Ekstraksi, Isolasi dan Identifikasi Gula dari Banana kulit (MusaSapientum) oleh HPLC digabungkan LC / MS instrumen dan analisis

TLC

Abstraksi Produksi berbagai gula dievaluasi dari non dimakan (peel) porsi buah pisang memiliki cukup menjanjikan di masa depan untuk mencapai keuntungan ekonomis. Sampel yang terpilih adalah kering, bubuk dan berurutan diekstraksi dengan air suling ganda, etanol 80% dengan ulangan dan akhirnya dengan campuran metanol - Dichloromethane - Air (MDW) (0.3:4:1 v / v / v). Fase MeOH-H2O diuji untuk analisis gula. The terkonsentrasi senyawa adalah UV aktif dan dengan demikian senyawa ini mengalami HPLC digabungkan ELSD memberikan merger puncak terionisasi tunggal pada Rt = 0.646. Ini campuran mentah mengalami HPLC preparative digabungkan LC / MS yang memberikan empat senyawa yang waktu retensi yang ditemukan menjadi 0,662, 0.676, 0.652, 0.684 dan dengan fragmen massa yang sesuai. Berbagai gula standar yang terlihat menggunakan sistem pelarut n-butanol - aseton - dietilamina air (10:10:2:6 v / v / v / v) lapisan selulosa untuk analisis TLC yang mengindikasikan adanya glukosa, fruktosa, sukrosa dan maltosa. Kata kunci: ekstraksi Gula, kulit pisang, UV aktif, HPLC, ELSD, Isolasi, LC / MS; TLC.

PENDAHULUAN Musa sapientum yang biasa disebut pisang merupakan tanaman herba dari Musaceae keluarga. Sekarang diketahui berasal dari daerah tropis di Asia Selatan. Sekarang dibudidayakan di seluruh daerah tropis [1]. Tanaman ini dibudidayakan terutama untuk buah-buahan dan pada tingkat lebih rendah untuk produksi serat [2]. Hal ini juga digunakan sebagai tanaman hias. The Musa sapientum tumbuh sampai ketinggian sekitar 2-8m dengan daun sekitar 3.5m panjang. Batang yang juga disebut semu menghasilkan sekelompok tunggal pisang sebelum meninggal dan digantikan oleh semu baru. Buah tumbuh di gantung klaster, dengan sekitar dua puluh buah ke tier dan 3 - 20 tingkatan untuk banyak. Buah dilindungi oleh kulitnya yang dibuang sebagai limbah setelah bagian berdaging batin dimakan. Musa sapientum buah telah dilaporkan untuk mencegah anemia dengan merangsang produksi hemoglobin dalam darah. Perannya untuk mengatur tekanan darah telah dikaitkan dengan tinggi isi kalium [2]. Pisang membantu

dalam memecahkan masalah sembelit tanpa perlu harus kembali ke laksativ. Pisang dapat menyembuhkan luka bakar jantung stres, stroke, maag dan banyak lainnya penyakit [3]. Para kulit telah dilaporkan berguna dalam pembuatan arang pisang, alternative sumber bahan bakar memasak di Kampala. Para kulit dalam hubungannya dengan zat lain membuat obat gosok untuk mengurangi keparahan rasa sakit arthritis dan nyeri [4]. Mengingat pergerakan itu dalam hadiah gula komersial dan meningkatnya permintaan mereka, penelitian ini dilakukan untuk memberikan informasi tentang Musa sapientun kulit yang sering mengabaikan dan dianggap sebagai limbah bisa dijinakkan untuk pemanfaatan yang tepat secara ekonomis.

BAGIAN EKSPERIMENTAL Ekstraksi air gula larut dari sampel Sampel terpilih diiris, dikeringkan dalam vakum pada 600 C selama 48 jam, dicampur untuk mendapatkan serbuk halus, karena luas permukaan memfasilitasi laju reaksi. Sampel bubuk digunakan untuk analisis lebih lanjut. 100,0 g bahan baku diambil dalam gelas 250ml dengan 50ml air suling ganda, diaduk dengan baik menggunakan pengaduk magnetik selama 30 '. Semua gula larut terlarut pada tahap ini dengan yang lain kotoran larut air (Setiap ekstraksi diulang empat kali). Yang dihasilkan sirup segera disimpan pada suhu 4 C dalam gelap. Sabut empulur dibakar di hadapan udara. Residu hitam diperoleh didinginkan dan halus membumi. Sirup dirawat dengan arang ini dan gelisah menggunakan shaker selama sekitar 30 '. Adsorpsi bahan pewarna berlangsung di atas permukaan arang. Filtrat dikumpulkan. Silica gel (230-400 mesh) dikemas dalam wadah disinter selama sekitar 2 cm dan filtratnya dituangkan ke dalam fraksi dikemas dalam jumlah minimal terhubung untuk pompa hisap yang membawa vakum tinggi. Kotoran berwarna diserap dan dipertahankan dengan silika gel, filtrat dikumpulkan dan pelarut telah dihapus pada evaporator berputar. Itu residu ditempatkan dalam gelas wadah kedap udara dan ditutupi dengan 300 ml etanol 80% mendidih. Setelah mendidih selama beberapa jam dalam mandi uap, wadah itu disegel dan kemudian disimpan pada suhu kamar. Untuk analisis, sampel homogen dalam blender selama 3-5 'dengan kecepatan tinggi dan kemudian disaring melalui corong Buchner menggunakan sumber vakum. Residu dalam saluran itu diekstraksi dua kali (lagi), menggunakan 150 ml 80% etanol setiap kali. Ekstrak yang kemudian dikombinasikan dan volume terkonsentrasi di evaporator berputar untuk menghilangkan alkohol. MDW dalam rasio (0.3:4:1 v / v / v), tabung sampel diberi makan dengan campuran yang longgar tertutup, ditempatkan dalam Mandi air untuk 5s, dan dibiarkan pada suhu ruang selama 10 'dan diambil dalam corong pisah, gelisah dengan penuh semangat oleh rilis sesekali tekanan, dua fase terpisah. Fase organic dibuang yang menghilangkan kotoran organik dan metanol: fasa air diuji untuk gula. Residu yang dikeringkan dengan oven pada 50 C (semalam) untuk menghapus sisa pelarut, dan disimpan pada -2 C untuk analisis.

