Indikasi Farmakologi

Carbamazepine biasanya digunakan untuk pengobatan pada gangguan kejang

dan nyeri neuropatik.

Carbamazepine merupakan obat lini pertama dalam sebagian besar

pengobatan epilepsi dan juga obat pilihan pertama dalam neuralgia trigeminal.
Selain itu, saat ini carbamazepine sering digunakan untuk gangguan depresi
bipolar dan digunakan bersama dengan agen antipsikotik pada skizofrenia.

PENDAHULUAN
Carbamazepine adalah obat anti-epilepsi yang secara luas digunakan untuk
pengobatan kejang parsial sederhana dan kompleks, neuralgia trigeminal, dan
gangguan afektif bipolar. Carbamazepine selektif menghambat frekuensi fokus
epilepsi tinggi tanpa mempengaruhi aktivitas saraf normal dengan memblokir saluran
natrium. Dosis umum terapeutik dewasa adalah antara 4 dan 12 ug/mL. Efek samping
yang serius, seperti koma, kejang, gagal pernafasan dan cacat konduksi jantung,
terjadi lebih sering ketika tingkat serum carbamazepine lebih tinggi dari 15 ug/mL.
Banyak teknik analitik telah diterapkan dalam penentuan tingkat
carbamazepine, seperti high performance liquid chromatography (HPLC), gas
chromatography, gas chromatography combined with mass spectrometry and
fluorescence polarization immunoassay (FPIA). Meskipun teknik HPLC memiliki
keunggulan waktu yang cepat dan resolusi yang sangat baik, biaya peralatan dan
pemeliharaan yang tinggi diperlukan untuk tetap berjalan secara optimal. Dalam
kromatografi umumnya sampel terbatas pada molekul non-polar dan sedikit polar.
Dalam laboratorium klinis, immunoassay lebih banyak digunakan untuk
memantau konsentrasi carbamazepine dalam serum atau plasma karena
kesederhanaan penggunaan. Immunoassays FPIA diterima di sebagian besar
laboratorium klinis karena memberikan pengukuran yang paling akurat dan sensitive
dari analit toksikologi kecil, seperti obat terapi, narkotika, dan beberapa hormon,
dibandingkan metode yang lain.
Metode elektrokimia telah terbukti sensitif dan dapat diandalkan untuk
mendeteksi beberapa obat elektroaktif seperti abacavir dan sildenafil sitrat.

Dibandingkan dengan teknik analisis lainnya, teknik elektrokimia lebih sederhana,

murah, dan punya waktu analisis yang relatif singkat.

ALAT, BAHAN, DAN METODE

Preparasi Sampel
Carbamazepine murni dalam bentuk bubuk dibeli dari MP Biomedicals, Inc
(Jerman). Tetrabutilammonium perklorat (TBAP) diperoleh dari Toyo Kogyo Kasei
Co, Ltd (Jepang). Sampel yang diuji disusun dalam 7 konsentrasi yang berbeda (0, 2,
4, 8, 12, 20 dan 23,6 ug / mL) dengan melarutkan carbamazepine di 0,1 M TBAP /
asetonitril. Semua reagen lain yang digunakan adalah kelas analitis. Air suling ganda
diperoleh dengan pemurnian melalui sistem air Millipore
Pengukuran Volumetrik
Untuk aplikasi analitis, parameter berikut digunakan: DPV pulse amplitude,
50mV, pulse width: 0,05 (s), sample width: 0,0167 (s); puls period: 0,2 (s); scan rate:
20 mV/s-1. DPV dilakukan dengan CHI421A (CHI Model 660 seri elektroanalitik
workstation). Hal ini dilakukan dengan menggunakan tiga sel elektroda, di mana
elektroda karbon gelas BAS (luas = 0,07 cm2) digunakan sebagai elektroda kerja
Elektroda karbon kaca dipoles dengan alumina 0.05m pada bantalan Buehler
dan disonikasi selama 2 menit untuk menghilangkan residu alumina. Sebuah kawat
platina digunakan sebagai elektroda pembantu. Semua potensial sel diukur dengan
menggunakan Ag / AgCl, elektroda referensi KCl. Larutan buffer mengandung 0,1 M
(C4H9) 4NClO4 untuk mendukung elektrolit dalam CH3CN.
Puncak arus khas carbamazepine ditunjukkan pada Gambar 1. Puncak pada
1,24 V diadaptasi dalam penelitian untuk analisis sejak puncaknya lebih tinggi
daripada -2.2V. Arus yang berhubungan dengan konsentrasi terkait ditunjukan pada
gambar 2. Menurut kurva kalibrasi yang ditunjukkan pada Gambar 2, dapat dihitung
konsentrasi dari sampel uji.
Teknik FPIA
Teknik FPIA dilakukan oleh teknisi menggunakan Abbott TDx analyzer
dengan prosedur operasi standar. Semua reagen yang dibutuhkan dibeli dari Abbott
Laboratories (Chicago, IL, USA).

