Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

Optimalkan Penelitian Anda

Cystatin C Manusia, CYS-C ELISA Kit

INSTRUKSI PENGGUNA

Kucing.Tidak E1104Hu

Rentang Kurva Standar 0,05-4mg/dl

Kepekaan 0,02mg/dl

Ukuran 48T, 96T

Penyimpanan Simpan pada suhu -20°C selama satu tahun. Atau simpan pada suhu 2-8°C selama 6

bulan. Jika reagen individu dibuka, disarankan agar kit digunakan dalam waktu 1

bulan. Hindari siklus pencairan berulang.

* Produk ini hanya untuk penelitian, tidak untuk digunakan dalam prosedur diagnosis. Sangat

disarankan untuk membaca instruksi ini sepenuhnya sebelum digunakan.

presisi

Intra-Assay Precision (Presisi dalam assay) Tiga sampel dengan konsentrasi yang diketahui diuji

pada satu piring untuk menilai presisi intra-assay. Kami mengukur sampel acak E1104Hu dalam

batch/lot yang sama untuk memastikan konsistensi kinerja kit.

Intra-assay Sampel n Berarti Standar deviasi CV (%)

Intra-Assay 1 18 2 0,08 3.8

Intra-Assay 2 18 0,5 0,02 4.3

Intra-Assay 3 18 0.9 0,04 4.3

Inter-Assay Precision (Precision antara assays) Tiga sampel dengan konsentrasi yang diketahui diuji dalam

assay terpisah untuk menilai presisi antar-assay.

CV(%) = SD/rata-rata x 100

Inter-Assay: CV< 10%

Penggunaan yang dimaksudkan

501 Changsheng S Rd, Distrik Nanhu, Jiaxing, Zhejiang, Cina

Telp: 86 21 31007137 | Email: save@bt-laboratory.com | www.bt-laboratory.com

halaman 1/8
Kit Sandwich ini untuk deteksi kuantitatif yang akurat dari Human Cystatin C (juga dikenal sebagai CST3)

dalam serum, plasma, supernatan kultur sel, Asites, homogenat jaringan atau cairan biologis lainnya.

Prinsip Assay

Kit ini adalah Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA). Pelat telah dilapisi sebelumnya dengan antibodi CST3

Manusia. CST3 yang ada dalam sampel ditambahkan dan mengikat antibodi yang dilapisi pada sumur. Dan kemudian

Antibodi CST3 Manusia yang terbiotinilasi ditambahkan dan mengikat CST3 dalam sampel. Kemudian Streptavidin-HRP

ditambahkan dan berikatan dengan antibodi CST3 terbiotinilasi. Setelah inkubasi, Streptavidin-HRP yang tidak terikat

dicuci selama langkah pencucian. Larutan substrat kemudian ditambahkan dan warna berkembang sebanding dengan

jumlah CST3 Manusia. Reaksi diakhiri dengan penambahan larutan penghenti asam dan absorbansi diukur pada 450

nm.

Reagen Disediakan

Komponen Kuantitas (96T) Kuantitas (48T)

Larutan standar (4.8mg/dl) 0,5ml x1 0,5ml x1

Pelat ELISA pra-dilapisi 12 * 8 strip sumur x1 12 * 4 strip sumur x1

pengencer standar 3ml x1 3ml x1

Streptavidin-HRP 6ml x1 3ml x1

Hentikan solusi 6ml x1 3ml x1

larutan substrat A 6ml x1 3ml x1

larutan substrat B 6ml x1 3ml x1

Konsentrat penyangga pencuci (25x) 20ml x1 20ml x1

Antibodi CST3 Manusia terbiotinilasi 1ml x1 1ml x1

Instruksi pengguna 1 1

Penyegel piring 2 foto 2 foto

Bahan Diperlukan tetapi Tidak Disediakan

- 37°C±0.5°C inkubator

- kertas penyerap

- Pipet presisi dan ujung pipet sekali pakai

- Tabung bersih

- Air deionisasi atau air suling

- Pembaca pelat mikro dengan filter panjang gelombang 450 ± 10nm

501 Changsheng S Rd, Distrik Nanhu, Jiaxing, Zhejiang, Cina

Telp: 86 21 31007137 | Email: save@bt-laboratory.com | www.bt-laboratory.com

halaman 2/8
Tindakan pencegahan

- Sebelum digunakan, kit dan sampel harus dihangatkan secara alami hingga suhu kamar 30

- menit. Instruksi ini harus benar-benar diikuti dalam percobaan.

- Setelah jumlah strip yang diinginkan telah dilepas, segera tutup kembali tas untuk melindungi sisa

dari kerusakan. Tutupi semua reagen saat tidak digunakan.

