UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK BATANG

Meistera chinensis TERHADAP Escherichia coli

Karya Tulis Ilmiah

Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar

Ahli Madya Farmasi (A.Md., Farm)

Diajukan Oleh :

DESAK PUTU ARNI

F.18.014

Kepada

PROGRAM STUDI DIPLOMA III FARMASI

POLITEKNIK BINA HUSADA KENDARI
KENDARI
2021

i
ii
iii
iv
 KATA PENGANTAR

Puji syukur penulis panjatkan kehadirat Tuhan Yang Maha Esa, karena

atas limpahan rahmat dan karunia-Nya, sehingga penulis Karya Tulis Ilmiah

(KTI) ini dapat terselesaikan sesuai dengan harapan. Berbagai kesulitan dan

hambatan dialami dalam penulisan karya ilmiah ini, namun atas dorongan dan

kemauan yang keras terutama adanya bantuan dari berbagai pihak sehingga

penulisan Karya Tulis Ilmiah ini dapat diselesaikan pada waktunya.

Melalui kesempatan ini dengan segala kasih sayang penulis sampaikan

terima kasih yang tak terhingga kepada kedua orang tua, penulis yakni Ayahanda

Dewa Putu Sukanta dan Ibunda Ni Ketut Mendri yang telah merawat penulis dari

lahir hingga sekarang dan perjuangan membiayai penulis sehingga penulis dapat

menyelesaikan studi saat ini, semoga dengan ini penulis dapat menjadi

kebanggaan kedua orang tua penulis.

Untuk itu penulis menyampaikan ucapan terima kasih dari lubuk hati yang

paling dalam dan penghargaan secara pribadi yang sebesar-besarnya kepada Ibu

apt. Nur Saadah Daud., S.Farm., M.Sc selaku pembimbing I dan Ibu Sri Aprilianti

Idris., M.Sc selaku pembimbing II yang baik hati telah banyak meluangkan waktu

dan memberikan petunjuk serta menyumbangkan pikiran dalam membimbing

penulis mulai saat perencanaan penelitian hingga selesainya Karya Tulis Ilmiah

ini.

Dengan segala kerendahan hati penulis juga menyampaikan ucapan terima

kasih yang sebesar-besarnya khusus kepada :

v
1. Ibu Tuti Dharmawati, SE., M.Si., AK., QIA., CA selaku Ketua Yayasan Bina

Husada Kendari

2. Bapak Dr. Muh. Syaiful Saehu, ST., M.Si selaku Direktur Politeknik Bina

Husada Kendari

3. Bapak apt. Muh. Azdar Setiawan, S.Farm., MM selaku Wakil Direktur I

Politeknik Bina Husada Kendari

4. Ibu Sri Aprilianti Idris, S.Si., M.Sc selaku Wakil Direktur II Politeknik Bina

Husada Kendari sekaligus pembimbing II

5. Bapak apt. Reymon, M.Si selaku Wakil Direktur III Politeknik Bina Husada

Kendari

6. Ibu apt. Nur Saadah Daud, M.Sc., selaku Ketua Program Studi D-III Farmasi

Politeknik Bina Husada Kendari sekaligus pembimbing I

7. Bapak apt. Randa Wulaisfan, M.Si selaku penguji I

8. Ibu apt. Selfiyana Austin Tee, S.Farm., M.Farm selaku penguji II

9. Bapak dan Ibu Dosen, Asisten Dosen, di lingkungan Politeknik Bina Husada

Kendari yang telah memberikan ilmu pengetahuan kepada penulis selama di

bangku kuliah dan seluruh Staf Tata Usaha Politeknik Bina Husada Kendari,

yang telah memberikan pelayanan kepada penulis dalam segala urusan hingga

Karya Tulis Ilmiah ini selesai.

10. Kepada keluargaku tercinta Niluh Widhi Antari dan Dewa Made Aditya yang

sudah memberikan motivasi dan dukungan kepada penulis selama penulis

kuliah, serta selalu memberikan semangat dan doa dalam penyusunan naskah

Karya Tulis Ilmiah ini.

vi
vii
 DAFTAR ISI

Halaman
HALAMAN SAMPUL ................................................................................... i
HALAMAN PENGESAHAN ........................................................................ ii
HALAMAN PERNYATAAN KEASLIAN .................................................. iii
HALAMAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA TULIS ILMIAH .. iv
KATA PENGANTAR .................................................................................... v
DAFTAR ISI ................................................................................................... viii
DAFTAR TABEL .......................................................................................... x
DAFTAR GAMBAR ...................................................................................... xi
DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................. xiii
ARTI SINGKATAN ...................................................................................... xiv
INTISARI ....................................................................................................... xv
ABSTRACT .................................................................................................... xvi
BAB I. PENDAHULUAN .............................................................................. 1
A. Latar Belakang Penelitian .................................................................... 1
B. Rumusan Masalah ................................................................................ 3
C. Tujuan Penelitian ................................................................................. 3
D. Manfaat Penelitian ............................................................................... 4
BAB II TINJAUAN PUSTAKA.................................................................... 5
A. Rujukan Penelitian ............................................................................... 5
B. Landasan Teori ..................................................................................... 7
1. Deskripsi Meistera chinensis ......................................................... 7
2. Ekstrak dan Ekstraksi ..................................................................... 10
3. Diare ............................................................................................... 13
4. Bakteri ............................................................................................ 18
5. Escherichia coli .............................................................................. 19
6. Antibakteri...................................................................................... 24
7. Metode pengujian aktivitas antimikroba ....................................... 26
8. Ciprofloxacin.................................................................................. 30
9. Sterilisasi ........................................................................................ 32

viii
 10. Uraian media ................................................................................. 34
BAB III METODE PENELITIAN ............................................................... 36
A. Jenis Penelitian ..................................................................................... 36
B. Desain Penelitian .................................................................................. 36
C. Waktu dan Tempat Penelitian .............................................................. 37
D. Populasi Dan Sampel Penelitian .......................................................... 37
E. Kerangka Konsep Penelitian ................................................................ 37
F. Variabel Penelitian ............................................................................... 37
G. Definisi Operasional Variabel .............................................................. 37
H. Hipotesis............................................................................................... 38
I. Prosedur Penelitian............................................................................... 38
1. Alat dan Bahan .............................................................................. 38
2. Cara Kerja ..................................................................................... 39
3. Skema Kerja Pembuatan Simplisia dan Ekstrak Batang
Meistera chinensis Dengan Metode Maserasi ............................... 45
4. Skema Jalannya Penelitian ............................................................ 46
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ....................................................... 47
A. Penyiapan Sampel ................................................................................ 47
B. Ekstraksi ............................................................................................... 48
C. Uji Aktivitas Antibakteri ...................................................................... 49
D. Analisis Data ........................................................................................ 52
BAB V PENUTUP .......................................................................................... 54
A. Kesimpulan .......................................................................................... 54
B. Saran ..................................................................................................... 54
DAFTAR PUSTAKA .................................................................................... 55
LAMPIRAN .................................................................................................... 60

ix
 DAFTAR TABEL

Halaman
Tabel 1. Uji daya hambat bakteri Escherichia coli .................................. 36
Tabel 2. Rendemen ekstrak batang Meistera chinensis ............................ 49
Tabel 3. Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak batang Meistera
chinensis terhadap Escherichia coli ......................................... 50
Tabel 4. Uji varians Data dan Uji One Way ANOVA ................................ 52
Tabel 5. Uji analisis Post-Hoc .................................................................. 52
Tabel 6. Rata-rata daya hambat bakteri E.coli .......................................... 65
Tabel 7. Varians Data ............................................................................... 65
Tabel 8. One Way Anova .......................................................................... 65
Tabel 9. Post-Hoc .................................................................................... 66

x
 DAFTAR GAMBAR

Halaman
Gambar 1. Batang Meistera chinensis .......................................................... 7
Gambar 2. Escherichia coli .......................................................................... 21
Gambar 3. Metode Difusi Agar .................................................................... 26
Gambar 4. Metode Dilusi (Makrodilusi) ...................................................... 29
Gambar 5. Struktur Kimia Ciprofloxacin ..................................................... 31
Gambar 6. Skema Kerangka Penelitian ........................................................ 37
Gambar 7. Pengukuran Zona Hambat .......................................................... 44
Gambar 8. Skema Pembuatan Simplisia dan Ekstrak dengan Metode
Maserasi ...................................................................................... 45
Gambar 9. Skema Jalannya Penelitian ......................................................... 46
Gambar 10. Proses Pengambilan Sampel ....................................................... 67
Gambar 11. Batang Meistera chinensis .......................................................... 67
Gambar 12. Pencucian Sampel Menggunakan Air Mengalir ......................... 68
Gambar 13. Pengupasan/Pemisahan Kulit Batang dengan Batang
Bagian Dalam ............................................................................. 68
Gambar 14. Perajangan Batang Meistera chinensis ....................................... 69
Gambar 15. Batang Meistera chinensis yang Telah Dirajang ........................ 69
Gambar 16. Penimbangan Batang Meistera chinensis ................................... 70
Gambar 17. Pengeringan Di bawah Sinar Matahari yang Telah
Ditutupi dengan Kain Hitam ....................................................... 70
Gambar 18. Penimbangan Simplisia Kasar .................................................... 71
Gambar 19. Penghalusan Sampel ................................................................... 71
Gambar 20. Penimbangan Simplisia Halus .................................................... 72
Gambar 21. Penuangan Pelarut Metanol Ke dalam Simplisia ........................ 72
Gambar 22. Simplisia yang Telah Direndam dengan Metanol....................... 73
Gambar 23. Ekstrak Cair yang Telah Disaring ............................................... 73
Gambar 24. Evaporasi .................................................................................... 74
Gambar 25. Ekstrak Kental Batang Meistera chinensis ................................. 74
Gambar 26. Pencucian Alat dengan Air Mengalir dan Sabun ........................ 75

xi
Gambar 27. Pengeringan Alat Menggunakan Tisu......................................... 75
Gambar 28. Alat Seperti Tabung Reaksi, Erlenmeyer, dan Gelas
Ukur Ditutup Dengan Kapas....................................................... 76
Gambar 29. Alat Dibungkus Menggunakan Kertas ........................................ 76
Gambar 30. Sterilisasi Alat ............................................................................. 77
Gambar 31. Penimbangan Media NA dan Dilarutkan dengan
Aquadest ..................................................................................... 77
Gambar 32. Dipanaskan Media NA Di atas Magnetik Stirrer........................ 78
Gambar 33. Media NA Dibungkus dengan Kertas dan Disterilisasikan ........ 78
Gambar 34. Dituang Media Kedalam Masing-masing Cawan Petri .............. 79
Gambar 35. Pengambilan 9 mL NaCl 0,9% ................................................... 79
Gambar 36. Diambil 1 Ose Bakteri dan Dicampurkan dengan NaCl ............. 80
Gambar 37. Dihomogenkan Suspensi Bakteri ................................................ 80
Gambar 38. Dipipet 1 mL DMSO .................................................................. 81
Gambar 39. Dilarutkan DMSO Dengan Aquadest ......................................... 81
Gambar 40. Digerus Tablet Ciprofloxacin ..................................................... 82
Gambar 41. Dtitimbang Serbuk Ciprofloxacin ............................................... 82
Gambar 42. Diambil 1 mL Larutan Ciprofloxacin ......................................... 83
Gambar 43. Larutan Kontrol Positif Ciprofloxacin 1µg................................. 83
Gambar 44. Penimbangan Ekstrak Konsentrasi 30%, 40%, dan 50%............ 84
Gambar 45. Dilarutkan Ekstrak dengan DMSO 10% ..................................... 84
Gambar 46. Larutan Ekstrak Konsentrasi 30%, 40%, dan 50% ..................... 85
Gambar 47. Inokulasi Suspensi Bakteri.......................................................... 85
Gambar 48. Pembuatan Sumuran Agar .......................................................... 86
Gambar 49. Dipipet Masing-Masing Larutan Uji........................................... 87
Gambar 50. Diinkubasi Pada Suhu 37oc Selama 24 Jam................................ 87
Gambar 51. Hasil Pengujian Replikasi 1 ........................................................ 88
Gambar 52. Hasil Pengujian Replikasi 2 ........................................................ 88
Gambar 53. Hasil Pengujian Replikasi 3 ........................................................ 89
Gambar 54. Pengukuran Zona Bening............................................................ 89

xii
 DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran Halaman
Lampiran 1. Perhitungan .................................................................................. 61
Lampiran 2. Tabel Statistika (SPSS 19) ........................................................... 65
Lampiran 3. Dokumentasi Kegiatan Penelitian ............................................... 67

xiii
 ARTI SINGKATAN

CFR : Crude Fatality Rate

KLB : Kejadian Luar Biasa
mg : Miligram
mL : Mililiter
g : Gram
µg : Mikrogram
µL : Mikroliter
mm : Milimeter
NaCl : Natrium Chloride
UV : Ultra Violet
DMSO : Dimhetyl Sulfoxide
RAL : Rancangan Acak Lengkap
SPSS : Statistical Product and Service Solution
NA : Nutrient Agar
L : Liter
E. coli : Escherichia coli
M. chinensis : Meistera chinensis
LAF : Laminar Air Flow

xiv
 INTISARI
UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK BATANG
Meistera chinensis TERHADAP Escherichia coli

Batang Meistera chinensis merupakan tumbuhan dari famili Zingiberaceae yang

memiliki aktivitas sebagai antibakteri. Masyarakat setempat memanfaatkan tumbuhan ini
sebagai penambah rasa pada makanan, nyeri, dan meningkatkan kekebalan tubuh. Tujuan
penelitian ini adalah untuk mengetahui daya hambat ekstrak batang Meistera chinensis
terhadap pertumbuhan bakteri Escherichia coli dan mengetahui perbandingan konsentrasi
ekstrak batang Meistera chinensis yang memiliki daya hambat antibakteri terhadap
bakteri Escherichia coli.
Penelitian ini adalah penelitian Eksperimental laboratorium untuk melihat
aktivitas antibakteri dari ekstrak batang Meistera chinensis pada berbagai konsentrasi
yaitu 30%, 40%, 50%, kontrol positif Ciprofloxacin 1µg, dan kontrol negatif DMSO
10%. Pembuatan ekstrak batang Meistera chinensis menggunakan metode maserasi
dengan pelarut metanol. Uji aktivitas antibakteri dari ekstrak batang Meistera chinensis
dilakukan dengan menggunakan metode difusi sumuran agar selama 24 jam, diinkubasi
pada suhu 37oC dan diukur daya hambat (mm). Hasil uji daya hambat yang diperoleh
dilakukan analisa data menggunakan metode statistic One Way ANOVA.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak batang Meistera chinensis dapat
menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli dengan rata-rata diameter zona
hambat untuk konsentrasi 30% yaitu 9,06 mm, 40% yaitu 10,01 mm, 50% yaitu 11,2 mm,
kontrol positif Ciprofloxacin 1µg yaitu 10,28 mm, dan kontrol negatif DMSO 10% yaitu
0 mm. Hasil analisis One way ANOVA pada uji antibakteri dengan nilai signifikasi 0,000
menunjukkan adanya perbedaan dari masing-masing konsentrasi terhadap pengaruh daya
hambat bakteri Escherichia coli.

