Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

jurnal Ilmu Kromatografi, 2020, Jil. 00, No. 00, 1–8

doi: 10.1093/chromsci/bmaa088
Artikel

Artikel

Penentuan Parasetamol, Propifenazon dan Kafein

Secara Simultan dengan Adanya Kotoran
Parasetamol Menggunakan Metode Dual-Mode
Gradient HPLC dan Metode Densitometri KLT
Hany Ibrahim 1,*, Abdallah M. Hamdy 1,*, Hanan A. Merey2,3 dan
Ahmed S. Saad2,4
1Departemen Kimia Analitik, Fakultas Farmasi, Universitas Rusia Mesir, jalan Kairo-Suez, Kota Badr 11829,
Mesir, 2Departemen Kimia Analitik, Fakultas Farmasi, Universitas Kairo, jalan Kasr El-Aini, 11562 Kairo, Mesir, 3
Departemen Kimia Analitik, Fakultas Farmasi, Universitas 6 Oktober, kota 6 Oktober, 12585 Giza, Mesir, dan 4
Departemen Kimia Farmasi, Sekolah Farmasi dan Industri Farmasi, Universitas Badr di Kairo (BUC), Kota Badr,
11829 Kairo, Mesir

* Penulis yang sesuai: hany.ibrahim@eru.edu.eg

Diterima 20 Juli 2020; Direvisi 8 September 2020; Diterima 10 Oktober 2020

Abstrak
Dua metode kromatografi divalidasi untuk penentuan kombinasi obat analgesik dan antipiretik yang
diresepkan secara luas dari parasetamol (PC) (baru-baru ini diintegrasikan ke dalam pengobatan
suportif COVID-19), propifenazon (PZ) dan kafein (CF) dengan adanya dua PC pengotor, yaitu 4-
aminofenol dan 4-nitrofenol. Metode kromatografi cair kinerja tinggi gradien “dual-mode”
dikembangkan, di mana pemisahan dicapai melalui gradien “dualmode” dengan mengubah komposisi
fase gerak terner (asetonitril: metanol: air) dan laju aliran. Hal ini memungkinkan resolusi yang baik
dalam waktu analisis yang relatif lebih singkat. Analisis direalisasikan menggunakan Zorbax Eclipse XDB
kolom C18, 5 m (250× 4,6 mm) dan detektor UV diatur pada 220 nm. Metode lainnya adalah metode
densitometri kromatografi lapis tipis, di mana pemisahan dicapai menggunakan fase gerak yang terdiri
dari kloroform: toluena: etil asetat: metanol: asam asetat (6: 6: 1: 2: 0,1, berdasarkan volume). Deteksi
densitometri dilakukan pada 220 nm pada pelat silika gel 60 F254. Metode yang dikembangkan
sepenuhnya divalidasi sesuai dengan pedoman ICH dan terbukti akurat, kuat, spesifik dan cocok untuk
aplikasi sebagai metode indikasi kemurnian untuk analisis rutin PC dalam bentuk murni atau dalam
obat-obatan dengan PZ dan CF di laboratorium kontrol kualitas.

pengantar
Obat anti-inflamasi non-steroid adalah salah satu obat yang paling sering
diresepkan di seluruh dunia untuk mengobati berbagai kondisi yang berhubungan
dengan rasa sakit (1).
Parasetamol (PC) adalah N-(4-Hydroxyphenyl) acetamide memiliki aktivitas
analgesik dan antipiretik dan baru-baru ini digambarkan sebagai antipiretik lini
pertama dalam meredakan gejala COVID19 (2, 3). propifenazon
(PZ) adalah 1,2-Dihidro-1,5-dimetil-4-(1-metiletil)-2-fenil-3Hpirazol-3-
satu. Ini memiliki sifat analgesik dan antipiretik yang sama dengan PC.
Keduanya digunakan untuk pengobatan nyeri dan demam. Kafein (CF)
adalah 3,7-Dihydro-1,3,7-trimethyl-1H-purine-2,6-dione. CF adalah
stimulan SSP, menghambat enzim fosfodiesterase dan memiliki efek
antagonis pada reseptor adenosin sentral (4). NS

