Machine Translated by Google

Panduan pengguna

Protokol Umum: Isolasi DNA dari Darah Manusia Segar Harap Baca Catatan
DNA Genomik Sel Darah/Kultur FavorPrepTM Penting Sebelum Memulai Langkah Berikut.
Kit Mini Ekstraksi Lisis RBC
-Untuk ekstraksi DNA genom dari darah segar, darah forzen, sel kultur dan jamur 1. Kumpulkan darah segar manusia dalam tabung penampung antikoagulan.
2. Pindahkan hingga 300 ÿl darah segar ke dalam tabung mikrosentrifugasi 1,5 ml (tidak disediakan). Jika sampelnya lebih dari
Isi Paket: 300 ÿl (hingga 1 ml), tambahkan sampel ke dalam tabung centrifuge steril 15 ml.
Hanya Untuk Penggunaan Penelitian
3. Tambahkan 3× volume sampel RBC Lysis Buffer dan campur secara inversi. Jangan pusaran.
Kucing. TIDAK: FABGK 004 FABGK 100 FABGK 300 Misalnya: tambahkan 900 ÿl RBC Lysisi Buffer ke 300 ÿl sampel darah.
(4 persiapan) (100 persiapan) (300 persiapan) 4. Inkubasi campuran sampel pada suhu kamar selama 10 menit.
7 ml 135 ml 405 ml -Catatan: Pastikan campuran sampel menjadi merah tua dan transparan setelah inkubasi.
Penyangga Lisis RBC
5. Centrifuge pada 3000 xg selama 5 menit. Dan hilangkan seluruh supernatannya.
Penyangga FATG 1.5 ml 30 ml 75 ml
6. Tambahkan 100 ÿl RBC Lysis Buffer ke dalam pelet dan resuspensi sel dengan memipet.
Penyangga FABG 1.5 ml × 2 40 ml 100 ml

Penyangga W1 1.8 ml 45 ml 130 ml Lisis Sel 7.

1ml 25 ml 50 ml Tambahkan 200 ÿl Buffer FABG ke dalam campuran sampel. Aduk rata dengan cara divorteks.
Wash Buffer* (konsentrat)
8. Inkubasi campuran sampel pada suhu kamar selama 10 menit atau hingga campuran sampel jernih. Selama
Penyangga Elusi 1ml 30 ml 75 ml
inkubasi, balikkan tabung setiap 3 menit.
Kolom FABG Mini 4 buah 100 buah 300 buah 9. Panaskan terlebih dahulu Elution Buffer yang diperlukan (untuk Langkah Elusi ) dalam penangas air 70ºC.
Tabung koleksi 8 buah 200 buah 600 buah 10. (Langkah Opsional): Jika diperlukan DNA genom bebas RNA, tambahkan 5 ÿl 10 mg/ml RNase A dan campur dengan cara divorteks.
1 1 1 Inkubasi selama 5 menit pada suhu kamar.
Panduan pengguna
Pengikatan
DNA 11. Tambahkan 200 ÿl etanol (96~100%) ke dalam sampel dan vorteks selama 10 detik. Pipet sampel agar tercampur rata jika ada endapan yang
terbentuk.
Pembuatan Wash Buffer dengan menambahkan etanol (96~100%) 12. Tempatkan Kolom FABG ke Tabung Pengumpul. Pindahkan campuran sampel dengan hati-hati ke Kolom FABG. Centrifuge dengan kecepatan 14.000
* Volume etanol untuk Wash Buffer 4ml 100ml 200ml rpm atau 18.000 xg selama 1 menit. Buang Tabung Pengumpul dan tempatkan Kolom FABG ke Tabung Pengumpul baru.

Pencucian Kolom 13.

Spesifikasi: Prosedur surat: Tambahkan 400 ÿl Buffer W1 ke dalam Kolom FABG dan sentrifugasi selama 30 detik pada kecepatan 14.000 rpm atau 18.000 xg.
Prinsip: kolom putar mini (matriks silika) Buang flow-through dan letakkan kembali Kolom FABG ke Tabung Pengumpul.
Waktu pengoperasian: 30~60 menit 14. Tambahkan 600 ÿl Wash Buffer ke dalam Kolom FABG dan sentrifugasi selama 30 detik pada kecepatan 14.000 rpm atau 18.000 xg.

