pelarut dengan perbandingan kira-kira 1:7,
atau sedikitnya semua sampel tercelup. Diamkan
selama 1-6 hari pada suhu kamar dan terlindung dari
cahaya dengan sesekali diaduk. Setelah itu, cairan
dipisahkan, buang bagian yang mengendap. Pada saat
proses perendaman senyawa organik yang terkandung
dalam sampel berdifusi melewati dinding sel untuk
NURPDWRJUDÀ ODSLV WLSLV ./7 NURPDWRJUDÀ NRORP melarutkan konstituen dalam sel dan juga memacu
YDNXP .9& NURPDWRJUDÀ NRORP JUDYLWDVL ..*
dan kromatotron (Centrifugal Chromatography).
Pemilihan jenis metode biasanya dilakukan
berdasarkan pengalaman peneliti maupun hasil
penelitian yang telah dilaporkan sebelumnya[7-10].
Langkah pertama yang biasanya dilakukan
dalam isolasi senyawa organik bahan alam adalah
larutan dalam sel untuk berdifusi keluar. Sistem yang
digunakan dalam metode ini adalah sistem statis,
kecuali saat digojog, proses ekstraksi berjalan dengan
difusi molekuler, sehingga proses ini berlangsung
secara perlahan. Setelah ekstraksi selesai, residu dari
sampel harus dipisahkan dengan pelarut dengan
didekantir atau disaring. Maserasi dengan pengulangan
ekstraksi sampel menggunakan pelarut organik. UHPDVHUDVL DNDQ OHELK HÀVLHQ GDUL SDGD KDQ\D VHNDOL
Ada beberapa metode ekstraksi sampel bahan alam, saja, hal ini terjadi karena ada kemungkinan sejumlah
antara lain maserasi, infusdasi, digesti, perkolasi dan besar komponen aktif masih tertinggal dalam proses
soxletasi. Maserasi merupakan teknik ekstraksi dari
sampel padat menggunakan pelarut tertentu biasanya
digunakan metanol atau etanol. Metanol memiliki
kelebihan memiliki titik didih yang lebih rendah
sehingga mudah diuapkan pada suhu yang lebih
rendah, tetapi bersifat lebih toksik. Sedangkan etanol
memiliki kelemahan memiliki titik didih yang relatif
tinggi sehingga lebih sulit diuapkan, tetapi relatif tidak
toksik dibanding metanol. Proses maserasi dilakukan
selama waktu tertentu dengan sesekali diaduk,
PDVHUDVL \DQJ SHUWDPD 6HMXPODK ÀOWUDW PDVHUDW GDUL
hasil pengulangan maserasi selanjutnya dicampur dan
dipekatkan.
Infusdasi merupakan metode ekstraksi dengan
pelarut air. Pada waktu proses infusdasi berlangsung,
temperatur pelarut air harus mencapai suhu 90ºC
selama 15 menit. Rasio berat bahan dan air adalah
1 : 10, artinya jika berat bahan 100 gr maka volume
air sebagai pelarut adalah 1000 ml. Cara yang biasa
dilakukan adalah serbuk bahan dipanaskan dalam
55
 Atun 0HWRGH,VRODVLGDQ,GHQWLÀNDVL6WUXNWXU6HQ\DZD2UJDQLN%DKDQ$ODP.....
panci dengan air secukupnya selama 15 menit
terhitung mulai suhu mencapai 90ºC sambil sekali-
VHNDOL GLDGXN 6DULQJ VHODJL SDQDV PHODOXL NDLQ ÁDQHO
tambahkan air panas secukupnya melalui ampas
hingga diperoleh volume yang diinginkan. Apabila
bahan mengandung minyak atsiri, penyaringan
dilakukan setelah dingin.