© Penulis 2020. Diterbitkan oleh Oxford University Press. Seluruh hak cipta. Untuk izin, silakan email: journals.permissions@oup.com
1
2 Ibrahim dkk.
kombinasi ketiga obat tersebut diresepkan untuk pengobatan demam
ringan dan nyeri berat.
4-aminofenol, 4 AP, dianggap sebagai pengotor utama PC
dalam sediaan farmasi yang berasal dari sintesis atau degradasi (5,
6). Karena 4 AP adalah senyawa aktif secara farmakologis yang
memiliki efek nefrotoksik dan teratogenik; oleh karena itu,
konsentrasinya harus dikontrol secara ketat (6). 4-nitrophenol, 4
NP, adalah prekursor dari 4 AP dan dianggap sebagai pengotor PC
potensial (7).
Survei literatur mengungkapkan beberapa teknik untuk analisis
kombinasi ketiga obat (8, 9, 10); namun, studi indikasi pengotor
sebagai contoh analisis campuran kompleks multi-komponen
memerlukan teknik yang sangat selektif dan sensitif seperti
kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC) dan kromatografi lapis tipis
(KLT). Metode kromatografi direkomendasikan untuk menentukan
obat utuh dengan adanya pengotornya.
Survei literatur menyoroti pentingnya dan kontribusi metode
kromatografi dalam penentuan ketiga obat ini (11-15).Namun,
tidak ada metode kromatografi yang dilaporkan untuk analisis
campuran terner CF, PZ dan PC dengan adanya pengotor PC
potensial, yaitu 4 AP (Acetaminophen RCK) dan 4 NP
(Acetaminophen RCF).
Pekerjaan saat ini bertujuan untuk mengembangkan metode
densitometri HPLC dan TLC gradien “dualmode” selektif dan sensitif
untuk penentuan simultan dari tiga obat dengan adanya dua pengotor
PC, 4 AP dan 4 NP.
Metode HPLC dan TLC divalidasi sesuai dengan pedoman Konferensi
Internasional tentang Harmonisasi (ICH). Analisis statistik ANOVA satu arah
diterapkan untuk membandingkan hasil yang diperoleh dari dua metode
yang sesuai dengan metode yang dilaporkan.
Eksperimental
Instrumen
peralatan HPLC
Sistem detektor HPLC-UV (Agilent 1260 infinity) terdiri dari pompa
Kuarter (model G 711A, pompa Quat VL 1260, Waldbronn-Jerman) yang
digabungkan ke detektor panjang gelombang ganda ultraviolet (model
G7165 A, 1260 MWD) dan injektor Rheodyne (model 7225 /7725I)
dilengkapi dengan loop injektor 20 L (Rohnert Park, CA.- USA).
Perangkat lunak Open Lab CDS ChemStatiion® versi A.01.05 digunakan
dalam akuisisi data.
densitometer TLC
Sistem densitometer TLC terdiri dari autosampler Camag Linomat 5
dengan microsyringe Camag 100 L. Kecepatan pemindaian dan laju
penyemprotan masing-masing adalah 20 mm/s dan 10 s/mL. Pemindai
TLC Camag (Swiss) tiga model densitometer tiga dilengkapi dengan
perangkat lunak WinCats® versi 1.4.2.8121.
Bahan:
Standar kerja CF, PZ dan PC dipasok dengan baik oleh Eva Pharma
Co, Mesir; kemurnian mereka dilaporkan 99,35± 1,68%, 100,09 ±
0,88% dan 99,89 ± 1,31%, masing-masing.
Stopain® Tablet diproduksi oleh Eva Pharma Co, Mesir. Tablet
diberi label mengandung 50 mg CF, 150 mg PZ dan 300 mg PC per
tablet.
4 AP (Acetaminophen RCK) dan 4 NP (Acetaminophen RCF) (16)
disediakan oleh Sigma-Aldrich.
Metanol kelas HPLC (Fisher Scientific, UK) dan asetonitril kelas
HPLC ) Fisher Scientific, UK).
Kloroform, toluena, etil asetat, metanol dan asam asetat yang digunakan
dalam metode KLT adalah kelas analitik (Adwic Co, Mesir).
Kondisi kromatografi
metode HPLC
Pemisahan kromatografi dilakukan pada Zorbax® Eclipse XDB
kolom C18 (250 mm × 4,6 mm, 5 m) Teknologi agilent, AS. Fase
gerak adalah asetonitril, metanol dan air dan elusi dilakukan
dengan memprogram rasio komponen dan laju aliran fase gerak.
Detektor UV diatur pada 220 nm dan pemisahan dilakukan pada
suhu kamar. Sebelum injeksi, kolom dikondisikan dengan fase
gerak selama 30 menit. Volume injeksi 20 L masing-masing sampel
dimuat ke kolom analitik. Pemisahan dilakukan di bawah kondisi
kromatografi yang disebutkan.
Metode TLC
Fasa gerak yang disukai untuk pemisahan kromatografi dibuat yang
mengandung kloroform: toluena: etil asetat: metanol: asam asetat (6: 6:
1: 2: 0,1, berdasarkan volume). Pemisahan dilakukan pada pelat silika
gel lembaran aluminium TLC 60 F254 (10× 20 cm) (Merck, Jerman). Fase
gerak bergerak sejauh 8 cm. Bintik-bintik dipindai menggunakan lampu
UV pada 220 nm untuk penentuan densitometri. Sampel secara akurat
terlihat pada 10× Pelat TLC 20 cm, menggunakan autosampler Camag
Linomat dengan microsyringe 100 L. Pita memiliki panjang 6 mm,
terpisah 10,5 mm satu sama lain dan 15 mm dari tepi bawah pelat.
Pelat dikembangkan dengan kromatografi menaik ke jarak 8 cm dari
garis bercak pada suhu kamar, dalam ruang kromatografi yang
sebelumnya jenuh dengan fase gerak selama 60 menit. Pelat dibiarkan
30 menit pada suhu kamar hingga kering kemudian pita dipindai pada
220 nm dalam mode penyerapan pada kecepatan pemindaian 20 mm s
1.
Prosedur
Pelarut terdiri dari metanol dalam air (1:9 volume).
Prosedur validasi
Kedua metode kromatografi divalidasi mengenai linearitas,
akurasi, presisi, spesifisitas, batas deteksi (LOD), batas kuantisasi
(LOQ), ketahanan dan uji kesesuaian sistem.
Linearitas. Larutan standar stok (1.000 g mL-1) dari masing-masing obat
disiapkan dalam pelarut yang disebutkan sebelumnya.
Untuk metode HPLC, larutan standar kerja dibuat dari stok ini
dengan pengenceran yang sesuai dengan fase gerak yang
memberikan kisaran konsentrasi akhir 10-100 g mL1, 20–400 g mL1
dan 20–600 g mL1 untuk CF, PZ dan PC, masing-masing. Sebuah rangkap tiga
dari 20 L disuntikkan dari masing-masing konsentrasi ke dalam HPLC. Kurva
kalibrasi dibangun menggunakan metode regresi linier dengan memplot
konsentrasi masing-masing obat versus daerah puncak yang sesuai untuk
membuktikan linearitas.
Untuk metode KLT, alikuot dari setiap larutan stok standar (1.000 g mL1)
secara akurat terlihat pada 10 × Pelat TLC 20 cm untuk menghasilkan 4–24 g
spot1, 5–30 g spot1 dan 5–30 g spot1 untuk CF, PZ dan PC, masing-masing,
menggunakan autosampler Camag Linomat dengan
Penentuan Parasetamol, Propifenazon, dan Kafein Secara Bersamaan 3