Kata Kunci : Batang Meistera chinensis, Escherichia coli, Daya Hambat

xv
 ABSTRACT

ANTIBACTERIAL ACTIVITY TEST OF Meistera chinensis STEM

EXTRACT AGAINST Escherichia coli
Meistera chinensis stem is a plant from the Zingiberaceae family which has
antibacterial activity. Local people use this plant as a flavor enhancer in food, pain relief,
and boost immunity. The purpose of this study was to determine the inhibitory power of
Meistera chinensis stem extract against the growth of Escherichia coli bacteria and to
compare the concentration of Meistera chinensis stem extract which has antibacterial
inhibition against Escherichia coli bacteria.
This study is a laboratory experimental study to see the antibacterial activity of
Meistera chinensis stem extract at various concentrations, namely 30%, 40%, 50%,
positive control of Ciprofloxacin 1µg, and negative control of DMSO 10%. Making
Meistera chinensis stem extract using maceration method with methanol solvent. The
antibacterial activity test of Meistera chinensis stem extract was carried out using the
agar well diffusion method for 24 hours, incubated at 37oC and measured the inhibitory
power (mm). The results of the inhibitory test obtained were analyzed using the One Way
ANOVA statistical method.
The results showed that Meistera chinensis stem extract could inhibit the growth
of Escherichia coli bacteria with an average diameter of the inhibition zone for a
concentration of 30% which was 9.06 mm, 40% was 10.01 mm, 50% was 11.2 mm,
positive control Ciprofloxacin 1µg is 10.28 mm, and 10% DMSO negative control is 0
mm. The results of the One way ANOVA analysis on the antibacterial test with a
significance value of 0.000 showed that there was a difference of each concentration on
the effect of the inhibition of Escherichia coli bacteria.

Keywords: Meistera chinensis stem, Escherichia coli, Inhibitory

xvi
 BAB I
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang Penelitian

Diare merupakan salah satu penyebab kematian terbanyak di negara

berkembang, terutama di Indonesia. Total penderita diare pada tahun 2016 yang

dilayani di fasilitas kesehatan berjumlah 3.176.079 pasien dan terjadi peningkatan

pada tahun 2017 menjadi 4.274.790. Kejadian Luar Biasa (KLB) diare sering

terjadi dengan Crude Fatality Rate (CFR) (Angka Kematian Kasar) yang tinggi.

Data yang diperoleh dari Kementerian Kesehatan Republik Indonesia pada tahun

2017 terjadi 21 kali KLB diare yang tersebar di 12 provinsi, 17 kabupaten/kota,

dengan kuantitas penderita sebanyak 1.725 orang dan kematian 34 orang (CFR

1,97%) (Kemenkes RI, 2018).

Diare disebabkan oleh berbagai bakteri, virus, dan jamur. Infeksi

menyebar melalui makanan dan minuman yang terkontaminasi oleh mikroba.

Faktor risiko yang mengakibatkan terjadinya diare adalah sanitasi lingkungan

yang buruk, persediaan air yang tidak higinenis, dan kurangnya pengetahuan

mengenai diare (WHO, 2013). Faktor hygiene individu yang buruk dapat

menyebabkan diare, tidak memiliki jamban dapat juga menyebabkan diare.

Penyebab utama diare di negara berkembang adalah rotavirus dan Escherichia

coli. Kedua agen penyakit ini sangat erat hubungannya dengan faktor lingkungan

seperti hygiene sanitasi, kecukupan sarana air bersih, kebersihan dan keamanan

pangan (WHO, 2013).

1
 Infeksi bakteri yang paling sering menyebabkan diare adalah Escherichia

coli. Escherichia coli merupakan bakteri gram negatif yang berkoloni di saluran

pencernaan manusia yang mampu membawa dampak penyakit meningitis, diare,

sepsis, dan infeksi saluran kemih (Jawetz, 2014). Escherichia coli ditemukan di

dalam usus manusia yang berperan di dalam sistem pengeluaran zat sisa pada

saluran pencernaan dan dapat menginfeksi usus sehingga menimbulkan diare

(Puteri dan Milanda, 2017).

Pengobatan antibakteri menggunakan antibiotik yang tidak tepat akan

menimbulkan berbagai permasalahan seperti pengobatan kurang efektif,

peningkatan dampak pada keamanan pasien, resistensi bakteri terhadap antibakteri

dan biaya pengobatan yang relatif mahal (Priamsari, 2020). Terjadinya resistensi

antibiotik menyebabkan kegagalan dari terapi. Salah satu penyembuhan alternatif

yang bisa digunakan untuk mengganti antibiotik yaitu penggunaan bahan alam

seperti tanaman yang bisa dijadikan sebagai antibakteri.

Secara tradisional, Zingiberaceae telah lama digunakan sebagai

antibakteri, antiinflamasi, analgesik, dan lain-lain (Danciu C, dkk,. 2015).

Zingiberaceae merupakan famili yang dapat dimanfaatkan untuk mengobati

penyakit pencernaan, pernapasan, dan kulit yang umumnya disebabkan oleh

infeksi bakteri (Irayanti, dkk,. 2020). Salah satu spesies dari famili Zingiberaceae

adalah Meistera chinensis. Meistera chinensis merupakan tumbuhan lokal

Sulawesi Tenggara yang ditemukan di Kabupaten Konawe. Secara empiris,

Meistera chinensis digunakan sebagai penambah rasa pada makanan, nyeri, dan

meningkatkan kekebalan tubuh. Musdalipah, dkk (2021) menyatakan bahwa

2
Meistera Chinensis mengandung senyawa fenolik, flavonoid, steroid, terpenoid,

alkaloid, dan saponin. Sebagian besar dari buah Meistera chinensis dapat menjadi

sumber potensial antioksidan alami dan agen toksik.

Berdasarkan uraian diatas, batang Meistera chinensis dimungkinkan

berpotensi sebagai antibakteri alami. Oleh karena itu, perlu dilakukan penelitian

secara mikrobiologi, sehingga peneliti tertarik melakukan penelitian dengan judul

“Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Batang Meistera chinensis Terhadap

Escherichia coli”.

B. Rumusan Masalah

Berdasarkan latar belakang masalah di atas maka yang menjadi rumusan

masalah dalam penelitian ini yaitu :

1. Apakah ekstrak batang Meistera chinensis dapat menghambat bakteri

Escherichia coli ?

2. Seberapa besar daya hambat ekstrak batang Meistera chinensis pada

konsentrasi 30%, 40%, dan 50% terhadap Escherichia coli ?

C. Tujuan

1. Untuk mengetahui daya hambat antibakteri ekstrak batang Meistera

chinensis terhadap bakteri Escherichia coli.

2. Untuk mengetahui perbandingan konsentrasi ekstrak batang Meistera

chinensis yang memiliki daya hambat antibakteri terhadap bakteri Escherichia

coli.

3
 D. Manfaat

Hasil dari penelitian ini diharapkan bermanfaat untuk :

1. Memperkaya ilmu pengetahuan, khususnya yang berkaitan dengan adanya

daya antibakteri suatu tanaman.

2. Memberikan informasi bahwa batang Meistera chinensis dapat digunakan

sebagai zat antibakteri.

3. Memberikan informasi sebagai bahan pertimbangan dalam pengobatan selain

menggunakan obat kimia yang telah dipelajari oleh tenaga medis.

4. Sebagai persyaratan tugas akhir dalam memperoleh gelar A.md,. Farm (Ahli

Madya Farmasi) di Prodi Farmasi Politeknik Bina Husada Kendari.

4
 BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
A. Rujukan Penelitian

1. Musdalipah, dkk,. (2021), melakukan penelitian tentang Total Phenolic and

Flavonoid Content, Antioxidant, and Toxicity Test with BSLT of Meistera

chinensis Fruit Fraction from Southeast Sulawesi. Meistera chinensis

merupakan spesies dari famili Zingiberaceae yang tumbuh di Sulawesi

Tenggara dan ditemukan di Kabupaten Konawe. Secara empiris digunakan

sebagai penambah rasa pada makanan, nyeri, dan meningkatkan kekebalan

tubuh. Dari hasil peneltian aktivitas antioksidan sangat kuat dengan IC 50

42,7 ± 3,53 mg / L (F8). Total kandungan fenolik dan flavonoid adalah 30,72

± 1,07 mgGAE / g dan 8,02 ± 0,48 mgQE / g, masing-masing. Uji toksisitas

BSLT ditemukan sangat toksik dengan IC 50 sebesar 5,2 ± 0,72 mg / L. Hal

tersebut menunjukkan bahwa sebagian besar fraksi buah M. chinensis dapat

menjadi sumber potensial antioksidan alami dan agen toksisitas.

2. Nurhayati, L.S., dkk (2020), melakukan penelitian tentang Perbandingan

Pengujian Aktivitas Antibakteri Starter Yogurt dengan Metode Difusi

Sumuran dan Metode Difusi Cakram. Pengujian aktivitas antibakteri

menggunakan dua metode yaitu metode difusi cakram dan metode difusi

sumur. Hasil penelitian menunjukkan metode difusi sumur agar diperoleh

aktivitas bakteri yang lebih besar daripada metode difusi cakram untuk

Escherichia coli.

5
3. Rini, A.A, dkk,. (2017), melakukan penelitian tentang Skrining Fitokimia dan

uji Antibakteri Ekstrak Etanol Buah Kawista dari Daerah Kabupaten Aceh

Besar Terhadap Bakteri Escherichia coli. Jenis penelitian ini adalah

penelitian eksperimental dengan menggunakan Rancangan Acak Lengkap

(RAL).

4. Sumampouw, O. J,. (2018), melakukan penelitian tentang Uji Sensitivitas

Antibiotik Terhadap Bakteri Escherichia coli Penyebab Diare Balita Di Kota

Manado. Aktivitas antibakteri dari Chlorampenicol, Amoxicillin dan

Tetracyclin hanya pada konsentrasi 0,1 g/mL dan 0,01 g/mL. ampicillin

menunjukkan aktivitas antibakteri sampai pada konsnetrasi 0,001 g/mL.

aktivitas antibakteri terbaik diperoleh dari ciprofloxacin yang menunjukkan

aktivitas antibakteri sampai pada konsentrasi 0,00001 g/mL.

6
 B. Landasan Teori
1. Deskripsi Meistera chinensis

Meistera chinensis merupakan salah satu tumbuhan yang termasuk

dalam famili Zingiberaceae. Populasi Meistera chinensis banyak ditemukan di

Sulawesi Tenggara.

Gambar 1. Batang Meistera chinensis

(Sumber : Dokumentasi pribadi, 2021)

a. Klasifikasi Meistera chinensis (De Boer, dkk. 2018)

Regnum : Plantae

Divisi : Spermatophyta

Kelas : Monocotyledoneae

Ordo : Zingiberales

Famili : Zingiberaceae

Genus : Meistera

Spesies : Meistera chinensis

b. Morfologi

Diagnosis : Spesies Meistera chinensis di (karakterisasi) oleh

kombinasi ciri-ciri berikut ini : buahnya berambut seperti duri-duri

7
(jarang yang tidak berambut), dan kelopak yang subur terdiri dari satu

bunga spesies ini berkerabat dekat dengan wrufbainia dan juga

mempunyai buah yang berduri dan buahnya selalu bergelombang

(buahnya jarang mengkerut ketika di keringkan tetapi tidak pernah rata),

dan bunganya dapat dibedakan dari bentuknya yang berkelopak tiga,

bunga tumbuhan ini umumnya menjalar dan juga sering tumbuh ke atas

lebih banyak atau kurang bibir bunga yang berbentuk seperti sendok.

Meistera termasuk spesies yang sebelumnya terdapat dalam amommum

(yang di karakterisasi dengan buah bersayap, berlekuk dan berbentuk

seperti kipas, memanjang ke kepala sari) yang mana secara genetik dan

morfologi jelas berbeda.

Penjelasan : kebanyakan berbentuk herba yang berukuran media

hingga besar berbentuk rumpun yang rapat hingga jarak, jarang merayap.

Daunya tumbuh kearah atas dengan bilah daun melekat pada batang

dengan tangkai daun yang jarang berkembang dan umumnya panjangnya

(3-5 cm). Tangkai bunga umumnya pendek merayap ke atas dan jarang

memanjang dan tegak ( misalnya M. chelete Scens ) berbunga banyak dan

rapat cabang yang subur selalu mempunyai satu bunga yang akan layu

seiring dengan waktu bunga akan muncul ketika akan berbuah. Bibir

bunga berwarna putih kekuningan dengan penanda warna merah

(kebanyakan dalam speseis Indo - Cina) atau yang kurang umum berwarna

kuning orange atau berwarna merah dengan titik-titik kuning atau crame

(beberapa spesiae di tanah Jawa). Kebanyakan buat berbentuk

8
 bergekombang pada spesies Meistera cihnensis. Di daerah Indo - Cina

buah yang halus atau tidak bergelombang jarang di temui kecuali pada

jenis Meistera koenigii dan Meistera tomrey. Di tanah Jawa spesies

Meistera ocrea mempunyai buah dengan yang berduri sebgian sedangkan

Meistera cherasina mempunyai buah yang tidak berduri. Buah – buah ini

dapat terlihat karena ukurannya besar dengan diameter lebih dari 3 cm

Daerah Sebaran : Meistera terdiri dari 42 spesies dan 3 farietas

yang telah terdata merupakan genus yang paling banyak tersebar.

Meistera dari genus ini tersebar dari Sri Langka hingga India, menyebar

dari daerah Indo-Cina hingga tanah Jawa dengan beberapa spesies dari

Amommum aculeatum yang tersebur sepanjang jalur wallace hingga

Sulawesi, Papua Nugini dan Australia (De Boer ddk, 2018).

c. Kandungan Kimia

Metabolit sekunder yang terdapat pada buah Meistera Chinensis

adalah senyawa flavonoid, fenolik, steroid, terpenoid, alkaloid, saponin

(Musdalipah, dkk,. 2021)

d. Manfaat

Secara empiris, Meistera chinensis digunakan sebagai penambah

rasa pada makanan, nyeri, dan meningkatkan kekebalan tubuh. Sebagian

besar dari buah Meistera chinensis dapat menjadi sumber potensial

antioksidan alami dan agen toksik (Musdalipah, dkk,. 2021).

9
2. Ekstrak dan Ekstraksi

Ekstrak adalah sediaan kental yang diperoleh dengan mengekstraksi

senyawa aktif dari simplisia nabati atau simplisia hewani menggunakan pelarut

yang sesuai, kemudian semua atau hampir semua pelarut diuapkan dan massa

atau serbuk yang tersisa diperlakukan sedemikian sehingga memenuhi baku

yang telah ditentukan. Sebagian besar ekstrak dibuat dengan mengekstraksi

bahan baku obat secara perkolasi. Seluruh perkolat biasanya dipekatkan secara

destilasi dengan menggunakan tekanan (Dirjen POM, 2014).

