Newborn Screening

Congenital
Hypotiroidism
Facts about Congenital
hypothyroidism
 Hipotiroid Kongenital adalah gangguan fungsi
kelenjar tiroid yang dialami sejak lahir
sehingga menyebabkan kekurangan hormon tiroid

 Penyebab : Kelainan kelenjar tiroid,

anatomi gangguan hormon tiroid
pembentukan
kekurangan atau
iodium.
 Tingkat kejadian hipotiroid kongenital mencapai 1:
3000 kelahiran di seluruh dunia.
Gejala Hipotiroid
Kongenital
Symptom
p

 >95% HK tidak memperlihkan tanda dan gejala klinis saat lahir.

 Jaundice (penyakit kuning), makroglosi (lidah besar), skin mottling,
intoleransi
terhadap dingin, miksedema.
 Decrease muscle tone, growth failure, broad hands with short fingers, short arms
and legs.
 Deteksi dini menjadi salah satu upaya untuk mencegah terjadinya
hambatan
Pengobatan Hipotiroid
Kongenital

 Pengobatan dengan pemberian tiroksin.

 Pengobatan dilakukan sesegera mungkin dan
waktu terbaik dimulai sebelum bayi berusia 1
bulan.
 Jika pengobatan dimulai sebelum minggu ke 6,
sebagian besar dapat mempunyai IQ >90
 Jika pegobatan baru dimulai pada usia 1 tahun, IQ
< 90
 Ministry of Health regulations

Every newborn must be screened

for congenital hypothyroidism
 Technical
Process

Proses
Pengambila Preparas Proses Pengukura dan
n Sampel i Sampel
n Pelaporan
Reagen
Data
Pengeringan ± 3 jam ± 30 menit/ plate 4 jam inkubasi + 30 Reading ( 1 detik/well)
menit washing dan
shaking
inkubasi overnight
+
1.5 jam washing
dan
shaking
 Alat yang
diperlukan
Disediakan oleh user

• Victor 2D • Mikropipet + disposable tips (20-200 µL, 100-

• Automatic DELFIA Washer-Diskremove 1000µL)
• Automatic DELFIA Plateshake • Gelas ukur (10mL, 100mL, 1000mL)
• PC + Monitor • Beaker Glass (250mL)
• Printer dot matrix • Aquades
• Puncher • Sarung tangan
• Biohazard Plastic bag
• Timer
No. Alat/Bahan Ukuran Keterangan
1 Mikropipet 20-200 pL
2 Mikropipet 100 pL - 1000 pL
Untuk dispensing reagen
3 Disposable Tips 20 pL - 200 pL
4 Disposable Tips 100 pL - 1000 pL
Untuk pengukuran pengenceran wash buffer dan
5 Gelas Ukur 10 mL, 100 mL, dan 1000 mL
Eu Tracer
6 Aquades Untuk pengenceran wash buffer
7 Sarung tangan (Gloves) Non Powdered

8 Biohazard Plastic Bag Untuk waste

9 Timer
10Beaker Glass / Pot plastik Untuk wadah larutan dilusi tracer solution
 Alat yang
diperlukan
Pengambilan sampel
• Sarung tangan steril non powder
• Blade Lancet pediatric steril
• Kotak Limbah tajam / Safety box
• Kain Kasa steril
• Alcohol pads
• Kertas saring DBS disertai kartu informasi
• Rak Sampel
• Handuk kompres hangat dan lembab
 Pengambila
n Sampel

• Spesimen diambil dari darah tumit , usia bayi 48-72

jam setelah lahir
• Spesimen dapat diambil dari vena untuk skrining bayi
pada kondisi khusus
• Tidak disarankan mengumpulkan sampel dengan
menggunakan tabung EDTA, heparin, maupun
kapilari.
 Skrining Bayi Kondisi
Khusus
 Maksimal usia neonatus (28 hari)

 Untuk Bayi prematur dg umur kehamilan <34 minggu / BBLR

1) Bayi prematur
2) Bayi berat lahir
<2500g dilakukan 2-3 x pengambilan spesimen. Usia 48
rendah (BBLR) jam,
3) Bayi sakit dirawat usia 2 minggu, dan bila diperlukan diambil spesimen ke3 pd
di NICU
4) Bayi kembar usia 28 hari atau sebelum bayi dipulangkan.
 Pada bayi kurang bulan, BBLR, dan bayi sakit dilakukan
dengan jenis
kelamin sama pengambilan spesimen segera sebelum mendapatkan
tindakan pengobatan (transfusi, nutrisi parenteral ataupun
pemberian antibiotika).
Pengambila
n Sampel
Pengambila
n Sampel
Pengambila
n Sampel
Stabilita
s
Sampel

Stabilitas Spesimen DBS

• Stabil selama 1 bulan disimpan

dalam suhu ruang ditambah
dengan desiccant.