- Pastikan urutan pemipetan dan laju penambahan dari sumur ke sumur saat pemipetan reagen. Ujung pipet dan

- sealer pelat di tangan harus bersih dan sekali pakai untuk menghindari kontaminasi silang. Hindari menggunakan

- reagen dari batch yang berbeda secara bersamaan.

- Larutan substrat B peka terhadap cahaya, jangan biarkan larutan substrat B terkena cahaya dalam waktu lama.

- Stop solution mengandung asam. Harap kenakan pelindung mata, tangan, dan kulit saat menggunakan bahan ini.

Hindari kontak kulit atau selaput lendir dengan reagen kit.

- Kit tidak boleh digunakan melebihi tanggal kedaluwarsa.

Koleksi Spesimen

SerumBiarkan serum menggumpal selama 10-20 menit pada suhu kamar. Sentrifugasi pada 2000-3000 RPM

selama 20 menit. Kumpulkan supernatan tanpa sedimen.

PlasmaKumpulkan plasma menggunakan EDTA atau heparin sebagai antikoagulan. Setelah pencampuran

10-20 menit, sentrifus sampel selama 20 menit pada 2000-3000 RPM. Kumpulkan supernatan tanpa sedimen.

Supernatan kultur selKumpulkan dengan tabung steril. Saat mendeteksi komponen yang disekresi, sentrifus

pada 2000-3000 RPM selama 20 menit. Kumpulkan supernatannya. Saat mendeteksi komponen dalam sel,

gunakan PBS (pH 7,2-7,4) untuk mengencerkan suspensi sel, konsentrasi sel sekitar 1 juta/ml. Merusak sel

melalui siklus beku-cair berulang untuk mengeluarkan komponen di dalamnya. Sentrifugasi pada 2000-3000

RPM selama 20 menit. Kumpulkan supernatan tanpa sedimen.

TisuBilas jaringan dalam PBS dingin (pH 7,4) untuk menghilangkan kelebihan darah secara menyeluruh dan timbang

sebelum homogenisasi. Cincang jaringan dan homogenkan dalam PBS (berat jaringan (g): PBS (mL) volume=1:9) dengan

homogenizer kaca di atas es. Untuk memecah sel lebih lanjut, Anda dapat mensonikasi suspensi dengan pengganggu sel

ultrasonik atau membuatnya menjadi siklus beku-cair. Homogenat kemudian disentrifugasi selama 15 menit pada 12.000

RPM pada suhu 4°C untuk mendapatkan supernatan. Hindari siklus pembekuan/pencairan.

Urine / Asites / Cairan serebrospinalKumpulkan dengan tabung steril. Sentrifugasi pada 2000-3000 RPM selama

20 menit. Kumpulkan supernatan tanpa sedimen.

Catatan

- Konsentrasi sampel harus diprediksi sebelum digunakan dalam pengujian. Jika konsentrasi sampel tidak berada

dalam kisaran kurva standar, pengguna harus menghubungi kami untuk menentukan sampel optimal untuk

eksperimen tertentu pengguna.

501 Changsheng S Rd, Distrik Nanhu, Jiaxing, Zhejiang, Cina

Telp: 86 21 31007137 | Email: save@bt-laboratory.com | www.bt-laboratory.com

halaman 3/8
- Sampel yang akan digunakan dalam waktu 5 hari harus disimpan pada suhu 2-8°C. Sampel harus aliquoted atau harus

disimpan pada -20 ° C dalam waktu 1 bulan atau -80 ° C dalam waktu 3 bulan. Hindari siklus pencairan beku yang

- berulang. Sampel harus dibawa ke suhu kamar sebelum memulai pengujian.

- Centrifuge untuk mengumpulkan sampel sebelum digunakan.

- Sampel yang mengandung NaN3 tidak dapat diuji karena menghambat aktivitas Horse Radish Peroxidase

(HRP).

- Kumpulkan supernatan dengan hati-hati. Ketika sedimen terjadi selama penyimpanan, sentrifugasi harus

dilakukan lagi.

- Hemolisis dapat sangat mempengaruhi validitas hasil tes. Berhati-hatilah untuk meminimalkan hemolisis.

* Sampel tidak dapat diencerkan dengan kit ini. Karena bahan yang kami gunakan untuk menyiapkan kit,

gangguan matriks sampel dapat salah menekan spesifisitas dan akurasi pengujian.

Persiapan Reagen

- Semua reagen harus dibawa ke suhu kamar sebelum digunakan.

- StandarSusun kembali 120ul standar (4.8mg/dl) dengan 120ul pengencer standar untuk menghasilkan larutan stok

standar 2mg/dl. Biarkan standar selama 15 menit dengan pengadukan lembut sebelum membuat pengenceran.

