Nama : Ni Putu Ratna Sari

NIM : 17101105076

Kelas : Farmasi B

Pharmacokinetics and bioequivalence study of rhein

as the main metabolite of diacerein
1. Landasan Uji Bioekivalensi

Metode kromatografi cair sederhana, cepat, dan sepenuhnya tervalidasi (RP - HPLC)
dengan deteksi fluoresensi dikembangkan untuk analisis rhein (sebagai metabolit utama
diacerein) dalam plasma manusia. Pemisahan dilakukan menggunakan ODS C 18 kolom
dengan fase gerak terdiri dari asetonitril: metanol: dapar fosfat pH 6,8 dan laju aliran adalah
1,0 mL / menit. Deteksi flimetri dilakukan pada 2 panjang gelombang eksitasi ʎ ex = 440 nm
& 338 nm dan satu panjang gelombang emisi di ʎ em = 520 nm. Metode yang dikembangkan
divalidasi sesuai dengan pedoman Food and Drug Administration (FDA) untuk validasi
metode bioanalitik. Parameter farmakokinetik dari tes dan referensi ditentukan dan analisis
varians (ANOVA) antara parameter dari dua merek dihitung. Ketersediaan hayati relatif
ditemukan 89%. Metode ini berhasil diterapkan untuk analisis bioekivalensi rutin diacerein
dalam plasma. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menentukan rhein dalam plasma
manusia dengan HPLC analitik yang sensitif dan sederhana.

2. Penjelasan Metode Uji bioekivalensi

Metode dengan jenis deteksi baru dan menerapkan metode ini untuk evaluasi
bioekivalensi obat dalam dua merek. Validasi lengkap dari metode ini dilakukan sesuai
dengan persyaratan FDA.
Validitas metode diperiksa sesuai dengan item pedoman FDA untuk validasi metode bio-
analitik. Metode ini valid pada rentang konsentrasi 0.145.00–5.00 m g / mL menggunakan
enam standar kalibrasi. Stabilitas analit diuji menggunakan sampel QC untuk beberapa
siklus pembekuan-mencair, di bangku pada suhu kamar (stabilitas jangka pendek), atau beku
pada suhu 80 C (stabilitas jangka panjang). Pemulihan ekstraksi rhein dihitung dengan
membandingkan daerah puncak standar plasma yang diekstraksi dengan daerah puncak rhein
dalam pelarut pada konsentrasi yang sesuai. Metode spesifik dievaluasi dengan menyaring
enam lot plasma manusia kosong.

3. Profil farmakokinetik obat

Analisis farmakokinetik non kompartemen dilakukan dengan menggunakan perangkat

lunak Kinitica versi 5 dan parameter farmakokinetik berikut ini dihitung: konsentrasi plasma
maksimum = C maks, waktu untuk mencapai C maks pemberian obat
berikut = T maks, kurva konsentrasi-waktu = AUC 0 t, area di bawah kurva waktu
konsentrasi plasma dari waktu 0 (administrasi) diekstrapolasi ke infinitas = AUC 0-inf,
konstanta laju eliminasi terminal = K e, dan waktu paruh eliminasi = t Hai. Untuk tujuan
analisis bioekivalensi AUC 0-t, AUC 0- 1 dan C maks dianggap sebagai variabel primer.
Bioequivalence dari dua merek dinilai dengan menggunakan Analysis Of Variance
(ANOVA) untuk desain crossover dan menghitung interval kepercayaan 90% dari rasio tes /
referensi menggunakan data Ln-transformed. Formulasi dianggap bioekuivalen ketika
perbedaan antara dua parameter yang dibandingkan ditemukan secara statistik tidak
signifikan ( p> 0,05) dan interval parameter jatuh dalam 80-125%.

4. Hasil Penelitian Dan Kesimpulan

a. Hasil
Karena uji obat dalam plasma manusia adalah masalah penting untuk studi
bioekivalensi, prosedur sederhana berdasarkan curah hujan protein langsung diterapkan
untuk penentuan rhein dalam plasma manusia. Banyak campuran pelarut diuji untuk
ekstraksi rhein dari plasma dengan presipitasi, seperti asetonitril, dietil eter-klorometana
(4: 1), etil asetat, dan metanol. Semua dievaluasi untuk pemulihan dan pembersihan
sampel. Persentase yang lebih tinggi dari rhein yang diekstraksi dari plasma diperoleh
dengan menggunakan metanol yang menghindari penggunaan alkana yang diklorinasi
atau senyawa iritan toksik lainnya seperti dalam metode tetra butil etil etil eter yang
dilaporkan sebelumnya, etil asetat dietil eter. Untuk mengurangi langkah-langkah
persiapan plasma, larutan stok IS dalam metanol digunakan sebagai pelarut ekstraksi.
Ranitidine dipilih sebagai IS karena memiliki panjang gelombang emisi yang sama
dengan rhein ( k em = 520 nm) tetapi dengan panjang gelombang eksitasi yang berbeda
( k ex = 440 nm untuk rhein) dan ( k ex = 338 nm untuk ranitidine). 600 m L larutan IS (1
mg / mL ranitidin dilarutkan dalam pelarut metanol '' pelarut ”) telah ditambahkan ke 200
m L plasma, dihomogenkan dengan vortex selama 15 menit dan disentrifugasi selama 10
menit pada 12 10 3 rpm. Lalu, 100 m L supernatan jernih disuntikkan ke dalam sistem
HPLC.
Pemisahan analit yang dapat diionkan seperti asam dan basa tergantung pada pH fase
gerak dan kondisi kromatografi yang digunakan. Untuk mengoptimalkan efisiensi metode
HPLC yang diusulkan, efek dari beberapa parameter kromatografi diselidiki. Ini termasuk
jenis pengubah organik, konsentrasi, dan pH buffer dan rasio pengubah organic pengubah.
Parameter-parameter ini dioptimalkan berdasarkan bentuk puncak, intensitas puncak /
area, resolusi puncak dan waktu retensi untuk analit pada ODS C 18.

b. Kesimpulan
Metode yang relatif sederhana, akurat, tepat dan cepat yang cocok untuk digunakan
dalam studi bioekivalensi untuk menentukan rhein sebagai metabolit langsung diacerein
dalam plasma dikembangkan dan divalidasi. Metode ini memiliki beberapa keunggulan
dibandingkan metode yang dilaporkan sebelumnya, seperti ekstraksi rhein dengan
pengendapan langsung protein plasma dan penggunaan IS yang dilarutkan dalam metanol
pelarut yang sama. ” yang mengurangi langkah-langkah ekstraksi. Jangka waktu yang
singkat sekitar 5,50 min '' rhein (4,7 min) dan IS (1,8 min) ” dicapai dibandingkan dengan
waktu berjalan yang dilaporkan sebelumnya, waktu yang relatif singkat saat ini memiliki
keuntungan memfasilitasi dan meningkatkan efisiensi pemrosesan sejumlah besar sampel
plasma yang diperoleh dari studi farmakokinetik / bioavailabilitas / bioekivalensi pada
subyek manusia sehat. Penggunaan deteksi fluoresensi obat dan IS menggunakan panjang
gelombang emisi yang sama dan panjang gelombang eksitasi yang berbeda diterapkan
untuk pertama kalinya dalam pekerjaan ini. Jenis pengukuran ini memungkinkan
penggunaan banyak IS lain yang berbeda dan lebih murah yang mengurangi biaya
keseluruhan studi bioekivalensi.