Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

J.Sep.Sci. 2007,30,1229 – 1234 EB Walker 1229

Edward B.Walker Kertas Asli

Departemen Kimia, Universitas
Negeri Weber, Ogden, Utah, AS
Analisis HPLC xanthone terpilih dalam
buah manggis
Xanthone adalah senyawa kimia unik yang ditemukan di alam, terdiri dari sistem
aromatik trisiklik dengan berbagai substituen fenolik, metoksi, dan isoprena,
sehingga menimbulkan banyak turunan. Mereka larut dalam berbagai tingkat
pelarut mulai dari alkohol hingga heksana. Campuran pelarut optimal aseton/air
(80:20) secara selektif dan efektif mengekstraksi berbagai macam xanton. Analisis
HPLC selanjutnya menggunakan standar C-18 RP dan gradien 30 menit dari 65 – 90%
MetOH dalam asam format 0,1% mendeteksi dan memisahkan banyak xanthone
yang berbeda dengan deteksi UV pada 254 nm. Xanthone alpha-mangostin, 8-
desoxygartanin, gartanin, beta-mangostin, 3-mangostin, dan 9-
hydroxycalabaxanthone telah diekstraksi, diidentifikasi, dan ditentukan secara
kuantitatif menggunakan metode ini.Garcinia mangostana.

Kata kunci:Garcinia mangostana /HPLC / Manggis /Manggis /Xanthone/ Diterima:

18 Januari 2007; direvisi: 16 Februari 2007; diterima: 18 Februari 2007
DOI 10.1002/jssc.200700024

1. Perkenalan
Xanthone adalah senyawa alami yang mengandung
komponen struktural kimia yang khas, yaitu sistem cincin
aromatik trisiklik (Gbr. 1). Paling sering, sistem cincin ini
diganti dengan berbagai kelompok isoprena, fenolik, dan
metoksi yang menimbulkan berbagai macam
kemungkinan struktur.
Penemuan aktivitas biologis yang ditunjukkan oleh xanthone
alami telah meningkatkan minat dan permintaan untuk produk
suplemen nutrisi yang mengandung bahan-bahan ini. Xanthone
telah dilaporkan memiliki aktivitas antioksidan [1, 2], antimalaria
[3], antimikroba [4 – 6], dan antijerawat [7]. Xanthone dari
Gutiferae menunjukkan sifat antiinflamasi dan dilaporkan
menunjukkan aktivitas antiulkus juga [8]. Matsumotodkk. [9],
melaporkan enam xanthones individu dariGarcinia mangostana
pericarp, semua menunjukkan efek penghambatan
pertumbuhan pada sel leukemia manusia. Xanthone yang dipilih
dari buah yang sama ini menghambat oksidasi lipoprotein [10]
dan menghambat pelepasan histamin dan sintesis prostaglandin
[11]. Gambar 1.Struktur kimia xanthone.
Xanthone telah diisolasi dari tanamanClusiaceae
(Gutiferae)keluarga, termasuk batangGarcinia multiflora mengisolasi xanthone terpilih dari spesies ini dan
[12], kayu inti dariG.manggis [13] serta bagian anatomi kemudian mendemonstrasikan interkonversi kimia
lainnya dari spesies ini [14]. Jeffersondkk. [15], xanthone dari satu ke yang lainmelaluidemetilasi selektif.
Meskipun banyak peneliti telah berhasil mengisolasi
xanthonesmelaluiekstraksi lengkap dan skema pemisahan, ada
Korespondensi:Dr. Edward B. Walker, Departemen Kimia, Weber
State University, Ogden, Utah 84403-2503, AS Surel: beberapa metode analisis kuantitatif yang dilaporkan dalam
ewalker@weber.edu Fax:801-626-7445 literatur. Dalam satu kasus, Bodkk. [16] laporkan metode
pemisahan HPLC dan CE menggunakan campuran sembilan

saya2007 WILEY-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim www.jss-journal.com

