DALF SALMONELLA ANTEGN TEST

PRNSIP KERJA
DALF Salmonella Antegn Test adalah suspensi bakteri yang diberi warna dan diinaktifkan
yang digunakan unuk penetapan kualitatif dan semi kualitatif untuk mendeteksi adanya
Algutnin serum sehubungan adanya infeksi bakteri yang disebabkan oleh bakteri grup
salmonella. Tite antibody pasien ditentukan dengan cara membuat satu seri pengenceran
serum yang kemudian direaksikan dengan suspense antigen. Reaksi positif ditentukan dengan
melihat adanya reaksi aglutunasi antara suspense antigen dan serum pasien tingkat
pengenceran tertentu.

PERSIAPAN SPESIMEN
Specimen yang dibutuhkan adalah serum pasien. Hanya serum spesimen yang bersih dan
tidak dipanaskan yang digunakan. Jangan mengguakan serum yang hemolosis dan
mempunyai kandungan lemak yang tinggi.

PROSEDUR KERJA
Sebelum dipergunakan sebaiknya seluruh material dibiarkan beberapa saat untuk mencapai
suhu ruang. Prosedur kerja diulang untuk setiap jenis suspense antigen.

A. Tes Qualitatif dengan slide

1. Teteskan satu tetes (0.04 ml) serum yang tidak di encerkan ke atas slide.
2. Tambahkan satu tetes (0.04 ml) suspense antigen yang telah dikocok dengan
homogeny.
3. Campurkan serum dan suspense antigen dan menggunakan batang pengaduk (tusuk
gigi) dan sebarkan memenuhi lingkaran pengamatan.
4. Putar slide dengan perlahan selama satu menit dan amati aglutinasi yang terjadi.
Hasil positif ditandai dengan terjadinya reaksi aglutinasi yang bisa dilihat dengan
mata. Jika terjadi aglutinasi dalam waktu satu menit tersebut, lanjutkan dengan tes
konfirmasi dengan menggunakan tabung reaksi untuk menentukan titer antibodi
dalam serum spesimen tersebut.

B. Tes Qualitatif dengan Pengenceran pada slide

 1. Pipet serum spesimen yang belum diencerkan dengan volume masing-masing 0.08
ml, 0.04 ml, 0.02 ml, 0.01 ml, dan 0.005 ml keingkaran yang terpisah pada slide.
2. Untuk pembanding, pipet juga 0.04 ml kontrol positif, dan 0.04 ml kontrol negatif ke
tempat yang terpisah pada slide. Larutan saline 0.85% bisa digunakan sebgai kontrol.
3. Teteskan satu tetes suspensi antigen yang telah dikocok secara homogen atau serum
spesimen, kontrol positif dan kontrol negatif.
4. Campurkan serum dan suspensi antigen tersebut dengan menggunakan batang
pengaduk dimulai dari pengenceran serum tersebar ke pengenceran serum terkevil
dan sebarkan memenuhi lingkaran pengamatan. Lakukan juga terhadap kontrol
positif dan kontrol negatif.
5. Putar slide dengan tangan atau rotato (150 rpm) selama dua – tiga menit.
6. Baca hasil reaksi dibawah penerangan yangbaik. Hasil positif ditandai dengan
terlihatnya agltinasi.

TUJUAN
Reagensia ini digunakan untuk menentukan aktivitas enzim Asparatate Aminotranfersea
(AST = GOT) dalam serum manusia. AST banyak terdapat di dalam jantung, hati, otot
skeletal, ginjal dan eritosit. Kerusakan pada jaringan dari organ tersebut di atas menyebabkan
meningkatnya GOT dalam serum atau plasma.

