PROGRAM STUDI FARMASI

STIKES ADILA DI KOTA BANDAR LAMPUNG

NAMA : Deka Wahyu Kurniawan

NIM : 202001218P
KELAS : KONVERSI

1. Tuliskan tujuan penelitian yang ada pada paper tersebut!

Untuk menentukan efek perlindungan pada kerusakan akibat UVB pada keratinosit
manusia dari senyawa alkaloid dan flavonoid yang terdapat pada daun Dendrobium
officinale Kimura et Migo

2. Jelaskan prinsip/metode kerja yang digunakan pada paper tersebut!

Metode yang digunakan yaitu di ekstraksi dan kemudian diisolasi menggunakan
kromatografi kolom dan dimurnikan dengan HPLC
Prinsip dasar ekstraksi adalah melarutkan senyawa polar dalam pelarut polar dan
senyawa non-polar dalam pelarut non-polar. Serbuk simplisia diekstraksi berturut-
turut dengan pelarut yang berbeda polaritasnya.
Prinsip dasar kromatografi kolom adalah adsorpsi, di mana campuran komponen
terlarut dalam fase gerak dimasukkan ke dalam kolom dan komponen bergerak
tergantung pada afinitas relatifnya terhadap fase diam. Pemilihan pelarut tergantung
pada karakteristik kelarutan campuran.
Prinsip dasar HPLC adalah pemisahan analit berdasarkan kepolarannya, alatnya
terdiri dari kolom (sebagai fasa diam) dan larutan tertentu sebagai fasa geraknya.
Yang paling membedakan HPLC dengan kromatografi lainnya adalah
pada HPLC digunakan tekanan tinggi untuk mendorong fasa gerak.

3. Identifikasi alat dan bahan yang digunakan pada paper tersebut!

Daun Dendrobium officinaleKimura et Migo (Orchidaceae), etanol, petroleum eter,
air, HCL 6 M, n-butanol, CH2CL2, metanol air, aseton, silica gel, HPLC.

4. Tuliskan langkah kerja pada metode yang digunakan pada paper tersebut!

Daun kering D. officinale (9,0 kg) digiling menjadi bubuk dan diekstraksi dengan
etanol 90-95%. Setelah penyaringan, cairan tersebut diuapkan di bawah tekanan
tereduksi untuk menghasilkan ekstrak kasar (2,3 kg), yang disuspensikan dalam air
(1 L) dan diekstraksi dengan petroleum eter (3 L × 8). Fasa yang larut dalam air
diatur ke pH 2-3 dengan asam klorida 6 M dan kemudian diekstraksi dengan
 EtOAc (3 L × 5). Fase berair yang tersisa dibasakan dengan larutan NaOH 50%
hingga pH 9-10
dan kemudian diekstraksi dengan CH2Cl2 (2 L × 5) untuk menghasilkan fraksi larut
CH2Cl2(5,9 g) yang kaya akan alkaloid. Fase larut air yang tersisa diatur ke pH 7
dengan asam klorida 6 M dan kemudian diekstraksi dengan n-BuOH (2 L × 5) untuk
menghasilkan n-BuOH (85,6 g).
CH2Cl2 dikenai kromatografi kolom silika gel dan dielusi dengan petroleum eter-
aseton (5:1, 3:1, 1:1, v/v), CH 2Cl2-MeOH (1:1, v/v) dan MeOH untuk menghasilkan
fraksi A–G.
Fr. B (petroleum ether-acetone, 5:1; 815,5 mg) dimuat pada kolom RP C 18 (MeOH-
H2O0) untuk menghasilkan fraksi B1–B5. Fr. B2 (MeOH-H2O, 30:70 → 50:50; 79,6
mg) dimurnikan dengan HPLC semipreparatif (Agilent Zorbax SB-C 18, 9,4 × 250 mm,
MeOH-H2O, 60:40, 2 mL/ menit) untuk menghasilkan senyawa 2 (3,8 mg, tR = 21,260
menit) dan 4 (23,4 mg, tR = 25.600 menit).
Fr. C (petroleum eter-aseton, 3:1; 502,9 mg) dimuat pada kolom RP C 18 (MeOH-
H2O10:90→ 100:0) untuk menghasilkan fraksi C1–C6. Fr. C3 (MeOH-H 2O, 20:80 →
30:70; 45,7 mg) dimurnikan dengan HPLC semi preparatif (Agilent Zorbax SB-C 18,
9,4 × 250 mm, MeCN-H2O, 30:70, 2 mL /min) untuk menghasilkan senyawa 3 (1,9
mg, tR = 17,070 menit).
Fr. D (petroleum ether-acetone, 1:1; 223,3 mg) dimuat pada kolom RP C 18 (MeOH-
H2O0) untuk menghasilkan fraksi D1–D6. Fr. D4 (MeOH-H 2O, 30:70 → 40:60; 28,0
mg) dimurnikan dengan HPLC semipreparatif (Agilent Zorbax SB-C18, 9,4 × 250 mm,
MeOH-H2O, 55:45, 2 mL/ menit) untuk menghasilkan senyawa 1 (20,2 mg, tR =
14,513 menit).
Fraksi n-BuOH dikenakan kromatografi kolom silika gel dan dielusi dengan CH 2Cl2-
MeOH (20:1, 10:1, 5:1, 3:1, 2:1, 1:1, v/ v) dan MeOH untuk menghasilkan fraksi H–
M. Fr. K (CH2Cl2-MeOH, 3:1; 30,4 g) dimuat pada kolom RP-C18 (MeOH-H2untukO,
5:95 → 100:0)
menghasilkan fraksi K1–K7. Fr. K4 (MeOH-H2O, 10:90; 559,5 mg) diisolasi dengan
kromatografi kolom Sephadex LH-20 (MeOH) dan HPLC semipreparatif (Agilent
Zorbax SB-AQ, 4,6 × 250 mm, MeOH H2O, 5:95 , 1 mL/menit) untuk menghasilkan
senyawa 5 (3,5 mg, tR = 16,800 menit) dan campuran (4,8 mg, tR = 22,284 menit).
Campuran dimurnikan dengan HPLC semipreparatif (Agilent Zorbax SB-AQ, 4,6 ×
250 mm, MeOH H2O, 3:97, 1 mL/menit) untuk menghasilkan senyawa 6 (2,5 mg, tR =
30,572 menit).

