Artikel Asli

Metode RP-HPLC sederhana untuk estimasi

diazepam dalam bentuk sediaan tablet

A. Sruthi, P. Tejaswi, N. Thanuja, D. Sudheer Kumar, P. Vivek Sagar*

Departemen Analisis Farmasi, Sekolah Tinggi Farmasi Farmasi, Warangal, Andhra Pradesh, India

artikel info

Sejarah artikel: Diterima 11 September 2012 Diterima 4 November 2012

Kata kunci: RP-HPLC Diazepam Validasi bentuk sediaan farmasi

ABSTRAK
Metode fase balik sederhana HPLC dikembangkan dan divalidasi untuk penentuan
diazepam yang ada dalam bentuk sediaan farmasi. Kolom Hypersil ODS C-18 (250 x 4,6 mm,
dikemas dengan 5 mikron) digunakan sebagai fase diam. Mode isokratik dengan fase gerak yang
terdiri dari asetonitril, metanol, dan buffer fosfat 1% (pH-3) dalam rasio 18:58:24 (v / v / v) pada
laju aliran 1 ml / menit dan efluen dipantau pada 232 nm. Kromatogram menunjukkan puncak
DZP pada waktu retensi 6,23 + 0,002 menit. Kisaran linearitas ditemukan 2e20 μg / ml. Metode
ini divalidasi untuk linearitas, akurasi, presisi, batas deteksi, batas kuantitasi, ketahanan dan
kekasaran. Pemulihan DZP ditemukan berada di kisaran 99,4dan100,3%. Batas deteksi dan
batas kuantitasi untuk estimasi DZP ditemukan 0,898 μg / ml dan 2,72 μg / ml, masing-masing.
Metode yang diusulkan berhasil diterapkan untuk penentuan kuantitatif DZP dalam bentuk
sediaan farmasi.
1. Pendahuluan
Diazepam (7-chloro-1, 3-dihydro-1-methyl-5-phenyl-2H-1, 4-benzodiazepin-2-one)
adalah benzodiazepine (BZD) yang umumnya digunakan sebagai hipnotik, anxiolitik dan
relaksan otot. . Diazepam (DZP) juga secara rutin diresepkan sebagai pengobatan lini pertama
standar untuk kejang akut dan status epileptikus berkepanjangan.1 Beberapa metode untuk
analisis BZD telah dilaporkan.2 Sejumlah metode kromatografi, seperti kromatografi lapis
 tipis (KLT)3 kromatografi gas4e6 dan kromatografi gasespektrometri massa (GCeMS)7,8 telah
digunakan dalam analisis diazepam dan lainnya 1,4- benzo- diazopin. Beberapa metode
kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC) juga telah dilaporkan untuk penentuan diazepam dan
BZD lainnya.9,10 Namun, semua metode ini memiliki keterbatasan seperti waktu jangka
panjang dan / atau mahal. Penelitian ini berfokus pada meminimalkan keterbatasan ini dan
untuk mengembangkan metode akurat akurat dan ekonomis sederhana untuk estimasi
diazepam dalam bentuk sediaan tablet.

2. Bahan dan metode

2.1. Bahan kimia dan reagen
Sampel diazepam yang secara analitik murni diperoleh sebagai sampel hadiah dari
Natco Pharma Ltd. (Hyderabad, India). Metanol tingkat HPLC diperoleh dari E. Merck
(Hyderabad). Air kadar kromatografi cair diperoleh dengan distilasi ganda dan
pemurnian melalui sistem pemurnian air Milli-Q. Kalium dihidrogen fosfat (kadar AR,
kemurnian 99,5%) diperoleh dari Qualigens. Formulasi tablet VALIUM (Nicholas
Piramal India Ltd.) dibeli dari apotek lokal dengan label jumlah 5 mg per tablet.
2.2. Instrumentasi & kondisi kromatografi
Analisis HPLC dilakukan pada CYBERLAB HPLC yang dilengkapi dengan pompa
HPLC resiprokal LCP-100. Sebuah Rheodyne beroperasi secara manual injector dengan
20 μ,lingkaran L sampel LC-UV 100 detektor ultraviolet digunakan. Analisis grafis
chromatograph dilakukan pada Hypersil fase terbalik C-18 kolom dengan 250 x 4.6 mm
id dan 5 μukuran m partikel. Fase gerak terdiri dari asetonitril, metanol, 1% dapar fosfat
(pH-3) dalam perbandingan 18:58:24 (v / v / v) yang ditetapkan pada laju aliran 1 ml /
menit. Fase gerak didegradasi dan disaring melalui 0,25 μm filter membran sebelum
dipompa ke sistem HPLC. Eluen dipantau dengan deteksi UV pada 232 nm.
2.3. Larutan dan standar
stok Larutan stok diazepam (1 mg / ml) dibuat dengan mentransfer 25 mg obat dalam
labu volumetrik 25 ml. Obat dilarutkan dalam jumlah yang cukup 0,1 N HCl dan
akhirnya volumenya dibuat sampai tanda dengan air suling.

