KATALIS

ENZIM
Oleh : Rizqya Lailatul R (22071535001)
 KATALIS ENZIM
Enzim adalah protein globular yang berkisar dari 62
(monomer 4-oxalocrotonate tautomerase) hingga
lebih dari 2.500 residu asam amino (sintase asam
lemak hewani), tetapi hanya sebagian kecil (~ 3-4
asam amino terlibat langsung dalam katalisis).
 KATALIS ENZIM
Kelebihan Katalis Enzim
 Beroperasi pada suhu rendah

 Dapat digunakan kembali tanpa proses pemisahan

(Ranganathan dkk., 2008),

Kekurangan Katalis Enzim

 Sangat mahal

 Volume reaksi yang sangat besar

 Mudah terdenaturasi pada suhu tinggi

(Royon dkk., 2007)

 Kinetika Reaksi Katalis enzim:
Reaksi enzimatik (berkatalis enzim) fase cair:
.... (*)
yang berlangsung dalam reaktor batch isotermal bervolume
tetap.
 Mekanisme reaksi yang diperkirakan terjadi untuk reaksi

ini:
dengan:
A=reaktan (substrat),
P =produk reaksi,
E =enzim,
AE=zat antara (intermediet) yang merupakan
molekul enzim yang terikat pada reaktan
Berdasarkan persamaan (*): r = -rA= rP .... (**)
Berdasarkan mekanisme reaksi, tahap (ii) lambat, sehingga
tahap (ii) menjadi tahap penentu

kecepatan reaksi: r = r tahap (ii) = rP .... (***)

Kecepatan reaksi tahap (ii): r = k2[AE] .... (1)
Pendekatan kesetimbangan untuk reaksi tahap (i):
.... (2)
Neraca massa katalis: [E0] = [E] + [AE]atau: [E] = [E0] – [AE] ....
(3)

dengan:
[E0] =konsentrasi enzim mula-mula
[AE]=konsentrasi enzim yang berikatan dengan reaktan A pada saat t
[E] =konsentrasi
Substitusikan enzim
persamaan bebas
(3) ke persamaan (2):

.... (4)

Substitusikan persamaan (4) ke persamaan (1):

Epoksidasi Chemoenzymatic dari
sitronelol dikatalisasi oleh lipase
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk melumpuhkan lima lipase mikroba
persiapan dari beberapa sumber seperti dua persiapan enzimatik dari
Thermomyces lanuginosus tersedia secara komersial sebagai Lipolase®
(TLL1) dan Lipex® 100L (TLL2), P. antarctica tipe B (CALB, juga dikenal
sebagai lipase B dari Candida antartika), Geobacillus thermocatenulatus
(Bernama BTL 2) dan Pseudomonas fluorescens (PFL) oleh adsorpsi fisik
pada manik-manik PHB kecil atau besar untuk mengkatalisis
transesterifikasi minyak babassu dengan etanol dalam pelarut bebas
medium.
 PENDAHULUAN
Sitronelol, juga dikenal sebagai dihydrogeraniol, adalah asiklik alami
monoterpenoid. Ini merupakan konstituen dari minyak esensial dari
tanaman, seperti (+) sitronelol hadir dalam minyak sereh dan (-) sitronelol
di mawar dan geranium (Pelargonium sp.) Minyak Monoterpenes dapat
diklasifikasikan menjadi dua kelompok utama: monoterpene hidrokarbon
dan monoterpen teroksigenasi. Itu Kelompok terakhir termasuk alkohol,
aldehida, keton, eter dan karboksilat asam.
Oksidasi terpen memiliki aplikasi industri penting karena epoksida
mereka digunakan sebagai bahan awal untuk sintesis dari komersial
wewangian dan bahan penyedap penting. Epoksida dapat mengalami
berbagai reaksi kimia dengan varietas dari nukleofil dan mudah diubah
menjadi diol, amino-alkohol dan eter. Sebuah aplikasi baru yang penting
adalah penggunaan kiral epoksida sebagai perantara untuk produksi obat-
obatan kiral.
Penggunaan hidrogen peroksida di kompleks
dengan urea, diistilahkan urea hidrogen peroksida
(UHP), telah menghasilkan hasil yang baik. UHP
adalah bentuk kering hidrogen peroksida, yang
memiliki potensi untuk melepaskan hidrogen
peroksida secara terkendali; ini menghindari
keberadaan air dalam reaksi meminimalkan yang
tidak diinginkan. Reaksi dari produk teroksidasi.
 LIPASE
Lipase digunakan untuk mengkatalisasi pembentukan asam oktanoat
peroksi asam karboksilat dan hidrogen peroksida dalam toluena. Peroksi
asam karboksilat yang terbentuk digunakan untuk oksidasi α-pinene yang
sesuai epoksida. Selama proses tersebut, jumlah bervariasi hidrogen
peroksida diuji lebih dari lima siklus reaksi. kegiatan ini lipase menurun 60-
90% setelah lima siklus, tergantung pada jumlah hidrogen peroksida yang
digunakan. Lipase ini juga digunakan untuk epoksidasi chemoenzymatic
dari metil ester dari minyak bunga matahari dalam sistem biphasic dari
CH2Cl2 / H2O dengan 30% (v/v) berair hidrogen peroksida. Dalam beberapa
kasus, hasil epoksida lebih tinggi dari 99%.
Dalam tulisan ini, epoksidasi chemoenzymatic
dari sitronelol di bawah kondisi yang berbeda
dilaporkan. Beberapa percobaan parameter
dievaluasi dalam penelitian ini untuk
mengoptimalkan proses, termasuk penggunaan
lipase dari sumber yang berbeda, reaksi waktu,
oksidator, pelarut organik yang berbeda, rantai
asil donor panjang dan suhu (Skema 1).
Prosedur untuk epoksidasi
chemoenzymatic dari
sitronelol
 0,36 mL (2 mmol) ditambahkan
shaker berputar
sitronelol, 0,24 mL (2 ke 10 mL
(Certomat MO,
mmol) asam oktanoat, 470 asetonitril
150 rpm) pada
mg (5 mmol) urea-hidrogen dalam labu
250C selama 24
peroksida (UHP) dan 200 U Erlenmeyer
jam.
lipase 125 mL.

