ALAT DAN BAHAN

Alat Bahan
Fotometer mikrolab Serum/ plasma heparim atau EDTA
Pipet piston Reagen untuk mengukur kadar kolesterol
dan trigliserida
Tabung reaksi Alkohol 70%
Spuit 3 mL Aqduadest
Sentrifugasi Praktikan

Reagensia untuk pemeriksaan kolesterol yang mengandung:

1. Reagen:
4-aminoantipirin 0,30 mmol/1
Phenol 6 mmol/1
Peroksidase > 0,5 U/ml
Kolesterol esterase > 0,15 U/ml
Buffer pH 6,8
2. Standard 200 mg/dl

Reagensia untuk pemeriksaan trigliserida yang mengandung:

1. Tris buffer: 0,15 mol/1, pH 7,6

Mg-sulfat: 17,5 mmol/1
Natrium kholat : 0,15 %
k-heksacyanoferrat II : 6 µmol/l
hidroksi polietoksin-alkali : 0,12%
2. ATP : > 0,5 mmol/1
4-aminofenazon : 0,35 mmol/1
Lipase : 3 U/ml
Gliserolphosphat oksidase : .2,5 U/ml
Gliserol kinase : > 0,15 U/ml
4-chlorofenol: 3,5 mmol/1
PROSEDUR KERJA
1. Pegukuran kadar kolesterol total

Pipet larutan blanko

Pipet larutan standar 10 Pipet larutan sampel 10
reagen 10 µl aquadest +
µl aquadest + 1000 µl µl aquadest +1000 µl
1000 µl reagen ke
reagen ke dalam kuvet reagen ke dalam kuvet
dalam kuvet

Larutan di inkunaso selama 10 menit pada suhu 20-25ºC

Atau bisa selama 5 menit pada suhu 37ºC

Absorbansi sampel Asampel dibaca BR dalam waktu 1 jam

Perhitungan menggunakan standar :

Konsentrasi kolesterol dalam sampel (mg/dl) =
(Asampel)/(Astandard) x 200

Perhitungan menggunakan faktor :

Panjang gelombang mg/dl
546 nm C = 840 x Asampel
500 nm C = 553 x Asampel

*Apabila hasil melebihi 1000 mg/dl encerkanlah 0,1 ml sampel dengan 0,2 ml larutan NaCl
0,9% dan ulangi pengukuran. Hasil yang diperoleh dikalikan 3
 2. Pengukuran kadar trigliserida

Pengukuran kadar trigliserida menggunakan spektrofotometer pada panjang gelombang 500

nm dan 546 nm

Larutan uji dibagi menjadi beberapa, yaitu :

Blanko Reagen Sampel

Larutan pereaksi 0,01 ml dengan

Larutan pereaksi 100 ml
larutan peraksi 100 ml

Masukan larutan kedalam kuvet ukuran 1 cm

Larutan di inkubasi selama 10 menit pada suhu 20-25ºC atau selama 5 menit pada suhu
37ºC

Absorbansi sampel dibaca dengan blanko reagen selama 1 jam

Konsentrasi trigliserida sampel C hitung dengan menggunakan:

Panjang gelombang C (mg/dL)

546 nm 1040 x Asampel

500 nm 760 x Asampel

*Apabila hasil melebihi 1000 mg/dL maka diencerkan 0,1 ml sampel dengan 0,2 ml larutan
NaCl 0,9% dan pemeriksaan diulangi. Hasil yang diperoleh dikalikan 3.