Machine Translated by Google

Tersedia online di www.sciencedirect.com

ScienceDirect

Pertanian dan Prosedia Ilmu Pertanian 11 ( 2016 ) 125 – 130

Konferensi Internasional tentang Penemuan & Inovasi untuk Pertanian Berkelanjutan 2016, ICIISA
2016

Pengaruh Extender Terhadap Semen Segar dan Beku Kambing Boer

Pakhatip Yodmingkwana , Somchit Guntapromb , Juggrid Jaksamritc,

Krittiya Lertchunhakiata,*
Fakultas Peternakan dan Teknologi Pertanian Universitas Silpakorn, Phetchaburi 76120, Thailand
B
Fakultas Teknologi Industri Pertanian, Universitas Kalasin, Kalasin, 46000, Thailand c Pusat
Penelitian AI Nakhonratchasima, SLJJ, Thailand

Abstrak

Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengevaluasi pengaruh lesitin kedelai dan kuning telur terhadap kualitas semen kambing
Boer. Semen tiga ekor Boer ditampung dengan menggunakan vagina buatan. Pada percobaan pertama, sampel semen diawetkan dalam
keadaan cair kemudian diencerkan dengan Tris-fructose-citric acid (TFC), Tris-fructose-citric acid + 1.5% soybele lecithin (TFCSL) dan
Tris fructose-citric acid + 2.5 % kuning telur (TFCEY). Pada percobaan kedua, sampel semen dikriopreservasi dalam berbagai media
pembekuan sebagai perlakuan yang sama dengan percobaan 1. Hasil percobaan pertama menunjukkan bahwa motilitas dan viabilitas
sperma pada TFCEY lebih besar secara signifikan dibandingkan dengan TFCSL (P<0,05). Pada percobaan kedua, tidak ada perbedaan
kualitas semen pasca thawing pada TFCEY dan TFCSL. Kesimpulannya, extender yang mengandung lesitin kedelai 1,5% merupakan
alternatif sediaan pembekuan semen kambing.

© 2016 Diterbitkan oleh Elsevier BV Ini adalah artikel akses terbuka di bawah lisensi CC BY-NC-
ND (http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/).
BV © 2016 Penulis. Diterbitkan oleh Elsevier
Peer-review
review di bawah
di bawah tanggung
tanggung jawabjawab Fakultas
Fakultas Peternakan
Peternakan dan Teknologi
dan Teknologi Pertanian,
Pertanian, Universitas
Universitas Silpakorn. Peer-
Silpakorn

Kata kunci: pemanjang semen; lesitin kedelai; kuning telur; kambing

*Penulis yang sesuai. Telp: +668-7642-9234;faks: +66-3259-4037.

Alamat email: krittiya_2549@hotmail.com

2210-7843 © 2016 Diterbitkan oleh Elsevier BV Ini adalah artikel akses terbuka di bawah lisensi CC BY-NC-ND
(http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/).
Peer-review di bawah tanggung jawab Fakultas Peternakan dan Teknologi Pertanian Universitas Silpakorn doi:
10.1016/j.aaspro.2016.12.021
Machine Translated by Google

