JOURNAL READING

PENGEMBANGAN DAN VALIDASI DARI METODE CHROMATOGRAPHY

CAIRAN KERJA CEPAT UNTUK MENGUJI CERITIZINE
DIHYDROCHLORIDA

ABSTRAK

Tujuan:

Tujuan utama dari penelitian ini adalah untuk mengembangkan dan

memvalidasi metode UPLC,simple, tepat,akurat dan metode kromatograf
yang spesifk untuk penentuan cetirizine dihidroklorida dalam tablet.

Metode:

Kromatograf cair kinerja tinggi dan silika, 33X 4,6 mm, 3 digunakan untuk
penentuan cetirizine dihidroklorida. Laju aliran dari 1,0 mL / menit ditetapkan
dengan isokratik, suhu kompartemen kolom dipertahankan pada 25 C dan
deteksi Ultra violet dilakukan pada panjang gelombang 230 nm. Volume
injeksi adalah 5 uL. Puncak dielusi cetirizine dihidroklorida pada 1,202 menit
dan run time ditetapkan sekitar 2 menit.

Hasil:

Koefsien korelasi ( 0.999) menunjukkan linearitas respon terhadap

konsentrasi selama rentang 10 sampai 300%. Hasil yang diamati
menunjukkan bahwa metode itu cepat, tepat, akurat dan sederhana. Metode
ini divalidasi sesuai pedoman ICH.

Kesimpulan:
Pengembangkan dan validasi metode Kromatograf cair kinerja tinggi cocok
untuk penentuan cetirizine dihidroklorida dalam formulasi farmasi yang lebih
berguna sehubungan dengan analisis laboratorium rutin. Metode ini dapat
dengan mudah digunakan di laboratorium kontrol kualitas untuk analisis
rutin cetirizine dihidroklorida.

PENDAHULUAN

Cetirizine hidroklorida adalah kimia 2- (2- {4 - [(4Chlorophenyl) (fenil) metil]

piperazino} etoksi) asetat hidroklorida asam. Ini adalah antihistamin
generasi kedua, merupakan metabolit utama dari hydroxyzine, dan rasemat
selektif reseptor H1 inverse agonis digunakan dalam pengobatan alergi,
demam, angioedema, dan urtikaria. Cetirizine melintasi penghalang darah-
otak hanya sedikit, mengurangi efek samping obat penenang umum dengan
antihistamin yang lebih tua. Hal ini juga telah terbukti dapat menghambat
kemotaksis eosinofl dan rilis LTB4. Pada dosis 20 mg ditemukan bahwa itu
menghambat ekspresi VCAM-1 pada pasien dengan dermatitis atopik.
Enansiomer levorotary dari cetirizine, yang dikenal sebagai levocetirizine,
adalah bentuk lebih aktif. Survei literatur mengungkapkan bahwa begitu
banyak metode RP-HPLC dan spektroskopi telah dilaporkan untuk estimasi
cetirizine dihidroklorida. Tujuan utama dari penelitian ini adalah untuk
mengembangkan metode UPLC baru untuk estimasi Cetirizine
Dihydrochloride dalam bentuk tablet. Karya ini menggambarkan, metode
UPLC gradien sederhana untuk penentuan bentuk tablet Cetirizine
Dihydrochloride sebagai pedoman ICH.

BAHAN DAN METODE

Bahan kimia

Standar kualifkasi dan sampel diperoleh dari laboratorium lokal dan yang
digunakan tanpa pemurnian lebih lanjut. Bahan kimia seperti asam sulfat,
asetonitril dan metanol dibeli dari Merck, Mumbai. Millipore air yang
digunakan dari sistem air TK. kolom analisis yang digunakan adalah 33 X 4,6
mm, 3 silika.

Instrumen

Sebuah sistem ACQUITY UPLC diproduksi oleh Waters yang terdiri dari Foto
Diode Array (PDA) detektor, pengaturan pelarut kuarter,pengaturan sample ,
kompartemen pemanasan digunakan untuk pengujian cetirizine
dihidroklorida. instrumen UPLC dikendalikan oleh perangkat lunak
kromatograf Waters Empower. Silica, 33 x 4,6 mm, kolom dengan ukuran
partikel 3 m digunakan pada proses fase pendiaman (fase tidak bergerak)
untuk pemisahan kromatograf dan penentuan Cetirizine Dihydrochloride.
keseimbangan analitis setengah mikro Sartorius digunakan untuk semua
berat, Thermo pH meter digunakan untuk penyangga pH, dan Bandelin
sonikator digunakan untuk melarutkan standar, sampel dan disentrifugasi
menggunakan mesin centrifuge Hermle

Persiapan Standar

Ditimbang dan dipindahkan 50.0mg standar cetirizine dihidroklorida ke 100

mL labu ukur larut dan membuat volume dengan fase gerak dan aduk rata.
Selanjutnya encer 5.0mL dari solusi atas dalam 25 mL labu volumetrik,
membuat volume dengan fase gerak dan aduk rata.