Validasi Metode
Presisi. Sampel yang diuji terdiri dari 4, 8,12 ug/mL carbamazepine dianalisis
sebanyak 20 kali dengan teknik DPV dan empat tes per-run selama lima-run dengan
teknik FPIA untuk mengevaluasi variasi antar-run. Perbandingan dalam menjalankan
variasi tidak mungkin karena teknik DPV hanya dapat menguji satu sampel per
dijalankan. Hasilnya dinyatakan sebagai koefisien variasi (CV,%).
Akurasi. Sampel yang diuji terdiri dari 2, 4, 8, 12, 20 dan 23,6 ug / mL
carbamazepine dianalisis 5 kali dengan teknik DPV dan teknik FPIA. Hasilnya
dinyatakan dalam bias, perbedaan antara rata-rata masing-masing konsentrasi dan
konsentrasi referens, dan dalam persen recovery, yang dihitung dengan membagi bias
dengan konsentrasi referens. Bias positif menunjukkan bahwa konsentrasi rata-rata
lebih tinggi dari konsentrasi referens, sedangkan bias negatif menunjukkan bahwa
konsentrasi rata-rata lebih rendah dari konsentrasi referens.
Linearitas. Tujuh konsentrasi yang berbeda dari sampel, diuji tiga kali dengan
masing-masing teknik. Rata-rata dari tiga hasil dikorelasikan dengan konsentrasi
teoritis masing-masing sampel. Hasilnya dinyatakan sebagai koefisien determinasi
(R2, RSQ).
Limit deteksi. Sampel uji dengan 0 ug/mL dianalisis 10 kali dengan masing-masing
teknik. Sampel uji 2 ug/mL diencerkan secara serial dan dianalisis 10 kali dengan
masing-masing teknik. Kemudian mean dan CV dari hasil dihitung. Konsentrasi
minimal menunjukkan bahwa rata-rata - 3SD lebih tinggi dari rata-rata + 3SD dari
hasil blank diinterpretasikan sebagai batas deteksi masing-masing teknik.
Analisis Statistik. Menurut pedoman FDA untuk metode bioanalytical, dianjurkan
bahwa akurasi dan presisi dari pengujian tersebut harus berada dalam jarak 15% dari
nilai yang sebenarnya, kecuali pada Lower Limit of Quantitation (LLOQ), di mana
seharusnya tidak menyimpang lebih dari 20%.
Dengan menggunakan korelasi Pearson, hubungan linear dihitung antara hasil
yang diperoleh dengan teknik FPIA dan konsentrasi referens serta antara hasil yang
diperoleh dengan teknik DPV dan konsentrasi referens. Sebuah t-test digunakan
untuk perhitungan signifikansi statistik r (Koefisien Korelasi Pearson). Nilai P kurang
dari 0,05 dianggap signifikan secara statistik. Koefisien determinasi (R2, RSQ) juga
dihitung.

