Jurnal dityA

SCHOLARS PENELITIAN PERPUSTAKAAN PENENTUAN BENZOIC ACID

RESIDU DARI FRUIT JUICE OLEH GAS KROMATOGRAFI DENGAN MASS
SPEKTROMETRI DETECTION TEKNIK

PENDAHULUAN

Asam benzoat ( CAS No 65-85-0 ) ; rumus molekul C7H6O2; C6H5COOH, nama IUPAC:
Benzene asam karboksilat atau Phenyl asam karboksilat; berat molekul 122,13, adalah
padatan putih yang mulai luhur pada 100 ° C , dengan titik leleh 122 ° C dan titik didih 249
°C. Benzoic Asam digunakan sebagai pengawet makanan dan yang paling cocok untuk
makanan, jus buah dan minuman ringan yang secara alami dalam rentang pH asam . Asam
benzoat juga digunakan sebagai pengawet dalam makanan, minuman, pasta gigi , mencuci
mulut , pasta gigi , kosmetik dan obat-obatan diatur. Itu Diperkirakan kapasitas produksi
global untuk asam benzoat adalah sekitar 6 , 00.000 ton per tahun. Benzoic asam terjadi
secara alami di banyak tanaman dan hewan . Oleh karena itu konstituen alami banyak
makanan , termasuk produk susu . Rilis antropogenik asam benzoat ke lingkungan yang
terutama emisi ke dalam air dan tanah dari menggunakan mereka sebagai pengawet .
konsentrasi V.S. Shrivastava et al Arch . Appl. Sci . Res . , 2011, 3 ( 2 ) :245 - 252
___________________________________________________________________________
__
246 Scholars Penelitian Perpustakaan alami asam benzoat dalam beberapa makanan tidak
melebihi nilai rata-rata dari 40mg/kg makanan. Metode analisis untuk penentuan asam
benzoat termasuk metode spektrofotometri, yang memerlukan prosedur ekstraksi luas dan
tidak sangat spesifik , kromatografi gas ( GC ) dan kinerja tinggi kromatografi cair ( HPLC )
metode , yang memiliki sensitivitas yang tinggi dan spesifisitas [ 1-10 ] . Halvorson et.al
( 1984) melaporkan penentuan langsung asam benzoat di udara oleh Flash desorpsi pada 240
° C dengan helium ke kapiler - GC memberikan batas deteksi 0,1 ppm ( 0.5mg/m3 ) dalam 20
liter sampel ( asam benzoat 10μg ) . Metode ini telah dikembangkan dan digunakan
untuk memantau paparan kerja [ 11 ] . Sebuah metode ( Larsson , 1983) untuk penentuan
asam benzoat dalam makanan padat pada 0,5-2 tingkat g / kg melibatkan ekstraksi dengan
eter menjadi natrium berair hidroksida dan Methylene klorida , konversi ke trimetilsilil ester
dan deteksi dengan GC dan ionisasi nyala [ 12 ] . Penentuan asam benzoat dalam margarin
diekstraksi dengan amonium asetat / asam acitic / metanol dengan menggunakan HPLC dan
deteksi violet Ultra , telah dijelaskan oleh Arens & Gretz 1990 [ 13 ] . Dalam makalah ini
kami memvalidasi dan dijelaskan prosedur ekstraksi dilakukan dengan kloroform . untuk
penentuan Benzoic acid dalam sampel jus buah , GC / MS dengan modus ionisasi elektron
adalah digunakan untuk secara bersamaan mengidentifikasi dan menghitung asam benzoat
dalam matriks makanan.