126 Phakatip Yodmingkwan dkk. / Pertanian dan Prosedia Ilmu Pertanian 11 ( 2016 ) 125 – 130

1. Perkenalan

Kriopreservasi semen merupakan teknologi yang efektif untuk meningkatkan program pemuliaan kambing. Motilitas sperma
pasca pencairan dan integritas membran berkurang akibat cold shock dan tekanan osmotik selama proses kriopreservasi
(Salamon dan Maxwell, 2000). Saat ini, kuning telur merupakan komponen paling umum dari sebagian besar pengawet semen
untuk melindungi spermatozoa dari kerusakan selama proses pembekuan-pencairan (Forouzanfar et al., 2010). Namun, kuning
telur memiliki beberapa masalah karena meningkatkan risiko kontaminasi mikroba yang dapat menyebabkan produksi endotoksin
yang dapat mengurangi pembuahan spermatozoa, dan meningkatkan risiko penularan penyakit dalam pertukaran semen yang
disimpan secara internasional (Beccaglia et al., 2009 ). Selain itu, masalah tentang pemanjangan yang mengandung kuning
telur dalam semen kambing telah dikaitkan dengan enzim penggumpal kuning telur (EYCE) yang dapat berbahaya bagi sel
sperma (Leboeuf et al., 2000; Purdy, 2006). Salah satu alternatif pengganti komponen asal hewani dalam pemanjang semen
adalah lesitin kedelai, campuran alami fosfatidilkolin dan beberapa asam lemak seperti stearat, oleat, dan palmitat. Asam lemak
tersebut adalah fosfolipid yang berlaku di sebagian besar membran biologis mamalia dan diketahui memberikan stabilitas
struktural pada sel (Oke et al., 2010). Efisiensi lesitin kedelai sebagai sumber utama lipoprotein dalam pemanjang semen telah
terbukti (Papa et al., 2010). Studi sebelumnya juga menunjukkan bahwa penambahan lesitin kedelai (SL) ke pemanjang semen
meningkatkan motilitas sperma pasca pencairan, viabilitas, integritas akrosom dan struktur membran sperma pada manusia
(Reed et al., 2009), ram (Sharafi et al., 2009; Forouzanfar et al., 2010), kucing (Vick et al., 2010), anjing (Kmenta et al., 2011),
dan kambing (Jiménez-Rabadán et al., 2012; Salmani et al., 2014). Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mempelajari pengaruh
tiga ekstender yang berbeda dengan plasma semen cuci pada kelangsungan hidup in vitro spermatozoa kambing Boer.

2. Bahan-bahan dan metode-metode

2.1 Hewan Percobaan, Pengumpulan dan Penyerahan Semen

Tiga ekor kambing Boer yang dewasa secara seksual berumur 12 -18 bulan, (berat badan lebih dari 50,0 kg dan skor
kondisi tubuh 2,5, skala 1-5, dengan 1 kurus dan 5 kondisi terlalu berlebihan) digunakan dalam penelitian ini. Semua kambing
sehat dan secara klinis terbebas dari parasit internal dan eksternal. Hewan dipelihara di bawah penyinaran alami dan status gizi
seimbang (diet konsentrat mengandung 21% Protein Kasar dan 75% Nutrisi Tercerna Total). Ransum yang ditawarkan kepada
kambing disesuaikan dengan kebutuhan menurut NRC (1981). Kambing juga menerima blok mineral dan air tawar selama
seluruh periode percobaan.
Sampel semen dikoleksi dua kali seminggu dengan menggunakan vagina buatan setelah distimulasi dengan kelinci betina
yang sedang berahi. Dolar diekspos ke penggoda selama 5 menit. Libido dicatat pada skala 0-3, dengan 0 adalah tidak adanya
hasrat seksual sama sekali dan 3 adalah tingkat hasrat seksual tertinggi yang memberikan waktu minimal untuk melompati
hewan penggoda (Qureshi et al, 2012). Setelah pengumpulan, semen ditempatkan dalam penangas air pada suhu 37°C dan
dipindahkan ke laboratorium untuk evaluasi semen dalam 15 menit. Ejakulasi dievaluasi volume (ml), warna, pH, densitas
(D-4D), pergerakan massa (0-5), motilitas sperma (%), abnormalitas sperma (%) dan viabilitas sperma (%) menggunakan
pewarnaan eosin-nigrosin. dan konsentrasi sperma (nx 109 sperma/ml) dengan hemositometer. Hanya ejakulasi antara volume
1,0 dan 2,0 ml dengan konsentrasi lebih besar dari 2,5 x 109 sperma/ml yang memiliki >75% sperma motil dan >85% sperma
normal yang dipilih dan dikumpulkan untuk kriopreservasi (Salmani et al., 2014).