Persiapan Sampel

Ditimbang dan dipindahkan 50.0mg sampel cetirizine dihidroklorida ke 100

mL labu ukur larut dan membuat volume dengan fase gerak dan aduk rata.
Centrifuge sebagian dari persiapan ini pada 3000 RPM selama 10 menit.
Pipet keluar 5 mL larutan supernatan jelas menjadi 25 mL labu volumetrik,
encerkan dengan volume dengan fase gerak dan mencampur dan menyaring
melalui filter 0.45m.

Kondisi Chromatographic
Kolom Chromatographic yang digunakan adalah silika kolom dengan dimensi
33 mm X 4,6 mm dengan ukuran partikel 3 m. Metode isokratik
dipekerjakan dengan fase gerak/tahap pergerakan asam sulfat encer, air dan
Asetonitril dalam rasio 4: 66: 930 (v / v / v)

Temperatur kolom dipertahankan pada 25.0 C dan deteksi dipantau pada

panjang gelombang 230 nm. Volume injeksi adalah 5 ml dan aliran fase
gerak/tahap pergerakan yang ditetapkan sebesar 1,0 mL / menit. Fase
gerak/tahap pergerakan yang digunakan sebagai pengencer untuk persiapan
solusi.

METODE VALIDASI

Metode yang dikembangkan untuk penentuan cetirizine dihydrochloride telah

divalidasi untuk kesesuaian sistem bersama dengan metode selektivitas,
spesifsitas, linearitas, jangkauan, presisi (Pengulangan dan presisi
Menengah), akurasi, batas-batas deteksi dan Batas kuantifkasi menurut
pedoman ICH.

Kesesuaian sistem

Kesesuaian sistem dilakukan menggunakan standar diluent (pengencer) dan

dievaluasi dengan menyuntikkan lima suntikan ulangan.

Spesifisitas

spesifsitas adalah kemampuan metode analisis untuk menilai tegas analit

dengan adanya komponen yang dapat diharapkan untuk hadir. Dilakukan
parameter spesifsitas metode dengan menyuntikkan diluent
(pengencer),plasebo ke dalam sistem chromatographic dan dievaluasi
menunjukkan puncak pada waktu retensi analit.

Linearitas
Dilakukan linearitas dengan cetirizine dihydroklorida pada kisaran 10 hingga
300% dari batas spesifkasi. Tercatat pada respon daerah untuk setiap
tingkat dan dihitung setiap kemiringan serta koefsien korelasinya. Serta
dilakukan ketelitian pada tingkat yang lebih tinggi dengan menyuntikan
enam kali ke dalam sistem kromatograf.

Ketelitian dan Akurasi

Ketepatan suatu metode analisa adalah tingkat kesepakatan antara hasil tes
individu ketika metode ini diterapkan berulang kali untuk beberapa sampling
dengan sampel yang homogen.

Ketepatan metode analisis biasanya dinyatakandengan deviasi dari

pengukuran berulang. sistem pengukuran dilakukan dengan menggunakan
cetirizine dihidroklorida dan dievaluasi dengan membuat enam suntikan
yang direplikasi. akurasi metode dengan pemulihan solusi sampel cetirizine
pada tingkat konsentrasi yang berbeda mulai 10-300 %

Kesuksesan

metode ketahanan dipelajari dengan sengaja mengubah persentase

pengubah organik, laju dan suhu kolom.

