Structural and Functional Characterization of Polyphenols Isolated from Acerola

(Malpighia emarginata DC.) Fruit

Sianci, Aserola atau Ceri barbados adalah sejenis tumbuhan perdu tropis berbuah yang
tergabung dalam keluarga Malpighiaceae. Meski bernama ceri, tumbuhan ini tidak berkerabat
dengan tumbuhan ceri sejati yang tergabung dalam marga Prunus dan keluarga Rosaceae.

Sampel. Acerola (Malpighia emarginata DC.) dulunya disediakan oleh Nichirei do Brazil
Agricola (Recife, Brazil) dan segera dibekukan dan disimpan pada suhu 35 C sampai
digunakan. Isolasi AP. Buah acerola beku (5.000 g) adalah dicairkan diikuti dengan
pembuangan bijinya. Lalu porsi yang dapat dimakan (3,547 g) dihomogenisasi dengan meth
anol (7 liter) dan diekstraksi dengan pengadukan pada suhu kamar suhu selama 1 jam untuk
mendapatkan AP. Prosedur yang sama diulang dua kali. Ekstrak yang dihasilkan disaring,
dan filtratnya dipekatkan dan dikeringkan beku. Itu bubuk yang diperoleh (241,2 g)
dilarutkan dalam sulingan air, dan material tersuspensi dihilangkan penyaringan. Ekstrak
yang dihasilkan dikromatografi kolom kartrid C18 (Sep-Pak Vac; Nihon Waters, Tokyo,
Jepang). Ekstrak yang teradsorpsi dielusi berturut-turut dengan metanol 0%, 10%, 20%, 30%,
dan 100%. mengandung 0,2% asam trifluoroasetat (TFA), memperoleh 5 pecahan (total,
228,25 g; fr. 1, 221,6 g; fr. 2, 3,1 g; NS. 3, 2,4 gram; NS. 4, 0,67 gram; NS. 5, 0,48 gram).
Pdt. 3 dan fr. 4 mengandung AP dikumpulkan dengan konsentrasi sampai kering dan
menjalani dua langkah lebih lanjut dari tografi kroma kolom, seperti dijelaskan di bawah.
Fraksi yang terkumpul, dilarutkan dalam asetonitril 20%. mengandung 0,1% TFA, dilakukan
HPLC (Sistem CBM-10A; Shimadzu, Kyoto, Jepang) menggunakan a 10 kolom C30 250 mm
(Develosil RPAQUEOUS AR-5; Nomura Chemical, Aichi, Jepang). Kolom oven diatur pada
suhu 40 C. Sampel dielusi dengan asetonitril 20% yang mengandung TFA 0,1% pada laju
aliran 2,3 ml/menit dengan deteksi pada 280 nm. Hasilnya, tiga puncak utama diperoleh,
maka ketiga senyawa ini diisolasi. Akhirnya, tiga fraksi puncak yang diisolasi dilarutkan
secara terpisah dalam 43% metanol yang mengandung 0,1% TFA, dan masing-masing
dikenakan HPLC (sistem SCL-10Avp;Shimadzu, Kyoto, Jepang) dan dimurnikan lebih
lanjut. Kolom
(10 250 mm; fenomena LUNA 5 m C18 (2) kolom; Fenomena, Inc., Torrance, CA). Oven
disetel pada pukul 40 C. Sampel dielusi dengan metanol 43%. mengandung 0,1% TFA
dengan laju aliran 2,0 ml/menit dideteksi dengan detektor susunan fotodioda.

Structural identification. NMR spectra were obtained on a JEOL -500 or a JEOL GSX-270
spectrometer (JEOL, Tokyo, Japan). Compounds 1 and 2 were measured in CD3OD
containing 3% TFA-d1, 19) and compound 3 were in CD3OD. FAB-MS was recorded on a
JEOL DX-303HF spectrometer (JEOL, Tokyo, Japan).

Persiapan fraksi AP kasar untuk bioassay. Buah acerola beku (1.000 g) dicairkan dan benih
telah dibuang. Kemudian bagian yang bisa dimakan adalah dihomogenisasi dengan etanol (2
liter) dan diekstraksi dengan diaduk pada suhu kamar selama 1 jam untuk mendapatkan AP.
Ini prosedur diulang dua kali. Penangguhan yang dihasilkan disaring, dan filtratnya
dipekatkan dan dikeringkan beku di bawah tekanan rendah. Serbuk yang diperoleh adalah
dilarutkan dalam air suling lagi, dan suspensi dihilangkan dengan penyaringan. Ekstrak ini
menjadi sasaran ke kolom kartrid C18 (Sep-Pak Vac; Nihon Waters, Tokyo, Jepang), dielusi
dengan 100% mengandung etanol 10% asam asetat, lalu dikeringkan beku (451 mg). Itu
bubuk acerola kering beku disebut sebagai minyak mentah Fraksi AP. Itu mengandung 40%
polifenol sebagai dianalisis dengan metode Folin-Denis