1230 EB Walker
standar yang dimurnikan. Namun, ada kekurangan pasti
metode analisis yang cepat dan dapat diandalkan untuk
xanthone dalam keadaan alaminya. Sebuah metode untuk
ekstraksi yang cepat dan efisien yang digabungkan dengan
analisis HPLC dijelaskan yang dapat membantu dalam
penentuan kuantitatif xanthone dari sumber alaminya.
2. Percobaan
2.1 Instrumentasi
Eksperimen HPLC dilakukan menggunakan Waters Alliance
System yang dilengkapi dengan degasser vakum,
pencampuran pelarut kuaterner, autosampler, dan detektor
array dioda Waters 996. Spektrum UV dikumpulkan di
kisaran 200 – 400 nm, mengekstraksi 254 nm untuk
kromatogram. Perangkat lunak Waters Millennium32
digunakan untuk kontrol instrumen, pengumpulan data, dan
pemrosesan data. Kolomnya adalah Waters Nova-Pak C-18
(3,96150 mm2). Fase gerak terdiri dari A: 0,1% asam format
dalam air dan B: metanol; pemisahan optimal dicapai
dengan menggunakan gradien 65 hingga 90% B selama 0 –
30 menit pada laju aliran 1,0 mL/menit. Volume injeksi untuk
semua sampel dan standar adalah 10akuL
2.2 Bahan Kimia
Xanthone sintetis, 97% dibeli dari Aldrich Chemical
(Katalog Aldrich# X600, CAS# 90-47-1). Standar xanthone
alami seperti alpha-mangostin, beta-mangostin, 3-
mangostin, gartanin, 8-desoxygartanin, dan 9-
hydroxycalabaxanthone dibeli dari Chroma-Dex (2952 S
Daimler St., Santa Ana, CA, 92705). Kulit buah manggis
yang dikeringkan dan digiling diperoleh dari Xango, LLC
(3098 West Executive Parkway, Lehi, Utah 84043, USA).
Metanol, aseton, dan asam format semuanya kelas HPLC.
Air murni disiapkan menggunakan sistem Milli-Q
(Millipore, Bedford, MA).
2.3 Isolasi standar
Standar xanthone diisolasi di laboratorium kami dengan
mencampurkan 10 kg kulit buah manggis kering utuh dengan
50 L heksana dan pencampuran pada suhu 608C selama 8 jam.
Setelah penyaringan, heksana dihilangkan dengan penguapan
roto di bawah tekanan yang dikurangi. Padatan yang dihasilkan
dilarutkan kembali dalam metanol. Alfa-mangostin
direkristalisasi dari larutan ini setelah menambahkan sedikit air
(1:20) ke dalam larutan metanol hangat dan dibiarkan dingin.
Lebih banyak alfa-mangostin dan lima xanthone lainnya
dimurnikan dengan HPLC preparatif, menggunakan sistem
pelarut yang sama dan deteksi UV seperti untuk metode
analitik. Kolom persiapan (Waters Nova-Pak HR C18 6akum,
196300 mm2) memberikan pemisahan yang sangat baik
ketika volume 1,0 mL ekstrak disuntikkan dan
saya2007 WILEY-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim
J.Sep.Sci. 2007,30,1229 – 1234
gradien 65 – 90%B diperpanjang menjadi 0 – 140 menit
pada laju alir 10,0 mL/menit. Fraksi dari beberapa
suntikan dikumpulkan dengan pengumpul fraksi Gilson
otomatis dan dikumpulkan. Padatan xanthone individu
diperoleh kembali dengan penguapan roto dan
direkristalisasi dari larutan metanol-air.
3. Hasil dan Pembahasan
3.1 Persiapan sampel
Xanthone alami tidak larut dalam air tetapi larut dalam
berbagai pelarut lain, mulai dari polaritas metanol
sampai heksana. Campuran aseton-air 80:20 (aseton/air)
adalah pelarut yang sangat baik untuk ekstraksi xanton
dari sumber alaminya seperti buah-buahan. Hal ini
disebabkan oleh kelarutan xanthone yang sangat baik
dalam campuran pelarut ini dan kemampuan sistem
pelarut ini untuk menembus matriks sampel selama
ekstraksi. Campuran 80:20 aseton/air juga kuat,
menunjukkan tidak ada perubahan total hasil ekstraksi
xanthone ketika diubah di kisaran 70 – 90% aseton dalam
air. Ekstraksi 0,1 g kulit buah manggis yang dikeringkan
dan digiling halus dalam 50 mL 80:20 aseton/air selama
30 menit pada suhu kamar menghasilkan penghilangan
xanton secara kuantitatif.
Untuk menyiapkan sampel untuk analisis HPLC, kulit buah
manggis yang dikeringkan dan digiling diekstraksi secara
kuantitatif dengan mencampurkan 0,1 g dengan 40 mL aseton/
air 80:20 dalam labu takar 50 mL dan diaduk kuat-kuat pada
pengocok pergelangan tangan selama 30 menit. Setelah
pengenceran akhir menjadi 50 mL dengan tambahan 80:20
aseton/air, sampel disaring melalui 0,45akum filter PTFE dan 10
akuL larutan yang dihasilkan disuntikkan ke dalam HPLC.
Efisiensi ekstraksi divalidasi dengan memasukkan sampel
ke skema ekstraksi lengkap, kemudian menghilangkan 50%
suspensi ekstraksi dari labu ekstraksi. Media ekstraksi
aseton/air 80:20 segar ditambahkan untuk menggantikan
volume media yang dibuang, sehingga mengencerkan
suspensi ekstraksi sebesar 50%. Setelah 30 menit
pengocokan yang kuat, suspensi yang dihasilkan dianalisis
dengan prosedur yang sama seperti ekstraksi asli.
Perbedaan konsentrasi untuk masing-masing analit selama
prosedur pengenceran rangkap tiga adalah 48,4 – 53,6%,
menunjukkan bahwa media ekstraksi memang mampu
mengekstrak masing-masing enam xanthone secara
kuantitatif dari matriks sampel.
Pemeriksaan lebih lanjut pada efisiensi ekstraksi
dilakukan dengan menambahkan standar referensi ke
matriks sampel sebelum ekstraksi. Tingkat lonjakan 15
dan 30% ke tingkat xanthone asli dalam matriks sampel
secara kuantitatif pulih dalam kisaran 98,0 – 104,3%
untuk setiap standar, selanjutnya memperkuat prosedur
ekstraksi (Tabel 1).
www.jss-journal.com
J.Sep.Sci. 2007,30,1229 – 1234 Kromatografi cair 1231