Preparatif Analisis HPLC Campuran sampel mentah menjadi sasaran preparatif HPLC untuk pemisahan ke dalam berbagai fraksi. Campuran dipisahkan dalam 26'by fase terbalik HPLC pada Adsorbosphere Kolom-NH2, (250 x 4.6 mm kolom) menggunakan kedua isokratik dan gradien elusi dengan asetonitril / air dan dideteksi menggunakan (Waters ELSD 2420). Di ELSD, fase mobile pertama menguap. Partikel padat yang tersisa dari sampel tersebut kemudian dibawa dalam bentuk kabut ke sel di mana mereka terdeteksi oleh laser.

Analisis UV Sampel mentah dan fraksi dipisahkan menjadi sasaran analisis UV menggunakan Agilent 8453 ditambah dengan array detektor Diode.

HPLC / LC / MS Analisis Produk diekstraksi dianalisis menggunakan teknik LC / MS dilakukan pada sistem HPLC dengan evaporasi Hamburan Cahaya Detector (Waters 2420) dengan analog - digital converter (ADC), karena dari analisis UV sampel ditemukan tidak aktif UV yang digabungkan dengan massa spektrometer (Agilent Technologies, 1200 Series) dengan detektor spektrum massa (MSD). Itu fase gerak terdiri dari asam formiat 0,10% pada HPLC air deionisasi grade (A) (mili-q-air (dikenakan radiasi IR bawah 3.5micron filter) dan Metanol (B) yang diambil dalam fase diam Atlantis dc 18 kolom (50 x 4.6mm - 5m). Program gradien adalah sebagai berikut: 10% untuk B 95 B% dalam 4 menit, 95 B% sampai 95% B dalam 1 menit, 95 B% sampai 10% B dalam 0,5 menit diikuti oleh 10% B di 1,5 menit pada laju alir 1,2 mL menit-1. Kolom suhu oven dijaga pada 40 C dan Volume injeksi adalah 2,0 uL. Spektrum massa produk dicatat dalam kisaran m / z 150-1000. Parameter penting yang dioptimalkan sebelum menjalankan.

Persiapan chromatoplates Kromatografi lapis tipis dilakukan untuk fraksi dipisahkan terkonsentrasi menggunakan Selulosa MN 300 G. fraksi yang diperoleh menjadi sasaran satu kromatogram dimensi pada lapisan pelat selulosa. Setiap lempeng diaktifkan pada 110 C sebelum digunakan untuk 10 '.

sampel standar Sampel murni D (-) Ribose, D (+) Xylose, D (+) Galactose, (+) Glukosa, D (+) Mannose, D (-) Fruktosa, D (+) Sukrosa dan D (+) Maltose digunakan sebagai standar.

Satu - kromatografi dimensi 10 mg setiap gula dan fraksi dipisahkan dilarutkan dalam 1 ml air deionisasi. 1L masing-masing larutan gula diaplikasikan kromatoplat dengan mikropipet dalam biasa cara. Kromatoplat itu ditempatkan di ruang yang berisi cairan pengembang. Itu Sistem pelarut yang digunakan adalah n-butanol - aseton - dietilamina - air (10:10:2:6 v / v / v / v). itu piring dikembangkan dalam posisi hampir vertikal pada suhu kamar, ditutupi dengan tutup [5-9]. Setelah elusi, piring dikeringkan di bawah udara hangat. Piring disemprot dengan 5% difenilamin dalam etanol, 4% anilin dalam etanol dan 85% asam fosfat (05:05:01 v / v / v). Piring dipanaskan untuk 10'at 105 C. Sementara pengeringan titik berwarna muncul. The Rf nilai relatif terhadap pelarut dilaporkan di atas.

HASIL DAN PEMBAHASAN Laporan UV fraksi mentah dan dipisahkan Laporan Analisis menunjukkan bahwa sampel di bawah analisis UV aktif (ada konjugasi). UV Spectrum untuk sampel mentah diberikan di bawah Gambar 1, dan dipisahkan fraksi 1,2,3,4 (Angka 2,3,4 dan 5).