Dekoksi merupakan proses ekstraksi yang mirip
dengan proses infusdasi, hanya saja infus yang dibuat
.URPDWRJUDÀ
Langkah berikutnya setelah diperoleh ekstrak
dalam isolasi senyawa organik bahan alam adalah
pemisahan komponen-komponen yang terdapat
dalam ekstrak tersebut. Teknik yang banyak
GLJXQDNDQ DGDODK NURPDWRJUDÀ .URPDWRJUDÀ
adalah teknik pemisahan campuran berdasarkan
perbedaan kecepatan perambatan komponen dalam
PHGLXP WHUWHQWX 3DGD NURPDWRJUDÀ NRPSRQHQ
PHPEXWXKNDQ ZDNWX OHELK ODPD •  PHQLW GDQ
suhu pelarut sama dengan titik didih air. Caranya,
serbuk bahan ditambah air dengan rasio 1 : 10,
panaskan dalam panci enamel atau panci stainless steel
selama 30 menit. Bahan sesekali sambil diaduk. Saring
SDGD NRQGLVL SDQDV PHODOXL NDLQ ÁDQHO WDPEDKNDQ DLU
panas secukupnya melalui ampas hingga diperoleh
volume yang diinginkan.
komponennya akan dipisahkan antara dua buah
fase yaitu fase diam dan fase gerak. Fase diam akan
menahan komponen campuran sedangkan fase
gerak akan melarutkan zat komponen campuran.
Komponen yang mudah tertahan pada fase diam akan
tertinggal. Sedangkan komponen yang mudah larut
dalam fase gerak akan bergerak lebih cepat. Beberapa
WHNQLN NURPDWRJUDÀ \DQJ EDQ\DN GLJXQDNDQ DQWDUD
Perkolasi adalah proses ekstraksi dengan pelarut ODLQ NURPDWRJUDÀ ODSLV WLSLV ./7 NURPDWRJUDÀ
yang dialirkan melalui kolom perkolator yang diisi
dengan serbuk bahan atau sampel, dan ekstraknya
dikeluarkan melalui keran secara perlahan. Secara
umum proses perkolasi ini dilakukan pada temperatur
ruang. Parameter berhentinya penambahan pelarut
adalah perkolat sudah tidak mengandung komponen
\DQJ DNDQ GLDPELO 3HQJDPDWDQ VHFDUD ÀVLN SDGD
ekstraksi bahan alam terlihat tetesan perkolat sudah
tidak berwarna. Caranya, serbuk bahan dibasahi
dengan pelarut yang sesuai dan ditempatkan pada
bejana perkolator. Bagian bawah bejana diberi sekat
berpori untuk menahan serbuk. Cairan pelarut
dialirkan dari atas kebawah melalui serbuk tersebut.
Cairan pelarut akan melarutkan zat aktif dalam sel-sel
yang dilalui sampai keadaan jenuh.
Soxkletasi merupakan proses ekstraksi
dengan menggunakan pelarut yang selalu baru yang
umumnya dilakukan dengan alat khusus soxklet
sehingga terjadi ekstraksi konstan dengan adanya
pendingin balik. Caranya, serbuk bahan ditempatkan
pada selongsong dengan pembungkus kertas saring,
lalu ditempatkan pada alat soxklet yang telah dipasang
labu dibawahnya. Tambahkan pelarut sebanyak 2
kali sirkulasi. Pasang pendingin balik, panaskan labu,
ekstraksi berlangsung minimal 3 jam dengan interval
sirkulasi kira-kira 15 menit.
56
NRORP YDNXP .9& NURPDWRJUDÀ NRORP JUDYLWDVL
(KG), dan kromatotron.
 .URPDWRJUDÀ ODSLV WLSLV DGDODK VXDWX WHNQLN
pemisahan komponen-komponen campuran suatu
senyawa yang melibatkan partisi suatu senyawa di
antara padatan penyerap (adsorbent, fasa diam) yang
dilapiskan pada pelat kaca atau aluminium dengan
suatu pelarut (fasa gerak) yang mengalir melewati
adsorbent (padatan penyerap). Pengaliran pelarut
dikenal sebagai proses pengembangan oleh pelarut
(elusi). KLT mempunyai peranan penting dalam
pemisahan senyawa organik maupun senyawa
anorganik, karena relatif sederhana dan kecepatan
analisisnya. Di dalam analisis dengan KLT,
sampel dalam jumlah yang sangat kecil ditotolkan
menggunakan pipa kapiler di atas permukaan pelat
tipis fasa diam (adsorbent), kemudian pelat diletakkan
dengan tegak dalam bejana pengembang yang berisi
VHGLNLW SHODUXW SHQJHPEDQJ 2OHK DNVL NDSLOHU SHODUXW
mengembang naik sepanjang permukaan lapisan pelat
dan membawa komponen-komponen yang terdapat
dalam sampel.