Ekstraksi adalah proses pemisahan yang didasarkan pada perpindahan

massa komponen kimia yang terdapat dalam sampel bahan alam ke dalam

pelarut. Tujuan utama dari metode ekstraksi ini didasarkan pada distribusi zat

terlarut ke dalam pelarutnya (Ilyas, 2013). Ekstraksi merupakan salah satu

langkah dimana suatu senyawa dipisahkan dari matriks ke dalam fase yang

berbeda dan tujuan utama dari tahap ini adalah agar sampel dapat dimasukkan

ke dalam instrumen analisis (Haeria, 2014).

Teknik pemisahan senyawa-senyawa metabolit sekunder yang

terkandung dalam suatu bahan alam merupakan isolasi yang mana pada isolasi

senyawa bahan alam terdiri dari beberapa tahapan yang dimulai dari ekstraksi.

Hasil ekstraksi ini disebut dengan ekstrak, beberapa metode ekstraksi senyawa

organik bahan alam yang umum digunakan antara lain maserasi, perkolasi,

soxhletasi dan lain-lain. Namun, metode ekstraksi bahan alam yang paling

sederhana adalah metode maserasi (Ilyas, 2013).

10
 Beberapa cara metode ekstraksi menggunakan pelarut yaitu sebagai

berikut:

a. Cara Dingin

1) Maserasi

Maserasi adalah proses pengekstrakan simplisia dengan

menggunakan pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan

pada temperatur ruangan (kamar). Maserasi kinetik berarti dilakukan

pengadukan yang terus menerus. Remaserasi berarti dilakukan

pengulangan penambahan pelarut setelah dilakukan penyaringan maserat

pertama dan seterusnya. Metode ini dapat menghasilkan ekstrak dalam

jumlah banyak, serta terhindar dari perubahan kimia senyawa-senyawa

tertentu karena pemanasan. Maserasi memiliki keuntungan yaitu cara

pengerjaan dan peralatan yang digunakan sederhana dan kekurangannya

adalah waktu pengerjaan yang lama dan ekstraksi kurang sempurna serta

banyak menggunakan pelarut (Puzi H, dkk., 2015).

2) Perkolasi

Perkolasi adalah ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru sampai

terjadi penyarian sempurna yang umumnya dilakukan pada suhu ruang.

Proses perkolasi terdiri dari tahap pengembangan bahan, tahap

perendaman, tahap perkolasi antara, tahap perkolasi sebenarnya

(penampungan ekstrak) secara terus menerus sampai diperoleh ekstrak

(perkolat).

11
b. Cara Panas

1) Sokletasi

Sokletasi merupakan ekstraksi menggunakan pelarut yang selalu

baru dengan menggunakan alat soklet sehingga terjadi ekstraksi kontinyu

dengan jumlah pelarut relatif konstan dengan adanya pendingin balik.

2) Refluks

Refluks adalah ekstraksi dengan menggunakan pelarut pada

temperatur titik didihnya selama waktu tertentu dan jumlah pelarut

terbatas yang relatif konstan dengan adanya pendingin balik.

3) Infusa

Infusa adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperatur 90oC

selama 15 menit. Bejana infus tercelup dalam penangas air mendidih,

temperatur yang digunakan 96-98oC selama waktu tertentu (15-20

menit).

4) Dekok

Dekok adalah infus pada waktu yang lebih lama dan temperatur

sampai titik didih air. Dekok merupakan ekstraksi dengan pelarut air

pada temperatur 900C selama 30 menit, metode ini digunakan untuk

ekstraksi konstituen yang larut dalam air dan stabil terhadap panas.

5) Digesti

Digesti adalah maserasi kinetik pada temperatur lebih tinggi dari

temperatur suhu kamar, yaitu secara umum dilakukan pada temperatur

40-50oC. Digesti merupakan maserasi dengan pengadukan kontinyu pada

12
 temperatur lebih tinggi dari temperatur ruang.

3. Diare

a. Definisi Diare

Diare adalah keadaan buang air dengan banyak cairan (mencret) dan

merupakan gejala dari penyakit-penyakit tertentu atau gangguan lain. Kasus

ini banyak terdapat di negara-negara berkembang dengan standar hidup

yang rendah, dimana dehidrasi akibat diare merupakan salah satu penyebab

kematian terpenting pada anak-anak (Tjay & Kirana, 2013).

Diare merupakan gejala yang terjadi karena kelainan yang

melibatkan fungsi pencernaan, penyerapan dan sekresi. Diare disebabkan

oleh transportasi air dan merupakan suatu keadaan pengeluaran tinja yang

tidak normal atau tidak seperti biasanya. Perubahan yang terjadi berupa

perubahan peningkatan volume, keenceran dan frekuensi dengan atau tanpa

lendir darah, seperti lebih dari 3 kali per hari dan pada neonatus lebih dari 4

kali per hari (Hidayat, 2008).

b. Jenis-jenis Diare

1) Diare Akut

Gejala diare akut adalah tinja cair, terjadi mendadak, badan lemas

kadang demam dan muntah, berlangsung beberapa jam sampai beberapa

hari. Umumnya disebabkan oleh infeksi virus atau kuman, atau dapat

pula akibat efek samping obat atau gejala dari gangguan saluran cerna.

Umumnya gangguan ini bersifat self-limiting dan bila tanpa komplikasi

tidak perlu ditangani dengan obat, kecuali rehidrasi oral bila ada bahaya

13
 dehidrasi (Tjay & Kirana, 2013).

Pada diare hebat sering kali disertai gejala muntah-muntah, tubuh

kehilangan banyak air dengan garam-garamnya, terutama natrium dan

kalium. Hal ini mengakibatkan dehidrasi, hipokaliemia dan adakalanya

asidosis yang tidak jarang berakhir dengan syok dan kematian. Gejala

pertama dari dehidrasi adalah perasaan haus, mulut dan bibir kering, kulit

menjadi keriput (hilang kekenyalannya), berkurangnya air seni dan

menurunnya berat badan, juga keadaan gelisah. Kekurangan kalium

terutama memengaruhi sistem neuromuskuler dengan gejala mengantuk

(letargi), lemah otot dan sesak napas (dyspnoea) (Indijah & Purnama,

2016).

2) Diare Kronik

Diare yang bertahan lebih dari 2 minggu umumnya disebut diare

kronis dan harus selalu diselidiki penyebabnya melalui sigmoidoscopy

dan biopsi rektal karena kemungkinan adanya tumor di usus besar atau

penyakit usus beradang kronis (Crohn. Colitis ulcerosa) (Tjay & Kirana,

2013). Kemungkinan penyebab diare kronik sangat beragam, dan tidak

selalu disebabkan kelainan pada usus (Wiryani & I Dewa, 2007).

Sindrom usus iritatif dan penyakit radang usus non spesifik

(inflamatory bowel disease) di negara maju merupakan penyebab utama

diare kronik, sedangkan di negara berkembang infeksi dan parasit masih

menjadi penyebab tersering. Diare kronis dapat terjadi pada kelainan

endokrin, kelainan pankreas, kelainan hati, infeksi, dan sebagainya.

14
 Tanda-tanda diare kronik seperti: demam, berat badan menurun,

malnutrisi, anemia, dan meningginya laju endap darah. Mekanisme

patofisiologi yang mendasari terjadinya diare kronis diklasifikasikan

menjadi 3 golongan yaitu: diare sekretorik, diare osmotik dan diare

inflamasi. Klasifikasi lain ada juga yang membagi menjadi 3 jenis yaitu

diare cair (watery diarrhea), yang mencakup diare sekretorik dan diare

osmotik, diare imflamasi dan diare berlemak (fatty diarrhea) (Wiryani &

I Dewa, 2007).

c. Pencegahan Diare

Menurut WHO (2017), langkah-langkah utama untuk mencegah

diare meliputi akses ke air minum yang aman, penggunaan sanitasi yang

lebih baik, mencuci tangan dengan sabun, pemberian ASI eksklusif selama

enam bulan pertama, kebersihan pribadi dan makanan yang baik, pendidikan

kesehatan tentang bagaimana infeksi menyebar, dan vaksinasi rotavirus.

Mencuci tangan dengan sabun telah terbukti mengurangi kejadian

penyakit diare kurang lebih 40%. Mencuci tangan disini lebih ditekankan

pada saat sebelum makan maupun sesudah buang air besar. Cuci tangan

menjadi salah satu intervensi paling cost effective untuk mengurangi

kejadian diare pada anak. Penyakit diare seringkali diasosiasikan dengan

keadaan air, namun secara akurat sebenarnya harus diperhatikan juga

penanganan kotoran manusia seperti tinja dan air kencing, karena bakteri

penyebab penyakit diare berasal dari kotoran-kotoran tersebut. Bakteri-

bakteri ini membuat manusia sakit ketika masuk ke dalam mulut melalui

15
 tangan yang telah menyentuh tinja, air minum yang terkontaminasi,

makanan mentah, dan peralatan makan yang tidak dicuci terlebih dahulu

atau terkontaminasi tempat makan yang kotor. Kebiasan cuci tangan,

perilaku cuci tangan tangan buruk berhubungan erat dengan peningkatan

kejadian diare dan penyakit yang lain. Perilaku cuci tangan yang baik dapat

menghindarkan diri dari diare (Fatmawati, dkk., 2016).

d. Cara Penularan Diare

Diare dapat ditularkan dengan berbagai cara yang mengakibatkan

timbulnya infeksi antara lain: makanan dan minuman yang sudah

terkontaminasi, baik yang sudah dicemari oleh serangga atau kontaminasi

oleh tangan yang kotor, bermain dengan mainan yang terkontaminasi,

apalagi pada bayi sering memasukan tangan/mainan/apapun kedalam mulut

karena virus ini dapat bertahan dipermukaan udara sampai beberapa hari,

pengunaan sumber air yang sudah tercemar dan tidak memasak air dengan

benar, pencucian dan pemakaian botol susu yang tidak bersih, tidak mencuci

tangan dengan bersih setelah selesai buang air besar atau membersihkan

tinja anak yang terinfeksi, sehingga mengkontaminasi perabotan dan alat-

alat yang dipegang (Mulyana & Eli, 2015).

e. Terapi Diare

1) Terapi Non Farmakologi

Penanganan terhadap dehidrasi meliputi pemberian cairan rehidrasi

pengganti, dan menurunkan pemberian makanan (meningkatkan

pemberian ASI) selama anak masih mengalami diare. World Health

16
 Organization (WHO) merekomendasikan penanganan terhadap dehidrasi

dengan menggunakan Oral Rehidrating Solution (ORS), yang diberikan

sesuai dengan derajat dehidrasi dan penggunaan suplementasi seng.

Suplementasi seng (Sulfat, Glukonat, dan Asetat) dalam bentuk tablet

atau sirup telah direkomendasikan karena mempengaruhi sistem imunitas

dan fungsi atau struktur saluran cerna, memperbaiki proses penyembuhan

epitel saluran cerna selama diare (Ariani, 2016).

Perlu pula dilakukan diet dengan bahan makanan yang tidak

merangsang dan mudah dicerna. Diet yang baik adalah pada hari pertama

bubur encer dengan beberapa tetes kecap dan minuman air teh agak

pekat, pada hari 2-5 nasi tim dengan kaldu ayam, sayur yang dihaluskan,

garam dan beberapa tetes kecap. Menurut laporan, diet ini dapat

mempercepat penyembuhan diare (Tjay & Kirana, 2013).

2) Terapi Farmakologi

Menurut Tjay dan Kirana (2013), kelompok obat yang sering

digunakan untuk terapi diare diantaranya:

a) Obat kemoterapeutika untuk terapi kausal yang memusnahkan bakteri

penyebab penyakit, digunakan obat golongan sulfonamide atau

antibiotik. Antibiotik digunakan hanya pada infeksi spesifik, misalnya

kolera dan disentri basiler berat, yang diterapi dengan tetrasiklin.

b) Obstipansia digunakan untuk terapi simtomatis dengan tujuan untuk

menghentikan diare dengan beberapa cara, yakni menekan peristaltik

usus, contoh candu dan alkaloidnya, derivat petidin (definoksilat dan

17
 loperamid), dan antikolinergik (Atropin dan ekstrak beladona).

Pemberian adsorben untuk menyerap racun yang dihasilkan bakteri

atau racun penyebab diare misalnya carbo adsorbens, kaolin, pektin

yang pada permukaannya menyerap zat-zat beracun yang dihasilkan

oleh bakteri. Pemberian Adstringen yaitu zat yang dapat meringankan

diare dengan menciutkan selaput lendir usus, misalnya tanin,

tannalbumin, garam-garam bismut dan aluminium.

c) Spasmolitika yang dapat melepaskan kejang-kejang otot perut (nyeri

perut) pada diare contohnya papaverin dan oksifenonium.

4. Bakteri

Nama bakteri berasal dari bahasa Yunani “bakterion” yang berarti

tongkat atau batang. Bakteri adalah mikroorganisme yang bersel satu dan

berkembang biak dengan membelah diri (aseksual), ukuran bakteri bervariasi

baik penampang maupun panjangnya. Bakteri dibagi dalam golongan gram

positif dan gram negatif berdasarkan reaksinya terhadap pewarnaan gram,

perbedaan keduanya diperlihatkan dari dinding selnya. Dinding sel bakteri

gram positif sebagian besar terdiri atas beberapa lapisan peptidoglikan yang

membentuk struktur yang tebal dan kaku. Dinding sel bakteri gram negatif

memiliki lapisan peptidoglikan yang tipis, membran luar yang terdiri dari

protein, lipoprotein, fosfolipid, lipopolisakarida dan membran dalam. Selain

itu, dinding sel bakteri gram negatif mengandung polisakarida dan lebih rentan

terhadap kerusakan mekanik dan kimia.

18
 Bakteri memiliki empat fase pertumbuhan yang dimulai dari fase

penyesuaian diri, fase ini merupakan penyesuaian bakteri ke suatu lingkungan

baru, pada fase ini tidak ada kenaikan jumlah sel melainkan peningkatan

ukuran atau besar sel. Fase kedua adalah fase logaritmik, selama fase ini

jumlah sel meningkat dari 1 menjadi 2, 2 menjadi 4, 4 menjadi 8 dan

seterusnya. Fase ketiga yaitu fase stasioner, dalam fase ini kecepatan tumbuh

sama dengan kecepatan mati sehingga jumlah sel akan konstan. Fase keempat

yaitu fase kematian, pada fase ini terjadi akumulasi bahan toksik dan zat hara

yang diperlukan oleh mikroorganisme juga berkurang sehingga bakteri akan

memasuki fase kematian.