5. Jelaskan hasil analisis data pada paper tersebut!

Senyawa 1–6 diperoleh dari ekstrak etanol D. officinale dengan kromatografi kolom
silika gel dan kromatografi cair kinerja tinggi semi preparatif (HPLC). Struktur kimia
(3S,4R)-1-(-karbolin-1-il)-3,4,5-trihidroksi-1- pentanon (1) [29], -karbolin(2) [30 ], 1-
hidroksimetil--karbolin(3) [31], perlolyrine (4) [32], (1S,3S)-1-metil-1,2,3,4-tetrahidro -
karbolin-3 -asam karboksilat (5) [33,34] dan (1R,3S)-1-metil-1,2,3,4- tetrahidro--
karbolin-3-asam karboksilat (6) [33,35]
Pertama, sitotoksisitas senyawa 1–20 terhadap sel keratinosit manusia diuji. Seperti
yang ditunjukkan, hanya senyawa 4 menunjukkan terhadap sel-sel keratinosit
manusia pada konsentrasi 10 g/mL, sedangkan senyawa 12 dan 14 tampaknya
memiliki sitotoksisitas marginal pada beberapa konsentrasi. Senyawa lain tidak
menunjukkan sitotoksisitas yang cukup besar pada konsentrasi mulai dari 0,01 g/mL
hingga 10 g/mL.

Efek senyawa 1–20 pada viabilitas sel pada sel keratinosit manusia yang disinari
UVB dievaluasi lebih lanjut. Seperti yang ditunjukkan pada Tabel 2, viabilitas sel
relatif senyawa 1 (0,01, 0,1 dan 1 g/mL), 2 (0,01 g/mL), 3 (1 g/mL), 4 (0,1 g/mL). ), 5
(0,1 dan 1 g/mL), 8 (0,01, 0,1 dan 1 g/mL), 9 (1 g/mL) dan 20 (0,01 dan 0,1 g/mL)
lebih tinggi dibandingkan dengan model (mengandung 0 g/mL senyawa). Hanya
senyawa 1 dan 8 yang meningkatkan viabilitas sel di bawah iradiasi UVB pada
ketiga konsentrasi yang diuji (Gbr. 2)

Karena senyawa 1 dan 8 menunjukkan efek perlindungan terbaik pada sel

keratinosit manusia yang disinari oleh UVB, efek lebih lanjut dari kedua senyawa ini
pada struktur kulit yang diinduksi UVB, kerusakan filaggrin dan claudin-1 diuji pada
kulit 3D (ArchSkin®). Data menunjukkan bahwa tantangan UV dapat menyebabkan
kerusakan struktur kulit, yang ditunjukkan dengan pewarnaan H&E (Gbr. 3).

Ditemukan bahwa kelompok UV memiliki lapisan sel yang lebih sedikit. Kulit yang
dirawat dengan senyawa 1 dan 8 menunjukkan efek protektif yang menjanjikan dan
mempertahankan struktur kulit yang wajar (Gbr. 3). Data tersebut juga menunjukkan
bahwa UV challenge dapat menurunkan ekspresi filaggrin pada ArchSkin®. Kulit
yang diobati dengan senyawa 1 dan 8 tidak menunjukkan perbedaan bila
dibandingkan dengan kelompok yang tidak diobati, menunjukkan efek perlindungan
potensial pada penurunan ekspresi filaggrin yang diinduksi UVB (Gbr. 4). Data lebih
lanjut menunjukkan bahwa tantangan UV dapat menurunkan ekspresi claudin-1 di
ArchSkin®. Kulit diperlakukan dengan senyawa 1 dan 8 menunjukkan ekspresi yang
jauh lebih tinggi daripada kelompok UV (P < 0,001 )