Pemilihan fasa gerak yang tepat merupakan
langkah yang sangat penting untuk keberhasilan
analisis dengan KLT. Umumnya fasa gerak dalam
KLT ditemukan dengan coba-coba dan jarang sekali
yang didasarkan pada pengetahuan yang mendalam.
Jurnal Konservasi Cagar Budaya Borobudur, Volume 8, Nomor 2, Desember 2014, Hal 53-61
Sifat-sifat pelarut pengembang juga merupakan faktor
dominan dalam penentuan mobilitas komponen-
komponen campuran. Umumnya kemampuan suatu
pelarut pengembang untuk menggerakkan senyawa
pada suatu adsorben berhubungan dengan polaritas
pelarut.
Kemampuan ini disebut kekuatan elusi, dan
urutan kekuatan elusi beberapa pelarut yaitu air
> metanol > etanol > aseton > etil asetat >
kloroform > dietil eter > metilen diklorida >
benzena > toluena > karbon tetraklorida > heksan
! SHWUROHXP HWHU ,GHQWLÀNDVL VHQ\DZD \DQJ WHODK
terpisah pada lapisan tipis dapat dilakukan dengan
menggunakan reaksi penampak noda maupun
dideteksi menggunakan lampu UV (254 atau 356 nm)
untuk senyawa-senyawa yang dapat menyerap warna.
.URPDWRJUDÀ YDNXP FDLU GLJXQDNDQ XQWXN
fraksinasi ekstrak total secara cepat. Teknik ini dapat
GLODNXNDQ GHQJDQ PHQJJXQDNDQ NRORP NURPDWRJUDÀ
yang dihubungkan dengan pompa vakum, dengan
kolom, sehingga proses pemisahan berlangsung lebih
cepat. Penggunaan tekanan dimaksudkan agar laju
aliran eluen meningkat sehingga meminimalkan
terjadinya proses difusi karena ukuran silika gel yang
ELDVDQ\D GLJXQDNDQ SDGD ODSLVDQ NURPDWRJUDÀ ./7
sebagai fasa diam dalam kolom yang halus yaitu
200-400 mesh. Kolom yang digunakan berukuran
OHELK SHQGHN GDUL SDGD NRORP NURPDWRJUDÀ JUDYLWDVL
dengan diameter yang lebih besar (5 -10 cm). Kolom
KVC dikemas kering dalam keadaan vakum agar
diperoleh kerapatan kemasan maksimum. Sampel
yang akan dipisahkan biasanya sudah diadsorbsikan
ke dalam silika kasar terlebih dahulu (ukuran silika
kasar 30-70 mesh) agar pemisahannya lebih teratur dan
menghindari sampel kangsung menerobos ke dinding
kaca tanpa melewati adsorben terlebih dahulu, yang
dapat berakibat gagalnya proses pemisahan. Pelarut
yang kepolarannya rendah dituangkan ke permukaan
penyerap yang sebelumnya sudah dimasukkan
sampel. Kolom dihisap perlahan-lahan ke dalam
LVLDQ NRORP VLOLND JHO XQWXN 7/&   ƬP 6HEDJDL
eluen digunakan campuran pelarut dari yang non
polar secara bertahap ke yang polar. Hasil pemisahan
GDUL NURPDWRJUDÀ YDNXP FDLU DGDODK IUDNVLIUDNVL \DQJ
dapat dikelompokkan menjadi kelompok senyawa
non polar, semi polar, dan polar.
.URPDWRJUDÀ YDNXP FDLU PHUXSDNDQ
PRGLÀNDVL GDUL NURPDWRJUDÀ NRORP JUDYLWDVL
Metode ini lebih banyak digunakan untuk fraksinasi
sampel dalam jumlah besar (10-50 g). Kolom yang
digunakan biasanya terbuat dari gelas dengan lapisan
berpori pada bagian bawah. Ukuran kolom bervariasi
tergantung ukurannya. Kolom disambungkan dengan
penampung eluen yang dihubungkan dengan pompa
vakum. Pompa vakum akan menghisap eluen dalam
A B
Gambar . Beberapa teknik kromatogra KVC (A); KG (B); kromatotron (C)
kemasan dengan memvakumkannya. Kolom dielusi
dengan campuran pelarut yang cocok, mulai dengan
pelarut yang kepolarannya rendah lalu kepolaran
ditingkatkan perlahan-lahan. Kolom dihisap sampai
kering pada setiap pengumpulan fraksi, sehingga
NURPDWRJUDÀ YDNXP FDLU GLVHEXW MXJD NRORP
fraksinasi.