2.2 Pemanjang semen

Extender dasar sebagai Tris fructose citric gliserol; TFC (perlakuan kontrol) yang digunakan dalam penelitian ini terdiri dari
2,4 g Tris, 1 g fruktosa, 1,4 g asam sitrat, 1,4% gliserol (v/v), 100 mg/ml Streptomisin dan 100 ÿg/ml penisilin G, masing-masing
(Qureshi dkk, 2012). Tekanan osmotik dan pH masing-masing ditetapkan pada 420 mOsm/kg dan 6,8. Dua ekstender berbeda
(TFC + 1,5% lesitin kedelai; TFCSL dan TFC + 2,5% kuning telur; TFCEY) dibuat dengan penambahan 1,5% lesitin kedelai dan
2,5% kuning telur ayam (Tabel 1).
Machine Translated by Google

Phakatip Yodmingkwan dkk. / Pertanian dan Prosedia Ilmu Pertanian 11 ( 2016 ) 125 – 130 127

2.3 Evaluasi Semen

2.3.1 Penilaian volume, pH dan motilitas sperma: Semen dievaluasi segera setelah dikumpulkan dengan cara volume
(ml), pH, pergerakan massa (0-5) dan motilitas sperma (%). Motilitas semen segar dievaluasi di bawah mikroskop cahaya
dengan pembesaran 100x.

Tabel 1. Komposisi bahan pemanjang yang digunakan untuk pengolahan semen kambing.

Bahan TFC TFCSL TFCEY

Tris (g) 2.4 4.54 2.4

1 1 -
Fruktosa (g)
- - 0,74
Glukosa (g)

Asam sitrat (g) 1.4 2.61 1.4

Gliserol (ml) 1.4 1.5 1.4

- 1.5 -
lesitin kedelai (g)
- - 2.5
Kuning telur (ml)

Streptomisin (mg/ml) 100 100 100

Penisilin G (ÿg/ml) 100 100 100

Air suling steril (ml) sampai dengan 100 sampai dengan 100 sampai dengan 100

2.3.2 Penilaian viabilitas dan abnormalitas sperma: Tingkat sperma hidup dilakukan dengan menggunakan modifikasi
prosedur pewarnaan eosin-nigrosin seperti yang dijelaskan oleh Chauhan dan Anand (1990). Campuran 10 ÿl spermatozoa
encer dan 10 ÿl noda eosin-nigrosin dioleskan pada slide dan dibiarkan mengering di lingkungan bebas debu.
Dua ratus spermatozoa dari bidang mikroskopis yang berbeda diperiksa di bawah mikroskop medan terang (perbesaran
400x), dan jumlah spermatozoa yang tidak ternoda (layak) dihitung.
2.3.3 Penilaian konsentrasi sperma: Konsentrasi sel sperma ditentukan dengan menggunakan a
hemositometer. Konsentrasi sel sperma tercatat dalam jutaan per mililiter.
2.3.4 Penilaian integritas akrosom: Integritas akrosom dinilai dengan pewarnaan semen dengan coomassie blue G-250
(0,22% coomassie blue G-250, 50% metanol, 10% asam asetat glasial, 40% air). Lima puluh ÿl semen ditambahkan ke 1
ml garam, dicampur dan disentrifugasi pada 2000 xg selama 15 detik. Pelet ditangguhkan kembali dalam 1 ml
paraformaldehyde dalam PBS dan difiksasi selama 30 menit. Spermatozoa disentrifugasi, dan pelet disuspensikan kembali
dalam PBS dan disebarkan pada slide untuk pengeringan udara. Apusan diwarnai selama 5 menit dengan 0,22% coomassie
blue G-250 dan dicuci dengan air. Setelah diangin-anginkan, apusan diamati status akrosom sperma. Akrosom utuh
diwarnai dengan warna biru pekat; sedangkan spermatozoa yang telah kehilangan integritas akrosom tidak memiliki
pewarnaan coomassie pada daerah akrosom. Jumlah spermatozoa dengan akrosom utuh dan jumlah total spermatozoa
dihitung pada lima lapangan berbeda. Metode yang dijelaskan oleh Larson dan Miller (1999).
2.3.5 Penilaian integritas membran fungsional: Integritas membran fungsional dievaluasi dengan uji pembengkakan
hipoosmotik singkat. Alikuot semen (2 ÿl) dalam 198 ÿl larutan hipo-osmotik (100 mOsm/kg) 0,9 g fruktosa dan 0,49 g
natrium sitrat dilarutkan dalam 100 ml air suling. Campuran ini diinkubasi selama 1 jam pada suhu 37o C, dan persentase
populasi spermatozoa dengan ekor bengkak dinilai di bawah mikroskop cahaya (perbesaran 400x), (dimodifikasi dari
Salvador et al., 2006). Sebanyak 200 spermatozoa dievaluasi dalam setidaknya lima bidang yang berbeda. Spermatozoa
tergolong membengkak (melingkar) menurut uraian Revell dan Mrode (1994).