• Stabil selama 1 tahun disimpan

dalam suhu 4C ditambah dengan
desiccant.
 Pengirima
n
Sampel

 Setelah kering, masukan kertas saring/ DBS ke dalam plastic ziplock

 Masukkan ziplock ke dalam amplop.
 Pengiriman tidak boleh lebih dari 7 hari sejak spesimen diambil.
 Perjalanan pengiriman tidak lebih dari 3 hari.
Penangana
n Sampel

Pengambilan
sample 48-72 jam

Pengiriman
sample Max 3 hari

Proses laboratorium
1-3 hari

Lap
oran
Hasi
l

Waktu sangat menentukan dalam skrining bayi baru lahir. Sebisa

mungkin seluruh proses sudah harus selesai dalam waktu kurang dari 10
Blood Spot
Check
Spesimen Invalid
(lanjt.)
 DELFIA® Neonatal hTSH
Komponen Kit Jumlah

Htsh standar* 1 lembar kertas saring (Whatman no. 903)

berisi 5 set dried blood spots

Control (C1, C2)* 1 lembar kertas saring (Whatman no. 903)

berisi 5 set dried blood spots

Anti-Htsh-Eu tracer stock solution (bovine serum, 1 vial (1.5mL)

mouse IgG, <0.1% sodium azide)

Wash concentrate (25x larutan garam yang 1 botol (250mL)

disangga Tris HCL (pH 7.8) + Tween 20, Germall
II  960 test
Neo hTSH assay buffer 1 botol (250mL)  Setelah dibuka, Kit stabil 2 minggu

Enhancement Solution (Triton X-100², asam asetat, 1 botol (250mL)

pengkelat)**
Reagen Unopened
Anti-hTSH microtitration strip 10x8x12 wells 10 plates
coated with antibodies direct against a specifi site
on the β subunit of hTSH molecule 2-8C hingga tanggal kadaluwarsa
*hTSH standar dan kontrol hindari dari lembab
Extra barcode labels for the plate 3 buah ** Enhancement Sol. hindari dari cahaya
matahari langsung.
Lot-specific quality control certificate 1 buah
 DELFIA® Neonatal hTSH
Kit Sensitif
Assay terhadap
Buffer cahaya

10 Microplates

Wash
Solution

Standard
& Control
Sensitif
terhadap
lembab
Standard dan Kontrol
 DELFIA® Neonatal hTSH
Kit
Jumlah Tes/kit
 1 kit => 10 microplate (10 x 96 well) = 960 well
 1x run dalam 1 plate membutuhkan 16 well (12 well standar dan 4
well kontrol)

Full plate (8 strip x 12 96 – 16 well = 80 pasien 80 x 10 plate =

well) 800 pasien
Running tidak full plate 960-240 well = 720
pasien
720 pasien / 15x run
= 48 pasien
Total 1x run = 64 well
 Preparasi Punching
Penambahan
Inkubasi Washing
Penambahan
Pembacaan
Reagen Reagen 1 Reagen 2

Encerkan Anti-hTSH-Eu Tracer sock solution dengan Neo

hTSH Assay Buffer seperti pada tabel berikut

Strips Tracer Stock Solution (µL) Buffer (mL)

4 70 11.5
8 140 23
12 210 34
16 270 43
20 330 53
24 400 64
28 460 74
32 520 84

Note: Larutan baik digunakan dalam jangka waktu 1 jam setelah

rekonstitusi
Preparasi Punching
Penambahan
Inkubasi Washing
Penambahan
Pembacaan
Reagen Reagen 1 Reagen 2

Encerkan 100 mL Wash concentrate

dengan 2400mL deionized water

Note: Stabilitas wash solution bertahan

2 minggu pada suhu 2-25C dalam
kontainer tertutup
 Preparas Penambahan Penambahan
i
Punching Reagen 1
Inkubasi Washing
Reagen 2
Pembacaan
Reagen

Pindahkan strip yang

diperlukan • Duplo standar dan kontrol
• Kontrol dan standar harus di running di setiap
pengujian
• Hindari pelubangan di bagian pinggir dan
tengah (tempat tetes sampel darah)
 Preparas Penambahan Penambahan
i
Punching Reagen 1
Inkubasi Washing
Reagen 2
Pembacaan
Reagen