Tabel 1.Data efisiensi ekstraksi xanthone

puncak xanthone Pengenceran 50% 15% lonjakan 30% lonjakan Pemulihan rata-rata
(% mengubah) pemulihan pemulihan (%)

3-Isomagostin 50.3 100,7 101.0 100,9

8-Desoksigartanin 50.7 99,0 98.9 98.9
Gartanin 48.4 98.1 96.1 97.1
Alpha-mangostin 51.2 98.4 98.0 98.2
9-Hydroxycalabaxanthone 53.6 99.2 99.7 99.4
Beta-mangostin 56.6 102.8 104.3 103.6

Gambar 2.Kromatogram HPLC ekstrak kulit buah manggis. Plot bawah diperluas pada skala absorbansi untuk mengungkapkan
banyak puncak xanthone minor yang ada dalam ekstrak.

3.2 Hasil kromatografi

Masing-masing puncak xanthone diselesaikan dengan baik dari
puncak tetangga dan menampilkan simetri puncak yang sangat baik
dan efisiensi pemisahan, seperti yang terlihat pada Gambar. 2 dan
Tabel 2. Sifat kromoforik yang unik dari xanthone membuat
mereka mudah diidentifikasi dari spektrum penyerapan dioda-array
UV mereka. Semua spektrum unik memiliki puncak serapan split
yang kuat dengan kisaran maksimum 240 – 300 nm. Selain itu,
puncak tunggal sekunder dari kepunahan yang sedikit lebih rendah
diamati pada 310 – 370 nm (Gbr. 3).

saya2007 WILEY-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim www.jss-journal.com

1232 EB Walker J.Sep.Sci. 2007,30,1229 – 1234

Meja 2.Hasil kesesuaian sistem kromatografi

puncak xanthone Waktu retensi Efisiensi Resolusi Asimetri puncak

(menit) (piring)

3-Isomagostin 12,7 19 204 T/A 0,87

8-Desoksigartanin 16.2 33 907 10.27 0,94
Gartanin 19.9 55 225 10.07 0,84
Alpha-mangostin 21.0 58 431 2.88 0,79
9-Hydroxycalabaxanthone 26.7 85 010 14,73 0,92
Beta-mangostin 28.2 110 964 2.50 0,95

Gambar 3.Plot indeks spektrum. Karakteristik spektrum serapan UV pada 200 – 400 nm secara jelas mengidentifikasi komponen dengan sifat
seperti xanthone.