DASAR PEMERIKSAAN
Berdasarkan reaksi kinetic enzim dengan bantuan Malate Dehydroganase dan NADH;
L-Aspartate + α – Kletoglutarate Oxalacetate + L-Glutamate
Oxaloacetate + NADH + H L-Malaate + NAD + H2O

AST mengkalatis transfer gugus amino dari L-Asparatate ke α – Kletoglutarate menjadi

Oxaloacetate dan L-Glutamate. Oxaloacetate selnjutnya mengalami reduksi dan terjadi
oksidasi NADH menjadi NAD dengan bantuan enzim Malate Dehydrogenese (MDH). Hasil
penurunan absorbance pada panjang gelombang 340 nm sesuai dengan aktivitas AST.
Lacatate Dehydrogenese (LDH) ditambhkan untuk mencegah gangguan dari piruvat yang
berasal dari serum.
BAHAN PEMERIKSAAN
Spesimen tebaik adalah serum (berasal dari darah yang tidak hemolisis) Sel darah merah
mengandung AST. Enzim ini stabil selama 10 hari pada suhu 2 – 8 0 C atau 2 minggu bila
disimpan beku atau 4 hari pada suhu kamar (18 – 300 C).

PERALATAN
1. Pipet 1,0 mL 4. Photometer dengan panjang gelombang
2. Mikropipet 100 µL 340 nm
3. Tabung reaksi

PERSIAPAN DAN STABILITAS

Pembuatan Larutan Kerja
Larutan reagenesia dengan pelarut Aqubidest sesuai volume pada label botol dan campur
dengan baik. Larutan ini stabil selama 30 hari pada suhu 2 – 8 0 C dan 48 jam pada suhu
kamar (18 – 300 C). Absorbance reagenesia harus < 0,8 AU bila dibaca terhadap aqubidest
pada panjang gelombang 340 nm.

PROSEDUR KERJA
Panjang gelombang : 340 nm
Faktor : 1768
Temperature : 300 C, 370 C
Masukan kedalaman tabung reaksi Test
Larutan Kerja
1,0 mL
(dihangatkan pada 300 C / 370 C selama 5 menit)
Serum 100 µL
Campur homogen dan hangakan pada 300 C - 370 C selama 60 detik. Baca
Absorbance Test (Abs. Test) selama 60 detik selama 3 menit terhadap
blanko air pada panjang gelombang 340 nm. Hitung nilai rata-rata dari
selisih absorbancenya :
(Abs.Test2 - Abs.Test1) + (Abs.Test1 - Abs.Test2) = Abs Test/menit
2
PERHITUNGAN

Aktivitas AST (IU/L) = Abs Test/menit x Faktor

Faktor konversi temperatu untuk serum manusia

Temperatur
Pemeriksaan 250 C 300 C 370 C
370 C 0,51 0,69 1,00

NILAI NORMAL
300 C < 28 (IU/L)
370 C < 40 (IU/L)

PEMANTAPAN KUALITAS
Untuk menentukan ketepatan (accuracy) dan ketelitian (precision), gunakan serum kontrol
normal dan abnormal

CATATAN
Lineritas sampai 500 IU/L. Bila hasil > 500 IU/L, encerkan serum 1 : 1 dengan NaCl 0,86%,
ulangi pemeriksaan dan hasil yang didapat dikalikan dengan 2.
 PEMERIKSAAN ALT / SGPT

Metode optimized tris buffer. IFCC kinetic

- Dasar pemeriksaan
L. Alanine + ketoglutarate pyruvate + 1 glutamate
Pyruvae + MADH + H + L lacatate + MAD + H2O
- Bahan pemeriksaan
- Serum (berasal dari darah yang tidak lisis)

- Prosedur kerja
Sample
1. Reagen 1 800 41
Reagen 2 200 41
Sample 100 41
2. Mix Incubasi 370 C, selama 1 menit selama 3menit terhadap blanko ai pada panjang
gelombang 340 nm.
- Nilai normal
L : 0 – 42 U | L
P : 0 – 32 U | L