BAHAN DAN METODE

Reagen dan bahan kimia Kloroform, eter ( HPLC grade) dibeli dari SD bahan kimia ,
Mumbai , India . Reagen kelas anhidrat natrium sulfat , natrium klorida , natrium hidroksida
diperoleh dari SD bahan kimia , Mumbai , India . HCl dan H2SO4 dengan AR kelas yang
dibeli dari SD bahan kimia , Mumbai . Asam benzoat dengan kemurnian > 99 % diperoleh
dari Fluka bahan kimia, USA . Jus buah yang diperoleh dari pasar lokal Delhi ( India ) .
Analisis GC / MS Analisis kromatografi gas dilakukan dengan menggunakan Agilent
Technologies 6890 N GC jaringan sistem , dilengkapi dengan Agilent Technologies 7683 seri
auto sampler , Mass detektor selektif Model 5973 jaringan , dan gelas kapiler DB - 5 , ID :
0,32 mm , panjang : 30 m , ketebalan film : 0,25 m ; dikemas dengan non - polar polimer [ ( 5
% - fenil ) - methylpolysiloxane ] ( J & W Scientific 122-5532 , USA ) . ; aliran gas pembawa
helium . 1,0 ml / menit ; temperatur injeksi 280 ° C ; transfer Suhu garis 300 ° C , suhu
sumber ion 230 ° C , temperatur MS quard 150 ° C ; modus ion Modus ionisasi elektron
( scan mode / modus SIM ) ; oven program suhu 50 ° C selama 2 menit , @ 10 ° C / menit
sampai 180 ° C , pasca run : 280 ° C diadakan selama 5 menit ; injeksi pisah dengan volume
1 ml dengan auto sampler . Mettler beratnya saldo dengan jumlah paling sedikit 0.0001g dan
0.001mg untuk menimbang sampel dan standar masing-masing. Dikalibrasi 'A' gelas kelas
Borosil diperoleh dari lokal pasar . Persiapan 0.5M NaOH ( Sodium hydroxide ) . Sekitar 2 g
natrium hidroksida akurat ditimbang dan dipindahkan ke dalam 100 ml labu ukur dilarutkan
dan diencerkan sampai volume dengan menggunakan air HPLC grade. V.S. Shrivastava et al
Arch . Appl. Sci . Res . , 2011, 3 ( 2 ) :245 - 252
___________________________________________________________________________
__
247
Scholars Penelitian Perpustakaan

Pembuatan larutan standar Kalibrasi :

Larutan stok asam benzoat di 100μg/ml dibuat dengan melarutkan 2,5 mg asam benzoat
standar dalam kloroform dan membuat hingga 25 ml dan menyimpan solusi tempat yang
dingin dan gelap .

ekstraksi :
Sekitar 5 ± 0,1 g homogen sampel uji ( jus buah ) ditimbang secara akurat dan ditransfer ke
dalam 50 ml tabung disentrifugasi dengan Teflon - berbaris topi sekrup . Untuk ini 1,5 ml
H2SO4 ( 1:5) , 5 g pasir dan 15 ml eter ditambahkan dan topi sekrup pada ketat untuk
menghindari kebocoran . Mekanis dikocok selama 5 menit dan disentrifugasi pada 1500 × g
selama 10 menit . Ditransfer lapisan eter dengan pipet sekali pakai menjadi corong pemisah
250 ml . Ekstraksi diulang dua kali dengan 15 ml eter setiap kali . Diekstrak gabungan fase
eter dua kali dengan 15 ml 0,5 M NaOH dan 10 ml solusi jenuh NaCl setiap kali .
Dikumpulkan lapisan air ke dalam corong pemisah 250 ml , ditambahkan 2 ml metil orange
dan dipelihara oleh pH 1 diasamkan dengan HCl ( 1:1) . diekstrak Lapisan berair tiga kali
dengan 75 ml CHCl3 setiap kali dan melewati saringan mengandung 15 g Na2SO4 anhidrat
ke dalam 250 ml labu alas bulat dan menguap solusi CHCl3 dalam rotary evaporator pada 40
° C , membuat pengenceran sampai 5 ml .

Metode validasi :
Metode ini divalidasi untuk penentuan Benzoic acid untuk parameter berikut : spesifisitas ,
linearitas , presisi , akurasi , batas deteksi , batas kuantisasi , ketahanan dan ketidakrataan
sesuai ICH ( International Conference on Harmonization ) pedoman . Kekhususan : Kekhasan
metode ditentukan dengan menganalisis standar asam benzoat larutan dengan larutan sampel
diperkaya dengan larutan stok standar dan sampel jus kosong . Untuk ini 1μl tujuan solusi
sampel berduri dan larutan standar yang disuntikkan ke dalam gas chromatograph dengan
spektrometer massa dan spesifisitas metode ini diukur dari nilai m / z antara puncak yang
timbul dari larutan sampel berduri dan larutan standar .