Kapasitas pengikatan: ÿ60 ÿg DNA/kolom Buang flow-through dan letakkan kembali Kolom FABG ke Tabung Pengumpul.
Darah segar -Pastikan etanol telah ditambahkan ke dalam Wash Buffer saat pertama kali dibuka.
Hasil tipikal: 15~35 ÿg/persiapan
15. Centrifuge lagi selama 3 menit dengan kecepatan 14.000 rpm atau 18.000 xg untuk mengeringkan kolom.
Penerapan kolom: sentrifugasi dan vakum
-Langkah Penting! Langkah ini akan menghindari reaksi enzimatik selanjutnya dihambat oleh sisa cairan.
Volume elusi minimum: 50 ÿl
Ukuran sampel: hingga 300 ÿl Darah utuh hingga 200
Elusi
ÿl darah beku hingga 200 ÿl buffy Lisis sel darah merah
16. Tempatkan Kolom FABG kering ke dalam tabung mikrosentrifugasi 1,5 ml yang baru.
coat hingga 1×107 sel hewan yang
17. Tambahkan 50~200 ÿl Preheated Elution Buffer atau TE ke pusat membran Kolom FABG.
dikultur hingga 1×109 sel bakteri yang dikultur
-Langkah Penting! Untuk elusi yang efektif, pastikan larutan elusi disalurkan ke pusat membran dan terserap seluruhnya.
hingga 5×107 sel jamur

-Jangan mengelusi DNA menggunakan volume kurang dari yang disarankan (50 ÿl). Ini akan menurunkan hasil akhir.
Lisis sel (FABG)
-Jika diperlukan hasil DNA yang lebih tinggi, ulangi langkah Elusi DNA untuk meningkatkan pemulihan DNA dan volume total bisa menjadi 200 ÿl.

Catatan Penting: 1.
Buffer yang disediakan dalam sistem ini mengandung bahan iritan.
Kenakan sarung tangan dan jas lab saat menangani buffer ini.
18. Inkubasi Kolom FAGB pada suhu 37ºC selama 10 menit dalam inkubator.
19. Centrifuge selama 1 menit dengan kecepatan penuh 14.000 rpm atau 18.000 xg untuk mengelusi DNA.
20. Simpan fragmen DNA pada suhu 4ºC atau -20ºC.
Mengikat
Mesin sentrifugal

Protokol: Isolasi DNA dari Darah Segar Bukan Manusia Harap Baca Catatan Penting
2. Tambahkan etanol (96~100%) ke dalam Wash Buffer saat pertama kali Pencucian (Penyangga W1) Sebelum Memulai Langkah Berikut. Saya. Volume sampel darah mamalia (tidak
membuka. (Penyangga Cuci)
Mesin sentrifugal berinti) bisa mencapai 50 ÿl; volume sampel berinti
3. Panaskan Elution Buffer hingga 70°C untuk langkah 17. eritrosit (misalnya burung atau ikan) bisa mencapai 10 ÿl. ii.
4. Semua langkah centrifuge dilakukan dengan kecepatan penuh Tambahkan 150 ÿl FATG Buffer dan sampel darah ke dalam tabung mikrosentrifugasi 1,5 ml (tidak disediakan). Campur oleh
(~18.000 xg) dalam microcentrifuge. Elusi (Elusi) pusaran.
Lisis Sel 1.
Mesin sentrifugal
Tambahkan 200 ÿl Buffer FABG ke sampel dan vorteks selama 5 detik.
2. Inkubasi campuran sampel pada suhu 70ºC selama 10 menit atau hingga campuran sampel menjadi jernih. Selama inkubasi, balikkan
DNA genom yang dimurnikan tabung setiap 3 menit.
3. Panaskan terlebih dahulu Elution Buffer yang diperlukan dalam penangas air 70ºC untuk langkah Elusi DNA.
4. (Langkah Opsional): Jika diperlukan DNA genom bebas RNA, tambahkan 5 ÿl 10 mg/ml RNase A ke dalam sampel dan campur dengan
pusaran. Kemudian diinkubasi selama 5 menit pada suhu kamar.
5. Ikuti Protokol Umum mulai dari Langkah 11.