microsyringe 100 L. Kurva kalibrasi dibangun menghubungkan Parameter uji kesesuaian sistem dihitung berdasarkan faktor
area di bawah puncak versus konsentrasi yang sesuai dari masing- tailing, nomor pelat teoritis, resolusi dan faktor selektivitas.
masing standar dan persamaan regresi linier yang sesuai
diperoleh.

Aplikasi untuk prosedur formulasi farmasi

Ketepatan. Akurasi dinyatakan sebagai (rata-rata persentase pemulihan
± SD) dinilai menggunakan minimal sembilan penentuan selama Dua puluh tablet ditimbang untuk menghitung berat rata-rata

minimal tiga tingkat konsentrasi yang mencakup kisaran yang kemudian tablet digiling. Berat rata-rata serbuk yang telah digiling

ditentukan. (setara dengan 50 mg CF, 150 PZ dan 300 mg PC) dipindahkan ke

Dalam metode TLC, jumlah yang terlihat adalah 4, 12 dan 20 g dalam labu takar 250 mL, ditambahkan 200 mL larutan metanol 10%

per titik untuk CF dan 5, 15 dan 25 g per titik untuk PZ dan PC. dalam air (v/v) ke dalam labu dan disonikasi selama 15 menit kemudian

Untuk metode HPLC, konsentrasi yang terlibat adalah 20, 50 dan disaring ke dalam labu ukur 250 mL baru. Residu dicuci menggunakan

90 g mL1 untuk CF, 40, 100 dan 300 g mL1 untuk PZ dan 50, 200 dan 5 mL larutan yang disebutkan sebelumnya selama tiga kali berturut-

500 g mL1 untuk komputer. Prosedur yang disebutkan sebelumnya turut, kemudian diselesaikan hingga volume akhir dengan pelarut yang

dilakukan untuk analisis konsentrasi yang berbeda dan sama.

konsentrasi dihitung menggunakan persamaan regresi linier yang

sesuai.
metode HPLC. Solusi yang disiapkan sebelumnya diencerkan lima kali
lipat menggunakan fase gerak sebelum disuntikkan ke dalam
presisi. Untuk penentuan pengulangan (RSD), studi presisi intraday
instrumen pada volume injeksi 20 L. Pemisahan dilakukan di bawah
dilakukan dengan analisis tiga konsentrasi dalam kisaran yang
kondisi kromatografi yang disebutkan.
ditentukan untuk setiap standar yang diulang tiga kali dalam sehari.
Interday Precision (RSD) dilakukan pada tiga konsentrasi dalam kisaran
yang ditentukan untuk setiap standar yang diulang tiga kali dalam tiga
metode TLC. Dua puluh mikroliter dari larutan yang disiapkan
hari berturut-turut.
terlihat pada pelat KLT. Pengembangan dan kuantifikasi dilakukan
Untuk metode HPLC, tiga konsentrasi yang diuji adalah 30, 50
di bawah kondisi kromatografi yang disebutkan.
dan 60 g mL1 untuk CF, 60, 80 dan 100 g mL1 untuk PZ dan 100, 200
Teknik penambahan standar dilakukan untuk kedua metode
dan 300 g mL1 untuk komputer. Untuk metode TLC, jumlah 8, 12
melalui penilaian pemulihan yang dilakukan pada obat-obatan
dan 16 g CF, 10, 15 dan 20 g PZ dan 15, 20 dan 25 g PC secara
daripada menyiapkan plasebo. Oleh karena itu, jumlah akurat yang
akurat terlihat pada pelat TLC untuk penentuan presisi.
diketahui dari setiap zat standar dibubuhkan ke dalam formulasi
farmasi untuk mendapatkan tiga tingkat penambahan yang berbeda
Prosedur yang disebutkan sebelumnya terlibat dalam analisis
untuk setiap analit.
konsentrasi yang berbeda.