2.4 Rancangan percobaan

Penelitian ini merupakan perbandingan jenis ekstender yang berbeda terhadap mutu semen kambing Boer. Rancangan
percobaan adalah Rancangan Acak Kelompok Lengkap (RAK), blok dengan waktu dan operator untuk 3 perlakuan dengan
6 ulangan sebagai Tris fruktosa sitrat gliserol (TFC; kontrol), TFC + Lesitin Kedelai 1,5% (TFCSL) dan TFC + 2,5% Kuning
telur. (TFCEY). Kumpulan ejakulasi dibagi menjadi tiga volume yang sama dan pencucian plasma mani dilakukan
Machine Translated by Google

128 Phakatip Yodmingkwan dkk. / Pertanian dan Prosedia Ilmu Pertanian 11 ( 2016 ) 125 – 130

mengikuti Salvador et al. (2006). Semen disentrifugasi selama 10 menit pada 900 xg, 1 ml semen murni diencerkan 1:15 dalam
media dasar Tris. Setelah dicuci, sampel diencerkan pada suhu 37 ° C untuk ekstensi dalam ekstender yang mengandung lesitin,
kuning telur, dan ekstender kontrol (dalam satu langkah), dalam tabung sentrifus kaca 15 ml. Sampel yang diencerkan kemudian
disimpan pada suhu kamar selama 5 menit dan diseimbangkan pada suhu 5 ° C selama 150 menit, setelah itu sampel dibagi untuk
digunakan dalam dua percobaan.
Eksperimen 1 adalah untuk mengetahui pengaruh semen extender (TFC, TFCSL dan TFCEY) terhadap kualitas sperma yang
diawetkan setelah periode ekuilibrasi. Semen straw ditempatkan dalam water bath pada suhu 37°C selama satu menit. Rata-rata
motilitas sperma dan viabilitas sperma dinilai pada periode pasca ekuilibrasi pada 24, 48, 72 dan 96 jam.
Eksperimen 2 dilakukan untuk mempelajari pengaruh pengencer semen TFC, TFCSL dan TFCEY terhadap karakteristik fisik
sperma setelah tahap pembekuan-pencairan. Setelah ekuilibrasi, sampel semen yang telah diencerkan disedot ke dalam sedotan
Perancis 0,25 ml, dan disegel dengan bubuk polivinil alkohol. Sedotan dibekukan dalam uap nitrogen cair, 4 cm di atas nitrogen cair
selama 7 menit, direndam dalam nitrogen cair pada suhu -196°C selama 7 menit dan kemudian dicelupkan ke dalam wadah nitrogen
cair untuk disimpan (Purdy, 2006). Setelah 24, 48, 72 dan 96 jam, sedotan dipanen dan dicairkan dalam penangas air pada suhu
37°C selama 60 detik. Sampel semen beku-cair dinilai dari motilitas sperma, kelainan sperma, viabilitas sperma, integritas akrosom
dan integritas membran.

2.5 Analisis statistik

Hasilnya disajikan sebagai sarana dengan SEM. Perbedaan parameter sperma dilakukan dengan ANOVA menggunakan paket
perangkat lunak Sistem Analisis Statistik (Versi 9.0, SAS Institute Inc, 1996, Cary, NC, USA).
Tes Rentang Berganda Baru Duncan (DMRT) digunakan untuk membandingkan perbedaan antara nilai. Signifikansi statistik dianggap
pada P <0,05.