HASIL DAN DISKUSI

Optimasi kondisi kromatografi:

Metode pengembangan meliputi pemilihan kondisi kromatograf / faktor

yang tepat seperti deteksi panjang gelombang, seleksi dan optimasi
stasioner dan fase yang mobile. Panjang gelombang 230 nm dipilih karena
menghasilkan lebih sedikit suara bising, yang meminimalkan masalah yang
dapat timbul di sekitar bahan aktif ketika mencoba untuk mengukur
Cetirizine Dihydrochloride. Awal uji coba pengembangan dilakukan dengan
berbagai kolom silika dari berbagai jenis dan dimensi dari berbagai produsen
yang berbeda yang diuji untuk bentuk puncak dan jumlah plat teoritis untuk
konsentrasi spesifikasi. Akhirnya dengan beralih ke Silica, 33 X 4,6 mm, 3m,
ada peningkatan kolom substansial dalam plat teoritis (2693) dengan
peningkatan yang signifkan dalam bentuk puncak dengan 1,5 faktor yang
menyertai.

Kesesuaian system

RSD dari lima suntikan ulangan persiapan standar adalah 0,1%. piring teoritis untuk cetirizine
dihidroklorida puncak 2693 dengan faktor tailing 1.5.System kesesuaian

Selektivitas

Dilakukan parameter spesifisitas metode dengan menyuntikkan pengencer, plasebo, persiapan

standar dan persiapan sampel ke dalam sistem kromatografi dan mencatat waktu retensi. Studi
Kekhususan metode terbukti ada puncak diamati pada waktu retensi cetirizine dihidroklorida.
Hasil spesifisitas cetirizine dihidroklorida diberikan di bawah Tabel-1.The selektivitas
kromatogram Tampil di Gambar-2
Linearitas

Untuk menunjukkan linearitas dengan standar cetirizine dihidroklorida di

kisaran 10 sampai 300% dari batas spesifkasi. koefsien korelasi cetirizine
dihidroklorida adalah hasil 1.000.The linearitas dihidroklorida cetirizine
ditunjukkan pada Tabel-2 tersebut.

Ketepatan

Ketepatan dari sebuah studi menemukan bahwa persentase rata-rata

kesembuhan lebih dari 97,0% dan kurang dari 103,0% pada masing-masing
tingkat dari tingkat konsentrasi 10 hingga 300%, maka metode ini akurat.
Hasil ketepatan dapat dilihat pada tabel 3.

Tabel 3 : Hasil Ketepatan

No Level dalam Persentase Rata-rata

persentase kesembuhan
1 10 101,6
2 50 100,6
3 100 99,8
 4 150 100,6
5 200 100,1
6 300 99,8

Ketelitian

Ketelitian uji metode divalidasi dengan pengujian enam sampel yang

disiapkan pada cretizine dihidroklorida dan menghitung standar deviasi
relatif dari hasil tes. Hasil ketelitian dapat dilihat pada tabel 4.

Tabel 4 : Hasil Ketelitian

No Nomor Preparat Persentase Pengujian

dari Cetirizine
1 Preparat No -1 99,31
2 Preparat No -2 99,52
3 Preparat No -3 99,13
4 Preparat No -4 97,69
5 Preparat No -5 99,42
6 Preparat No 6 99,33
Rata-Rata persentase pengujian dari Cetirizine 99,07
Persentas Standar Deviasi Relatif 0,69
Robustness

Metode robustness dipelajari dengan menyuntikkan larutan dalam

persentase modifkasi organik, kecepatan aliran, dan suhu. Hasil yang
diperoleh dapat ditunjukkan pada table 5 .

Tabel 5 : Hasil Robustness

Kondisi Faktor Theoritical Persentase RSD

Penyerta Plates
Terbatas NLT 2.0 NLT 1500 NMT 2.0
Kondisi Normal 1.5 2693
Kecepatan aliran 1,2 1.5 2675 0,1
ml/menit
Kecepatan aliran 0,8 1.4 2985 0,1
ml/menit
Suhu 30oC 1.4 2918 0,1
Suhu 20oC 1.4 2849 0,1
Fase Organic +10% 1.4 2853 0,1
Fase Organic -10% 1.5 2818 0,1

PENGHARGAAN

Penulis berterima kasih kepada Departemen Kimia, Universitas Sri

Krishnadevaraya, Anantapur, India atas dukungannya.

KESIMPULAN

Metode UPLC isokratik sederhana telah dikembangkan dan divalidasi untuk

penentuan cetirizine dihidroklorida dalam tablet. Metode yang
dikembangkan ditemukan untuk indikasi selektif, sensitif, tepat, kuat, dan
stabilitas. Metode ini dapat langsung diterapkan dalam control kualitas
laboratorium untuk peniliaian rutin sehubungan dengan kuantifkasi uji
cetirizine dan juga untuk analisa dari stabilitas sampel.