Kekhususan. Larutan standar kerja dari masing-masing pengotor (4 AP dan 4

NP) disiapkan dalam 10% metanol dalam larutan air (v/v) pada konsentrasi Hasil
(1.000 g mL1). Pemisahan campuran disiapkan laboratorium yang
Studi saat ini bertujuan untuk mengembangkan dua metode
mengandung rasio yang berbeda dari CF, PZ, PC, 4 AP dan 4 NP dicapai
kromatografi untuk penentuan CF, PZ dan PC dengan adanya pengotor
dengan menggunakan prosedur yang disebutkan sebelumnya dari kedua
PC, tanpa adanya metode indikasi pengotor yang dilaporkan.
metode.RF nilai-nilai, tR nilai dan resolusi diperoleh untuk mengevaluasi
pemisahan senyawa yang dipelajari dan mengungkapkan kekhususan kedua
metode.
Pengembangan dan pengoptimalan metode
Setelah evaluasi beberapa komposisi pelarut, pelarut yang digunakan adalah
Batas deteksi dan batas kuantitasi. LOD dan LOQ dari kedua
metanol 10% dalam larutan air (v/v), di mana standar dan pengotor PC
metode ditentukan untuk CF, PZ dan PC. Setelah konstruksi setiap
menunjukkan kelarutan yang baik.
kurva kalibrasi, data yang diperoleh dilibatkan dalam penentuan
Dalam metode HPLC, gradien "mode ganda" diterapkan untuk
LOD dan LOQ menggunakan persamaan berikut:
meningkatkan resolusi dan mempersingkat waktu analisis (1). Selain itu,
LOD = 3,3 × SD intersep/kemiringan.
sistem fase gerak terner memungkinkan pemisahan yang lebih baik
LOQ = 10× SD intersep/kemiringan.
dibandingkan dengan sistem binernya (17).
Nilai LOD diverifikasi secara praktis di mana konsentrasi yang ditemukan
Pemisahan optimal dicapai dengan menggunakan fase gerak yang
untuk setiap komponen disiapkan dalam rangkap tiga dan diuji untuk
terdiri dari metanol: asetonitril: air. Persentase masing-masing komponen
menyelidiki rasio sinyal terhadap noise. Hal yang sama dilakukan untuk nilai
dan laju aliran berubah seiring waktu, seperti yang dijelaskan dalamTabel I.
LOQ dan rasio sinyal terhadap noise diselidiki.
Gambar 1a dan b menunjukkan kromatogram representatif yang diperoleh
dengan standar tanpa dan dengan pengotor.
Pengujian kekokohan dan kesesuaian sistem. Kekokohan Dalam metode KLT, fase gerak yang terdiri dari kloroform: toluena: etil
dievaluasi dalam hal RSD setelah penerapan variasi kecil dalam asetat: metanol: asam asetat (6: 6: 1: 2: 0,1, berdasarkan volume)
waktu saturasi fase gerak dan komposisi fase gerak untuk metode direkomendasikan untuk mendapatkan pemisahan kromatografi yang
KLT dan laju aliran fase gerak, komposisi fase gerak dan panjang memuaskan antara CF, PZ dan PC tanpa dan dengan pengotor PC seperti
gelombang detektor untuk metode HPLC. yang direpresentasikan dalam Gambar 2a dan b dan Gambar Tambahan S1.
4 Ibrahim dkk.

Tabel I. Metode Dual-Mode Gradient HPLC untuk Pemisahan CF, PZ, PC, 4 AP dan 4 NP

Waktu (menit) Asetonitril% Metanol% H2O% Laju aliran (mL min−1)

0–2.3 25 25 50 2
2,3–2,7 15 15 70 2
2,7–6 15 15 70 2
6–6.2 20 30 50 2.5
6.2–8.4 20 30 50 2.5
8.4–9.4 0 50 50 2
9.4–14 0 50 50 2

Gambar 1. (a) Kromatogram HPLC PC (50 gmL−1 ), CF (75 gmL−1 ) dan PZ (40 gmL1 )-1) menggunakan kondisi kromatografi tertentu. (b) Kromatogram HPLC 4-amio phenol
(50 gmL−1), PC (50 gmL-1), CF (50 gmL−1), 4 nitrofenol (50 gmL-1) dan PZ (50 gmL−1) menggunakan kondisi kromatografi tertentu.