3. Hasil dan Pembahasan

Rerata libido, volume semen, warna, pH, densitas, pergerakan massa, motilitas sperma, kelainan sperma dan konsentrasi sperma
adalah 3,00 (skala 1-3), 1,15 ± 0,15 ml, putih susu, 7,00, berbutir krem (4D) (skala D-4D), 4,00 ± 1,00 (skala 1-5), 80,83 ± 3,06%,
3,00 ± 0,00 dan 55,6 ± 0,61x106 sperma/ml. Hanya ejakulasi antara volume 1,0 dan 2,0 ml dengan konsentrasi lebih besar dari 2,5
x 109 sperma/ml yang memiliki motilitas sperma >75% dan sperma normalitas >85% yang dipilih dan dikumpulkan untuk kriopreservasi
(Salmani et al. , 2014). Dalam penelitian
kami, volume ejakulasi 1,15 ml dengan konsentrasi 55,6 ± 0,61x106 /ml memiliki motilitas sperma 80,83 ± 3,06% dan normalitas
sperma 97%.
Dalam percobaan 1, pengaruh ekstender yang berbeda (TFC, TFCSL dan TFCEY) pada parameter motilitas dan viabilitas sperma
pasca ekuilibrasi ditunjukkan pada Tabel 2. Persentase motilitas dan viabilitas tertinggi diamati pada ekstender TFCEY, sedangkan
ekstender TFC tidak. mempengaruhi parameter ini (P<0,05).
Dalam penelitian kami, semen yang diencerkan dengan TFCEY dan TFC memiliki motilitas dan viabilitas sperma yang lebih tinggi
daripada yang diencerkan dengan TFCSL. Studi ini mengkonfirmasi studi tentang penghilangan plasma semen sebelum pembekuan
spermatozoa kambing dan pengaruh enzim koagulasi kuning telur dalam plasma semen semen kambing terhadap motilitas dan
viabilitas ketika disimpan dalam pemanjang basa Tris dengan kuning telur (Ritar dan Salamon, 1982; Aboagla dan Terada, 2004;
Choe et al., 2006). Namun, hasil penelitian ini tidak sesuai dengan laporan Yotov (2015) yang melaporkan bahwa pengenceran
semen dengan pengencer berbasis TFC yang mengandung lesitin kedelai 1,5% dan gliserol 1,5% memberikan motilitas dan viabilitas
terbaik pada penyimpanan dingin (0 -4 °C) spermatozoa dari sapi perah. Hal ini mungkin disebabkan oleh perbedaan breed kambing,
lokasi dan musim pengambilan semen yang dapat mempengaruhi kualitas semen (Leboeuf et al. , 2000). Konsentrasi
gliserol yang rendah juga dikaitkan dengan perlindungan spermatozoa yang buruk terhadap cryoinjury (Silva et al., 2002).

Tabel 2. Pengaruh pemanjang basa Tris yang berbeda terhadap parameter motilitas dan viabilitas sperma pasca ekuilibrasi pada kambing Boer. (Rata-rata ± SEM).

Parameter TFC TFCSL TFCEY

Motilitas sperma (%) 34,89 ± 0,68a 8.11 ± 0.32b 40,22 ± 0,85a

Viabilitas sperma (%) 26.00 ± 0.74a 11.00 ± 1.29b 27,33 ± 0,85a

a,b Rerata dengan superskrip yang berbeda pada baris yang sama menunjukkan perbedaan yang nyata antar kelompok perlakuan (P<0,05).
Machine Translated by Google

Phakatip Yodmingkwan dkk. / Pertanian dan Prosedia Ilmu Pertanian 11 ( 2016 ) 125 – 130 129

Pada percobaan 2, pengaruh pemanjangan semen sperma terhadap sifat fisik disajikan pada Tabel 3.
Secara umum, tidak ada perbedaan yang signifikan antara ekstender TFC, TFCSL dan TFCEY pada motilitas, viabilitas dan abnormalitas
sperma pasca pencairan. Hasil ini sesuai dengan hasil dari Khalifa dan Abdel-Hafez (2014) dan Salmani et al. (2013) yang melaporkan
bahwa tidak ada perbedaan antara Tris-citric acid dengan pengencer lesitin kuning telur dan kedelai terhadap parameter kualitas
spermatozoa pasca thawing berturut-turut pada spermatozoa domba jantan dan kambing.