2.4. Persiapan bekerja solusi standar

 Bekerja solusi standar mulai 0,5-50 μg / ml disusun oleh pengenceran yang tepat dari
saham dengan air suling.
2.5. Persiapan larutan sampel
Dua puluh tablet diazepam hidroklorida ditimbang dan ditumbuk menjadi bubuk
halus. Sejumlah bubuk yang setara dengan 25 mg diazepam ditimbang dan dipindahkan
ke dalam labu ukur 25 ml dan dilarutkan dalam 0,1 N HCl. Volume dibuat dengan tanda
yang sama. Larutan di atas sesuai diencerkan dengan air suling. Dari stok ini,
pengenceran yang sesuai (10 μg / ml) disiapkan. Larutan yang disiapkan disaring melalui
0,45 μ filter membran dan filtrat yang dihasilkan disonikasi selama 10 menit. Setelah
mengatur kondisi kromatografi dan menstabilkan instrumen untuk mendapatkan garis
dasar yang mantap, larutan sampel dimasukkan dalam20 μltetap e loop sampelpada port
injeksi.
2.6. Metode pengembangan
Eksperimen percobaan awal dilakukan, dengan tujuan untuk memilih sistem pelarut
yang cocok untuk estimasi obat yang akurat dan untuk mencapai waktu retensi yang baik.
Kesesuaian fase gerak diputuskan berdasarkan sensitivitas uji, waktu yang diperlukan
untuk analisis, kemudahan persiapan, dan penggunaan pelarut efektif yang tersedia
dengan biaya. Ini termasuk metanol-kalium dihidrogen fosfat, metanol-amonium asetat,
asetonitril-kalium dihidrogen fosfat, asetonitril-amonium asetat, metanol-air. Fase gerak
yang terdiri dari asetonitril, metanol, buffer fosfat 1% (pH-3) dalam perbandingan
18:58:24 (v / v / v) yang ditetapkan pada laju aliran 1 ml / mnt ditemukan menjadi
optimal dan dioptimalkan lebih lanjut dengan menyesuaikan pH 3e4 dengan
menambahkan asam ortofosfat. Komposisi asetonitril, metanol, 1% dapar fosfat dengan
perbandingan 18:58:24 (v / v / v) dengan pH-3 memberikan hasil terbaik.

2.7. Stabilitas solusi

Untuk menunjukkan stabilitas solusi standar dan sampel selama analisis, kedua solusi
dianalisis selama 96 jam pada interval 24 jam pada suhu kamar. Hasil menunjukkan
bahwa untuk solusi, waktu retensi dan area puncak diazepam hidroklorida tetap tidak
berubah dan tidak ada degradasi yang signifikan dalam periode yang ditunjukkan, ini
menunjukkan bahwa kedua solusi stabil untuk 72 jam.
3. Hasil dan diskusi
3.1. Analisis formulasi
Larutan sampel diinjeksikan dan kromatogram dicatat. Suntikan diulang enam kali dan
daerah puncak dicatat. Jumlah yang hadir obat dalam formulasi farmasi dihitung
menggunakan kurva kalibrasi standar (konsentrasi dalam μg / ml diambil pada sumbu X
dan rata-rata daerah puncak pada sumbu Y). Persentase hadir obat di setiap tablet
ditemukan menjadi 100,2. Sebuah kogramogram representatif telah diberikan pada
Gambar. 1.

3.2. Validasi metode pengujian

3.2.1. Linearitas
Berbagai konsentrasi dalam kisaran 0,5e50 μg / ml disiapkan. Masing-masing
tingkat konsentrasi disiapkan dalam Jumlah rangkap tiga obat yang ditambahkan
(ppm).11 20 μlmasing-masing larutan standar disuntikkan ke sistem HPLC untuk
mendapatkan kromatogram. Waktu retensi, daerah puncak rata-rata dicatat. Kurva
kalibrasi dibangun dengan memplot area puncak rata-rata terhadap konsentrasi
dan persamaan regresi dihitung. Kisaran linearitas ditemukan 2e20 μg / ml.
Hasilnya ditunjukkan pada Tabel 1. Hasilnya menunjukkan bahwa ada korelasi
yang sangat baik antara daerah puncak dan konsentrasi obat dalam rentang
konsentrasi, grafik regresi disajikan pada Gambar. 2.

