Panduan pengguna
Protokol Umum: Isolasi DNA dari Darah Manusia Segar Harap Baca Catatan
DNA Genomik Sel Darah/Kultur FavorPrepTM Penting Sebelum Memulai Langkah Berikut.
Kit Mini Ekstraksi Lisis RBC
-Untuk ekstraksi DNA genom dari darah segar, darah forzen, sel kultur dan jamur 1. Kumpulkan darah segar manusia dalam tabung penampung antikoagulan.
2. Pindahkan hingga 300 ÿl darah segar ke dalam tabung mikrosentrifugasi 1,5 ml (tidak disediakan). Jika sampelnya lebih dari 300 ÿl
Isi Paket: (hingga 1 ml), tambahkan sampel ke dalam tabung centrifuge steril 15 ml.
Hanya Untuk Penggunaan Penelitian
3. Tambahkan 3× volume sampel RBC Lysis Buffer dan campur secara inversi. Jangan pusaran.
Kucing. TIDAK:
FABGK 004 FABGK 100 FABGK 300 Misalnya: tambahkan 900 ÿl RBC Lysisi Buffer ke 300 ÿl sampel darah.
(4 persiapan) (100 persiapan) (300 persiapan) 4. Inkubasi campuran sampel pada suhu kamar selama 10 menit.
7 ml 135 ml 405 ml -Catatan: Pastikan campuran sampel menjadi merah tua dan transparan setelah inkubasi.
Penyangga Lisis RBC
5. Centrifuge pada 3000 xg selama 5 menit. Dan hilangkan seluruh supernatannya.
Penyangga FATG 1.5 ml 30 ml 75 ml
6. Tambahkan 100 ÿl RBC Lysis Buffer ke dalam pelet dan resuspensi sel dengan memipet.
Penyangga FABG 1.5 ml × 2 40 ml 100 ml
1ml 25 ml 50 ml Tambahkan 200 ÿl Buffer FABG ke dalam campuran sampel. Aduk rata dengan cara divorteks.
Wash Buffer* (konsentrat)
8. Inkubasi campuran sampel pada suhu kamar selama 10 menit atau hingga campuran sampel jernih. Selama inkubasi,
Penyangga Elusi 1ml 30 ml 75 ml
balikkan tabung setiap 3 menit.
Kolom FABG Mini 4 buah 100 buah 300 buah 9. Panaskan terlebih dahulu Elution Buffer yang diperlukan (untuk Langkah Elusi ) dalam penangas air 70ºC.
Tabung koleksi 8 buah 200 buah 600 buah 10. (Langkah Opsional): Jika diperlukan DNA genom bebas RNA, tambahkan 5 ÿl 10 mg/ml RNase A dan campur dengan cara divorteks. Inkubasi
Panduan pengguna 1 1 1 selama 5 menit pada suhu kamar.
Pengikatan
DNA 11. Tambahkan 200 ÿl etanol (96~100%) ke dalam sampel dan vorteks selama 10 detik. Pipet sampel agar tercampur rata jika ada endapan yang terbentuk.
12. Tempatkan Kolom FABG ke Tabung Pengumpul. Pindahkan campuran sampel dengan hati-hati ke Kolom FABG. Centrifuge dengan kecepatan 14.000
Pembuatan Wash Buffer dengan menambahkan etanol (96~100%)
* Volume etanol untuk Wash Buffer rpm atau 18.000 xg selama 1 menit. Buang Tabung Pengumpul dan tempatkan Kolom FABG ke Tabung Pengumpul baru.
4ml 100ml 200ml
hingga 5×107 sel jamur -Langkah Penting! Untuk elusi yang efektif, pastikan larutan elusi disalurkan ke pusat membran dan terserap seluruhnya.
-Jangan mengelusi DNA menggunakan volume kurang dari yang disarankan (50 ÿl). Ini akan menurunkan hasil akhir.
Lisis sel (FABG)
-Jika diperlukan hasil DNA yang lebih tinggi, ulangi langkah Elusi DNA untuk meningkatkan pemulihan DNA dan volume total bisa menjadi 200 ÿl.
18. Inkubasi Kolom FAGB pada suhu 37ºC selama 10 menit dalam inkubator.
19. Centrifuge selama 1 menit dengan kecepatan penuh 14.000 rpm atau 18.000 xg untuk mengelusi DNA.
Catatan Penting: 1. 20. Simpan fragmen DNA pada suhu 4ºC atau -20ºC.
Mengikat
Buffer yang disediakan dalam sistem ini mengandung bahan iritan.
Kenakan sarung tangan dan jas lab saat menangani buffer ini. Mesin sentrifugal
Protokol: Isolasi DNA dari Darah Segar Bukan Manusia Harap Baca Catatan Penting
2. Tambahkan etanol (96~100%) ke dalam Wash Buffer saat pertama kali
Pencucian (Penyangga W1) Sebelum Memulai Langkah Berikut. Saya. Volume sampel darah mamalia (tidak
membuka.