AP menunjukkan afinitas yang relatif tinggi Ketepatan

terhadap silika polar dan menunjukkan pemisahan
yang baik dari CF, PZ, PC dan 4 NP
Validasi metode
Validasi dilakukan sesuai dengan pedoman ICH (18) dan parameter
validasi pengujian dihitung, seperti yang ditunjukkan pada Tabel II.
Dalam metode TLC, akurasi dievaluasi melalui pemulihan persen rata-
rata dan standar deviasi. Berarti± SD ditemukan menjadi 100,73 ± 1,09,
99,92 ± 0,84 dan 101,22 ± 0,67 untuk CF, PZ dan PC, masing-masing.
Sedangkan metode HPLC adalah 99,17± 1,66 untuk CF, 101,46 ± 0,98
untuk PZ dan 101,08 ± 1.31 untuk komputer.

Linearitas
Linearitas dicapai untuk dalam kisaran 10-100 g mL1 CF, 20– 400 g
mL1 PZ dan 20–500 g mL1 PC untuk metode HPLC dan 4– 24 g spot1
CF, 5–30 g spot1 PZ dan 5–30 g spot1 PC untuk metode TLC,
Gambar 3. Kurva kalibrasi dibangun dan persamaan regresi linier
diperoleh untuk dua metode.
presisi
Pada pengujian repeatability, RSD CF adalah 0,77 pada metode KLT dan 1,23
pada metode HPLC sedangkan RSD PZ adalah 1,53 pada metode KLT dan
0,97 pada metode HPLC dan PC sebesar 0,81 pada metode KLT dan 1,32
pada metode HPLC.
Setelah pemeriksaan presisi antar hari, RSD ditemukan
1,92 untuk CF, 1,12 untuk PZ dan 0,64 untuk PC dalam metode TLC dan 1,44,
Penentuan Parasetamol, Propifenazon, dan Kafein Secara Bersamaan 5

Gambar 2. (a) Kromatogram TLC dua dimensi menunjukkan pemisahan PC (5 g spot-1, RF: 0.36), CF (24 g spot-1, RF: 0.52) dan PZ (5 g spot-1, RF: 0.64). (b) Kromatogram TLC
dua dimensi menunjukkan pemisahan PC (20 g spot-1, RF: 0.36), CF (20 g spot-1, RF: 0.52) dan PZ (20 g spot-1, RF: 0.65) dari dua pengotor parasetamol (4-amino fenol dan 4-
nitro fenol) pada RF: 0,22 dan 0,97, masing-masing.

Gambar 3. Kromatogram TLC tiga dimensi menunjukkan pemisahan PC dalam kisaran (5–30 g spot-1), dalam rentang CF (4-24 g spot-1) dan dalam rentang PZ (5–30 g spot-1) pada RF: 0,36 ,
0,52 dan 0,65, masing-masing.
6 Ibrahim dkk.

Tabel II. Tabel Validasi Pengujian Metode yang Diusulkan untuk Penentuan CF, PZ dan PC sesuai Pedoman ICH

Parameter TLC HPLC

CF PZ PC CF PZ PC

KetepatanA 100.73 ± 1.09 99,92 ± 0,84 101.22 ± 0,67 99.17 ± 1.66 101,46 ± 0,98 101,08 ± 1.31
presisi
PengulanganB 0,77 1.53 0,81 1.23 0,97 1.32
(%RSD)
Intermediat 1.92 1.12 0,64 1.44 1.22 1.56
presisiC (%RSD)
Linearitas
Korelasi 0,9992 0,9994 0,9991 0,9995 0,9993 0,9992
Koefisien
Lereng 1.315.0842 1,527,0258 1,264.3691 61.5296 19.8574 34.1023
Mencegat 5.891.1464 5.684.4189 4.638.2217 19.6058 82.7323 323.0196
Jangkauan 4–24 g spot1 5–30 g spot1 5–30 g spot1 10–100 g mL1 20–400 g mL1 20–600 g mL1
LOD Bintik 1,21 g1 1,59 g titik1 1,50 g tempat1 3,0976 g mL1 5,1928 g mL1 6,5660 g mL1
LOQ 3,67 g tempat1 4,83 g titik1 titik 4,54 g1 9,3869 g mL1 15,7360 g mL1 19,8971 g mL1

AAkurasi (rata-rata persentase pemulihan ± SD) dinilai menggunakan minimal sembilan penentuan selama minimal tiga tingkat konsentrasi yang mencakup kisaran yang ditentukan. Bintra hari (n = 3),
RSD pada tiga konsentrasi dalam kisaran yang ditentukan untuk setiap standar yang diulang tiga kali dalam sehari. Cantar hari (n = 3), RSD pada tiga konsentrasi dalam kisaran yang ditentukan untuk setiap
standar yang diulang tiga kali dalam tiga hari berturut-turut.