Tabel 3 Pengaruh pemanjangan semen TFC, TFCSL dan TFCEY terhadap semen beku-cair pada kambing Boer. (Rata-rata ± SEM).

Parameter TFC TFCSL TFCEY

Motilitas sperma (%) 9,56 ± 1,44 12.18 ± 1.41 9,93 ± 1,41

Viabilitas sperma (%) 12,38 ± 0,83 6,79 ± 0,90 10,38 ± 0,52

Kelainan sperma (%) 1,71 ± 0,29 1,54 ±0,34 1,71 ± 0,19

Integritas membran (%) 5,92 ± 0,38ab 4,75 ± 0,54b 8,04 ± 1,02a

Integritas akrosom (%) 88,75 ± 1,28b 93,62 ± 0,72a 85,75 ± 2,00b

a,b Rerata dengan superskrip yang berbeda pada baris yang sama menunjukkan perbedaan yang nyata antar kelompok perlakuan (P<0,05).

Persentase integritas membran setelah thawing lebih rendah pada TFCSL dibandingkan ekstender lainnya (P<0,05). Salmani dkk.
(2014) melaporkan bahwa tidak ada perbedaan antara lesitin berbasis kuning telur dan lesitin kedelai 1,5% dalam mempengaruhi integritas
membran semen mungkin karena perbedaan protokol kriopreservasi, waktu ekuilibrasi, breed kambing dan protokol penyiapan
pengembang lesitin kedelai. Namun, penelitian kami sesuai dengan penelitian Salmani et al. (2014) pada kasus konsentrasi lesitin kedelai
yang hasilnya menunjukkan bahwa tidak terdapat perbedaan antara kuning telur dan lesitin kedelai dalam mempengaruhi motilitas
spermatozoa, viabilitas spermatozoa dan abnormalitas spermatozoa.
Persentase integritas akrosom setelah thawing lebih tinggi pada TFCSL dibandingkan ekstender lainnya (P<0,05), hasilnya sesuai
dengan laporan Khalifa dan Abdel-Hafez (2014). Mereka melaporkan bahwa lesitin kedelai telah meningkatkan motilitas progresif pasca
pencairan, viabilitas dan tingkat akrosom spermatozoa domba jantan yang rusak.
Pada penelitian ini kualitas semen beku kambing tidak memenuhi standar semen beku untuk inseminasi buatan (Salvador et al., 2005)
akibat motilitas sperma yang buruk <35% dan integritas membran yang rendah <35%. Oleh karena itu, perlu dilakukan perbaikan protokol
kriopreservasi semen beku untuk meningkatkan produksi semen beku untuk inseminasi buatan kambing.

4. Kesimpulan

Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa bahan pengawet yang mengandung lesitin kedelai sebagai sumber lipid/
lipoprotein dapat digunakan untuk menyiapkan semen kambing untuk dibekukan. Namun parameter kualitas semen beku kambing hasil
penelitian ini, tidak sesuai dengan standar semen beku untuk inseminasi buatan. Dengan demikian peningkatan protokol kriopreservasi
semen kambing diperlukan untuk mendapatkan semen beku yang baik untuk inseminasi buatan pada kambing.

Pengakuan

Penulis berterima kasih kepada Supathida Aiumsakul, Chanita Sengsom dan Ameeza Yoso atas kerjasamanya . Dukungan finansial
diterima dari Thailand's budget in Brief Fiscal year 2015 dan Fakultas Peternakan dan Teknologi Pertanian, Silpakorn University, IT
Campus, Thailand.

Referensi

Aboagla, EM, Terada, T., 2004. Pengaruh kuning telur selama tahap pembekuan kriopreservasi terhadap viabilitas spermatozoa kambing.
Teriogenologi 62, 1160–72.
Ashmawy, TAM, Sallam, AA, El-Khalek, AEA, El-Saidy, BE, Gabr, MG, 2010. Tingkat pemulihan dan pembuahan spermatozoa kambing yang terpengaruh
dengan berbagai tingkat kuning telur, tingkat pengenceran, metode pembekuan dan bulan dalam setahun. Mesir J. Domba. Kambing. Sains. 5, 283–293.
Machine Translated by Google