Alpha-mangostin adalah puncak yang paling menonjol
dalam kromatogram, diikuti oleh 8-desoxygartanin dan
betamangostin. Identifikasi yang tepat dari xanthone ini
serta 3-mangostin, gartanin, dan 9-HC-xanthone dicapai
dengan analisis standar murni mereka. Keenam
xanthone ini diisolasi dengan prepara-
kromatografi aktif, dikumpulkan, dan direkristalisasi dari
larutan alkohol-air. Waktu retensi dan spektrum UV dari
senyawa yang diisolasi ini digunakan untuk mengidentifikasi
dan mengukurnya. Selain itu, standar komersial independen
dibeli dan digunakan untuk membandingkan identitas dan
faktor respons detektor individual.

saya2007 WILEY-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim www.jss-journal.com

J.Sep.Sci. 2007,30,1229 – 1234 Kromatografi cair 1233

Tabel 3.Waktu retensi xanthone dan faktor respons

standar xanthone Waktu retensi Kemiringan Jumlah R2 Tanggapan

(menit) plot kalibrasi tingkat kalibrasi faktor

Xanthone sintetis 4.4 2.80E + 04 7 1.0000 1.00

3-Mangostin 12,7 3.64E + 04 6 0,9996 1.30
8-Desoksigartanin 16.2 2.90E + 04 5 0,9969 1.03
Gartanin 19.9 2.59E + 04 7 0,9937 0,92
Alpha-mangostin 21.0 3.90E + 04 6 0,9988 1.39
9-Hydroxycalabaxanthone 26.7 1.31E + 04 6 0,9981 0,47
Beta-mangostin 28.2 3.73E + 04 5 0,9989 1.33

Deteksi: Area puncak terintegrasi pada UV-254 nm; unit konsentrasi:akug/mL.

Tabel 4.Contoh data percobaan : Kulit buah manggis kering

Xanthone Waktu retensi Daerah puncak Tanggapan Konsentrasi Xanthone

(menit) pada 254 nm faktor percobaan (akug/g)

3-Mangostin 12,7 76 864 1.30 1.05E + 03

8-Desoksigartanin 16.2 874 970 1.03 1.50E + 04
Gartanin 19.9 108529 0,92 2.1E + 03
Alpha-mangostin 21.0 4 332 678 1.39 5.51E + 04
9-Hydroxycalabaxanthone 26.7 23 988 0,47 9.1E + 02
Beta-mangostin 28.2 127 656 1.33 1.70E + 03

Persiapan sampel: 0,1007 g kulit kering yang digiling diekstraksi dengan 50,00 mL 80:20 aseton/air.

3.3 Faktor respons detektor
Faktor respons detektor untuk xanthone individu
ditentukan dengan menyiapkan larutan kalibrasi multi-
level dari xanthone murni dan memasukkannya ke
analisis kromatografi di bawah kondisi yang sama seperti
yang digunakan untuk pemisahan ekstrak xanthone
yang lebih rumit. Kesepakatan yang sangat baik diamati
antara standar terisolasi dan standar komersial (lihat
Tabel 3).
Xanthone sintetis (tidak tersubstitusi) juga dievaluasi
sebagai standar potensial. Xanthone ini terelusi pada waktu
elusi yang jauh lebih pendek, jauh di depan sebagian besar
xanthone tersubstitusi alami. Tidak ada xanthone yang
diamati dalam ekstrak buah manggis, menjadikannya
sebagai standar internal yang sangat baik. Lebih lanjut,
faktor responsnya pada 254 nm mirip dengan banyak
xanton yang terjadi secara alami.
hadir pada konsentrasi yang sangat rendah. Masing-masing
xanthone yang mungkin ini diselesaikan dengan baik dari xanthone
yang dikenal yang diidentifikasi dalam metode ini dan menawarkan
peluang lebih lanjut untuk identifikasi masa depan dan analisis
selanjutnya.
4 Penutup
Metode analisis HPLC ini menunjukkan selektivitas dan
resolusi yang sangat baik untuk enam senyawa xanthone
yang berbeda dalam ekstrak buah manggis, dalam
jangka waktu yang relatif singkat sekitar 30 menit.
Ekstraksi dengan campuran 80:20 aseton/air adalah
metode yang sangat baik dan kuat untuk ekstraksi
preferensi xanthone dari sumber alaminya. Enam
xanthone spesifik telah diidentifikasi dan faktor respons
relatifnya ditentukan.