Tabel III. Parameter Terkait Dengan Penilaian Kekokohan

metode TLC HPLC

Parameter variabel Waktu fase gerak Komposisi fase gerakn Laju aliran fase gerak Komposisi fase gerak Panjang gelombang detektor

saturasi (menit) (%, CHCl3) (mL min−1) (%, metanol) (nm)

Derajat variasi 45 ± 5 40 ± 2 2 ± 0.1 25 ± 1 220 ± 4

diukur RF nilai TR nilai

nilai CF 0,56 0,52 0,55 0,52 0,52 0,54 0,54 0,52 0,50 4.11 4.12 4.17 4.144.12 4.12
PZ 0.63 0,64 0,64 0,61 0,64 0,69 0,66 0,64 0,60 12,65 12,80 12,54 12,71 82,80 12,81
PC 0.36 0.36 0.38 0.35 0.36 0.37 0.38 0.36 0.33 3.39 3.41 3.42 3.393.41 3.40 0.78 0.28
RSD (%) CF 3.83 2.19 3.85
PZ 0,91 6.25 4.82 1,03 0,12
PC 3.15 2.78 7.06 0,45 0,29

1.22 dan 1.56 untuk CF, PZ dan PC, masing-masing, dalam metode HPLC.
Data yang diperoleh menunjukkan bahwa kedua metode tersebut akurat
dan tepat.
Kekhususan
Juga, hasil yang diperoleh dari analisis campuran yang disiapkan di
laboratorium menunjukkan bahwa kedua metode tersebut spesifik.
Pemisahan yang baik dari CF, PZ dan PC dari pengotor PC diperoleh seperti
yang ditunjukkan pada:Gambar 1b, Gambar 2b dan Gambar Tambahan S1.
Dalam metode TLC, pemisahan PC (RF: 0,36), CF (RF: 0,52) dan PZ (RF: 0,65)
dari dua pengotor PC 4 AP dan 4 NP (masing-masing pada RF: 0,22 dan 0,97)
dicapai. Dalam metode HPLC, nilaitR adalah 2.333, 3.428, 4.178, 7.546 dan
12.858 menit untuk 4 AP, PC, CF, 4 NP dan PZ; masing-masing. Resolusi yang
baik antara komponen diperoleh dengan menggunakan kondisi
kromatografi yang ditentukan di mana nilai resolusi (Rs) ditemukan 4,38
untuk 4 AP relatif terhadap PC, 2,30 untuk PC relatif terhadap CF, 7,48 untuk
CF relatif terhadap 4 NP dan 10,08 untuk 4 NP relatif terhadap PZ.
Batas deteksi dan batas kuantitasi
LOD dan LOQ yang merupakan batas deteksi dan batas kuantisasi dihitung
untuk kedua metode seperti yang disebutkan sebelumnya dan hasilnya
diwakili dalam Tabel II.
Nilai LOD dan LOQ yang dihitung diverifikasi secara praktis di mana rasio
sinyal terhadap noise dari setiap komponen ditemukan setidaknya 3 untuk
LOD dan setidaknya 10 untuk LOQ.
Pengujian kekokohan dan kesesuaian sistem
Kekokohan dinilai dengan mengevaluasi pengaruh penerapan
perubahan kecil pada kondisi kromatografi sebagai laju aliran fase
gerak (2 ± 0,1 mL/menit), persentase komponen fase gerak (metanol,
25 ± 1%), dan panjang gelombang (220 ± 4 nm) detektor dalam metode
HPLC. Untuk metode TLC, variasi kecil dalam waktu yang diperlukan
untuk saturasi dengan fase gerak (45± 5 menit), dan persentase
komponen fase gerak (kloroform, 40 ± 2%) dilakukan. Parameter yang
diselidiki tidak menunjukkan perbedaan yang cukup besar dalam hasil
mengenai RSD, yang menunjukkan bahwa kedua metode tersebut kuat
seperti yang ditunjukkan padaTabel III.
Penentuan Parasetamol, Propifenazon, dan Kafein Secara Bersamaan 7

Tabel IV. Parameter Kesesuaian Sistem untuk CF, PZ dan PC dalam Metode HPLC yang Diusulkan

Parameter Nilai yang didapat Direkomendasikan

nilaiA
CF PZ PC 4AP PC dan CF dan 4NP dan
dan PC CF 4NP PZ

Faktor tailing (T) 1.2 1.1 1.1 ≤2

Jumlah 3.247 2.460 2.950 > 2000
pelat teoretis (N)
Resolusi (Rp) 4.38 2.30 7.48 10.08 >2
Faktor selektivitas (α) 1.47 1.218 1.81 1.84 >1

ANilai yang ditentukan oleh FDA Center of Drug Evaluation and Research's reviewer guide on validasi metode kromatografi (November 1994) (19).

Tabel V. Analisis Sediaan Farmasi dan Penerapan Teknik Penambahan Standar

Obat/metode TLC (Pemulihan HPLC (Pemulihan

% ± SD) % ± SD)

CF (Stopain® tablet) 101,86 ± 1.67 99,52 ± 2.07

PZ (Stopain) ® tablet) 101.12 ± 1.44 101.34 ± 0,66
PC (Stopain ® tablet) 100.94 ± 0,15 102.11 ± 0,85
CF (Teknik penjumlahan standar)A 99.81 ± 1.46 100.39 ± 1.02
PZ (Teknik penjumlahan standar)A 101,36 ± 0,42 100.49 ± 1.24
PC (Teknik penjumlahan standar)A 99,86 ± 0,67 101.17 ± 0,22

A(Berarti ± SD) diperkirakan menggunakan sembilan penentuan selama tiga tingkat konsentrasi yang mencakup kisaran yang ditentukan.