Siapkan titik standar duplikat dengan mengencerkan larutan stok standar (2mg/dl) 1:2 dengan pengencer standar

secara berurutan untuk menghasilkan larutan 1mg/dl, 0,5mg/dl, 0,25mg/dl dan 0,125mg/dl. Setiap larutan yang

tersisa harus dibekukan pada suhu -20°C dan digunakan dalam waktu satu bulan. Pengenceran larutan standar

yang disarankan adalah sebagai berikut:

2mg/dl Standar No.5 120ul Standar asli + pengencer Standar 120ul

1mg/dl Standar No.4 Standar 120ul No.5 + pengencer Standar 120ul

0,5mg/dl Standar No.3 Standar 120ul No.4 + pengencer Standar 120ul

0,25mg/dl Standar No.2 Standar 120ul No.3 + pengencer Standar 120ul

0.125mg/dl Standar No.1 Standar 120ul No.2 + pengencer Standar 120ul

501 Changsheng S Rd, Distrik Nanhu, Jiaxing, Zhejiang, Cina

Telp: 86 21 31007137 | Email: save@bt-laboratory.com | www.bt-laboratory.com

Halaman 4/8
 Konsentrasi standar Standar No.5 Standar No.4 Standar No.3 Standar No.2 Standar No.1

4.8mg/dl 2mg/dl 1mg/dl 0,5mg/dl 0,25mg/dl 0.125mg/dl

- penyangga cuciEncerkan 20ml Wash Buffer Concentrate 25x ke dalam air deionisasi atau suling untuk

menghasilkan 500 ml 1x Wash Buffer. Jika kristal telah terbentuk dalam konsentrat, aduk perlahan

sampai kristal benar-benar larut.

Prosedur Pengujian

1. Siapkan semua reagen, larutan standar dan sampel sesuai instruksi. Bawa semua reagen ke suhu

kamar sebelum digunakan. Pengujian dilakukan pada suhu kamar.

2. Tentukan jumlah strip yang diperlukan untuk pengujian. Masukkan strip ke dalam bingkai untuk digunakan. Strip yang

tidak digunakan harus disimpan pada suhu 2-8°C.

3. Tambahkan standar 50ul ke sumur standar.Catatan: Jangan menambahkan antibodi ke standar dengan baik karena

larutan standar mengandung antibodi terbiotinilasi.

4. Tambahkan 40ul sampel ke sumur sampel dan kemudian tambahkan 10ul antibodi Human CST3 ke sumur sampel, lalu

tambahkan 50ul streptavidin-HRP ke sumur sampel dan sumur standar (Bukan sumur kontrol kosong). Campur dengan

baik. Tutupi piring dengan sealer. Inkubasi 60 menit pada suhu 37°C.

5. Lepaskan sealer dan cuci piring 5 kali dengan buffer pencuci. Rendam sumur dengan buffer pencuci 300ul selama

30 detik hingga 1 menit untuk setiap pencucian. Untuk pencucian otomatis, aspirat atau tuang masing-masing

sumur dan cuci 5 kali dengan buffer pencuci. Blot piring ke handuk kertas atau bahan penyerap lainnya.

6. Tambahkan 50ul larutan substrat A ke setiap sumur, lalu tambahkan 50ul larutan substrat B ke setiap sumur.

Inkubasi piring ditutup dengan sealer baru selama 10 menit pada 37 ° C dalam gelap.

7. Tambahkan 50ul Stop Solution ke masing-masing sumur, warna biru akan langsung berubah menjadi kuning.

8. Tentukan densitas optik (nilai OD) masing-masing sumur segera dengan menggunakan pembaca pelat mikro yang disetel ke 450 nm

dalam waktu 10 menit setelah menambahkan larutan penghenti.

Ringkasan

1. Siapkan semua reagen, sampel dan standar.

2. Tambahkan sampel dan reagen ELISA ke dalam masing-masing sumur. Inkubasi selama 1 jam pada suhu 37°C.

3. Cuci piring 5 kali.

4. Tambahkan larutan substrat A dan B. Inkubasi selama 10 menit pada suhu 37°C.

5. Tambahkan stop solution dan warna berkembang.

6. Baca nilai OD dalam waktu 10 menit.

Perhitungan Hasil

501 Changsheng S Rd, Distrik Nanhu, Jiaxing, Zhejiang, Cina

Telp: 86 21 31007137 | Email: save@bt-laboratory.com | www.bt-laboratory.com

Halaman 5/8
Bangun kurva standar dengan memplot OD rata-rata untuk setiap standar pada sumbu vertikal (Y) terhadap

konsentrasi pada sumbu horizontal (X) dan gambar kurva yang paling sesuai melalui titik-titik pada grafik. Perhitungan

ini paling baik dilakukan dengan perangkat lunak penyesuaian kurva berbasis komputer dan garis yang paling sesuai

dapat ditentukan dengan analisis regresi.