Mesin sentrifugal (Penyangga Cuci) berinti) bisa mencapai 50 ÿl; volume sampel berinti
3. Panaskan Elution Buffer hingga 70°C untuk langkah 17.
eritrosit (misalnya burung atau ikan) bisa mencapai 10 ÿl. ii.
4. Semua langkah centrifuge dilakukan dengan kecepatan penuh
Tambahkan 150 ÿl FATG Buffer dan sampel darah ke dalam tabung mikrosentrifugasi 1,5 ml (tidak disediakan). Campur oleh pusaran.
(~18.000 xg) dalam microcentrifuge.
Elusi (Elusi) Lisis Sel 1.
Tambahkan 200 ÿl Buffer FABG ke sampel dan vorteks selama 5 detik.
Mesin sentrifugal
2. Inkubasi campuran sampel pada suhu 70ºC selama 10 menit atau hingga campuran sampel menjadi jernih. Selama inkubasi, balikkan tabung
setiap 3 menit.
DNA genom yang dimurnikan 3. Panaskan terlebih dahulu Elution Buffer yang diperlukan dalam penangas air 70ºC untuk langkah Elusi DNA.
4. (Langkah Opsional): Jika diperlukan DNA genom bebas RNA, tambahkan 5 ÿl 10 mg/ml RNase A ke dalam sampel dan campur dengan pusaran.
Kemudian diinkubasi selama 5 menit pada suhu kamar.
5. Ikuti Protokol Umum mulai dari Langkah 11.
2
1 pada tahun 202401
Machine Translated by Google
Persiapan Sampel sel bakteri dalam jumlah yang sesuai (hingga 1×109 ) ke dalam tabung mikrosentrifugasi 1,5 ml (bukan disediakan) dan
Centrifuge seluruh darah pada 3.300 xg selama 10 menit pada suhu kamar dan Anda akan mendapatkan tiga fraksi berbeda: lapisan bening atas adalah sentrifugasi pada 14.000 rpm atau 18.000 xg selama 1 menit. Buang supernatannya.
plasma; lapisan tengahnya adalah buffy coat, mengandung leukosit pekat; lapisan bawah mengandung eritrosit pekat. Ekstraksi total DNA dari buffy coat ii. Tambahkan 200 ÿl Buffer FATG dan suspensikan kembali pelet dengan cara divorteks atau dipipet. Inkubasi selama 5 menit di kamar suhu. aku
aku
akan menghasilkan DNA 5~10 kali lebih banyak dibandingkan volu7me setara darah utuh.
aku. Ikuti Protokol Sel Berbudaya mulai dari Langkah 1 (Lisis Sel).
Lisis Sel 7.
Tambahkan 250 ÿl Buffer FABG ke sampel dan campur dengan pusaran.
8. Inkubasi selama 30 menit pada suhu kamar atau sampai sampel lisat bening. Selama inkubasi, balikkan tabung
setiap 3 menit. Protokol: Isolasi DNA dari Jamur Harap Baca
9. Panaskan terlebih dahulu Elution Buffer yang diperlukan dalam penangas air 70ºC untuk Elusi DNA. Catatan Penting Sebelum Memulai Langkah Berikut.
10. (Langkah Opsional): Jika diperlukan DNA genom bebas RNA, tambahkan 5 ÿl 10 mg/ml RNase A ke dalam sampel dan campur
Persiapan Sampel i. Panen
dengan cara divorteks. Kemudian diinkubasi selama 5 menit pada suhu kamar.
sel jamur dalam jumlah yang sesuai (hingga 5×107 ) ke dalam tabung mikrosentrifugasi 1,5ml (tidak disediakan) dan centrifuge pada
5.000 xg selama 10 menit. Buang supernatannya.
Pengikatan DNA
ii. Tambahkan 600 ÿl buffer sorbitol (1,2 M sorbitol; 10 mM CaCl; 0,1 M Tris-HCl pH 7,5; 35 mM ß-mercaptoetanol) dan
11. Tambahkan 250 ÿl etanol (96~100%) ke sampel dan vorteks selama 10 detik. Pipet sampel agar tercampur rata jika ada endapan yang terbentuk.
suspensikan kembali pelet tersebut.
aku aku aku. Tambahkan 200 U litikase atau zymolyase. Inkubasi selama 30 menit pada suhu
12. Tempatkan Kolom FABG ke Tabung Pengumpul. Pindahkan campuran sampel dengan hati-hati ke Kolom FABG.
30ºC. iv. Sentrifugasi campuran pada 2.000 xg selama 10 menit untuk memanen sferoplas, lalu buang supernatannya. v. Tambahkan 200 ÿl Buffer FATG ke dalam
Centrifuge dengan kecepatan 14.000 rpm atau 18.000 xg selama 1 menit. Buang Tabung Pengumpul dan tempatkan Kolom FABG ke Tabung
Pengumpul baru. tabung dan resuspensikan pelet sel dengan vorteks atau pemipetan. vi. Inkubasi pada suhu kamar selama 5 menit, lalu
ikuti Protokol Sel Kultur mulai dari Langkah 1
13. Ikuti Protokol Umum mulai dari Langkah 13 (Pencucian Kolom).
(Lisis Sel).
3 4