5. Escherichia coli

Escherichia Coli adalah sutu bakteri gram negatif berbentuk batang,

bersifat anaerobik fakultatif, dan mempunyai flagela peritrika. Escherichia coli

dibedakan atas sifat serologinya berdasarkan antigen O (somatik), K (kapsul),

dan H (flagela). Keberadaan Escherichia coli dalam sumber air atau makanan

merupakan indikasi pasti terjadi kontaminasi tinja manusia. Adanya

Escherichia coli menunjukkan suatu tanda praktek sanitasi yang tidak baik

terhadap air, makanan dan susu. Escherichia coli yang terdapat pada minuman

yang masuk kedalam tubuh manusia dapat menyebabkan gejala seperti kolera,

disentri, gastroenteritis, diare dan berbagai penyakit saluran pencernaan lainnya

(Hakim, 2012).

Keracunan makanan disebabkan oleh Escherichia coli

enteropatogenik (disebut EPEC) biasanya disebabkan oleh konsumsi air atau

19
makanan yang terkontaminasi oleh Escherichia coli enteritis. EPEC berbeda

dari Escherichia coli yang secara normal terdapat didalam usus besar. EPEC

mempunyai antigen spesifik tertentu, dan menyebabkan gastroenteritis akut

atau enteritis seperti disentri pada manusia. Yang tergolong EPEC termasuk

Escherichia coli yang bersifat invasif, atau disebut EIEC (Enteroinvasif

Escherichia coli), dan Escherichia coli enterotoksigenik yang disebut juga

ETEC. EIEC dapat menembus sel-sel saluran pencernaan seperti halnya

Shigella, sedangkan ETEC memproduksi enterotoksin yang sifat-sifatnya

menyerupai toksin kolera (Irianto, 2014).

Escherichia coli terdapat secara normal dalam alat-alat percernaan

manusia dan hewan pada usus bayi dan orang dewasa jumlahnya dapat

mencapai 109 CFU (colony forming unit)/gram. Bakteri ini adalah gram

negatif, bergerak, berbentuk batang, bersifat fakultatif anaerob dan termasuk

golongan Enterobacteriaceae yang kemudia dikenali dengan bersifat komensal

maupun berpotensi pathogen (Arisman, 2009:93). Suatu serotype tertentu

bersifat entheropathogenik dan kemudian dikenal sebagai penyebab diare pada

bayi. Organisme ini terdapat pada dan tempat-tempat persiapan bahan pangan

melalui bahan baku dan selanjutnya masuk ke makanan yang yang telah

dimasak melalui tangan, permukaan alat-alat, tempat masakan dan peralatan

lainnya. Bakteri ini dikenal sebagai mikroba indikitor kontaminasi fekal dibagi

dalam dua kelompok yaitu non patogenik dan patogenik (BPOM, 2003).

20
 Gambar 2. Escherichia coli
(Sumber: Sagar, 2016)
Menurut Escherich (1885), bakteri Escherichia coli diklasifikasikan

sebagai berikut:

Domain : Bacteria

Kingdom : Eubacteria

Phylum : Proteobacteria

Class : Gammaproteobacteria

Ordo : Enterobacteriales

Family : Enterobacteriaceae

Genus : Escherichia

Species : Escherichia coli

Kuman berbentuk batang pendek (cocobacil), gram negative, ukuran

0,4 s/d 0,7µm sebagian besar gerak positif dan beberapa strain memiliki kapsul

dan tidak berspora. Pada biakan Escherichia coli membentuk koloni bulat,

konveks, halus dan pinggir-pinggir yang rata. Hemolisis pada darah dihasilkan

21
oleh beberapa strain Escherichia coli dan mempunyai morfologi warna yang

khas pada media pembeda seperti agar EMB (Jawetz, 2013).

Escherichia coli di hubungkan dengan tipe penyakit diare pada

manusia. Gejala timbul 18-48 jam setelah memakan makanan dan minuman

yang tercemar, berupa diare dan nyeri, terkadang disertai oleh demam serta

muntah. Beberapa faktor berperan dalam pencegahan Escherichia coli,

seperti keasaman lambung, keutuhan floral dan matilitas usus (Arisman,

2009:94).

Periode inkubasi ETEC berkisar 1-2 hari kemudian berlanjut dengan

timbulnya diare berair tanpa disertai darah, lendir dan leukosit. Muntah dapat

timbul, tetapi sebagian penderita tidak disertai demam. Biasanya gejala ini

akan hilang sendiri dalam kurun waktu kurang dari 5 hari. EPEC yang

menyerang terutama bayi dan anak, menyebabkan diare berair. Jika keadaan ini

menjadi parah pada anak-anak akan terjadi dehidrasi yang mengarah pada

gagal pertumbuhan. Gejala yang ditimbulkan oleh EHEC berkisar dari diare

ringan hingga colitis hemoragik yang parah. Setelah masa inkubasi 1-5 hari

dilalui,diare berair terjadi dan kerap diikuti kram perut serta muntah. Pada

kebanyakan penderita diare berdarah biasanya muncul 1-2 hari setelah gejala

pertama timbul, tetapi tidak terkait dengan keberadaan leukosit dalam tinja.

Enterotoxigenik Escherichia coli menyebabkan diare terus menerus seperti

pada kolera. Strain kuman ini mengeluarkan toksin LT dan ST. Faktor-faktor

permukaan perlekatan sel kuman pada mukosa usus penting didalam

pathogenesis diare karena sel kuman harus melekat dulu pada sel epitel mukosa

22
usus sebelum kuman mengeluarkan toksin (jawetz dkk, 2008:357).

Terdapat 4 kelas Escherichia coli yang bersifat enterovirulen. Keempat

kelas tersebut adalah (Arisman, 2009:93-94) :

a. Escherichia coli enteropatogenik (EPEC)

EPEC menyebabkan diare yang parah bagi bayi, tempat terinfeksi

EPEC terjadi di usus kecil. Menyebakan diare infatil mirip dengan

salmonellosis dengan demam, mual dan muntah.

b. Escherichia coli enteroksigenik (ETEC)

ETEC menghasilkan dua jenis toksin yang bersifat stabil dan agak

labil terhadap panas dan menyebabkan diare pada anak serta bayi, yaitu

penyakit yang mirip dengan kolera (didaerah endemis kolera) badan diare

petualang (ditularkan melalui air dan makanan). Tempat infeksi ETEC

adalah usus kecil. Menyebabkan travellers diarrhea, tinja berair, kram perut

mual dan subfebris.

c. Enterohaemorrhagic Escherichia coli (EHEC)

Tempat infeksi di usus besar, menyebabkankolitis hemoragik, nyeri

perut hebat, diare berair berlanjut dengan pengeluaran banyak darah.

d. Enteroinvasive Escherichia coli (EIEC)

EIEC menginvasi dan berproliferasi didalam sel epitel mukosa

sehingga tidak jarang menimbulkan colonic ephitelial cell death. Tempat

infeksi EIEC adalah usus besar. Menyebabkan shigella-like diarrhea, tinja

berair, berdarah, berlendir, kram perut dan demam.

23
6. Antibakteri

Zat antibakteri adalah zat yang dapat membunuh atau menghambat

pertumbuhan bakteri sehingga dapat digunakan untuk mencegah atau

mengatasi infeksi bakteri. Zat ini dapat berupa metabolit sekunder dari mikroba

tertentu (antibiotika), diisolasi dari tumbuhan atau hewan dan hasil sintesis

kimia (Sulistyaningsih, dkk., 2016). Faktor-faktor yang dapat mempengaruhi

daya antibakteri suatu bahan adalah konsentrasi bahan, jumlah dan jenis bakteri

yang diuji.

Mekanisme kerja antibakteri ada lima yaitu:

a. Menghambat sintesis dinding sel, sruktur dinding sel dapat dirusak dengan

cara menghambat pembentukkannya atau mengubah dinding sel setelah

terbentuk.

b. Mengganggu keutuhan membran sel mikroba, membran sitoplasma

mempertahankan bahan-bahan tertentu yang ada di dalam sel serta mengatur

aliran keluar masuknya bahan-bahan lain. Membran memelihara integritas

komponen-komponen selular, kerusakan pada membran ini akan

mengakibatkan terhambatnya pertumbuhan sel atau matinya sel.

c. Menghambat sintesis protein sel mikroba, hidupnya suatu sel bergantung

dengan terjaganya molekul-molekul protein dan asam nukleat dalam

keadaan alaminya. Suatu kondisi yang mengubah keadaan ini dengan

mendenaturasi protein dan asam-asam nukleat dapat merusak sel tanpa

dapat diperbaiki kembali, suhu tinggi dan konsentrasi pekat beberapa zat

kimia dapat mengakibatkan koagulasi (denaturasi) ireversible.

24
d. Mengganggu metabolisme sel mikroba, setiap enzim dari banyaknya enzim

ada yang di dalam sel merupakan sasaran potensial bagi bekerjanya suatu

penghambat. Banyaknya zat kimia telah diketahui dapat mengganggu reaksi

biokimia, penghambatan ini dapat mengakibatkan terganggunya

metabolisme atau matinya sel.

e. Penghambatan sintesis asam nukleat dan protein, dalam kehidupan normal

sel DNA, RNA dan protein memiliki peranan penting sehingga gangguan

apapun yang akan terjadi pada pembentukan atau pada fungsi zat-zat

tersebut dapat mengakibatkan kerusakan total pada sel.

Pengujian mikrobiologi memanfaatkan mikroorganisme sebagai

penentu konsentrasi komponen tertentu pada campuran kompleks kimia, untuk

mendiagnosis penyakit tertentu serta untuk menguji bahan kimia guna

menentukan potensi mutagenik atau karsinogenik suatu bahan. Pada uji ini

diukur pertumbuhan mikroorganisme terhadap agen antimikroba, kegunaan uji

antimikroba adalah diperolehnya suatu sistem pengobatan yang efektif dan

efisien.

Suatu zat aktif dikatakan memiliki potensi yang tinggi sebagai

antibakteri jika pada konsentrasi rendah memiliki daya hambat yang besar.

Menurut Sudrajat dan Ruga (2012), kriteria kekuatan antibakteri adalah sebagai

berikut:

a. Diameter zona hambat ≥ 21 mm : Daya hambat sangat kuat

b. Diameter zona hambat 11-20 mm : Daya hambat kuat

c. Diameter zona hambat 6-10 mm : Daya hambat sedang

25
 d. Diameter zona hambat ≤ 5 mm : Daya hambat lemah

7. Metode pengujian aktivitas antimikroba

Uji antibakteri dan antifungi secara garis besar terbagi menjadi tiga

kelompok besar yaitu difusi, dilusi dan bioautografi (Cos dkk., 2006). Berikut

beberapa penjelasan mengenai metode uji aktivitas antibakteri.

a. Metode Difusi

Pada metode difusi, senyawa uji pada konsentrasi tertentu

dimasukkan pada media yang telah diinokulasi dengan bakteri, selanjutnya

diukur zona hambat pada akhir inkubasi. Hasil inokulasi disimpan pada

suhu yang lebih rendah selama beberapa jam agar meningkatkan difusi

dan diameter zona hambat penghambatan (Cos dkk., 2006). Macam-macam

metode difusi sebagai berikut.

Tidak ada zona

penghambatan

0,8 mm

Zona Penghambatan
15 mm
Metode Difusi Agar

15 mm

Gambar 3. Metode Difusi Agar

(Sumber: Filho dan Cordeiro, 2014)

26
1) Metode Difusi Cakram

Metode difusi cakram disahkan oleh Clinical and Laboratory

Standards Institute (CLSI) yang digunakan untuk menguji aktivitas

antimikroba dari bakteri dan ragi. Pengujian difusi ini menggunakan

kertas cakram yang dimasukkan ke dalam media padat yang berisi kultur

bakteri (Filho dan Cordeiro, 2014). Agen antibakteri berdifusi ke dalam

agar dan menghambat pertumbuhan bakteri (Balouiri dkk., 2016).

Pengujian ini untuk mendeteksi sensitivitas atau resistensi bakteri

patogen fakultatif aerob dan anaerob (Filho dan Cordeiro, 2014).

2) Metode Difusi Sumuran

Metode difusi sumuran secara umum digunakan untuk

mengevaluasi aktivitas antibakteri dari ekstrak tumbuhan. Prosedur yang

digunakan sama dengan metode difusi cakram, permukaan atas agar

media padat diinokulasi dengan menggoreskan okulum bakteri.

Kemudian dibuat lubang dengan diameter 6 sampai 10 mm secara

aseptik dengan jarum ose steril atau tip. lalu ditambahkan agen

antibakteri atau larutan ekstrak pada konsentrasi yang diinginkan dengan

volume (20-100 µL) ke dalam sumur. Kemudian cawan agar

diinkubasi dalam kondisi yang sesuai tergantung pada mikroorganisme

uji. Agen antibakteri akan berdifusi dalam media agar dan menghambat

pertumbuhan strain bakteri yang diuji (Balouiri dkk., 2016).

27
 3) Metode Agar Plug Diffusion

Metode Agar plug diffusion sering digunakan untuk

membedakan mikroorganisme. Metode ini sama dengan metode difusi

cakram, strain bakteri dibiakkan pada media yang sesuai dengan

menggoreskan pada permukaan cawan. Selama pertumbuhan, bakteri

mensekresikan molekul yang dapat berdifusi dalam media agar. Setelah

diinkubasi, sebuah media agar silinder dipotong secara aseptis dengan

cork borer steril dan diendapkan pada permukaan agar dari cawan lain

yang sebelumnya diinokulasi dengan mikroorganisme uji. Zat berdifusi

pada media agar. Kemudian aktivitas antibakteri dari molekul bakteri

yang disekresi akan terdeteksi dengan adanya zona hambat pada sekitar

Agar plug (Balouiri dkk., 2016).

b. Metode Dilusi

Metode dilusi adalah metode yang paling tepat sebagai penentuan

nilai konsentrasi hambat karena memungkikan untuk memperkirakan

konsentrasi agen antibakteri pada media agar atau kaldu. Metode dilusi

kaldu dapat digunakan untuk mengukur secara kuantitatif aktivitas

antibakteri secara in vitro terhadap bakteri dan jamur. Nilai konsentrasi

hambat didefinisikan sebagai konsentrasi antibakteri uji yang menghambat

pertumbuhan mikroorganisme (Balouiri dkk., 2016).

Sebelum diinokulasi dengan mikroorganisme, senyawa uji pada

metode dilusi dicampur dengan media yang sesuai. Metode ini dapat

dilakukan dalam media cair maupun media padat. Pada metode dilusi

28
 ditunjukkan hasil kekeruhan yang dapat dilihat secara visual atau diperoleh

lebih akurat dengan mengukur densitasnya. Namun, sampel uji yang tidak

larut sempurna kemungkinan mengganggu pembacaan kekeruhan (Cos dkk.,

2006).

Metode dilusi berdasarkan perbenihan cair dapat dibagi menjadi

dua yaitu mikrodilusi dan makrodilusi. Menurut Soleha (2015), prinsip

pengerjaan mikrodilusi dan makrodilusi adalah sama. perbedaan kedua

metode dilusi tersebut terletak pada volumenya. Untuk makrodilusi volume

yang digunakan lebih dari 1 mL, sedangkan mikrodilusi volume yang

digunakan 0,05 mL sampai 0,1 mL. antibakteri yang digunakan disediakan

pada berbagai macam pengenceran biasanya dalam satuan µg/mL.