.URPDWRJUDÀ JUDYLWDVL GDSDW GLJXQDNDQ XQWXN
pemisahan dan pemurnian senyawa yang telah
GLIUDNVLQDVL PHQJJXQDNDQ NURPDWRJUDÀ YDNXP FDLU
Teknik ini dapat dilakukan dengan kolom diameter
ukuran 1-3 cm dan panjang kolom 50 cm. Sebagai
adsorben digunakan silika gel GF 60 (200-400 mesh).
Tinggi adsorben yang biasa digunakan berkisar 15-20
cm. Eluen yang digunakan menggunakan campuran
C
57
 Atun 0HWRGH,VRODVLGDQ,GHQWLÀNDVL6WUXNWXU6HQ\DZD2UJDQLN%DKDQ$ODP.....

pelarut polar dan non polar dengan perbandingan
\DQJ VHVXDL 3HPLVDKDQ GHQJDQ NURPDWRJUDÀ NRORP
gravitasi biasanya akan diperoleh hasil yang baik
apabila digunakan campuran pelarut yang dapat
memisahkan komponen pada Rf kurang dari 0,3 pada
uji coba dengan KLT.
.URPDWRWURQ DWDX VHQWULIXJDO NURPDWRJUDÀ
PHUXSDNDQ NURPDWRJUDÀ PHQJJXQDNDQ DODW
yang disebut kromatotron, teknik pemisahannya
menggunakan gaya sentrifugal dan gravitasi. Dalam
teknik ini digunakan silika gel for TLC yang
EHUÁRXUHFHQW 3ULQVLS SHPLVDKDQ GHQJDQ NURPDWRWURQ
VDPD GHQJDQ NURPDWRJUDÀ \DQJ ODLQQ\D WHWDSL
pemisahan akan berlangsung lebih cepat, oleh karena
ada gaya sentrifugal yang akan mempercepat proses
penyerapan pelarut yang membawa komponen yang
dipisahkan.
Penggunaan gabungan sedikitnya tiga macam
WHNQLN NURPDWRJUDÀ GL DWDV VXGDK GDSDW GLJXQDNDQ
untuk memisahkan dan memurnikan senyawa
organik bahan alam. Namun diperlukan ketrampilan
dalam penggunaan serta ketepatan dalam memilih
MHQLV NURPDWRJUDÀ VHUWD NHWHSDWDQ SHPLOLKDQ HOXHQ
\DQJ VHVXDL %HEHUDSD WHNQLN NURPDWRJUDÀ WHUVHEXW
dapat dilihat dalam gambar 1.
+DVLO SHPLVDKDQ VHFDUD NURPDWRJUDÀ  VHODQMXWQ\D
diperoleh fraksi-fraksi yang ditampung dalam botol
DWDX WDEXQJ GDQ GLDQDOLVLV VHFDUD NURPDWRJUDÀ ODSLV
tipis (KLT), yang biasa disebut kromatogram.
Kromatogram yang diperoleh selanjutnya dianalisis
dengan lampu UV pada panjang gelombang 254
atau 356 nm atau disemprot dengan reagen warna.
Salah satu reagent warna yang banyak digunakan
antara lain serium sulfat yang dapat mendeteksi
hampir semua senyawa bahan alam, maupun reagen
yang khusus seperti Lieberman Burchard untuk
mendeteksi terpenoid dan steroid. Fraksi-fraksi yang
telah dinalisis secara KLT selanjutnya dikelompokkan
berdasarkan jumlah senyawa maupun Rfnya yang
sama digabungkan untuk dianalisis lebih lanjut.
Pemisahan dianggap cukup apabila sudah diperoleh
fraksi yang menunjukkan noda tunggal pada beberapa
uji KLT dengan menggunakan berbagai variasi eluen
yang berbeda. Adanya noda tunggal pada beberapa uji
KLT tersebut menunjukkan bahwa sudah diperoleh
senyawa dengan tingkat kemurnian tinggi.