2
1 pada tahun 202401
Machine Translated by Google

Protokol: Isolasi DNA dari Darah Beku Harap Baca Protokol: Isolasi DNA dari Sel yang Dikultur Harap Baca
Catatan Penting Sebelum Memulai Langkah Berikut. Catatan Penting Sebelum Memulai Langkah Berikut.
Persiapan Sampel 1. Persiapan Sampel i.
Pindahkan hingga 200 ÿl darah ke dalam tabung mikrosentrifugasi 1,5 ml (tidak disediakan). Jika volume sampel kurang dari 200 ÿl, tambahkan Tripsinisasi sel-sel yang melekat sebelum dipanen. ii. Pindahkan
volume PBS yang sesuai. jumlah sel yang sesuai (hingga 1×107 ) ke tabung mikrosentrifugasi 1,5 ml (tidak disediakan)
2. Tambahkan 30 ÿl Proteinase K (10 mg/ml, tidak disediakan) ke dalam sampel dan aduk sebentar. Kemudian inkubasi selama 15 menit dan sentrifugasi pada 6.000 xg selama 20 detik. aku
7
pada suhu 60ºC.
aku aku. Hapus supernatan dan resuspensi sel dengan 150 ÿl RBC Lysis Buffer.
Lisis Sel 1.
Lisis Sel 3. Tambahkan 200 ÿl Buffer FABG ke sampel dan vorteks selama 5 detik.
Tambahkan 200 ÿl FABG Buffer ke dalam sampel dan campur dengan cara divorteks. 2. Inkubasi selama 10 menit pada suhu 70ºC atau hingga sampel lisat bening. Selama inkubasi, balikkan tabung setiap 3 menit.
4. Inkubasi dalam penangas air 70ºC selama 15 menit untuk melisiskan sampel. Selama inkubasi, balikkan sampel setiap 3. Panaskan terlebih dahulu Elution Buffer yang diperlukan (untuk Step DNA Elution) dalam penangas air 70ºC.
3 menit. 4. (Langkah Opsional): Jika diperlukan DNA genom bebas RNA, tambahkan 5 ÿl 10 mg/ml RNase A ke dalam sampel dan campur dengan cara divorteks.
5. Panaskan terlebih dahulu Elution Buffer yang diperlukan dalam penangas air 70ºC untuk Elusi DNA. Inkubasi selama 5 menit pada suhu kamar.
6. (Langkah Opsional): Jika DNA genom bebas RNA diperlukan, tambahkan 5 ÿl 10 mg/ml RNase A ke sampel dan 5. Ikuti Protokol Umum mulai dari Langkah 11.
campur dengan cara divorteks. Inkubasi selama 5 menit pada suhu kamar.
7. Ikuti Protokol Umum mulai dari Langkah 11.

Protokol: Isolasi DNA dari Sel Bakteri Harap Baca Catatan

Penting Sebelum Memulai Langkah Berikut.
Protokol: Isolasi DNA dari Buffy Coat Harap Baca Persiapan Sampel A.
Catatan Penting Sebelum Memulai Langkah Berikut. Untuk bakteri Gram negatif: i. Pindahkan
Persiapan Sampel sel bakteri dalam jumlah yang sesuai (hingga 1×109 ) ke dalam tabung mikrosentrifugasi 1,5 ml (bukan
Centrifuge seluruh darah pada 3.300 xg selama 10 menit pada suhu kamar dan Anda akan mendapatkan tiga fraksi berbeda: lapisan bening disediakan) dan sentrifugasi pada 14.000 rpm atau 18.000 xg selama 1 menit. Buang supernatannya.
atas adalah plasma; lapisan tengahnya adalah buffy coat, mengandung leukosit pekat; lapisan bawah mengandung eritrosit pekat. Ekstraksi total ii. Tambahkan 200 ÿl Buffer FATG dan suspensikan kembali pelet dengan cara divorteks atau dipipet. Inkubasi selama 5 menit di kamar
DNA dari buffy coat akan menghasilkan DNA 5~10 kali lebih banyak dibandingkan volume setara darah utuh. suhu. aku aku
7
aku. Ikuti Protokol Sel Berbudaya mulai dari Langkah 1 (Lisis Sel).

Lisis RBC B. Untuk bakteri Gram positif: i.