Mikrodilusi merupakan teknik yang lebih menguntungkan dibandingkan

makrodilusi karena lebih ekonomis dari segi bahan yang dipergunakan

(Filho dan Cordeiro, 2014).

Gambar 4. Metode Dilusi (Mikrodilusi)

(Sumber: Balouiri dkk., 2016)

c. Metode Bioautografi

Pada metode bioautografi, kromatografi lapis tipis dicelupkan ke

dalam suspensi bakteri. Kemudian, bioautogram diinkubasi pada 25 °C

29
 selama 48 jam di bawah kondisi lembab. Untuk visualisasi pertumbuhan

bakteri, sering menggunakan garam tetrazolium. Garam-garam ini

mengalami konversi warna dengan dehidrogenase dari sel-sel hidup. Reagen

p-iodonitrotetrazolium violet adalah reagen deteksi yang paling cocok.

Garam-garam ini disemprotkan ke bioautogram, yang diinkubasi pada 25 °C

selama 24 jam atau pada 37 °C selama 3-4 hari. Penggunaan Mueller Hinton

Broth dapat memberikan media cair yang cukup untuk memungkinkan

aderen atau penempelan plat KLT dan menjaga kelembapan yang sesuai

untuk pertumbuhan bakteri. Bioautografi dapat langsung dimanfaatkan

dengan baik untuk jamur atau bakteri. Metode ini adalah teknik paling

mudah untuk mendeteksi zat antijamur dan memberikan hasil yang

konsisten untuk jamur penghasil spora seperti aspergillus, penicillium dan

cladosporium (Balouiri dkk., 2016).

8. Ciprofloxacin

Ciprofloxacin merupakan senyawa flurokuinolon dengan 4-kuinolon

terfloresensi. Struktur senyawa ciprofloxacin ditunjukkan pada Gambar 5

Ciprofloxacin menunjukan perkembangan terapeutik yang lebih penting

dibandingkan dengan kuinolon lainnya karena senyawa ini memiliki aktivitas

antimikroba yang lebih luas dan efektif dalam pemberian secara oral

(Goodman, 2011).

30
 Gambar 5. Struktur kimia Ciprofloxacin
(Sumber : Cayman, 2016)

Mekanisme kerja ciprofloxacin yaitu Kuinolon menghambat

pembentukan DNA bakteri dengan menghambat topoisomerase II (DNA

girase) dan topoisomerase IV bakteri. Topoisomerase II (DNA girase)

terdapat pada bakteri Gram negatif sedangkan topoisomerase IV terdapat pada

bakteri Gram positif (Goodman dkk., 2011). Inhibisi DNA girase menghambat

relaksasi gulungan DNA yang diperlukan untuk proses transkripsi dan replikasi

normal. Inhibisi topoisomerase IV mencegah pemisahan DNA baru setelah

replikasi DNA bakteri selesai dilakukan (Katzung dkk., 2013). Terhambatnya

enzim-enzim tersebut menyebabkan tidak terbentuknya DNA bakteri sehingga

tidak terbentuk pula sel-sel bakteri yang baru. Dosis ciprofloxacin untuk diare

oral dewasa, 500 mg setiap 12 jam selama 1-5 hari. Dosis untuk Infeksi

Saluran Kemih (ISK), 250 mg setiap 12 jam selama 3 hari.

Ciprofloxacin merupakan florukuinolon lama yang memiliki daya

antibakteri kuat pada Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Klebsiella,

Enterobacter, Proteus, Haemophilus influenza, Providencia, Serratia,

Salmonella, Neisseria meningitis, Neisseria gonnorrhoea, Branhamella

catarrhalis dan Yersinea enterocolita. Terhadap gram positif daya

31
 antibakterinya kurang baik.

9. Sterilisasi

Cahyani (2014) menyatakan bahwa, sterilisasi dalam mikrobiologi

merupakan suatu cara untuk mematikan dan menghilangkan semua organisme

yang terdapat pada suatu benda. Pemindahan biakan bakteri secara aseptik

menggunakan salah satu cara sterilisasi, yaitu pembakaran. Namun, ada pula

beberapa peralatan dan media yang menjadi rusak apabila dibakar. Tiga cara

utama yang biasa dipakai dalam sterilisasi yaitu penggunaan panas, bahan

kimia, dan penyaringan atau filtrasi.

a. Sterilisasi Mekanik (filtrasi)

Sterilisasi dengan penyaringan (filtrasi) yaitu teknik sterilisasi

dengan menggunakan suatu saringan yang berpori sangat kecil yang

berukuran 0,22 mikron atau 0,45 mikron. Cairan yang akan disterilisasi

dilewatkan ke suatu saringan sehingga mikroba tertahan pada saringan

tersebut. Sterilisasi dengan penyaringan dilakukan untuk mensterilisasi

bahan yang mudah rusak jika terkena panas dan bahan yang tidak tahan

panas, misalnya larutan enzim antibiotik.

b. Sterilisasi Fisika

Sterilisasi fisika dapat dilakukan dengan cara pemanasan dan

penyinaran.

32
1) Pemanasan

(a) Pemijaran (dengan api langsung), yaitu membakar alat pada api

secara langsung. Contoh alat: jarum inokulum (jarum ose), pinset,

batang L.

(b) Panas kering, yaitu sterilisasi dengan oven kira-kira 60-180oC.

Sterilisasi panas kering cocok untuk alat yang terbuat dari kaca,

seperti erlenmeyer, tabung reaksi, cawan.

(c) Uap air panas, merupakan sterilisasi dengan konsep mirip dengan

mengukus. Bahan yang mengandung air lebih tepat menggunakan

metode ini supaya tidak terjadi dehidrasi.

(d) Uap air panas bertekanan, yaitu sterilisasi menggunakan autoklaf.

2) Radiasi

(a) Sinar Ultra Violet (UV) dapat digunakan untuk proses sterilisasi,

misalnya untuk membunuh mikroba yang menempel pada

permukaan interior Biological Safety Cabinet (BSC) atau Laminar

Air Flow (LAF) dengan disinari lampu UV.

(b) Gamma bersumber dari Cu60 dan Cs137 dengan aktivitas sebesar

50-500 kilo curie serta memiliki daya tembus sangat tinggi. Dosis

efektifitasnya adalah 2,5 MRad. Gamma digunakan untuk

mensterilkan alat-alat yang terbuat dari logam, karet serta bahan

sintesis seperti pulietilen.

33
 c. Sterilisasi Kimiawi

Sterilisasi kimiawi merupakan sterilisasi menggunakan senyawa

desinfektan. Desinfektan adalah suatu bahan kimia yang dapat

membunuh sel-sel vegetatif dan jasad renik, bersifat merusak jaringan.

Contoh desinfektan adalah alkohol, fenol, dan halogen (Cahyani, 2014).

10. Uraian Media

Media adalah bahan yang terdiri dari campuran zat-zat makanan

(nutrisi) baik bahan alami maupun buatan, yang di perlukan mikroorganisme

untuk perkembangbiakan di laboratorium secara in vitro. Mikroorganisme

memanfaatkan nutrisi media berupa molekul-molekul kecil yang dirakit untuk

menyusun komponen sel. Syarat media yang baik harus berupa molekul-

molekul rendah dan mudah larut dalam air, nutrient dalam media harus

memenuhi kebutuhan dasar mikroorganisme yang meliputi air, karbon, energi,

mineral dan faktor tumbuh, tidak mengandung zat-zat penghambat dan media

harus steril (Yuniarti, 2014).

Media pertumbuhan mikroorganisme adalah suatu bahan yang

terdiri atas campuran nutrisi (nutrient) yang digunakan oleh suatu

mikroorganisme untuk tumbuh dan berkembang biak pada media tersebut.

Mikroorganisme memanfaatkan nutrisi pada media berupa molekul-molekul

kecil yang dirakit untuk menyusun komponen selnya. Dengan media

pertumbuhan juga bisa digunakan untuk mengisolasi mikroorganisme,

identifikasi dan membuat kultur murni. Komposisi media pertumbuhan dapat

34
dimanipulasi untuk tujuan isolasi dan identifikasi mikroorganisme tertentu

sesuai dengan tujuan masing-masing pembuatan suatu media.

35
 BAB III
METODOLOGI PENELITIAN
A. Jenis Penelitian

Jenis penelitian yang akan dilakukan termasuk ke dalam jenis penelitian

eksperimen laboratorium yang dilakukan dengan mengadakan manipulasi yang

bertujuan untuk mengetahui akibat manipulasi terhadap perilaku individu yang

diamati.

B. Desain Penelitian

Desain penelitian ini dilakukan menggunakan Rancangan Acak Lengkap

(RAL), dimana setiap perlakuan dalam percobaan dirancang dengan kondisi yang

relatif homogen. Rancangan Acak Lengkap (RAL) yang terdiri dari 3 perlakuan, 2

kontrol dengan 3 kali replikasi, yang dilambangkan sebagai berikut:

Tabel 1. Uji daya hambat bakteri Escherichia coli

Diameter Zona Hambat (mm)
Kelompok Rata-rata
Replikasi Total
perlakuan (mm)
1 2 3
A
B
C
K (+)
K (-)

Keterangan :
A = Konsentrasi ekstrak batang Meistera chinensis 30%
B = Konsentrasi ekstrak batang Meistera chinensis 40%
C = Konsentrasi ekstrak batang Meistera chinensis 50%
K (+) = Kontrol positif (Ciprofloxacin 500 mg)
K (-) = Kontrol negatif (DMSO 10%)

36
 C. Waktu dan Tempat Penelitian

Penelitian akan dilaksanakan pada bulan Maret - Juli 2021 bertempat di

Laboratorium Mikrobiologi Terpadu Politeknik bina Husada Kendari.

D. Populasi dan Sampel Penelitian

1. Populasi

Populasi dalam penelitian ini adalah batang Meistera chinensis yang

terdapat di Kecamatan Abuki, Kabupaten Konawe, Provinsi Sulawesi

Tenggara.

2. Sampel

Sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah ekstrak batang

Meistera chinensis yang dibuat dengan tiga varian konsentrasi.

E. Kerangka Konsep Penelitian

Ekstrak batang Meistera Zona Hambat Escherichia

chinensis coli

Gambar 6. Skema kerangka penelitian

F. Variabel Penelitian

1. Variabel bebas : Ekstrak batang Meistera chinensis

2. Variabel terikat : Zona hambat Escherichia coli

G. Definisi Operasional Variabel

1. Ekstrak batang Meistera chinensis merupakan hasil ekstraksi dari batangnya

yang berupa ekstrak cair yang diperoleh dari ekstraksi maserasi menggunakan

pelarut etanol yang kemudian diuapkan dengan rotary evaporator sehingga

menjadi ekstrak kental.

37
2. Zona hambat Escherichia coli merupakan daerah jernih disekitar sumuran yang

menunjukkan adanya aktivitas bakteri E. coli yang dihambat.

H. Hipotesis

Ekstrak batang Meistera chinensis mampu menghambat pertumbuhan

bakteri Escherichia coli.

I. Prosedur Penelitian

1. Alat dan Bahan

a. Alat yang digunakan

Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah autoklaf, batang

pengaduk, cawan petri, cawan porselin, erlenmeyer, gelas kimia, gelas ukur,

gunting, inkubator, jarum ose, jangka sorong, batang L, cylinder cup, lampu

spritus, Laminar Air Flow, lumpang dan alu, oven, penangas air, pinset,

pisau, tabung reaksi, rotary evaporator, vortex mixer, colony counter, rak

tabung, timbangan digital, timbangan analitik, dan wadah maserasi.

b. Bahan yang digunakan

Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah metanol,

etanol 70%, aqua pro injeksi, ekstrak batang Meistera chinensis, bakteri

Escherichia coli, kain flannel, kapas, kain kasa, lakban hitam, media NA

(Nutrient Agar), kertas whatman no. 1, NaCl 0,9%, DMSO 10%, dan

Ciprofloxacin 500 mg.

38
2. Cara Kerja

a. Cara Pengambilan Sampel

Sampel batang Meistera chinensis diperoleh dari kecamatan Abuki

Kabupaten Konawe, Sulawesi Tenggara. Diambil yang sudah dewasa

dengan kriteria batang berwarna hijau tua dengan tekstur keras,

pengambilan sampel menggunakan alat berupa parang kemudian sampel

dikumpulkan dan dimasukkan dalam wadah keranjang.

b. Preparasi Sampel

Sampel yang digunakan adalah batang Meistera chinensis. Batang

Meistera chinensis ditimbang sebanyak 5 kg kemudian disortasi basah dan

dicuci bersih dengan air mengalir untuk menghilangkan kotoran yang

menempel, sampel kemudian dirajang lalu dijemur di bawah sinar matahari

dengan ditutup kain hitam. Batang yang sudah kering dihaluskan

menggunakan blender (Suryani, dkk. 2019).

c. Ekstraksi

Pembuatan ekstrak batang Meistera chinensis menggunakan

metode maserasi, serbuk batang Meistera chinensis sebanyak 500 g

dimasukkan ke dalam metanol sebanyak 2500 mL (1:5) hingga simplisia

terendam sempurna didalam pelarut dan terhindar dari cahaya matahari

langsung. Proses maserasi dilakukan selama 3x24 jam, dan dilakukan

pengadukan setiap 1x24 jam dengan menggunakan batang pengaduk.

Setelah itu ekstrak disaring menggunakan kertas Whatman no. 1 lalu

didapatkan filtratnya kemudian diuapkan menggunakan rotavapor pada suhu

39
 40oC sampai tidak ada pelarut yang menetes lagi sehingga didapatkan

ekstrak kental. Ekstrak pekat yang dihasilkan kemudian ditimbang dan

dihitung rendemennya dengan persamaan:

𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖𝑑𝑎𝑝𝑎𝑡

% Rendemen = 𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑠𝑖𝑚𝑝𝑙𝑖𝑠𝑖𝑎 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘𝑠𝑖x100%

d. Prosedur Sterilisasi Alat dan Media

1) Sterilisasi Alat

a) Siapkan alat yang akan digunakan.

b) Bersihkan alat dengan sabun dan air, kemudian dikeringkan.

c) Tutup mulut tabung reaksi dan erlenmeyer dengan menggunakan

kapas yang telah dilapisi kain kasa.

d) Bungkus tabung reaksi dan erlenmeyer menggunakan kertas.

e) Masukkan alat yang tidak berskala kedalam oven pada suhu 170oC

selama 2 jam. Sedangkan alat yang berskala dimasukkan dalam

autoklaf pada suhu 121oC selama 15 menit.

f) Keluarkan alat-alat setelah selesai.

2) Sterilisasi Media

a) Bungkus media yang telah dibuat dengan menggunakan kertas.

b) Buka tutup autoklaf serta aluminiumnya.

c) Masukkan media kedalam autoklaf.

d) Tutup rapat autoklaf, lalu di kunci rapat.

e) Sambungkan pada stok kontak.

f) Tunggu hingga mencapai suhu 121oC selama 15 menit.