Data Umum

Kurva standar Human Cystatin C, CYS-C ELISA Kit disediakan untuk demonstrasi saja. Kurva
standar harus dibuat untuk setiap set sampel yang diuji.

Konsentrasi OD Rata-rata dikoreksi

1.82
2.4mg/dl 1.88 1,834
1.939
1.109
1.2mg/dl 1.094 1.049
1.08
0,478
0.6mg/dl 0,525 0,479
0,571
0,312
0.3mg/dl 0,26 0.215
0.208
0,088
0.15mg/dl 0,092 0,047
0,096
0,048
0mg/dl 0,045 0
0,043

Penyelesaian masalah

Kemungkinan kasus Latar Belakang Tinggi Larutan

Pencucian yang tidak benar Meningkatkan durasi langkah perendaman

Suhu inkubasi salah Inkubasi pada 37°C

501 Changsheng S Rd, Distrik Nanhu, Jiaxing, Zhejiang, Cina

Telp: 86 21 31007137 | Email: save@bt-laboratory.com | www.bt-laboratory.com

halaman 6/8
 Waktu inkubasi terlalu lama Mengurangi waktu inkubasi

Substrat terkena cahaya sebelum digunakan Simpan substrat di tempat yang gelap

Ganti substrat. Substrat harus bersih dan menghindari

Substrat terkontaminasi
kontaminasi silang dengan menggunakan sealer

Buffer pencuci yang terkontaminasi Gunakan buffer bersih dan filter steril

Kasus yang mungkin terjadi Lemah atau Tidak Ada Sinyal Larutan

Sebuah reagen atau langkah prosedur dihilangkan karena

Periksa protokol dan ikuti langkah-langkahnya dengan cermat
kesalahan

Antibodi tidak cukup Meningkatkan konsentrasi antibodi

Pencucian yang tidak benar Meningkatkan durasi langkah perendaman

Reagen terkontaminasi Gunakan yang baru

Pipet tidak bersih Pipet harus bersih

HRP tidak ditambahkan Tambahkan HRP sesuai instruksi

Sampel mengandung natrium azida Jangan siapkan sampel dengan natrium azida

Periksa dan ikuti protokol. Tempatkan piring di inkubator selama

Waktu atau suhu inkubasi yang salah
periode inkubasi (diatur ke 37ºC).

Kemungkinan kasus presisi buruk Larutan

Keluarkan dengan cepat dan identik ke sisi masing-masing sumur.

Kesalahan pemipetan
Gunakan pipet yang dikalibrasi.

Pastikan sumur dicuci secara memadai dengan mengisi sumur dengan

Pencucian tidak lengkap
buffer pencuci dalam jumlah yang tepat.

Periksa sumur dan singkirkan puing-puing sebelum digunakan. Bersihkan

Sumur najis bagian bawah luar pelat untuk menghilangkan kotoran atau sidik jari sebelum
membaca.

Kemungkinan kasus kurva standar yang buruk Larutan

Persiapan standar yang salah Menyusun kembali standar seperti yang disarankan pada lembar data.

Menangkap Antibodi tidak mengikat Gunakan pelat ELISA BT LAB di dalam kit

Pastikan peralatan cuci bekerja dengan benar (yaitu mendistribusikan

Pencucian yang tidak efisien volume yang merata ke setiap sumur). Pastikan sumur kosong setelah
aspirasi, namun pastikan untuk mengisi sumur tepat waktu.

Keluarkan dengan cepat dan identik ke sisi masing-masing sumur.

Kesalahan pemipetan
Gunakan pipet yang dikalibrasi.

Simpan semua komponen seperti yang direkomendasikan pada lembar data.

Penyimpanan komponen yang salah
Jangan biarkan reagen yang dilarutkan tetap pada suhu kamar selama

501 Changsheng S Rd, Distrik Nanhu, Jiaxing, Zhejiang, Cina

Telp: 86 21 31007137 | Email: save@bt-laboratory.com | www.bt-laboratory.com

halaman 7/8
 waktu berlebih.

Jika Anda memiliki pertanyaan tentang pesanan, silakan hubungi kami melalui: order@bt-
laboratory.com ; bantuan teknis, silakan hubungi kami melalui: support@bt-laboratory.com
Lebih banyak produk kunjungiwww.bt-laboratory.com

501 Changsheng S Rd, Distrik Nanhu, Jiaxing, Zhejiang, Cina

Telp: 86 21 31007137 | Email: save@bt-laboratory.com | www.bt-laboratory.com

Halaman 8/8