1. Pindahkan hingga 200 ÿl buffy coat ke dalam tabung mikrosentrifugasi 1,5 ml (tidak disediakan).
2. Tambahkan 3× volume sampel RBC Lysis Buffer dan campur secara inversi.
Misalnya: tambahkan 600 ÿl RBC Lysisi Buffer ke 200 ÿl buffy coat.
3. Inkubasi pada suhu kamar selama 10 menit. Selama inkubasi, balikkan tabung setiap 3 menit.
4. Centrifuge selama 1 menit dengan kecepatan 14.000 rpm atau 18.000 xg dan buang supernatan seluruhnya.
5. Tambahkan 500 ÿl RBC Lysis Buffer dan suspensikan kembali pelet dengan memipet. Centrifuge selama 1 menit dengan kecepatan 14.000 rpm
atau 18.000 xg dan buang supernatan seluruhnya.
6. Tambahkan 200 ÿl RBC Lysis Buffer dan suspensikan kembali pelet dengan cara divorteks.
-Catatan! Pastikan pelet tersuspensi kembali sepenuhnya.
Pindahkan sel bakteri dalam jumlah yang sesuai (hingga 1×109 ) ke dalam tabung mikrosentrifugasi 1,5ml (tidak disediakan)
dan centrifuge dengan kecepatan 14.000 rpm atau 18.000 xg selama 1 menit. Buang supernatannya.
ii. Tambahkan 200 ÿl buffer lisozim (20 mg/ml lisozim; 20 mM Tris-HCl; 2 mM EDTA; 1% Triton X-100, pH 8,0; siapkan buffer lisozim segar segera sebelum
digunakan) dan suspensi kembali pelet dengan pusaran atau pemipaan .
aku aku aku. Inkubasi selama 10 menit pada suhu kamar. Selama inkubasi, balikkan tabung setiap 2~3 menit. iv. Ikuti Protokol Sel
Berbudaya mulai dari Langkah 1 (Lisis Sel).

Lisis Sel 7.
Tambahkan 250 ÿl Buffer FABG ke sampel dan campur dengan pusaran.
8. Inkubasi selama 30 menit pada suhu kamar atau sampai sampel lisat bening. Selama inkubasi, balikkan
tabung setiap 3 menit.
Protokol: Isolasi DNA dari Jamur Harap Baca
9. Panaskan terlebih dahulu Elution Buffer yang diperlukan dalam penangas air 70ºC untuk Elusi DNA.
Catatan Penting Sebelum Memulai Langkah Berikut.
10. (Langkah Opsional): Jika diperlukan DNA genom bebas RNA, tambahkan 5 ÿl 10 mg/ml RNase A ke dalam sampel dan Persiapan Sampel i. Panen
campur dengan cara divorteks. Kemudian diinkubasi selama 5 menit pada suhu kamar. sel jamur dalam jumlah yang sesuai (hingga 5×107 ) ke dalam tabung mikrosentrifugasi 1,5ml (tidak disediakan) dan
centrifuge pada 5.000 xg selama 10 menit. Buang supernatannya.
Pengikatan DNA ii. Tambahkan 600 ÿl buffer sorbitol (1,2 M sorbitol; 10 mM CaCl; 0,1 M Tris-HCl pH 7,5; 35 mM ß-mercaptoetanol) dan
11. Tambahkan 250 ÿl etanol (96~100%) ke sampel dan vorteks selama 10 detik. Pipet sampel agar tercampur rata jika ada endapan yang terbentuk. suspensikan kembali pelet tersebut.
aku aku aku. Tambahkan 200 U litikase atau zymolyase. Inkubasi selama 30 menit pada suhu
12. Tempatkan Kolom FABG ke Tabung Pengumpul. Pindahkan campuran sampel dengan hati-hati ke Kolom FABG. 30ºC. iv. Sentrifugasi campuran pada 2.000 xg selama 10 menit untuk memanen sferoplas, lalu buang supernatannya. v. Tambahkan 200 ÿl Buffer FATG
Centrifuge dengan kecepatan 14.000 rpm atau 18.000 xg selama 1 menit. Buang Tabung Pengumpul dan tempatkan Kolom FABG ke ke dalam tabung dan resuspensikan pelet sel dengan vorteks atau pemipetan. vi. Inkubasi pada suhu kamar selama 5 menit, lalu
Tabung Pengumpul baru. ikuti Protokol Sel Kultur mulai dari Langkah 1
13. Ikuti Protokol Umum mulai dari Langkah 13 (Pencucian Kolom). (Lisis Sel).

3 4