40
 g) Buka tutup autoklaf lalu dikeluarkan media yang telah disterilkan.

e. Pembuatan Biakan Bakteri (Suryani, dkk., 2019)

1) Bakteri uji diambil dengan jarum ose steril

2) Ditanamkan pada media agar miring dengan cara menggores

3) Diinkubasi pada suhu 37oC selama 24 jam

f. Pembuatan Kontrol Negatif DMSO 10 %

1) Dipipet 1 mL dimetil sulfoksida

2) Dilarutkan dalam 10 ml aquades steril, lalu dikocok sampai larutan

homogen.

g. Pembuatan Varian Konsentrasi 30%, 40%, dan 50% dibuat dalam 2 ml

1) Larutan uji 30%

a) Ditimbang 0,6 g ekstrak etanol batang Meistera chinensis

b) Dilarutkan dalam 2 ml larutan DMSO 10%

2) Larutan uji 40%

a) Ditimbang 0,8 g ekstrak etanol batang Meistera chinensis

b) Dilarutkan dalam 2 mL larutan DMSO 10%

3) Larutan uji 50 %

a) Ditimbang 1 g ekstrak etanol batang Meistera chinensis

b) Dilarutkan dalam 2 mL larutan DMSO 10%

h. Pembuatan Media Uji Antibakteri (Nurhayati, dkk 2020)

1) Ditimbang Nutrient Agar (NA) sebanyak 5,75 gram

2) Dilarutkan ke dalam labu erlenmeyer dengan aquadest hingga mencapai

250 mL, kemudian dipanaskan di atas penangas air hingga homogen

41
 3) Disterilkan media menggunakan autoklaf pada suhu 121oC selama 15

menit

4) Dituang media kedalam cawan petri sekitar 20 mL dan dibiarkan hingga

memadat

i. Pembuatan Kontrol Positif ciprofloxacin

1) Digerus tablet ciprofloxacin 500 mg hingga menjadi serbuk

2) Ditimbang serbuk ciprofloxacin sebanyak 50 mg

3) Dilarutkan serbuk ciprofloxacin dalam 50 mL aqua pro injeksi, kemudian

di ambil sebanyak 1 mL untuk memperoleh larutan ciprofloxacin

50µg/50µL

4) Digenapkan sampai 50 mL aqua pro injeksi sehingga didapat larutan

kontrol positif dengan konsentrasi 1µg/50 mL

j. Pembuatan Suspensi Bakteri (Muljono, dkk,. 2016)

1) Diambil sebanyak 1 ose koloni dari media NA padat ke tabung reaksi

berisi 9 mL NaCl 0,9%

2) Dikocok hingga homogen

k. Pengujian Diameter Zona Hambat Ekstrak Batang Meistera chinensis

Bakteri Escherichia coli dengan Metode Difusi Sumuran Agar.

1) Suspensi bakteri uji diinokulasikan pada media NA padat sekitar 1-2

mL.

2) Selanjutnya diratakan menggunakan batang L dan didiamkan sampai

kering.

3) Sumuran dibuat dengan menggunakan cylinder cup.

42
 4) Selanjutnya cylinder cup di angkat secara aseptik dari cawan petri,

sehingga terbentuklah sumur-sumur yang akan digunakan

5) Dimasukkan ekstrak batang Meistera chinensis kombinasi dari tiap

konsentrasi yang akan diuji, kontrol positif ciprofloxacin 1µg serta

kontrol negatif larutan DMSO 10 % dengan menggunakan mikropipet

6) Dilakukan pengulangan secara triplo dengan cara yang sama.

7) Diinkubasikan dalam inkubator pada suhu 370C selama 24 jam.

8) Diamati zona hambat yang terjadi di sekitar sumuran kemudian diukur

diameter zona hambat secara horizontal dan vertikal dengan

menggunakan jangka sorong

l. Teknik Pengumpulan Data

Penelitian ini menggunakan teknik pengumpulan data dengan

eksperimen dan pengamatan. Pengamatan dalam penelitian adalah suatu

prosedur berencana, meliputi melihat, serta mencatat sejumlah dari taraf

aktivitas tertentu atau situasi tertentu yang ada hubungannya dengan

masalah yang diteliti. Adapun yang diamati dalam penelitian ini adalah uji

aktivitas antibakteri ekstrak batang Meistera chinensis sebagai penghambat

pertumbuhan bakteri Escherichia coli dengan mengukur zona hambat.

Zona hambat merupakan aktivitas antibakteri yang diukur menggunakan

jangka sorong.

43
 Gambar 7. Pengukuran Diameter Zona Hambat
(Sumber : Harti, 2015)

Rumus:
(𝑫𝒗 − 𝑫𝒄) + (𝑫𝒉 − 𝑫𝒄)
𝟐

Keterangan :
Dv : Diameter vertikal
Dh : Diameter horizontal
Dc : Diameter sumuran

m. Teknik Analisis Data

Data dianalisis dan diolah menggunakan Uji Analysis of Variance

(Anova) dengan Program SPSS versi 19. Data diuji terlebih dahulu dengan

uji homogenitas sebagai prasyarat analisis data sebelum melakukan uji

ANOVA. Uji homogenitas, bertujuan untuk mengetahui varian dari

beberapa populasi menunjukkan sama atau tidak (p = 0,05) . Apabila nilai

signifikan pada uji homogenitasnya lebih kecil dari p, maka varian dari

dua atau lebih kelompok populasi data adalah tidak sama. Kebalikannya,

apabila nilai signifikan lebih besar dari p, maka varian dari dua atau lebih

kelompok populasi data adalah sama (Febrianasari F. 2018).

44
3. Skema Kerja Pembuatan Simplisia dan Ekstrak Batang Meistera chinensis
dengan Metode Maserasi

Batang Meistera chinensis

1. Dipetik
2. Disortasi basah
3. Dicuci bersih
4. Dipotong
5. Dikeringkan

Simplisia

Ditimbang 500 gram serbuk simplisia

Maserasi batang Meistera chinensis

1. Direndam dengan metanol

dengan perbandingan 1:5
2. Didiamkan selama 3 hari
3. Diaduk sesekali
4. Disaring

Evaporasi 40oC

Ekstrak kental

Gambar 8. Skema Pembuatan Simplisia dan Ekstrak dengan Metode Maserasi

45
4. Skema jalannya penelitian

Batang Meistera chinensis Pembuatan media NA

1. Dicuci bersih 1. Ditimbang

2. Disortasi basah 2. Dilarutkan
3. Dipotong tipis 3. Dipanaskan
4. Dikeringkan 4. Disterilkan
5. Disortasi kering
6. Dimaserasi
Penyiapan biakan bakteri
Ekstrak batang Meistera chinensis di
1. Satu ose bakteri
evaporasi 400C
2. Diinkubasi (37oC) selama
24 jam

Ekstrak kental Pembuatan suspensi bakteri

1. Dibuat variasi konsentrasi 30%,
40%, dan 50%
2. Kontrol (+) dan kontrol (-)
1. Biakan bakteri
2. Dimasukkan kedalam tabung
reaksi yang berisi 9 mL
NaCL 0,9 %
3. Siap digunakan sebagai
suspensi induk bakteri uji

Pengujian daya hambat terhadap Escherichia coli

Pengukuran luas zona hambat terhadap Escherichia coli

Data

Analisis

Hasil

Pembahasan

Kesimpulan

Gambar 9. Skema jalannya penelitian

46
 BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN

Meistera chinensis termasuk salah satu tumbuhan dari famili Zingiberaceae

yang mempunyai potensi sebagai bahan baku obat-obatan pada industri farmasi.

Secara empiris, Meistera chinensis digunakan sebagai penambah rasa pada

makanan, nyeri, dan meningkatkan kekebalan tubuh.

A. Penyiapan Sampel

Batang Meistera chinensis diambil di Kecamatan Abuki Kabupaten

Konawe, Sulawesi Tenggara. Penyiapan sampel diawali dengan pengambilan

sampel sampai menjadi serbuk simplisia yang siap untuk diekstraksi. Bagian

batang diambil yang sudah dewasa dengan kriteria batang berwarna hijau tua

dan bertekstur keras. Sampel disortasi basah dengan tujuan untuk memisahkan

sampel yang rusak akibat proses pemanenan. Pencucian dilakukan dengan

menggunakan air mengalir untuk menghilangkan tanah dan kotoran yang

melekat pada sampel.

Perajangan dilakukan untuk memperkecil ukuran sampel dan

mempermudah proses pengeringan. Pengeringan dilakukan untuk mengurangi

jumlah kadar air dalam simplisia. Kadar air simplisia sebaiknya lebih kecil dari

10,00%. Apabila kadar air lebih besar dari 10,00% akan menyebabkan

terjadinya proses enzimatik dan kerusakan oleh mikroba yang akan

menurunkan stabilitas ekstrak (Saifudin dkk., 2011). Pengeringan dilakukan

dengan menjemur sampel di bawah sinar matahari yang ditutupi kain hitam

dengan tujuan untuk mencegah kerusakan senyawa metabolit sekunder yang

47
 ada dalam sampel. Sampel disortasi kering untuk memisahkan simplisia yang

rusak selama proses sebelum dan setelah pengeringan. Pengepakan simplisia

dilakukan di toples simplisia yang kedap udara. Penghalusan simplisia

bertujuan untuk memperluas permukaan partikel simplisia sehingga semakin

besar kontak permukaan partikel simplisia dengan pelarut dan mempermudah

penetrasi pelarut ke dalam simplisia sehingga dapat menarik senyawa-senyawa

dari simplisia lebih banyak.

B. Ekstraksi

Metode yang digunakan untuk ekstraksi adalah dengan cara maserasi

karena maserasi merupakan cara yang paling sederhana. Maserasi digunakan

dengan cara merendam serbuk simplisia dengan pelarut. Pelarut akan

menembus dinding sel dan akan masuk ke dalam rongga sel yang mengandung

zat aktif, zat aktif akan larut karena adanya perbedaan konsentrasi antara

larutan zat aktif di dalam sel dan di luar sel. Maka, larutan pekat didesak

keluar. Peristiwa tersebut berulang sehingga terjadi keseimbangan konsentrasi

antara larutan di luar sel dan di dalam sel. Pelarut yang digunakan adalah

metanol karena metanol merupakan pelarut yang bersifat universal sehingga

dapat menarik sebagian besar senyawa yang bersifat polar dan non polar pada

simplisia (Salamah dan Widyasari, 2015).

Proses ekstraksi dilakukan selama 3 hari dengan 3 jam sekali pengadukan

dengan tujuan untuk memaksimalkan proses pengambilan senyawa-senyawa

kimia yang terdapat pada sampel batang. Ekstrak yang diperoleh dievaporasi

48
 pada suhu 40oC dengan tujuan agar zat yang terkandung di dalam pelarut tidak

rusak pada suhu tinggi.

Tabel 2. Rendemen ekstrak batang Meistera chinensis

Bobot Bobot Ekstrak Rendemen
Bahan Warna
Simplisia (g) Kental (g) (%)
Batang Meistera chinensis 500 109 21,8 Coklat

Tabel 2 menunjukkan hasil esktraksi batang Meistera chinensis. Batang

Meistera chinensis sebanyak 500 g yang dimaserasi dengan 2,5 L metanol

sehingga diperoleh ekstrak kental sebanyak 109 g, dengan persentasi rendemen

21,8 %. Ekstrak batang Meistera chinensis berwarna coklat dapat dilihat pada

lampiran gambar 25.

C. Uji Aktivitas Antibakteri

Pengujian aktivitas antibakteri diawali dengan proses sterilisasi alat dan

bahan. Sterilisasi bertujuan untuk membunuh semua bentuk mikroorganisme

hidup termasuk sporanya pada alat dan bahan yang disterilkan. Metode yang

digunakan untuk menghambat aktivitas antibakteri adalah difusi sumuran

dengan medium Nutrient Agar (NA). Metode ini dilakukan untuk mengetahui

besarnya diameter hambatan yang terbentuk pada bakteri Escherichia coli.

Setelah masa inkubasi 24 jam, larutan ekstrak batang Meistera chinensis akan

berdifusi keluar untuk menghambat pertumbuhan mikroba pada medium, yang

ditandai dengan adanya zona hambat bening yang terdapat di sekeliling lubang

sumuran. Zona hambat yang terbentuk inilah yang kemudian diukur

diameternya.

49
 Medium Nutrient Agar merupakan medium yang baik sebagai tempat

tumbuhnya beberapa bakteri gram positif dan gram negatif yang dimanfaatkan

sebagai sumber nutrisi bagi pertumbuhan bakteri. Medium NA mengandung

pepton, agar dan beef extract yang berfungsi sebagai sumber nitrogen dan

sumber karbon, sumber vitamin dan beberapa senyawa lain untuk menyokong

pertumbuhan bakteri. Kontrol negatif yang digunakan yaitu DMSO 10%

karena DMSO (Dimetil sulfoksida) dapat melarutkan hampir semua senyawa

polar maupun nonpolar. Tujuan penggunaan kontrol negatif adalah sebagai

pembanding bahwa pelarut yang digunakan sebagai pengencer tidak

mempengaruhi hasil uji antibakteri dari senyawa yang akan diuji. Kontrol

positif yang digunakan yaitu antibiotik Ciprofloxacin 500 mg karena

Ciprofloxacin memiliki efek antibakteri dengan spektrum luas. Mekanisme

kerja Ciprofloxacin yaitu dengan menghambat Topoisomerase II (DNA girase)

dan Topoisomerase VI pada bakteri. Tujuan penggunaan kontrol positif adalah

untuk melihat gambaran terbunuhnya bakteri uji (Goodman dkk., 2011). Hasil

penelitian secara lengkap dapat dilihat pada tabel 3.

Tabel 3. Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak batang Meistera chinensis terhadap
Echerichia coli
Diameter Zona Hambat (mm)
Kelompok Replikasi Rata-rata
Total
perlakuan (mm)
1 2 3
A 9,4 9 8,85 27,2 9,06
B 9,9 10,4 9,75 30,05 10,01
C 11,5 11,7 10,4 33,6 11,2
K (+) 8,85 11,6 10,4 30,85 10,28
K (-) 0 0 0 0 0
Ket:
A = Konsentrasi ekstrak batang Meistera chinensis 30%
B = Konsentrasi ekstrak batang Meistera chinensis 40%
C = Konsentrasi ekstrak batang Meistera chinensis 50%
K (+) = Kontrol positif (Ciprofloxacin 500 mg)
K (-) = Kontrol negatif (DMSO 10%)

50
 Tabel 3 menunjukkan rata-rata diameter daya hambat antibakteri ekstrak

batang Meistera chinensis yang dibuat dengan beberapa konsentrasi yaitu 30%;

40% dan 50%. Semakin tinggi konsentrasi yang diberikan maka semakin tinggi

pula zona bening atau daya hambatnya.

Berdasarkan hasil pengukuran diameter zona hambat menunjukkan

bahwa ekstrak batang Meistera chinensis memiliki daya hambat sedang sampai

kuat terhadap Escherichia coli. Konsentrasi 30% dan 40% memiliki daya

hambat sedang, sedangkan konsentrasi 50% memiliki daya hambat yang kuat.