&,GHQWLÀNDVL6HQ\DZD2UJDQLN%DKDQ$ODP
1. Menggunakan Pereaksi Warna

A B

C D
Gambar 2. Fraksi-fraksi hasil pemisahan (A); analisis dengan KLT (B); kromatogram (C); dan kromatogram senyawa yang sudah
murni pada berbagai campuran pelarut (D)

58
Jurnal Konservasi Cagar Budaya Borobudur, Volume 8, Nomor 2, Desember 2014, Hal 53-61
Pengujian kandungan kimia secara kualitatif
terhadap ekstrak atau senyawa murni dapat dilakukan
secara sederhana untuk menentukan golongan
senyawa yang diperoleh. Secara rinci beberapa
pengujian sederhana yang dapat dilakukan adalah
sebagai berikut :
a. Uji sterol dan triterpenoids: ekstrak metanol
GLODUXWNDQ GDODP NORURIRUP GLVDULQJ GDQ ÀOWUDW
diuji untuk sterol dan triterpenoids
1) Uji Salkowski : Beberapa tetes asam sulfat
pekat ditambahkan ke larutan kloroform dan
diamati untuk warna merah di lapisan bawah
untuk sterol dan warna kuning keemasan
menunjukkan adanya Triterpenoid.
2) Libermann Buchard test: Beberapa tetesan
hidrida asetat ditambahkan ke dalam larutan
kloroform, kocok dan teteskan 1 ml asam sulfat
pekat dengan hati-hati ditambahkan dari sisi
tabung reaksi. Jika berwarna coklat kemerahan
menunjukkan adanya sterol dan cincin merah
menunjukkan adanya triterpenoid.
b. Uji alkaloid: 0,5 g ekstrak diencerkan secara
terpisah untuk 10 ml dengan alkohol asam, direbus
GDQ GLVDULQJ  PO ÀOWUDW GLWDPEDKNDQ  PO HQFHU
amonia. 5 ml kloroform ditambahkan dan kocok
dengan lembut untuk mengekstrak alkaloid.
Lapisan kloroform diekstraksi dengan 10 ml asam
asetat, dan dibagi dalam 3 bagian, dan diuji sebagai
berikut:
1) Uji Dragendroff : (kalium nitrat- bismut):
Beberapa tetes larutan Dragendroff
ditambahkan ke dalam larutan kloroform,
endapan coklat kemerahan menunjukkan
adanya alkaloid.
2) Uji Mayer : (Kalium iodida- merkuri) : Beberapa
tetes reagent Mayer ditambahkan ke dalam
larutan kloroform , jika terbentuk endapan
putih menunjukkan adanya alkaloid.
3) Uji Wagner : (Yodium- kalium iodida dalam)
: Beberapa tetes larutan Wagner ditambahkan
ke dalam larutan kloroform, jika terbentuk
endapan coklat menunjukkan adanya alkaloid.
c. Uji Saponin: Foam Test : Untuk 0.5 g ekstrak
ditambahkan 5 ml air suling dalam tabung
reaksi. Larutan dikocok dengan kuat dan diamati
terbentuknya buih yang stabil. Buih itu dicampur
dengan 3 tetes minyak zaitun dan dikocok dengan
kuat setelah itu diamati untuk pembentukan
emulsi.
d. 8ML ÁDYRQRLGV 6DPSHO GLODUXWNDQ GDODP SHODUXW
yang sesuai, sebanyak 2 ml dimasukkan ke dalam
tabung reaksi dan tambahkan beberapa tetes
larutan FeCl3, apabila terbentuk warna ungu
PHQXQMXNNDQSRVLWLI WHUKDGDSÁDYRQRLG
 ,GHQWLÀNDVL VWUXNWXU PROHNXO PHQJJXQDNDQ
metode spektroskopi
Elusidasi struktur molekul senyawa organik
merupakan tahapan terpenting dari penggunaan
analisis spektroskopi modern. Dalam elusidasi
struktur molekul untuk menentukan struktur
senyawa hasil sintesis jauh lebih mudah dari
SDGD HOXVLGDVL VHQ\DZD KDVLO LVRODVL 2OHK NDUHQD
analisis struktur molekul dari hasil sintesis sudah
dapat diprediksi struktur molekulnya berdasarkan
reaktan yang digunakan serta mekanisme reaksinya.
Sedangkan dalam elusidasi struktur molekul senyawa
hasil isolasi relatif lebih rumit, karena struktur
molekul yang sangat banyak kemungkinannya.