Tabel VI. Analisis Statistik ANOVA Satu Arah Dalam Interval Keyakinan 95% pada Data Persentase Pemulihan yang Diperoleh Dari Metode yang
Dilaporkan dan Penerapan Dua Metode yang Sesuai pada Sediaan Farmasi

ANOVA satu arah

Variabel terikat: data persentase pemulihan

Sumber Jumlah kuadrat dfA Rata-rata persegi FB P-nilai

CF
Antar kelompokC 0,479 2 0.240 0,161 (5,14D) 0,855
Di dalam grup 8.946 6 1.491
Total 9.425 8
PZ
Antar kelompokC 0,044 2 0,022 0,014 (5,14D) 0,986
Di dalam grup 9.154 6 1.526
Total 9.197 8
PC
Antar kelompokC 3.679 2 1.839 1,799 (5,14D) 0.244
Di dalam grup 6.135 6 1.022
Total 9.814 8

ADerajat kebebasan. BF adalah rasio kuadrat rata-rata dengan kuadrat rata-rata kesalahan. CAntara metode yang dilaporkan (metode RP-HPLC-UV) (21) dan dua metode yang sesuai. DNilai tabulasi dari
F.

Parameter kesesuaian sistem termasuk resolusi puncak, faktor eksipien, di mana hasil yang memuaskan diperoleh, seperti yang ditunjukkan pada
tailing, jumlah pelat teoritis dan faktor selektivitas dihitung untuk Tabel V.
metode HPLC yang diusulkan dan berhasil memenuhi rekomendasi
FDA (19), seperti yang ditunjukkan pada Tabel IV.
Perbandingan statistik
Perbandingan statistik ANOVA satu arah pada interval kepercayaan 95%
Assay obat-obatan dilakukan (20) pada hasil persen pemulihan yang diperoleh dari penerapan
Metode diterapkan untuk penentuan PC, PZ dan CF dalam tablet dua metode yang diusulkan pada bentuk sediaan farmasi, seperti yang
Stopain®, kemudian, teknik adisi standar diterapkan untuk ditunjukkan pada Tabel VI. Perbandingan membuktikan bahwa tidak ada
menguji validitas metode yang diusulkan untuk menentukan PC, perbedaan yang signifikan antara metode yang diusulkan dan metode RP-
PZ dan CF secara selektif dengan adanya aditif formulasi dan HPLC-UV yang dilaporkan (21). Metode yang dijelaskan dapat
8 Ibrahim dkk.
digunakan untuk penilaian akurat CF, PZ dan PC dalam campuran
ternernya dan dalam sediaan farmasi.
Diskusi
Studi saat ini bertujuan untuk mengembangkan dua metode
kromatografi untuk penentuan PC, PZ dan CF dengan adanya
pengotor PC, yaitu 4 AP dan 4 NP, tanpa adanya metode indikasi
pengotor yang dilaporkan. Kedua metode dioptimalkan dan
pemisahan PC, PZ dan CF yang baik dari pengotor tercapai. Hasil
validasi parameter menunjukkan bahwa kedua metode tersebut
akurat, presisi, linier, spesifik dan kuat.
Kesimpulan
Dua metode kromatografi yang menunjukkan pengotor yang akurat,
tepat dan selektif dikembangkan untuk penentuan PC, PZ dan CF tanpa
gangguan dari pengotor PC. Metode divalidasi sesuai dengan pedoman
ICH. Kedua metode ditemukan cocok untuk digunakan sebagai metode
penunjuk pengotor untuk penentuan PC, PZ dan CF dalam sediaan
farmasi di laboratorium kendali mutu. Metode HPLC merupakan
metode yang menghemat waktu sedangkan metode TLC memberikan
teknik yang murah.
data pelengkap
data pelengkap disebutkan dalam teks tersedia untuk pelanggan
di CHRSHI on line.
Referensi
1. Hany, I., Alexandre, B., Jalloul, B., François, C., Françoise, N.; Penentuan
obat antiinflamasi nonsteroid dalam obat-obatan dan serum manusia
dengan HPLC gradien mode ganda dan deteksi fluoresensi;Jurnal
Kromatografi. B, Teknologi Analitik dalam Ilmu Biomedis dan
Kehidupan, (2007); 857: 59–66.
2. Pergolizzi, JV, Varrassi, G., Magnusson, P., LeQuang, JA, Paladini,
A., Taylor, R. dkk.; COVID-19 dan NSAIDS: Tinjauan naratif tentang
Diketahui dan tidak diketahui; Nyeri dan Terapi, di tekan, https://doi.org/
10. 1007/s40122-020-00173-5.
3. Casalino, G., Monako, G., Di Sarro, PP, David, A., Scialdone, A.; Penyakit
Coronavirus 2019 dengan konjungtivitis sebagai gejala pertama;Mata, (
2020); 34: 1235–1236.