3.2.2. Presisi
Ketepatan metode dipastikan dari respons area puncak yang diperoleh dengan
penentuan sebenarnya dari enam ulangan jumlah obat yang tetap. Persen standar
deviasi relatif dihitung untuk diazepam dan disajikan dalam Tabel 2. Ketepatan
metode ditemukan menjadi 1,02.

3.2.3. Akurasi
Akurasi metode yang dikembangkan dikonfirmasi dengan melakukan studi
pemulihan sesuai norma ICH. Kuantitas yang diketahui dari obat murni
ditambahkan ke formulasi sampel pra-dianalisis (10 μg / ml) pada tiga tingkat
 konsentrasi yang berbeda 80%, 100% dan 120% dengan analisis ulangan (n = 3).
Dari studi pemulihan jelas bahwa metode ini sangat akurat untuk estimasi
kuantitatif diazepam hidroklorida dalam bentuk sediaan tablet karena semua hasil
statistik berada dalam kisaran penerimaan, 99,4dan100,3%, yang menunjukkan
bahwa tidak ada gangguan dengan eksipien. Nilai pemulihan persentase dihitung
dan hasilnya ditunjukkan pada Tabel 3.

3.2.4. Ruggedness
Ruggedness adalah tingkat reproduksibilitas hasil yang diperoleh dalam
berbagai kondisi. Dari larutan stok, larutan yang mengandung 14 μg / ml
hidroklorida diazepam disiapkan dan dianalisis oleh dua analis yang berbeda
menggunakan kondisi operasional dan lingkungan yang sama dalam periode
percobaan yang berbeda. Persentase pemulihan dari ulangan dihitung. Diperiksa
bahwa hasilnya dapat direproduksi di bawah perbedaan dalam, analis. Hasilnya
ditunjukkan pada Tabel 4.

3.2.5. Robustness
Metode ini ditemukan kuat, meskipun perubahan yang disengaja kecil dalam
kondisi metode memang memiliki efek yang dapat diabaikan pada perilaku
kromatografi zat terlarut. Hasil menunjukkan bahwa mengubah panjang
gelombang detektor tidak memiliki efek besar pada perilaku kromatografi
diazepam hidroklorida. Bahkan perubahan kecil komposisi fase gerak (pH 3 +
0,2), tidak menyebabkan perubahan penting pada area puncak obat yang
digunakan untuk metode ini. Hasilnya disajikan dalam Tabel 5 dan 6.

3.2.6. LOD & LOQ

LOD dan LOQ untuk diazepam diperkirakan dengan menyuntikkan
serangkaian larutan encer dengan konsentrasi yang diketahui. Parameter LOD dan
LOQ ditentukan berdasarkan respon puncak dan kemiringan persamaan regresi.
LOD dan LOQ obat ditemukan masing-masing 0,898 μg / ml dan 2,72 μg / ml.
 3.2.7. Parameter kesesuaian sistem
Parameter kesesuaian sistem dapat didefinisikan sebagai pengujian untuk
memastikan bahwa metode ini dapat menghasilkan hasil yang akurat dan presisi.
Persyaratan untuk kesesuaian sistem biasanya dikembangkan setelah
pengembangan metode dan validasi telah selesai. Parameter kesesuaian sistem
seperti pelat Teoritis (N), Resolusi (R), faktor Tailing (T) dihitung dan
dibandingkan dengan nilai standar untuk memastikan apakah metode RP-HPLC
yang diusulkan untuk estimasi diazepam dalam formulasi farmasi divalidasi atau
tidak. . Hasilnya ditunjukkan pada Tabel 7.

4. Kesimpulan
Metode RP-HPLC yang mudah, cepat, akurat, tepat dan ekonomis telah dikembangkan
untuk memperkirakan diazepam dalam bentuk sediaan curah dan tablet. Pengujian ini
memberikan respons linier di berbagai konsentrasi dan menggunakan fase gerak yang mudah
disiapkan dan pengencer ekonomis, tersedia. Metode yang diusulkan dapat digunakan untuk
analisis rutin diazepam hidroklorida dalam sediaan massal obat dan, dalam bentuk sediaan
farmasi tanpa campur tangan eksipien.