Untuk mempermudah analisis struktur senyawa hasil
isolasi biasanya diperlukan pengetahuan sebelumnya
mengenai keragaman struktur senyawa yang telah
diperoleh dari tumbuhan yang memiliki kekerabatan
yang dekat, misalnya merupakan tumbuhan dalam
genus atau famili yang sama. Biasanya senyawa yang
ditemukan dari tumbuhan dalam satu genus atau
famili memiliki hubungan kekerabatan senyawa
metabolit sekundernya. Selanjutnya sebagai tambahan
informasi untuk mempermudah dalam analisis
struktur senyawa hasil isolasi juga diperlukan data
VLIDW ÀVLN VHSHUWL NHODUXWDQ WLWLN OHOHK PDXSXQ MHQLV
pelarut yang digunakan dalam proses pemisahan.
Metode spektroskopi yang biasanya digunakan
XQWXN LGHQWLÀNDVL VWUXNWXU \DQJ ELDVD GLJXQDNDQ
antara lain spektroskopi ultraviolet (UV), infra
merah (IR), NMR (Nuclear magnet resonance), dan
PDVVD 6SHNWURVNRSL 89 XQWXN LGHQWLÀNDVL DGDQ\D
gugus kromofor (fenolik; ikatan rangkap; dll) ,
VSHNWURVNRSL ,5 XQWXN LGHQWLÀNDVL DGDQ\D JXJXV
fungsional ( hidroksil; aromatik; karbonil; dsb),
59
 Atun 0HWRGH,VRODVLGDQ,GHQWLÀNDVL6WUXNWXU6HQ\DZD2UJDQLN%DKDQ$ODP.....
spektroskopi NMR (1H dan 13 C), 1H NMR untuk
menentukan jumlah dan lingkungan proton (atom
H dalam senyawa), 13 C NMR untuk menentukan
jumlah atom karbon dalam senyawa , sedangkan
untuk menentukan massa atom relatif (Mr) digunakan
MS[10-13].
Namun demikian, dalam elusidasi struktur
molekul yang kompleks baik senyawa hasil sintesis
maupun isolasi tidak cukup hanya menggunakan data
spektroskopi UV, IR, 1H NMR, 13C NMR, dan MS,
tetapi masih diperlukan data spektroskopi NMR dua
dimensi seperti HMQC (Heteronuclear Multiple
Quantum Coherence), HMBC (Heteronuclear
Selanjutnya untuk menentukan struktur yang paling
sesuai dibuktikan dengan data fragmentasi dari
spektroskopi MS[10-13].
D. Penutup
Sejalan dengan keberadaan organisme di
alam yang tidak terbatas jumlahnya, maka topik
penelitian bahan alam juga tidak akan pernah
habis. Penelitian bahan alam biasanya dimulai
GDUL HNVWUDNVL LVRODVL GHQJDQ PHWRGH NURPDWRJUDÀ
VHKLQJJD GLSHUROHK VHQ\DZD PXUQL LGHQWLÀNDVL
struktur dari senyawa murni yang diperoleh dengan
metode spektroskopi, dilanjutkan dengan uji aktivitas
0XOWLSOH %RQG &RQQHFWLYLW\ ++ &26< biologi baik dari senyawa murni ataupun ekstrak
(Homonuclear Correlated Spectroscopy), maupun kasarnya. Setelah diketahui struktur molekulnya
12(6< 1XFOHDU 2YHUKDXVHU (IIHFW 6SHFWURVFRS\
Spektroskopi dua dimensi HMQC dapat digunakan
untuk mengetahui proton-karbon dengan jarak
satu ikatan, sehingga dapat diketahui karbon yang
mengikat proton dan karbon yang tidak mengikat
proton. Spektroskopi HMBC dapat mengetahui
proton-karbon dengan jarak dua atau tiga ikatan,
sehingga dapat digunakan untuk mengetahui karbon-
karbon tetangga yang memiliki jarak dua sampai
tiga ikatan dengan suatu proton tertentu. Untuk
mengetahui proton-proton yang berdampingan
GLJXQDNDQ GDWD VSHNWURVNRSL ++ &26<
VHGDQJNDQ XQWXN PHQJHWDKXL VWUXNWXU NRQÀJXUDVL
FLVWUDQV GLJXQDNDQ GDWD VSHNWURVNRSL 12(6<
Dengan menggunakan data spektroskopi dua dimensi
elusidasi struktur menjadi semakin mudah dan secara
tepat dapat menentukan kerangka struktur molekul
senyawa organik serumit apapun.