CHOLESTEROL HDI
Prinsip kerja

Cholesterol Cster + H2O Cholesterol + Fatty acid

Cholesterol Cster + ½ O2 + H2O Cholesterol H2O2
2 H2O2 + 4 – aminoan + 1 pyrince + phenoi quenonemine + 4 H2O2
Sample
- Serum atau plasma
Prosedur
1. Pipet
Sample 0.2 ml
Macam cholesterum 0.5 ml
2. Inkubasi 10 menit
3. Centri Fuax min 4000 rpm sciama
4. Ambil supernatant
5. Pipet
Blank Standard Sample
Aquadest 100 uL - -
HDi Cholest std - 100 uL -
Sample Supernantan - - 100 uL
Reaqm cholesterol 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml

6. Mix dan icubasi 30 menit

7. Baca dengan standat sample dan blanko α 500 nm. Stabil dalam 30 menit

Nilai normal
L : > 35 mq %
P : > 45 mq %

Pemeriksaan IDI
- Dasar pemeriksaan
Cholesterol csters + H20 Cholesterol + Fatty acid
Cholesterol Cster + ½ O2 + H2O Cho1 + H2O2
2 H2O2 + 4 – aminoan + 1 pyrince + phenoi quenonemine + 4 H2O2
- Bahan pemeriksaan
Serum (bersal dari darah yang tidak lisis) standar prosedur
- Cara kerja
1. Pipet
Sample 0.4 ml
Reagen 0.2 ml
2. Mix inkubasi suhu ruang 15 menit
3. Centrifuge 15 menit dan 4000 rpm
4. Ambil supernatant
5.
Blank Standard Sample
 Blanko - - -
Cholest std - 2041 uL -
Sample Supernantan - - 20 uL
cholesterol 10 ml 1.0 ml 1.0 ml

6. Mix dan icubasi 30 menit suhu (16 – 25o C) atau 10 menit suhu 57 o C
7. Baca dan absornan standard an sample at 500 nm terhadap blanko stabil 50 menit

Harga normal
< 150 mq / dl

PEMERIKSAAN URCUM / CREATNIN

- Dasar pemeriksaan
- Bahan pemeriksaan
o Serum
- Cara kerja
1. Pipet
Reagen 1 1000 ul
Reagen 2 250 ul
2. Mix stabil dalam 30 hari
Pipet
Blank Standard Sample
Blanko - - -
Std - - -
Sample - 5 ul 5 ul
Reagen 500 ul - -
3. Mix baca dengan foto meter 405 nm
Harga normal
Urcum : 10 – 50 mq %
Cractinin : 0.6 – 1.1 mq %
0.5 – 0.9 mq %
 PEMERIKSAAN GLUKOSA
- Dasar pemeriksaan
- Bahan pemeriksaan
o Serum (bersal dari darah yang tidak lisis)
- Cara kerja
1. Pipet
Blank Standard Sample
Blanko 5 ul - -
Std - 5 ul -
Sample - - 5 ul
Reagen - - 500 ul
2. Mix incubasi 10 menit
3. Baca dengan fotometer
Sampai stabil dalam 30 menit
Harga normal
Gula darah swaktu < 140 mq / dl
Puasa > 0 – 110 mq / dl
2 Jam PP < 140 mq / dl

 Pemeriksaan asam urat

 Pemeriksaan cholesterol
 Pemeriksaan triqiisscrida
- Dasar pemeriksaan
- Bahan pemeriksaan.
Serum
- Cara kerja
1. Pipet
Blank Standard Sample
Reagen 500 ul - -
Std - 5 ul -
Sample - - 5 ul
Blanko - - -
2. Mix incubasi 10 menit
3. Baca dengan foto meter sampai stabil dalam 30 menit
4. Baca dengan foto meter sampai stabil dalam 30 menit
5. Harga normal
6. < 200 mq/dl Cholesterol / triqiiscrida
7. Asam urat L : 3.4 – 7.0 mq/dl
P : 3.4 – 5.7 mq/dl