Penentuan kriteria ini berdasarkan Sudrajat dan Ruga (2012) yang melaporkan

bahwa kekuatan daya antibakteri sebagai berikut : daerah hambatan ≥ 21 mm

termasuk kategori sangat kuat, daerah hambatan 11-20 mm kategori kuat,

daerah hambatan 6-10 mm kategori sedang, dan daerah hambatan 5 mm atau

kurang termasuk kategori lemah.

Penelitian ini memperlihatkan hasil bahwa ekstrak batang Meistera

chinensis dengan konsentrasi 30%; 40% dan 50% mampu menghambat

pertumbuhan bakteri uji. Hal ini disebabkan adanya senyawa kimia tertentu

yang diduga terkandung dalam sampel batang Meistera chinensis yang

merupakan salah satu komponen kimia yang terkandung dalam batang

Meistera chinensis yang bersifat sebagai antibakteri.

Berdasarkan studi literatur, belum ada data penelitian tentang aktivitas

antibakteri batang Meistera chinensis. Akan tetapi, diperoleh data dari ekstrak

buah Meistera chinensis konsentrasi 5%, 10%, dan 15% yang dapat

menghambat bakteri Escherichia coli dengan rata-rata diameter 0,2 mm karena

51
 adanya kandungan senyawa diterpen dan metabolit sekunder. (Musdalipah,

dkk. 2021). Mekanisme kerja terpenoid sebagai antibakteri adalah bereaksi

dengan porin (protein transmembran) pada membran luar dinding sel bakteri,

membentuk ikatan polimer yang kuat sehingga mengakibatkan rusaknya porin

(Cowan, 1999).

D. Analisis Data

Analisis statistik menggunakan uji One way ANOVA aktivitas

antibakteri pada kelompok uji ekstrak menggunakan rancangan acak lengkap.

Tabel 4. Uji Varians Data dan Uji One Way Anova

Uji Ekstrak Batang Meistera chinensis Sig.
Varians Data Zona hambat ekstrak 0,059
One Way Anova Kelompok perlakuan 0,000

Tabel 4 menunjukkan bahwa nilai p > 0,05, artinya data yang ada dalam

penelitian ini memiliki varian yang sama sehingga dapat dilakukan pengujian

menggunakan One Way ANOVA. Hasil uji One Way ANOVA terhadap

kelompok perlakuan ekstrak batang Meistera chinensis memiliki nilai p = 0,000.

Karena nilai P < 0,05, maka nilai rata-rata antar kelompok perlakuan ekstrak

batang Meistera chinensis adalah berbeda bermakna (signifikan).

Tabel 5. Uji Analisis Post-Hoc

Konsentrasi 30% 40% 50% Kontrol (+) Kontrol (-)
30% - 0,150 0,005* 0,073 0,000*
40% 0,150 - 0,073 0,665 0,000*
50% 0,005* 0,073 - 0,150 0,000*
Kontrol (+) 0,073 0,665 0,150 - 0,000*
Kontrol (-) 0,000* 0,000* 0,000* 0,000* -
*. Perbedaan rata-rata signifikan pada tingkat 0,05

52
 Tabel 5 merupakan hasil uji Post-Hoc yang menunjukkan jika data

memiliki nilai p < 0,05 berarti data tersebut signifikan atau berbeda bermakna

dengan konsentrasi lain. Jika p = > 0,05 maka data tersebut tidak signifikan

atau tidak berbeda bermakna dengan konsentrasi lain. Uji Post-Hoc

menunjukkan diameter zona hambat bakteri Escherichia coli untuk konsentrasi

30% tidak memiliki perbedaan bermakna dengan konsentrasi 40% dan kontrol

positif, tetapi terdapat perbedaan bermakna pada konsentrasi 50% dan kontrol

negatif. Untuk konsentrasi 40%, tidak memiliki perbedaan bermakna dengan

konsentrasi 30%, 50%, dan kontrol positif, tetapi terdapat perbedaan bermakna

dengan kontrol negatif. Konsentrasi 50% tidak memiliki perbedaan bermakna

dengan konsentrasi 40% dan kontrol positif, tetapi terdapat perbedaan

bermakna dengan konsentrasi 30% dan kontrol negatif.

Secara keseluruhan penelitian ini pada setiap replikasi dalam berbagai

konsentrasi menunjukkan aktivitas antibakteri dengan terbentuknya zona

hambat. Hal ini membuktikan hipotesis pada penelitian ini bahwa ekstrak

batang Meistera chinensis menghambat pertumbuhan Escherichia coli dengan

metode difusi sumuran.

53
 BAB V
PENUTUP
A. Kesimpulan

Kesimpulan yang dapat diambil berdasarkan hasil penelitian ini adalah

sebagai berikut:

1. Ekstrak batang Meistera chinensis dapat menghambat bakteri Escherichia coli

ditandai dengan adanya zona bening di sekitar sumuran.

2. Daya hambat ekstrak batang Meistera chinensis pada konsentrasi 30%

berdiameter 9,06 mm termasuk kriteria daya hambat sedang, konsentrasi 40%

berdiameter 10,01 mm termasuk kriteria daya hambat sedang, dan konsentrasi

50% berdiameter 11,2 mm termasuk kriteria daya hambat kuat.

B. Saran

1. Perlu dilakukan pemanfaatan batang Meistera chinensis sebagai sumber

antibakteri alami yaitu isolasi senyawa-senyawa aktif batang Meistera

chinensis beserta uji aktivitas masing-masing senyawa aktif sehingga dapat

dipelajari senyawa manakah yang lebih dominan sebagai antibakteri.

2. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut dengan bakteri yang berbeda.

3. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk pengembangan obat herbal

sebagai antibakteri alami, serta mengembangkan jenis produk batang Meistera

chinensis sehingga lebih mudah diaplikasikan kepada masyarakat.

54
 DAFTAR PUSTAKA

Ariani P. 2016. Diare Pencegahan & Pengobatannya. Yogyakarta: Nuha

Medika.

Arisman. 2009. Keracunan Makanan. Jakarta: EGC.

Astuti SM. 2011. Skrining Fitokimia dan Uji Aktivitas Antibiotika Ekstrak
Etanol Daun, Batang, Bunga, dan Umbi Tanaman Binahong Anredera
Cordifolia (Ten) Steenis. Balai Besar Pengujian Mutu dan Sertifikasi
Obat Hewan (BBPMSOH). Fakulti Kejuteraan Kimia dan Sumber Asli
(Bioproses). Universiti Malaysia Pahang. Malaysia.

Balai Pengawas Obat dan Makanan. 2003. Higiene dan Sanitasi Pengolahan
Pangan. Diakses 15 Juli 2018
Balouiri, M., M. Sadiki, dan S. K. Ibnsouda. 2016. Methods for in Vitro
Evaluating Antimicrobial Activity : a review. Journal of
PharmaceuticalAnalysis. 6(2):71–79.

Cahyani, V.R. 2014. Petunjuk Mikrobiologi Pangan. Surakarta : Universitas

Sebelas Maret.

Cos, P., A. J. Vlietinck, D. Vanden Berghe, dan L. Maes. 2006. Anti-infective

Potential of Natural Products: How to Develop a Stronger in Vitro
“Proof-of-Concept”. Journal of Ethnopharmacology. 106(3):290–302.

Cowan, M., M., 1999. Plant Product As Antimicrobial Agents, Clinical

microbiology reviews. 12(4), 564-82

Danciu C, Vlaia L, Fetea F, dkk. 2015. Evaluation of phenolic profile,

antioxidant and anticancer potential of two main representants of
Zingiberaceae family against B164A5 murine melanoma cells.
Biological Research;48(1)

De Boer H, Newman M, Poulsen AD, Droop AJ, Fér T, Hiền LTT, et al.
Convergent morphology in Alpinieae (Zingiberaceae):
Recircumscribing Amomum as a monophyletic genus. Taxon. 2018;
67(1):6-36. doi:10.12705/671.2
Dirjen POM. 2014. Farmakope Indonesia Edisi V. Jakarta: Depkes RI

Escherich, T. 1885. Die Darmbakterien des Neugeborenen und Sauglings.

Fortschr. Med. 3: 515-522; 547-554.

55
Fariza, A. 2015. Uji aktivitas antibakteri Ekstrak Etanol Daun Cengkodok
(Melastoma malabathricum L.) Terhadap Escherichia coli secara In
Vitro. Naskah Publikasi. Fakultas Kedokteran Universitas tanjungpura,
Pontianak

Fatmawati dkk. 2016. Faktor yang Mempengaruhi Kejadian Diare Anak Usia 3-
6 Tahun di TK Raudhatul Athfal Alauddin Makassar. Journal of
Islamic Nursing 1:21-32.

Febrianasari F,. 2018. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Kirinyu

(Chromolaena odorata) Terhadap Staphylococcus aureus. Skripsi.
Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan Universitas Sanata Dharma :
Yogyakarta.

Filho, Limha, J. V. dan R. de A. Cordeiro. 2014. In Vitro and in Vivo

Antibacterial and Antifungal Screening of Natural Plant Products:
Prospective Standardization of Basic Methods. Methods and
Techniques in Ethnobiology and Ethnoecology. 311–319.
Goodman, L. S., dan A. Gilman. 2011. The Pharmacological Basis of
Therapeitics. Twelefh Edition. USA: The McGraw-Hill Companies Inc.

Haeria. Kimia Produk Alami. Makassar: Alauddin-press, 2014.

Hakim, AR, 2012, Hubungan Kondisi Higiene dan sanitasi dengan Keberadaan
Escherichia coli pada Nasi Kucing yang Dijual di Wilayah Tembalang
Semarang, Jurnal Kesehatan Masyarakat: (1)2.

Harti, S.A., 2015. Mikrobiologi Kesehatan. CV. ANDI OFFSET. Yogyakarta.

pp. 3–5.

Hidayat AA. 2008. Pengertian Ilmu Kesehatan Anak untuk Pendidikan

Kebidanan. Jakarta: Salemba Medika.

Ilyas, Asriani. Senyawa Bahan Alam. Makassar: Alauddin-Press, 2013.

Indijah S.W, Purnama F. 2016. Farmakologi. Jakarta: Kemenkes RI.

Irayanti. A. N, dan Putra. Y. G. 2020. A Narative Review Of Zingiberaceae

Family As Antibacterial agent For Traditional Medication Based On
Balinese Local wisdom. Journal of Pharmaceutical Science And
Application, 2:66-76.

56
Irianto, koes. 2014. Mikrobiologi Medis (Medical Microbiology). Bandung:
Alfabeta
Jawets. 2008. Mikrobiologi Kedokteran (Medical Mikrobiology). Jakarta:
SalembaMedika
Jawetz, Melnick & Adelberg. Medical Microbiology. New York: McGraw-Hill.
2013.
Jawetz, Melnick & Adelberg. 2014. Mikrobiologi Kedokteran. Salemba Medika:
Jakarta.

Katzung, B. G., S. B. Masters, dan A. J. Trevor. 2013. Farmakologi Dasar Dan

Klinik. Edisi 12. Jakarta: EGC.

Kemenkes RI. 2018. Data dan Informasi Profil Kesehatan Indonesia 2017.
Jakarta: Kementrian Kesehatan Republik Indonesia.

Mahon C, Lehman D, Manuselis G. Texbook of diagnostic microbiologi 4th ed.

USA: Saunders Elsevier, 2015. 420-853P

Mpila DA, Fatimawali, Wiyono WI. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol
Daun Mayana (Coleus atropurpureus [L] Benth) terhadap
Staphylococcus aureus, Escherichia coli dan Pseudomonas aeruginosa
secara InVitro. Manado: Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan
Alam Universitas Sam Ratulangi. 2012;1(1):13-21.

Muljono, P. Fatimawali. Manampiring, A. 2016. Uji aktivitas antibakteri ekstrak

daun mayana jantan (Coleus atropurpureus Benth) terhadap
pertumbuhan bakteri Streptococcus Sp. dan Pseudomonas Sp. Jurnal e-
Biomedik (eBm), 4(1).

Mulyana H, Eli K. 2015. Gambaran Pengetahuan, Pengalaman & Sikap Ibu

Terhadap Tatalaksanaan Diare Pada Anak Penderita Diare di Ruang
Anak Bawah RSUD dr. Soekardjo Tasikmalaya. Jurnal Kesehatan
Bakti Tunas Husada 13:173-180.

Musdalipah. Tee, S.A. Karmilah. Sahidin. Fristiohady, A. Yodha. A.W. 2021.

Total Phenolic and Flavonoid Content, Antioxidant, and Toxicity Test
with BSLT of Meistera chinensis Fruit Fraction from Southeast
Sulawesi. Borneo Journal of Pharmacy. 4: 6-15.

Musdalipah. Tee, S.A. Karmilah. Nurhikma, E. Fauziah, Y. Sahidin. Fristiohady,

A. Yodha. A.W. 2021. Meistera Chinensis Fruit Properties: Chemical
Compound, Antioxidant, Antimicrobial, And Antifungal Activity. IOP
Conf. Ser.: Earth Environ. Sci. 755 012014

57
Nurhayati, L.S. Yahdiyani, N. dan Hidayatulloh, A. 2020. Perbandingan
Pengujian Aktivitas Antibakteri Starter Yogurt dengan Metode Difusi
Sumuran dan Metode Difusi Cakram. Jurnal Teknologi Hasil
Peternakan, 1(2): 41-46.

Priamsari, M. dan Wibowo A. 2020. Aktivitas Antibakteri Ekstrak Perasan Daun

Mengkudu (Morinda citrifolia L.) Terhadap Escherichia coli Secara In
Vitro. Jurnal riset Kefarmasian Indonesia. 2(1)

Puteri, T. Milanda, T. (2017) Uji Daya Hambat Ekstrak daun Lidah Buaya (Aloe
vera L.) terhadap bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus.
Farmaka, 14(2): 9-17.

Puzi H, Wina Sonya, dkk. ”Isolasi dan Identifikasi Senyawa Flavonoid dari
Daun Tumbuhan Sirih Merah (Piper Crocatum Ruiz dan Pav)”. Jurnal
ISSN 2460-6472 (2015): h. 53-61.

Rini, A. A, Suprianto, dan Rahmatan, H. 2017. Skrining Fitokimia dan Uji

Antibakteri Ekstrak Etanol Buah Kawista (Limonia acidissima L,) dari
Daerah Kabupaten Aceh Besar Terhadap Bakteri Escherichia coli.
Jurnal ilmiah Mahasiswa Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan
Unsyiah. 2(1).

Sagar, A. 2016. Morphology of E. coli. Departemen Mikrobiologi, Kolese St.

Xavier, Kathmandu, Nepal.

Saifudin, Aziz., Rahayu, Viesa., Teruna & Hilwan Yuda. 2011. Standardisasi
Bahan Obat Alam. Edisi Pertama. Yogyakarta: Graha Ilmu.