4. Manis, SC; Martindale Referensi Obat Lengkap, edisi ke-36 Pers Farmasi,
London, (2009).
5. Dejaegher, B., Bloomfield, MS, Smeyers-Verbeke, J., Vander Heyden,
Y.; Validasi uji fluorimetri untuk 4-aminofenol dalam formulasi
parasetamol;Talanta, (2008); 75: 258–265.
6. Németh, T., Jankovics, P., Németh-Palotás, J., Koszegi-Szalai, H.; Penentuan
parasetamol dan pengotor utamanya 4-aminofenol dalam sediaan
analgesik dengan kromatografi elektrokinetik misel;Jurnal Analisis
Farmasi dan Biomedis, (2008); 47: 746–749.
7. Steendam, RRE, Keshavarz, L., de Souza, B., Frawley, PJ; Sifat
termodinamika pengotor parasetamol 4-nitrofenol dan 4kan-
kloroasetanilida dan dampak pengotor tersebut pada kristalisasi
parasetamol dari larutan; jurnal Termodinamika Kimia,(2019); 133: 85–
92.
8. Saad, AS, Hamdy, AM, Salama, FM, Abdelkawy, M.; Meningkatkan kekuatan
prediksi model kemometrik melalui manipulasi data spektrofotometri:
Sebuah studi perbandingan;Spectrochimica Acta, Bagian
A: Spektroskopi Molekuler dan Biomolekuler, (2016); 167: 12–18.
9. Medenica, M., Ivanovi, D., Malenovi, A.; Spektrum turunan kedua
uji trofotometri campuran analgetik multikomponen; Surat
Spektroskopi, (2000); 33: 173–183.
10. zgür, M.Ü., Alpdoğan, G., Aşçi, B.; Metode spektrofotometri cepat untuk
menyelesaikan campuran terner propifenazon, kafein, dan
asetaminofen dalam tablet;Monatshefte für Chemie/Bulanan Kimia,
(2002); 133: 219–223.
11. Emre, D., Ozaltin, N.; Penentuan simultan parasetamol, kafein dan
propifenazon dalam campuran terner dengan kromatografi kapiler
elektrokinetik misel;Jurnal Kromatografi. B, Teknologi Analitik dalam
Ilmu Biomedis dan Kehidupan, (2007); 847: 126-132.
12. Mamolo, MG, Vio, L., Maurich, V.; Kuantisasi simultan parasetamol, kafein
dan propifenazon dengan kromatografi cair tekanan tinggi;Jurnal
Analisis Farmasi dan Biomedis, (1985); 3: 157-164.
13. Hałka-Grysińska, A., lAzak, P., Zaręba, G., Markowski, W., Klimek-Turek, A.,
Dzido, TH; Penentuan asetaminofen, propifenazon, dan kafein secara
simultan dalam preparasi cefalgin dengan elektrokromatografi planar
bertekanan dan kromatografi lapis tipis kinerja tinggi;Metode analitis, (
2012); 4: 973.
14. Avramova, J.; Penentuan propifenazon, parasetamol, dan kafein secara
bersamaan dalam darah dengan kromatografi cair kinerja tinggi;Jurnal
Analisis Farmasi dan Biomedis, (1989); 7: 1221–1224.
15. Tomankova, H., Vasatova, M.; Penentuan densitometri propifenazon,
parasetamol, guaiakol gliserol eter, kafein dan asam asetilsalisilat dalam
sediaan analgesik-antipiretik dengan kromatografi lapis tipis;Die
Farmasi, (1989); 44: 197–198.
16. Gaur, R., Azizi, M., Gan, J., Hansal, P., Harper, K., Mannan, R. dkk. (eds).
Farmakope Inggris, volume I & II, Kantor Alat Tulis, London, (2009), hlm.
4548–4552.
17. Coym, JW; Evaluasi fase gerak terner untuk kromatografi cair fase
terbalik: Pengaruh komposisi pada mekanisme retensi;Jurnal
Kromatografi. A, (2010); 1217: 5957–5964.
18. Topik ICH Q2; (R1) validasi prosedur analitis: Teks dan metodologi;
Konferensi Internasional tentang Harmonisasi, (2005); BPS-P/ICH/
381/95: 1–15.
19. Pedoman peninjau FDA: Validasi Metode Kromatografi. Pusat Evaluasi
dan Penelitian Obat FDA; (1994); KPK 3: 21–28.
20. Remington, G.; Statistik.Remington: Ilmu dan Praktek Farmasi. ,Edisi
ke-21, Bab 12. Lippincott,Williams & Wlikins, Philadelphia, AS, (2005),
hlm. 127-161.
21. Dinç, E., Kökdil, G., Onur, F.; Rasio turunan spektrofotometri penyilangan
spektra-nol dan metode LC diterapkan pada penentuan kuantitatif
parasetamol, propifenazon dan kafein dalam campuran terner;Jurnal
Analisis Farmasi dan Biomedis, (2001); 26: 769–778.