130 Phakatip Yodmingkwan dkk. / Pertanian dan Prosedia Ilmu Pertanian 11 ( 2016 ) 125 – 130

Beccaglia, M., Anastasi, P., Chigioni, S., Luvoni, GC, 2009. Pemanjang tris-lesitin yang dilengkapi dengan katalase antioksidan untuk mendinginkan anjing
air mani. Reproduksi Animasi Domestik. 44 (Sup. 2), 345–349.
Chauhan, MS, Anand, SR 1990. Pengaruh lipid kuning telur terhadap pembekuan semen kambing. Teriogenologi 34, 1003–1013.
Choe, CY, Kim, JG, Cho, SR, Son, DS, Kim, YK, Balasubramanian, S., Choe, SY, Rho, GJ, 2006. Pengaruh musim, perluasan, pembekuan lambat dan cepat pada karakter
penting dalam bahasa Korea dolar asli. Reproduksi Dom. Animasi. 41, 55–60.
Forouzanfar , M. , Sharafi , M. , Hosseini , SM , Ostadhosseini , S. , Hajian , M. , Hosseini , L. , Abedi , P. , Nili , N. , Rahmani , HR , Nasr-Esfahani , MH In vitro perbandingan
pemanjang berbasis lesitin berbasis kuning telur dan kedelai untuk kriopreservasi semen domba jantan. Teriogenologi 3 , 480– 487 .

Jiménez-Rabadán, P., Ramón, M., García-Álvarez, O., Maroto-Morales, A., Del Olmo, E., Pérez-Guzmán, M., Bisbal, A., Fernández-Santos, M. , Garde, J., Soler, A., 2012.
Pengaruh metode pengumpulan semen (vagina buatan vs. elektroejakulasi), ekstender dan sentrifugasi terhadap kualitas sperma pasca pencairan ejakulasi buck Blanca-
Celtibérica. Satwa Pemutaran Sains. 132, 88–95.
Khalifa, EI, Abdel-Hafez, MAM, 2014. Pengaruh Pemanjang Semen Berbahan Lesitin Kedelai terhadap Freezability dan Fertilitas Spermatozoa Ram Rahmani.
Jurnal Ilmu Domba & Kambing Mesir. 9, 59–66.
Kmenta, I. Strohmayer, C., Muller-Schlosser, F., Schafer-Somi, S., 2011. Efek lesitin dan katalase yang mengandung pemanjang semen dan yang kedua
pengenceran dengan enhancer buffer yang berbeda terhadap kualitas spermatozoa anjing cold storage. Teriogenologi 75, 1095–1103.
Larson JL dan Miller DJ, 1999. Pewarnaan histokimia sederhana untuk akrosom pada sperma dari beberapa spesies. Mol. Reproduksi Dev. 52, 445–449.
Leboeuf, B., Restall, B., Salamon, S., 2000. Produksi dan penyimpanan semen kambing untuk inseminasi buatan. Animasi. Reproduksi Sains. 62, 113–141.
Najafi, A., Zhandi, M., Towhidi, A., Sharafi, M., Akbari Sharif, A., Khodaei Motlagh, M., Martinez-Pastor, F., 2013. Trehalosa dan gliserol memiliki sinergis yang bergantung
pada dosis efek pada kualitas post-thawing semen ram cryopreserved dalam extender berbasis lesitin kedelai. Kriobiologi 66, 275–282.