3.4 Hasil
5 Referensi
Alpha-mangostin hadir pada konsentrasi tertinggi di kulit
buah manggis kering pada konsentrasi 5510akug/g.
Xanthone lain dalam urutan konsentrasi yang menurun
adalah 8-desoxygartanin, gartanin, beta-mangostin, 3-
mangostin, dan 9-hydroxycalabaxanthone (hasil
tercantum pada Tabel 4).
Spektrum serapan UV dari puncak lain yang lebih kecil dan teratasi
menunjukkan adanya lebih banyak senyawa seperti xanthone
[1] Chiang, Y., Kuo, Y., Oota, S., Fukuyama, Y.,J.Nat. Melecut.2003,66, 1070
– 1073.
[2] Jung, H., Su, B., Keller, WJ, Mehta, RG, Kinghorn, AD,J. Pertanian. Kimia
Makanan.2006,54,2077 – 2082.
[3] Likhitwitayawuid, K., Phadungcharoen, T., Krungkrai, J.,Planta
Med.1998,64,70 – 72.
[4] Rukachaisirikul, V., Kamkaew, M., Sukavisit, D., Phongpaichit,
S.,dkk., J.Nat. Melecut.2003,66,1531 – 1535.
[5] Mahabusarakam, W., Wiriyachitra, P., Phongpaichit, S.,J.Sci. Soc.
Thailand1986,12,239 – 242.

saya2007 WILEY-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim www.jss-journal.com

1234 EB Walker
[6] Sundaram, BM, Gopalakrishnan, C., Subramanian, S.,
Shankaranarayanan, D., Kameswaran, L.,Planta Med.1983,48,59 – 60.
[7] Chomnawang, MT, Surassmo, S., Nukoolkarn, VS, Gritsanapan,
W.,J. Etnofarmaka.2005,101,330 – 333.
[8] Bennett, GJ, Lee, H.,fitokimia1989,28,967 – 998.
[9] Matsumoto, K., Akao, Y., Kobayashi, E., Ohguchi, K.,dkk., J.Nat.
Melecut.2003,66,1124 – 1127.
[10] Mahabusarakam, W., Proudfoot, J., Taylor, W., Croft, K.,Rad gratis. Res.
2000,33,643 – 659.
[11] Nakatani, K., Atsumi, M., Arakawa, T., Oosawa, K.,dkk., Bio. Farmasi.
Banteng.2002,25,1137 – 1141.
saya2007 WILEY-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim
J.Sep.Sci. 2007,30,1229 – 1234
[12] Chiang, Y., Kuo, Y., Oota, S., Fukuyama, Y.,J.Nat. Melecut.2003,66, 1070
– 1363.
[13] Nilar, HLJ,fitokimia2002,60,541 – 548.
[14] Govindachari, TR, Kalyanaraman, PS, Muthukumaraswamy,
N., Pai, BR,Segi empat1971,27,3919 – 3926.
[15] Jefferson, A., Quillinan, AJ, Scheinmann, F., Sim, KY,Australia J.
Kimia.1970,23,2539 – 2543.
[16] Bo, T., Liu, F., Li, KA, Liu, H.,J.Liq. Krom rel. teknologi.2003,26, 993
– 998.
www.jss-journal.com