Kesesuaian antara kedua metode dan kecocokan masing-masing metode

dengan nilai konsentrasi refrens disajikan dengan menggunakan pendekatan BlandAltman, dengan memplot perbedaan persen antara dua metode versus konsentrasi
rata-rata ditentukan.

HASIL DAN PEMBAHASAN

Hasil dari presisi, akurasi, linearitas, dan batas deteksi DPV dan FPIA
tercantum dalam Tabel 1. Koefisien variasi untuk teknik DPV pada konsentrasi 4, 8,
dan 12 ug/mL adalah 3,27%, 2,35% dan 2,87%. Koefisien variasi untuk teknik FPIA
pada konsentrasi 4, 8, dan 12 ug/mL adalah 3,26%, 2,65% dan 2,44%. Hal tersebut
menunjukkan ketepatan teknik DPV dan FPIA adalah sebanding
Bias untuk teknik DPV pada konsentrasi 2, 4, 8, 12, 20, dan 23,6 ug / mL
adalah -0.38 ug / mL (-18,89%), -0.30 ug / mL (-7,38%), 0,53 ug / mL (6,62%), 0,59
ug / mL (4,88%), -0.29 ug / mL (-1.44%) dan -0.14 ug / mL (-0.61%). Bias untuk
teknik FPIA pada konsentrasi 2, 4, 8, 12, 20, dan 23,6 ug / mL adalah -0.03 ug / mL
(-1.4%), -0.13 ug / mL (-3,28%), 0,19 ug / mL (2,32%), -0.52 ug / mL (-4,31%), 1,55
ug / mL (7,76%) dan 0,03 ug / mL (0,13%). Hasil kinerja kedua teknik itu
menunjukaan berada dalam batas pedoman FDA untuk metode bioanalytical.
Meskipun bias dalam teknik DPV terlihat lebih besar dari teknik FPIA, ini
memastikan penerapan klinis dari teknik DPV.
Dibandingkan dengan sampel referens, RSQ untuk teknik DPV adalah 0,993
dan 0.994 untuk teknik FPIA. T-tes untuk signifikansi statistik r (Koefisien Korelasi
Pearson) baik di DPV dan FPIA teknik adalah P <0,001. Batas deteksi adalah 1ug/mL
untuk teknik DPV dan 0,5 ug / mL untuk teknik FPIA. Pendekatan Bland-Altman
untuk kedua DPV dan konsentrasi nilai referensi (Gambar 3) dan FPIA dan nilai
konsentrasi referensi (Gambar 4) menunjukkan kesesuaian yang baik.
Analisis elektrokimia menentukan konsentrasi suatu analit dengan mengukur
perubahan arus sebagai respon tegangan terhadap waktu menggunakan elektroda.
Menurut Hukum Faraday, perubahan mencerminkan jumlah analit yang mengalami
oksidasi atau reduksi. Teknik elektrokimia yang paling sering digunakan adalah
potentia konstan.
Analisis elektrokimia menentukan konsentrasi suatu analit dengan mengukur
perubahan arus dalam menanggapi tegangan terhadap waktu menggunakan elektroda.