Letak pelubangan/punching
yang baik

1 2
Tampak Tampak
depan belakang Hindari pelubangan bagian pinggir
Pastikan darah
menyerap dengan baik dan tengah (tempat penetesan
pada kertas filter sampel darah)
Preparas Penambahan Penambahan
i
Punching Reagen 1
Inkubasi Washing
Reagen 2
Pembacaan
Reagen

Contoh peta sampel yang direkomendasikan dibawah ini:

Note :
- Std = Standar
- Crl = Kontrol
- Unk = Sampel
 Preparasi Penambahan Penambahan
Punching Inkubasi Washing Pembacaan
Reagen Reagen 1 Reagen 2

Tambahkan 200µL Anti-hTSH-Eu Tracer sock solution ke setiap well

Preparas Penambahan Penambahan
i
Punching
Reagen 1 Inkubasi Washing
Reagen 2
Pembacaan
Reagen

• 10 menit fast shaking -> 4 jam inkubasi dgn slow shaking (20-25C)

• 10 menit fast shaking -> inkubasi overnight (2-8C) + 1 jam

inkubasi slow shaking (20-25C)
Preparas Penambahan Penambahan
i
Punching
Reagen 1
Inkubasi Washin Reagen 2
Pembacaan
Reagen g

Buang larutan dan paper disk dari

well menggunakan DELFIA Washer-
Diskremove (program 32)
 Preparasi
Punching
Penambahan
Inkubasi Washing
Penambahan Pembacaan
Reagen Reagen 1 Reagen 2

Shake plate perlahan, 5 menit

Tambahkan 200µL Enhancement

Solution ke setiap well
Preparasi Penambahan Penambahan enambac
Punching Inkubasi Washing
Reagen Reagen 1 Reagen 2 PeHmabsalica
an

Lakukan pembacaan pada Victor 2D

(dalam jangka waktu 1 jam)
4.5 – 5 hours/running process, 80 samples/plate
DELFIA (Dissociaion
Enhanced Lanthanide
Fluoro Immuno Assays)
 Prinsip Assay DELFIA

DELFIA® Neonatal hTSH assay menggunakan dua situs fluoroimmunometric

assay berbasis teknik Direct Sandwich terhadap dua antibodi
monoklonal
yang berlekatan langsung pada dua situs determinan antigen pada molekul
hTSH
 Time-Resolved Fluorometry

intensity
Emission

Pembacaan pada teknologi Time Resolved

Fluorometry mengeliminasi intervensi dari sinar
background/ noise saat eksitasi, sehingga hasil
perpendaran yang didapat lebih akurat
 Time-Resolved Fluorometry

Prompt Time resolved signal

signal
V2D Workstation Software
Modules
A separate Workstation PC that
generates worklist and analyze assay
results

Generate plate worklist

manually if required

Management of kit lot

information, default plate
map and run parameters

Management of
quality control data
and multirules

Review results, calibration and

quality control data, retest
samples
QC Validation
Criteria

 Grafik membentuk garis Linear

 Iteration value < 8
 %CV for duplicate <20%
 QC range (within manufacturing
range)
 Proses
dan
Pelaporan
Data Hasil TSH

< 20 µu/mL ≥20 µu/mL

Normal Resample/ Pemeriksaan

DUPLO

< 20 µu/mL ≥20 µu/mL

Normal
Konfirmasi
Tes dengan
Serum FT4
 Routine
Maintenance

 Bersihkan area sekeliling instrumen dari debu

 Bersihkan Plate Carrier dan Workstation
dari sisa potongan kertas menggunakan
Tissue yang dibasahi Alkohol 70%
 Bersihkan Punch Head dengan Dust
Remover, Aquades, dan Alkohol 70%
 Routine
Maintenance

 Lakukan priming harian

 Bersihkan area sekeliling instrument dari debu
 Mengganti wash buffer dan akuades 2 minggu
sekali
 Buang waste secara rutin

D
E
L
F
I
 Unexpected
Result
 Kondisi yang diketahui menyebabkan anomali hasil adalah:

 Spot sampel pada kertas saring tidak terpenuhi oleh darah dan
darah tidak tembus ke bawah kertas
 Titik sampel dilubangi terlalu dekat dengan tepi atau
terlalu tengah
 Spesimen tidak dikeringkan dengan benar
 Kontaminasi kertas saring (terkena debu, atau terdapat
jamur)
True
Story
Terima Kasih