Laporan HPLC dari fraksi mentah dan dipisahkan Laporan HPLC minyak mentah memberikan puncak terionisasi bergabung satu di Rt = 0.646 disajikan dalam Gambar 6 dan fraksi dipisahkan 1,2,3,4 memberikan puncak terionisasi tunggal tajam di Rt = 0,662, 0,676, 0.652, 0.684 masing-masing (Gambar 7, 8, 9 dan 10).

Laporan Massa fraksi mentah dan dipisahkan Detektor Mass Spectrum memberikan spektrum berikut untuk campuran mentah di 0.575 ', fraction1 di 0.578 ', fraction2 di 0,593', fraction3 di 0.636 dan 0.666 ', fraction4 di 0,547 dan 2,572 '(Angka 11, 12, 13, 14, 15).

Laporan MS dicatat pada waktu yang tepat sesuai MSD untuk campuran minyak mentah antara waktu 0,493: 0,732 memberi massa nilai 111,2, 126,9, 140,9, 163,0, 180,1, 202,9, 342,2, 365,0, 390,1, 391,2, 553,3 memberikan kesimpulan gula mungkin monosakarida dan disakarida dengan massa 180,1 dan 342,2 dan fragmen mereka ditunjukkan pada Gambar 16, Fraction1 dipindai antara periode waktu 0.493:0.772 memberi nilai massa 112,9, 145,1, 163,0, 164,1, 180,1, 202,9 yang memberikan kesimpulan bahwa itu bisa menjadi monosakarida mengatakan glukosa, fruktosa, galaktosa, mannose dll yang massanya 180.1 (Gambar 17). Fraction2 dipindai antara periode waktu 0.507: 0.745 memberi nilai massa 111,2, 115,1, 140,9, 145.1,180.1, 198,0, 202,9 yang memberikan kesimpulan bahwa bisa menjadi monosakarida mengatakan glukosa, fruktosa, galaktosa, mannose dll yang massanya adalah 180.1 (Figure18). Fraction3 dipindai antara periode waktu 0.507: 0.600 dan 0.600: 0.878 memberi nilai massa 126,9, 163,0, 343,2, 360,0, 365,0, 374,0 dan 126,9, 163,0, 342,2, 365,0, 375,1 masing-masing yang menyimpulkan bahwa, mungkin suatu disakarida mengatakan laktosa, maltosa, sukrosa dll massa yang adalah 342,1 (Figure19 dan 20). Fraction4 antara periode 0.493:0.600 dan waktu 2.482:2.667 memberi nilai massa 145.1, 279,2, 312,1, 342,2, 360,0, 366,0, 527,0, 528,0, 689,0 dan 112,2, 145,1, 175,9, 278,9, 312,1 masing yang menyimpulkan bahwa mungkin laktosa, maltosa, sukrosa dll yang massanya adalah 342,1 (Angka 21 dan 22).

Lapisan tipis laporan analisis kromatografi Empat dipisahkan dan dimurnikan fraksi sampel terlihat di lapisan selulosa dan dielusi spesies yang disebutkan sebagai F 1, F 2, F 3, F 4 di kromatogram digambarkan dalam Gambar 23

The fractions obtained were found to be matching with the standard sugars and found to glucose, fructose, maltose and xylose. Rf value for the analytical grade samples which also shows the matching fractions Table 1. KESIMPULAN Limbah padat rumah tangga ini lebih penting karena bagian dibuang sangat tinggi, misalnya dalam karya ini bagian non-edible pisang yang dilemparkan adalah 20%. Oleh karena itu, sering ada masalah pembuangan limbah yang serius. Sebuah industri berbuah dan ekonomi aplikasi diterapkan dalam pekerjaan saat ini. Berdasarkan penelitian di atas, kami telah mengembangkan metode cepat untuk ekstraksi gula dapat larut dalam air. Secara singkat, sampel tanah kering diekstrak dengan 80% etanol panas yang diikuti oleh penggunaan campuran Methanol - Dichloromethane - Air (0.3:4:1 v / v / v) yang membawa hasil yang lebih baik dibandingkan dengan kloroform dalam Tempat diklorometana [10]. Keuntungan

menggunakan HPLC untuk mengukur gula telah diakui selama lebih dari satu dekade. HPLC telah terbukti menjadi lebih selektif daripada basah konvensional metode, sehingga sampel lebih sedikit pra-perawatan. Selain itu, HPLC memungkinkan individu kuantifikasi beberapa gula individu dalam kromatografi menjalankan tunggal. Massa dan TLC analisis memberikan konfirmasi akurat untuk kehadiran glukosa, fruktosa, sukrosa dan maltosa. Menjaga dalam melihat hasil yang diperoleh, dapat disimpulkan bahwa kulit pisang memiliki baik jumlah nilai gizi dan kaya karbohidrat. Paket kaca dan cold storage dapat mempertahankan berkualitas baik yang mengarah ke kehidupan yang lebih luas rak produk.