Dalam elusidasi struktur molekul biasanya
dimulai dari data yang paling sederhana, misalnya
spektroskopi UV (kalau ada), selanjutnya IR, analisis
data 1H NMR dan 13C NMR, dengan memperhatikan
data massa molekul dari spektroskopi MS. Dari data-
data tersebut biasanya sudah dapat memprediksi
struktur kerangka senyawa yang dianalisis, ada
kemungkinan memiliki beberapa alternatif struktur.
60
ELDVDQ\D MXJD GLODQMXWNDQ GHQJDQ PRGLÀNDVL VWUXNWXU
untuk mendapatkan senyawa dengan aktivitas dan
kestabilan yang diinginkan. Di samping itu, dengan
kemajuan bidang bioteknologi, dapat juga dilakukan
peningkatan kualitas tumbuhan atau organisme
melalui kultur jaringan, maupun tumbuhan
transgenik yang tentunya juga akan menghasilkan
berbagai jenis senyawa metabolit sekunder baru yang
beraneka ragam dan mungkin juga dengan struktur
molekul yang berbeda dengan yang ditemukan dari
tumbuhan awalnya.
Penentuan struktur molekul merupakan bagian
yang tidak dapat dipisahkan dari isolasi senyawa kimia
bahan alam. Senyawa hasil isolasi belum memiliki
makna jika belum diketahui struktur molekulnya.
Metode penentuan struktur senyawa organik yang
banyak digunakan adalah metode spektroskopi,
yang meliputi UV, IR, NMR (1H dan 13C), dan
MS. Untuk menentukan struktur senyawa organik
yang relatif sederhana metode tersebut sudah cukup
memadai, namun untuk senyawa dengan kerangka
karbon yang cukup kompleks penggunaan NMR dua
GLPHQVL \DQJ PHOLSXWL +04& +0%& &26< GDQ
12(6<PXWODNGLSHUOXNDQ>@
Jurnal Konservasi Cagar Budaya Borobudur, Volume 8, Nomor 2, Desember 2014, Hal 53-61

Daftar Pustaka

Syamsul A.A., E.H. Hakim, L.D. Juliawati, L. Hostettman, K., Hostettman, M., & Marston, A.
Makmur, S. Kusuma, Y.M. Syah, (1995), (1986). &DUD .URPDWRJUDÀ 3UHSDUDWLI. (Alih
Eksplorasi kimia tumbuhan hutan tropis bahasa: Kosasih P). Bandung: ITB.
Indonesia : beberapa data mikromolekuler Harborne, J.B. (2006). Metode Fitokimia: Penuntun
tumbuhan Lauraceae sebagai komplemen Cara Modern Menganalisis Tumbuhan (alih
etnobotani, Prosiding Seminar Etnobotani bahasa: Kosasih Padmawinata & Iwang
Tanggal 24-25 Januari 1995, Fakultas Biologi Soediro). Bandung : Penerbit ITB.
UGM, Yogyakarta, 8 -12. Sudjadi. 1988. Metode Pemisahan. Yogyakarta: KANISIUS.
Dalimarta, S. (2003), Atlas tumbuhan obat Indonesia, Hardjono Sastrohamidjojo. (2005). .URPDWRJUDÀ.
jilid 2, Trubus Agriwidya Yogyakarta : Liberty
'KDUPD $3  7DQDPDQ 2EDW 7UDGLVLRQDO
Indonesia, P.N. Balai Pustaka, Jakarta, hal.
265-266.
Heyne K. (1987), Tumbuhan berguna Indonesia,
Badan Litbang Kehutanan, Jakarta, jilid III,
1390 – 1443.
Grabley R.T., (1999), Drug discovery from nature,
Springer-Verlag, Berlin
Cannell, Richard J.P. (1998). Natural Products Isolation
Methods in Biotechnology ; 4. Totowa : Humana
Press.
Silverstein R.M.; Webster F.X., 1998, Spectrometric
,GHQWLÀFDWLRQ RI  2UJDQLF &RPSRXQGV VL[WK
edition,New York: John Wiley & Sons, Inc.
Harjono Sastrohamidjojo. (2007). Spektroskopi. Yogyakarta
: Penerbit Liberty.
Pavia, D.L, Lampman G.M, Kriz G.S, 2007,
Introduction to spectroscopy, Australia :
Brook/Cole.
61