Linearitas : Linearitas dari metode ini ditentukan dengan kurva kalibrasi untuk benzoat
acid untuk konsentrasi Vs detektor respon ( jumlah daerah di mV ) . Untuk tujuan ini ,
Kalibrasi larutan standar dibuat dengan mengencerkan larutan stok ( 100 mg / ml ) pada lima
tingkat di berkisar 0,1 , 0,5 , 1,0 , 5,0 dan 10.0μg/ml dan untuk kalibrasi pertandingan matriks
memperkuat sampel dengan spiking konsentrasi yang diketahui bekerja larutan standar . Dari
masing-masing kalibrasi ini standar 1ml disuntikkan ke GC - MS . Kurva kalibrasi diperoleh
menjadi sasaran analisis regresi dengan metode kuadrat terkecil untuk menghitung persamaan
kalibrasi dan koefisien korelasi ( r ) .

Batas Deteksi dan Batas Penghitungan : Untuk pengukuran batas deteksi ,

deviasi standar dari latar belakang ditentukan . Setelah itu , solusi standar yang sangat rendah
tingkat konsentrasi yaitu 0.05mg/ml , 0.1mg/ml dan 0,2 mg / ml disuntikkan sampai sinyal
yang diperoleh adalah tiga kali standar deviasi dari latar belakang . Untuk pengukuran batas
kuantisasi lagi , konsentrasi diketahui benzoat standar larutan asam disuntik sampai sinyal
yang diperoleh adalah direproduksi selama lima suntikan ulangan . V.S. Shrivastava et al
Arch . Appl. Sci . Res . , 2011, 3 ( 2 ) :245 - 252
___________________________________________________________________________
__
248
Scholars Penelitian Perpustakaan

Presisi : Ketepatan metode ditentukan dari segi pengulangan atau

reproduktifitas dan studi presisi menengah. Repeatability ditentukan dengan mengevaluasi
lima ulangan dari tiga konsentrasi yang berbeda yaitu 0,1 mg / ml , 0,5 mg / ml dan 5,0 mg /
ml kalibrasi larutan standar asam benzoat pada hari yang sama ( intra - day ) di bawah
disebutkan kondisi kromatografi . Ketepatan antara metode diyakinkan oleh melakukan
analisis pada tiga hari yang berbeda ( inter - hari) dan juga oleh para analis yang berbeda
dalam laboratorium yang sama ( antara analis ) . Co- efisien variasi atau RSD persen dihitung
dalam setiap kasus .

Studi Pemulihan : Akurasi dan pemulihan studi metode dievaluasi dengan spikingn
konsentrasi diketahui berbeda dari asam benzoat dalam sampel jus pra - dianalisis yang
dilakukan dengan menambahkan 0,05 ml dan 0,10 ml 100 ml / ml larutan stok ke dalam 5g
dari setiap sampel , diberikan konsentrasi 1μg / g ( 1 - ppm ) dan 2 mg / g ( 2 - ppm ) . 1ml
dari masing-masing solusi dari lima mereplikasi disuntikkan ke GC - MS dan kedekatan hasil
dengan nilai sejati ditentukan .
Ketahanan: Ketahanan metode ditentukan dengan menganalisis sampel yang sama di bawah
kondisi yang berbeda dari metode parameter seperti dua membuat berbeda dari kromatografi
gas , kolom yang sama dari dua produsen yang berbeda , analis yang berbeda , dan berbagai
Volume injeksi .