Salamah, N. Dan E. Widyasari. 2015. Aktivitas Antioksidan Ekstrak Metanol

Daun Kelengkeng (Euphoria longan (L) Steud.) Dengan Metode
Penangkapan Radikal 2,2’-difenil-1-pikrilhidrazil, Pharmaciana. 5(1):
25-34

Soleha, tri umiana. 2015. Uji Kepekaan terhadap Antibiotik. Bagian

MikrobiologiFakultas Kedokteran Universitas Lampung. 3–7.
Sulistyaningsih, Rr, dkk. “Uji Aktivitas Ekstrak Etanol Bayam Duri
(amaranthus spinosus) Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus dan
Pseudomonas aeruginosa dengan Metode Difusi Agar”. Jurnal
Farmaka 14, 1 (2016): 3.

Sumampouw, O. J,. 2018. Uji Sensitivitas Antibiotik Terhadap Bakteri

Escherichia coli Penyebab Diare Balita di Kota manado. Journal of
Current Pharmaceutical Sciences. 2(1).

58
Suryani, N. Nurjanah, D. dan Indriatmoko, D. 2019. Aktivitas Antibakteri
Ekstrak Batang Kecombrang (Etlingera elatior (Jack) R.M.Sm.)
Terhadap Bakteri Plak Gigi Streptococcus mutans. Journal homepage:
http://jkk.unjani.ac.id/index.php/jkk. 2(1): 23-29.

Susanto, D., Sudrajat dan R. Ruga. 2012. Studi Kandungan Bahan Aktif
Tumbuhan Meranti Merah (Shorea leprosula Miq) Sebagai Sumber
Senyawa Antibakteri. Mulawarman Scientifie. 11(2): 181-190.

Tjay TH, Kirana R. 2013. Obat-Obat Penting Kasiat, Penggunaan dan Efek-
Efek Sampingnya. E ke-6, cetakan ke-3. Jakarta: Gramedia.

WHO. 2013. Diarrheal Disease. USA: WHO

WHO. 2017. Diarrhoeal disease. https://www.who.int/news-room/fact-

sheets/detail/diarrhoeal-disease (Maret, 2021).

Wiryani C, I Dewa NW. 2007. Pendekatan Diagnosik dan Terapi Diare Kronis.
Jurnal Penyakit Dalam 8: 66-78.

Yuniarti, Tuty. 2014. Media dan Reagensia. Bahan Ajar Jurusan Analis
kesehatan Poltekkes Kementrian Kesehatan Kendari.

59
60
Lampiran 1. Perhitungan

1.1 Perhitungan Rendemen Ekstrak

𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖𝑑𝑎𝑝𝑎𝑡

% Rendemen = 𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑠𝑖𝑚𝑝𝑙𝑖𝑠𝑖𝑎 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘𝑠𝑖x100%

109 𝑔𝑟𝑎𝑚
% Rendemen = 500 𝑔𝑟𝑎𝑚 x100%

= 21,8 %

1.2 Perhitungan pembuatan NA (Nutrient Agar) sebanyak 250 mL

23
NA = 1000 𝑥 250 = 5,75 𝑔𝑟𝑎𝑚

1.3 Perhitungan DMSO 10% dalam 10 mL

10
𝐷𝑀𝑆𝑂 = 𝑥 10 = 1 𝑔𝑟𝑎𝑚
100

1.4 Perhitungan varian konsentrasi ekstrak batang Meistera chinensis

1) Konsentrasi 30% dalam 2 mL

30
𝑥 2 = 0,6 𝑔𝑟𝑎𝑚
100

2) Konsentrasi 15% dalam 2 mL

40
𝑥 2 = 0,8 𝑔𝑟𝑎𝑚
100

3) Konsentrasi 20% dalam 2 mL

50
𝑥 2 = 1 𝑔𝑟𝑎𝑚
100

1.5 Perhitungan zona hambat bakteri

Replikasi 1

(+) 1,6 + (5 x 0,02) = 1,61 cm

1,7 + (34 x 0,02) = 1,76 cm

(30%) 1,7 + (30 x 0,02) = 1,76 cm

1,7 + (12 x 0,02) = 1,72 cm

61
(40%) 1,8 + (39 x 0,02) = 1,87 cm

1,7 + (14 x 0,02) = 1,72 cm

(50%) 1,9 + (28 x 0,02) = 1,95 cm

1,9 + (32 x 0,02) = 1,96 cm

Replikasi 2

(+) 1,9 + (19 x 0,02) = 1,93 cm

1,9 + (48 x 0,02) = 1,99 cm

(30%) 1,6 + (43 x 0,02) = 1,68 cm

1,7 + (14 x 0,02) = 1,72 cm

(40%) 1,8 + (31 x 0,02) = 1,86 cm

1,8 + (11 x 0,02) = 1,82 cm

(50%) 1,9 + (35 x 0,02) = 1,97 cm

1,9 + (36 x 0,02) = 1,97 cm

Replikasi 3

(+) 1,8 + (33 x 0,02) = 1,86 cm

1,8 + (12 x 0,02) = 1,82 cm

(30%) 1,6 + (8 x 0,02) = 1,61 cm

1,7 + (32 x 0,02) = 1,76 cm

(40%) 1,7 + (46 x 0,02) = 1,79 cm

1,7 + (30 x 0,02) = 1,76 cm

(50%) 1,8 + (26 x 0,02) = 1,85 cm

62
 1,8 + (24 x 0,02) = 1,84 cm

Rumus :

(𝐷𝑣−𝐷𝑐)+ (𝐷ℎ−𝐷𝑐)
2

Replikasi 1

(1,61−0,8)+ (1,76−0,8) 1,77

= = 0,88 𝑐𝑚 = 8,85 mm
2 2

(1,76−0,8)+ (1,72−0,8) 1,88

= = 0,94 𝑐𝑚 = 9,4 mm
2 2

(1,87−0,8)+ (1,72−0,8) 1,99

= = 0,99 𝑐𝑚 = 9,9 mm
2 2

(1,95−0,8)+ (1,96−0,8) 2,31

= = 1,15 𝑐𝑚 = 11,5 mm
2 2

Replikasi 2

(1,93−0,8)+ (1,99−0,8) 2,32

= = 1,16 𝑐𝑚 = 11,6 mm
2 2

(1,68−0,8)+ (1,72−0,8) 1,8

= = 𝑂, 9 𝑐𝑚 = 9 mm
2 2

(1,86−0,8)+ (1,82−0,8) 2,08

= = 1,04 𝑐𝑚 = 10,4 mm
2 2

(1,97−0,8)+ (1,97−0,8) 2,34

= = 1,17 𝑐𝑚 = 11,7 mm
2 2

Replikasi 3

(1,86−0,8)+ (1,82−0,8) 2,08

= = 1,04 𝑐𝑚 = 10,4 mm
2 2

(1,61−0,8)+ (1,76−0,8) 1,77

= = 0,88 𝑐𝑚 = 8,85 mm
2 2

(1,79−0,8)+ (1,76−0,8) 1,95

= = 0,97 𝑐𝑚 = 9,75 mm
2 2

(1,85−0,8)+ (1,84−0,8) 2,09

2
= 2
= 1,04 𝑐𝑚 = 10,4 mm

63
Rumus :

𝑟𝑒𝑝𝑙𝑖𝑘𝑎𝑠𝑖 1 + 𝑟𝑒𝑝𝑙𝑖𝑘𝑎𝑠𝑖 2 + 𝑟𝑒𝑝𝑙𝑖𝑘𝑎𝑠𝑖 3

𝑝𝑒𝑟𝑙𝑎𝑘𝑢𝑎𝑛 =
3

Konsentrasi 30%

9,4 + 9 + 8,8 27,2

= = 9,06 𝑚𝑚
3 3

Konsentrasi 40%

9,9 + 10,4 + 9,75 30,05

= = 10,01 𝑚𝑚
3 3

Konsentrasi 50%

11,5 + 11,7 + 10,4 33,6

= = 11,2 𝑚𝑚
3 3

Kontrol (+)

8,85 + 11,6 + 10,4 30,85

= = 10,28 𝑚𝑚
3 3

64
Lampiran 2. Tabel Statistika (SPSS 19)

Tabel 6. Rata-rata Daya Hambat E. coli

N Mean Std. Std. Error 95% Confidence Interval Minimum Maximum

Deviation for Mean

Lower Upper
Bound Bound

konsentrasi 30% 3 9.07 .306 .176 8.31 9.83 9 9

konsentrasi 40% 3 10.01 .361 .208 9.10 10.90 10 10
konsentrasi 50% 3 11.20 .700 .404 9.46 12.94 10 12
kontrolpositif
3 10.28 1.405 .811 6.78 13.76 9 12
ciprofloxacin
kontrolnegatif DMSO
3 .00 .000 .000 .00 .00 0 0
10%
Total 15 8.11 4.299 1.110 5.73 10.49 0 12

Tabel 7. Varians Data

Levene Statistic df1 df2 Sig.

3.261 4 10 .059

Tabel 8. One Way Anova

Sum of Squares Df Mean Square F Sig.

Between Groups 253.376 4 63.344 117.886 .000

Within Groups 5.373 10 .537
Total 258.749 14

65
 Tabel 9. Post-Hoc
Dependent Variable: DAYA HAMBAT Escherichia coli
LSD

(I) EKSTRAK (J) EKSTRAK BATANG Mean Std. Error Sig. 95% Confidence
BATANG Meistera chinensis Difference (I- Interval
Meistera J) Lower Upper
chinensis Bound Bound

konsentrasi 40% -.933 .599 .150 -2.27 .40

konsentrasi 50% -2.133* .599 .005 -3.47 -.80

konsentrasi 30%
kontrolpositif ciprofloxacin -1.200 .599 .073 -2.53 .13

kontrolnegatif DMSO 10% 9.067* .599 .000 7.73 10.40

konsentrasi 30% .933 .599 .150 -.40 2.27
konsentrasi 50% -1.200 .599 .073 -2.53 .13
konsentrasi 40%
kontrolpositif ciprofloxacin -.267 .599 .665 -1.60 1.07
kontrolnegatif DMSO 10% 10.000* .599 .000 8.67 11.33
konsentrasi 30% 2.133* .599 .005 .80 3.47
konsentrasi 40% 1.200 .599 .073 -.13 2.53
konsentrasi 50%
kontrolpositif ciprofloxacin .933 .599 .150 -.40 2.27
kontrolnegatif DMSO 10% 11.200* .599 .000 9.87 12.53
konsentrasi 30% 1.200 .599 .073 -.13 2.53
kontrolpositif konsentrasi 40% .267 .599 .665 -1.07 1.60
ciprofloxacin konsentrasi 50% -.933 .599 .150 -2.27 .40
kontrolnegatif DMSO 10% 10.267* .599 .000 8.93 11.60
konsentrasi 30% -9.067* .599 .000 -10.40 -7.73

konsentrasi 40% -10.000* .599 .000 -11.33 -8.67

kontrolnegatif
konsentrasi 50% -11.200* .599 .000 -12.53 -9.87
DMSO 10%

kontrolpositif ciprofloxacin -10.267* .599 .000 -11.60 -8.93

*. The mean difference is significant at the 0.05 level.

66
Lampiran 3. Dokumentasi Kegiatan Penelitian

Gambar 10. Proses pengambilan sampel

Gambar 11. Batang meistera chinensis

67
 Gambar 12. Pencucian sampel menggunakan air mengalir

Gambar 13. Pengupasan/pemisahan kulit batang dengan batang bagian dalam

68
 Gambar 14. Perajangan batang Meistera chinensis

Gambar 15. Batang Meistera chinensis yang telah dirajang

69
 Gambar 16. Penimbangan batang Meistera chinensis

Gambar 17. Pengeringan di bawah sinar matahari yang telah ditutupi dengan kain hitam

70
Gambar 18. Penimbangan simplisia kasar

Gambar 19. Penghalusan sampel

71
 Gambar 20. Penimbangan simplisia halus

Gambar 21. Penuangan pelarut metanol ke dalam simplisia

72
Gambar 22. Simplisia yang telah direndam dengan metanol

Gambar 23. Ekstrak cair yang telah disaring

73
 Gambar 24. Evaporasi

Gambar 25. Ekstrak kental batang Meistera chinensis

74
Gambar 26. Pencucian alat dengan air mengalir dan sabun

Gambar 27. Pengeringan alat menggunakan tisu

75
Gambar 28. Alat seperti tabung reaksi, erlenmeyer, dan gelas ukur ditutup dengan kapas

Gambar 29. Alat dibungkus menggunakan kertas

76
 Gambar 30. Sterilisasi alat

Gambar 31. Penimbangan media NA sebanyak 5,75 g, kemudian dilarutkan dengan

aquadest steril sebanyak 250 mL

77
 Gambar 32. Dipanaskan di atas magnetik heated stirrer hingga homogen

Gambar 33. Media dibungkus dengan kertas, kemudian disterilisasikan menggunakan

autoklaf

78
Gambar 34. Dituang media ke cawan petri masing-masing 20 mL, kemudian didiamkan
hingga padat

Gambar 35. Pengambilan 9 mL NaCl 0,9 %

79
Gambar 36. Diambil 1 ose bakteri Escherichia coli, kemudian dicampurkan dengan
NaCl 0,9%

Gambar 37. Dihomogenkan menggunakan vortex mixer

80
 Gambar 38. Dipipet 1 mL DMSO kedalam gelas kimia

Gambar 39. Dilarutkan DMSO dengan aquadest steril sebanyak 10 mL

81
 Gambar 40. Digerus 1 tablet ciprofloxacin 500 mg hingga menjadi serbuk halus

Gambar 41. Ditimbang serbuk ciprofloxacin sebanyak 0,05 g (50 mg), kemudian dilarutkan
dengan aquadest steril sebanyak 50 mL

82
Gambar 42. Diambil 1 mL larutan Ciprofloxacin dan dicukupkan kembali menggunakan
aquadest steril sebanyak 50 mL

Gambar 43. Larutan kontrol positif ciprofloxacin 1µg

83
 Gambar 44. Penimbangan ekstrak 30%, 40%, dan 50%

Gambar 45. Dilarutkan dengan DMSO 10% sebanyak 2 mL pada masing-masing

konsentrasi, kemudian dihomogenkan menggunakan vortex mixer

84
 Gambar 46. Larutan ekstrak konsentrasi 30%, 40%, 50%, kontrol positif, dan kontrol
negatif

Gambar 47. Diinokulasikan suspensi bakteri sebanyak 2 mL, kemudian diratakan dengan
batang L

85
Gambar 48. Dibuat sumuran menggunakan cylinder cup secara aseptik

86
 Gambar 49. Dipipet masing-masing larutan uji ke dalam sumuran

Gambar 50. Diinkubasi di dalam inkubator pada suhu 37oC selama 24 jam

87
Gambar 51. Hasil pengujian replikasi 1

Gambar 52. Hasil pengujian replikasi 2

88
 Gambar 53. Hasil pengujian replikasi 3

Gambar 54. Pengukuran zona bening menggunakan jangka sorong secara vertikal dan
horizontal, kemudian dicatat hasil pengamatan

89
90
91