Uji antioksidan. Aktivitas antioksidan dievaluasi oleh aktivitas pemulungan anion

superoksida
radikal (O2) dengan resonansi putaran elektron (ESR) spektrometer (JEOL JES-FR30; JEOL,
Tokyo, Jepang). Untuk analisis O2, reagen berikut ditambahkan dalam tabung reaksi dengan
urutan sebagai berikut: 65 ml DMPO 2,0 M, 50 ml sampel, 50 ml 2 mM HPX, dan 50 ml 0,4
unit/ml XOD. Semua reagen termasuk senyawa yang dimurnikan dilarutkan dalam 50 mM
natrium fosfat penyangga (pH 7,4). Solusinya dicampur dan ditempatkan di a sel ESR datar,
dan kemudian, tepat 45 detik setelah pencampuran, Hasil spin DMPO-O2 dianalisis dengan
trometri spek ESR. Pengaturan ESR adalah sebagai berikut: microwavedaya 4 mW, frekuensi
modulasi 100 kHz, lebar modulasi 0,1 mT, waktu pemindaian 2 menit, respons 0,1 detik,
intensitas medan magnet 335 : 5 mT, dan amplitudo 100. Aktivitas pemulungan O2
dievaluasi dengan menghitung persentase intensitas sinyal DMPO-O2 dengan dan tanpa
pemulung radikal

Aktivitas antioksidan
Aktivitas pengambilan oksigen reaktif ketiganya polifenol yang dimurnikan serta fraksi AP
mentah dinilai pada konsentrasi 0,125-0,5 mg/ml dengan ESR (Gbr. 3). Semua sampel
menghambat generasi DMPO-O2 spin adduct, dan khususnya, C3R dan quercitrin
menunjukkan penghambatan yang kuat pada generasi. Dengan mengubah konsentrasi DMPO
(dari 2,0 M hingga 0,2 M) untuk memvariasikan laju penangkapan putaran O2 radikal,
adanya reaksi kompetitif antar minyak mentah Fraksi AP dan O2 radikal dipelajari (Gbr.
4).3) Oleh mengencerkan konsentrasi DMPO, kurva penghambatannya adalah bergeser ke
kiri, terutama pada konsentrasi rendah kisaran fraksi AP kasar, menunjukkan penghambatan
itu
fraksi AP kasar pada DMPO-O2 generasi adalah terutama disebabkan oleh pemulungan O2
radikal, bukan untuk mengarahkan penghambatan xantin oksidase. Ketiga polifenol hasil
isolasi juga menunjukkan hasil yang sama (data tidak ditampilkan).

ktivitas antioksidan dievaluasi dengan aktivitas pembersihan radikal anion superoksida (O2) dengan
spektrometer resonansi spin elektron (ESR) (JEOL JES-FR30; JEOL, Tokyo, Jepang). Untuk analisis O2,
reagen berikut ini ditambahkan ke dalam tabung reaksi dengan urutan sebagai berikut: 65 ml 2,0 M
DMPO, 50 ml sampel, 50 ml 2 mM HPX, dan 50 ml 0,4 unit/ml XOD. Semua reagen termasuk senyawa
yang dimurnikan dilarutkan dalam 50 mM buffer natrium fosfat (pH 7,4). Larutan dicampur dan
ditempatkan dalam sel ESR datar, dan kemudian, tepat 45 detik setelah pencampuran, spin adduct
DMPO-O2 dianalisis dengan spektrometri ESR. Pengaturan ESR adalah sebagai berikut: daya
gelombang mikro 4 mW, frekuensi modulasi 100 kHz, lebar modulasi 0,1 mT, waktu pemindaian 2
menit, respons 0,1 detik, intensitas medan magnet 335:9 5 mT, dan amplitudo 100. Aktivitas
pemulungan O2 dievaluasi dengan menghitung persentase intensitas sinyal DMPO-O2 dengan dan
tanpa pemulung radikal

aktivitas antioksidan diukur dengan melakukan pembersihan radikal anion superoksida (O 2)

menggunakan Spektrometer Resonansi Spin Electron (ESR) (JEOL JES-FR30; JEOL, Tokyo, Jepang)

65 ml 2,0 M DMPO + 50 ml
sampel + 50 ml 2 mM HPX, dan
50 ml 0,4 unit/ml XOD
- Dimasukkan ke tabung reaksi
- Ditambahkan 50 mM buffer Natrium
Fosfat pH 7,4
- Campuran ditempatkan pada sel datar
- Setelah 45 detik, dianalisis dengan
ESR
Hasil