NRC, National Research Council., 1981. Kebutuhan nutrisi kambing. Pers Akademi Nasional, Washington DC, AS.
Oke, M., Jacob, JK, Paliyath, G., 2010. Pengaruh Lesitin Kedelai dalam Meningkatkan Kualitas Sari Buah/Saus. Makanan Res. Int. 43, 232–240.
Paus , FO , Felicio , GB , Melo , CM , Alvarenga , MA , De Vita , B , Avanzi , BR , Dell'Aqua , JA , 2010
kuning telur dalam ekstender yang digunakan untuk kriopreservasi semen kuda. Animasi. Reproduksi Sains. 121, 71–72.
Peterson, K., Kappen, MAPM, Ursem, PJF, Nöthling, JO, Colenbrander, B., Gadella, BM, 2007. Penilaian semen mikroskopis dan aliran sitometrik terhadap AI-bucks Belanda:
Pengaruh prosedur pemrosesan semen dan korelasinya dengan kesuburan . Teriogenologi 67, 863–871.
Purdy, P., 2006. Review kriopreservasi sperma kambing, Ruminansia Kecil Res. 63, 215–225.
Qureshi, MH, Khan, D., Mushtaq, A., Afridi, SS, 2013. Pengaruh pemanjangan, interval pasca pengenceran, dan musim terhadap kualitas semen pada kambing perah.
Turk J.Vet. Animasi. Sains. 37, 147–152.
Reed, ML, Ezeh, PC, Hamic, A., Thompson, DJ, Caperton, CL, 2009. Lesitin kedelai menggantikan kuning telur untuk kriopreservasi sperma manusia tanpa mempengaruhi
motilitas pasca pencairan, morfologi, integritas DNA sperma, atau pengikatan sperma ke hyaluronate. Subur. Steril. 92, 1787– 1790.

Revell, SG, Mrode, RA, 1994. Tes resistensi osmotik untuk semen sapi. Anim Reprod Sci. 36, 77–86.
Ritar, AJ, Salamon, S., 1982. Pengaruh plasma mani dan penghilangannya serta kuning telur dalam pengencer terhadap kelangsungan hidup segar dan beku-cair
spermatozoa kambing Angora. Aust. J.Biol. Sains. 35, 305–312.
Salamon, S., Maxwell, WM, 2000. Penyimpanan semen domba, Anim. Reproduksi Sains. 62, 77–111.
Salmani, H., Nabi, MM, Vaseghi-Dodaran, H., Rahman, MB, Mohammadi-Sangcheshmeh, A., Shakeri, M., Towhidi, A., Shahneh, AZ, Zhandi, M., 2013. Pengaruh glutathione
dalam pengencer semen berbahan dasar lesitin kedelai terhadap kualitas semen kambing setelah dibekukan. Ruminansia Kecil Res. 112, 123– 127.

Salmani, H., Towhidi, A., Zhandi, M., Bahreini, M., Sharafi, M., 2014. Penilaian in vitro lesitin kedelai dan pengencer berbasis kuning telur untuk
kriopreservasi semen kambing, Cryobiology 68, 276–280.
Salvador, I., Viudes-de-Castro, MP, Bernacer, J., Gomez, EA, Silvestre, MA, 2005. Faktor yang mempengaruhi angka kehamilan pada inseminasi buatan dengan
semen beku selama musim non-kawin pada kambing Murciano-Granadian: uji lapangan. Reproduksi Dom. Animasi. 40, 526–529.
Salvador, I., Yaniz, J., Viudes-de-Castro, MP, Gomez, EA, Silvestre, MA, 2006. Pengaruh penyimpanan padat pada konservasi semen caprine pada 5 derajat C.
Theriogenology 66, 974–981.
Sharafi, M., Forouzanfar, M., Hosseini, SM, Hajian, M., Ostadhosseini, S., Hosseini, L., Abedi, P., Nili, N., Rahmani, HR, Reza Javaheri, A., 2009 . .
Perbandingan in vitro extender berbasis lesitin kedelai dengan extender yang tersedia secara komersial untuk kriopreservasi semen Ram. Int. J. Subur.
Steril. 3, 149–152.
Silva, AR, Cardoso, RCS, Uchoa, C. Silva, LDM, 2002. Pengaruh Tris-buffer, kuning telur dan gliserol pada pembekuan semen anjing. Dokter Hewan J.164,
244–246.

Vick, M., Bateman, H., Swanson, W., 2010. Peningkatan kriopreservasi spermatozoa kucing domestik dalam pemanjang berbasis lesitin kedelai. Reproduksi Subur.
Dev. 23, 153–154.
Yotov, S., 2015. Pengaruh ekstender berbasis TFC dengan lesitin kedelai dan/atau gliserol konsentrasi rendah terhadap kualitas simpanan dingin kambing
air mani. Int. J.Curr. Mikrobiol. Aplikasi. Sains. 4, 752–761.