Menurut Hukum Faraday, perubahan mencerminkan jumlah analit yang mengalami

oksidasi atau reduksi. Teknik elektrokimia yang paling sering digunakan adalah
potensi amperometry konstan, highspeed chronoamperometry, fast cyclic
voltammetry (FCV) dan differential pulse voltammetry (DPV). Potensi amperometry
konstan memonitor perubahan waktu untuk saat ini dengan menerapkan potensi
konstan. Resolusi waktu potensial amperometry konstan sangat baik.
Menurut hasil, presisi dan linearitas, didapat teknik DPV sebaik teknik FPIA.
Meskipun akurasi teknik DPV tidak sebagus yang dari teknik FPIA pada tingkat
2ng/mL, namun masih dalam batas 20% dari pedoman FDA untuk batas bawah
kuantitasi (LLOQ). Pada konsentrasi lain yang memainkan peran lebih penting dalam
pemantauan klinis, rekomendasi bias pedoman FDA adalah 15%. Keakuratan teknik
DPV tidak hanya sebanding dengan yang dari teknik FPIA, tetapi juga dalam
pedoman FDA pada konsentrasi antara 4 ug / mL dan 23,6 ug / mL. Kondisi serupa
juga tercatat untuk batas deteksi. Batas deteksi teknik DPV adalah lebih tinggi dari
teknik FPIA. Namun, dalam aplikasi klinis, tingkat terapi carbamazepine adalah 4-12
ug / mL.
Selain keuntungan tersebut, dalam metode elektrokimia juga diperlukan
instrumentasi yang relatif murah, sederhana, dan durasi yang lebih lama untuk
validitas reagen yang dibutuhkan. Metode ini mampu menentukan unsur akurat pada
tingkat trace dan ultratrace dalam waktu analisis yang relatif singkat sehingga dapat
terus memantau tingkat serum
Immunoassays terutama tergantung pada reaksi antigen-antibodi. Mereka
banyak diterapkan di laboratorium klinis, dan termasuk radioimmunoassay (RIA),
assay enzyme-linked immunosorbent (ELISA), immunoassays polarisasi fluoresensi
(FPIA) dan kloning immunoassay donor enzim (CEDIA). Namun, diketahui bahwa
stabilitas antibodi dapat dipengaruhi oleh banyak faktor, seperti suhu, freeze and thaw
berulang, dilution dan freshness. Jadi penyimpanan dan penanganan antibodi
membutuhkan perawatan khusus. Sebaliknya, reagen yang diperlukan untuk analisis
DPV relatif stabil. Selain itu, reaksi silang dengan zat yang memiliki struktur kimia
yang mirip dapat mengakibatkan hasil yang salah. Dengan kata lain, metode
immunoassay dapat membedakan senyawa dalam kelas yang berbeda
Namun, metode immunoassay mungkin tidak dapat secara akurat
membedakan senyawa dalam kelas yang berbeda. Oleh karena itu, pemantauan obat
terapeutik dengan immunoassay mungkin gagal dalam kasus-kasus dengan resep

simultan obat di kelas yang sama atau dalam kasus di mana metabolitnya memiliki
struktur kimia mirip dengan senyawa asli.
Sekitar 75% dari carbamazepine dalam plasma terikat dengan protein. Setelah
dimetabolisme oleh hati, metabolit utama dari carbamazepine adalah 10,11-epoksida,
yang cukup stabil, aktif secara farmakologi, dan ditemukan dalam plasma dan
jaringan. 10,11-epoksida ini kemudian dimetabolisme lebih lanjut menjadi 10,11dihydroxide. 10,11-dihydroxide dapat dieliminasi dalam urin atau mungkin
terkonjugasi dengan asam glukuronat. Pemantauan rutin dari 10,11-epoksida
metabolit dianjurkan selama terapi carbamazepine, karena pemantauan
carbamazepine dalam serum saja tidak cukup untuk mendeteksi toksisitas pada
beberapa pasien.
Serum total carbamazepine-10,11-epoksida pada tingkat di atas 9 umol/L
berhubungan dengan efek samping yang lebih besar dari tingkat yang lebih rendah.
Karena teknik elektrokimia dengan karbon multi-wall nanotube-modified electrodes
dapat menentukan struktur serupa isomer secara bersamaan, mungkin memiliki
potensi untuk mengukur carbamazepine sebaik metabolit yang aktif secara
farmakologi dengan menginterpretasikan puncak yang berbeda di DPV.
Dalam studi ini, digunakan sampel konsentrasi refrens untuk validasi DPV.
Namun, dalam aplikasi klinis, bahan uji, seperti serum, mengandung banyak unsur
lain selain bahan kimia murni yang digunakan. Sebelum teknik DPV dapat diterapkan
dalam pemantauan klinis carbamazepine, diperlukan evaluasi lebih lanjut.
.