HASIL DAN PEMBAHASAN

Selektivitas / spesifisitas : Selektivitas atau spesifisitas metode analisis untuk asam benzoat
dalam buah jus direpresentasikan dalam Figure.1 . Kromatogram menunjukkan bahwa
metode yang dikembangkan adalah sukses dalam pemisahan asam benzoat dalam makanan
matriks kompleks . Puncak kromatogram juga dikonfirmasi oleh nilai m / z standar asam
benzoat dengan NIST perpustakaan GC - MS (Gambar 2 ) . Daerah puncak asam benzoat
diperoleh nilai RSD berada dalam 5 % pada tingkat ppb . itu waktu retensi memiliki
reproduktifitas baik, dalam RSD 0,05 % . Tabel 1 menunjukkan hasil untuk selektivitas dan
spesifisitas asam benzoat dalam jus buah. Linearitas dan Rentang : Kurva kalibrasi untuk
asam benzoat disiapkan dengan memplot daerah puncak terhadap konsentrasi asam benzoat
dalam jus buah matriks dan pelarut kosong . Itu linear di kisaran 0.1μg/ml , 0,5 ug / ml , 1,0
mg / ml , 5,0 mg / ml dan 10,0 mg / ml memberikan respon linear selama rentang konsentrasi
belajar , dan kotak analisis regresi linier paling besar data yang diberikan koefisien korelasi
yang sangat baik ( r ) lebih dari 0,999 untuk kedua kalibrasi standar dalam matriks jus dan
pelarut kosong . Persamaan linear , korelasi co - efisien dan Nilai RSD disajikan pada Tabel 2
. Batas deteksi ( LOD ) dan batas kuantitasi ( LOQ ) : LOD ditentukan dengan
mempertimbangkan sinyal ke noise ( S / N ) rasio 3:1 untuk transisi massa terkuat
sehubungan dengan latar belakang kebisingan yang diperoleh dari sampel kosong sedangkan
LOQ ditentukan sama dengan mempertimbangkan sinyal untuk rasio kebisingan ( S / N )
rasio 6:1 . Berdasarkan tingkat rata-rata kebisingan selama sepuluh suntikan kosong matriks
buah sampel jus , batas deteksi terendah dari instrumen dihitung sebagai 0.05mg / g dan
dikonfirmasi menggunakan larutan standar dengan konsentrasi 0.05mg / g dan terendah
tingkat konsentrasi yang dapat diukur dengan nilai-nilai direproduksi diperoleh pada suntikan
6 V.S. Shrivastava et al Arch . Appl. Sci . Res . , 2011 , 3 ( 2 ) :245 - 252
___________________________________________________________________________
__
249
Scholars Penelitian Perpustakaan ulangan dari konsentrasi yang sama dengan 0,1 mg / g dan
selanjutnya dikonfirmasi dengan menyuntikkan 6 ulangan dari matriks cocok larutan standar
asam benzoat memiliki konsentrasi 0,1 mg / g .
Presisi : Studi Presisi dilakukan untuk kedua intra-day dan inter - hari pengulangan dan
reproducibility ( Tabel 3 ) . Sampel berduri jus buah pada tingkat konsentrasi yang berbeda
yaitu 0,1 mg / g , 0,5 mg / g dan 5,0 mg / g masing-masing disuntik lima ulangan pada hari
yang sama dan jumlah yang sama kali pada tiga hari berikutnya oleh tiga analis yang
berbeda . The % rendah RSD nilai yang diperoleh untuk intra-day dan inter - hari variasi
dalam batas yang bisa diterima menunjukkan bahwa Metode yang diusulkan adalah tepat dan
dapat diadopsi untuk analisis .

Ketahanan: Ketahanan metode ditentukan dengan menganalisis set yang sama berduri sampel
( yaitu sampel dibubuhi pada tingkat konsentrasi 0,1 mg / g , 0,2 mg / g , dan 0,5 mg / g ) di
bawah parameter yang berbeda ; seperti kimia kolom yang sama dari produsen yang berbeda ,
berbeda analis , dan volume injeksi yang berbeda . Metode ini ditemukan untuk menjadi kuat
bahkan dengan kecil

perubahan kondisi analitis : perubahan laju alir ( ± 0,1 ml / menit ) , perubahan injector suhu (
+ 2 ° C ) , penggunaan kolom yang sama dari produsen yang berbeda ( HP5 , DB5 , CP - sil 8
CB ) . Di bawah semua kondisi ini , nilai-nilai analisis dari sampel berduri tidak terpengaruh
dan itu sesuai dengan nilai yang sebenarnya .

KESIMPULAN
Asam benzoat digunakan sebagai pengawet dalam jus buah tetapi harus hadir pada tingkat
ppm karena pada konsentrasi yang tinggi berdampak pada kesehatan manusia . Sebuah
divalidasi gas kromatografi –Mass metode spektrometri telah dikembangkan untuk penentuan
asam benzoat dalam jus buah saat tingkat ppm . Pekerjaan yang diuraikan dalam makalah ini
telah menunjukkan bahwa metode analisis yang dikembangkan adalah tepat, akurat , sensitif
dan kuat untuk penentuan asam benzoat . Metode inikhusus untuk analisis asam benzoat
dalam jus buah tanpa campur tangan matriks