Asetonitril terkonsentrasi
pada evaporator rotary lipase dan UHP
biokatalis disaring. UHP
pengurangan tekanan (2
Torr) pada 500C untuk (Lipase) dicuci dipisahkan dari
mendapatkan produk reaksi lima kali dengan lipase dengan
mentah dalam bentuk pelarut organik mencuci berturut-
minyak berwarna
turut dengan air

Reaksi dilakukan
dalam rangkap tiga
Pembentukan produk dipantau oleh 1H resonansi magnetik nuklir pada Varian
EM360L spektrometer (400 MHz) menggunakan CDCl3 sebagai pelarut. Konversi
ke sitronelol oksida 2 ditentukan melalui perbandingan daerah relatif dari triplet
berpusat di 2.70 ppm, yang terkait dengan hidrogen dari oxirane yang cincin,
dengan itu dari triplet di 5.06 ppm, yang merupakan karakteristik dari hidrogen
ikatan ganda sitronelol. Dalam kebanyakan studi, spektrum 1H NMR juga
disajikan triplet berpusat di 4,13 ppm ; puncak ini ditugaskan untuk hidrogen
metilen ester sitronelol oksida 3. Campuran reaksi yang diperoleh dimurnikan
menggunakan kolom kecil silika dan dielusi dengan campuran heksana:etilasetat
(90:10, v/v). Produk 2 isolat ditandai dengan 1H NMR pada hasil 85%. nilai-nilai
ini yang dibandingkan dengan yang dilaporkan dalam literatur.
Sitronelol oksida 2. 1H NMR (CDCl3): δ 3,70 (m, 2H), 2,70 (t, 1H), 2.02 (s, 1H),
1,60 (m, 2H), 1,50 (m, 2H) 1,40 (m, 3H), 1,30 (s, 3H) 1,27 (s, 3H), 0,98 (d, 3H).
Sampel Reaksi juga dianalisis dengan kromatografi gas (Agilent Teknologi 7820
A) menggunakan detektor ionisasi nyala. Pemisahan itu dilakukan pada kolom
polaritas (Shimadzu CBP-5-M25, 25 m) dengan program temperatur kolom 80-
2500C (100C/min). Injektor dan detektor ditetapkan pada 280 0C dan 2900C,
masing-masing. Laju aliran gas pembawa hidrogen adalah 7 mL/menit, sehingga
dalam waktu analisis 15 menit. Waktu retensi adalah 5.14 menit dan 13,95 menit
untuk epoxy 2 dan ester sitronelol oksida 3, masing-masing. Hasil dihitung dengan
menggunakan daerah puncak.
 Dalam studi yang berkaitan dengan
penggunaan lipase yang berbeda, kondisi waktu
reaksi, agen oksidan, asil donor, suhu dan pelarut
efek yang ditentukan untuk masing-masing
percobaan. percobaan kontrol juga dilakukan
tanpa lipase atau UHP bawah kondisi reaksi yang
sama, tidak ada produk diperoleh.
Karakterisasi & Hasil
 Sebagai tujuan laporan ini adalah
persiapan hasil yang tinggi dari sitronelol
oksida 2 atau ester, sitronelol oksida 3,
oleh chemoenzymatic epoksidasi
sitronelol, beberapa parameter
eksperimental dievaluasi.
 Skrining enzim

Dalam pendekatan pertama, 12 jenis yang berbeda tersedia enzim disaring untuk
efisiensi mereka dalam chemoenzymatic yang epoksidasi sitronelol, menggunakan
kondisi reaksi dijelaskan dalam penelitian ini. Asam oktanoat terpilih sebagai asil yang
donor dan asetonitril sebagai pelarut organik karena yang ini berhasil digunakan dalam
epoksidasi chemoenzymatic dari (+) -3-Carene. Sitronelol oksida 2 atau 3 tidak
terdeteksi ketika lipase M Amano 10, PS Amano IM, Lipozyme IM dan Amano 12
digunakan. Dengan lipase PS-C Amano I, F-AP15 dan AY Amano 30, hanya produk 3
terdeteksi dengan hasil yang rendah kurang dari 5%. menggunakan lipase PS Amano
SD, PS Amano, AK, PS-C Amano II dan Lipozyme RM IM, produk 2 dan 3 keduanya
terbentuk, namun hasil yang <10%. Tertinggi konversi ke 2 dan 3 dicapai dalam reaksi
dikatalisis oleh CAL-B dan Amano saya, yang memberikan 70% dari produk 2 dan 30%
dari produk 3 dan 26% dari produk 2 dan 3% dari produk 3, masing-masing, setelah 24
jam reaksi. Mengingat hasil di atas, CAL-B terpilih untuk studi berikut.
Gambar 1. Pengaruh waktu pada epoksidasi chemoenzymatic dari sitronelol.
Reaksi kondisi: sitronelol (2 mmol), asam oktanoat (2 mmol), UHP (5 mmol),
CAL-B (200 U), asetonitril (10 ml), suhu kamar, 150 rpm.
 Pengaruh waktu reaksi

Tingkat pembentukan produk 2 dan 3 kemudian dievaluasi. Gambar 1). menunjukkan

spektrum 1H NMR, di wilayah 2,4-5,3 ppm, untuk sitronelol sampel ditarik dan
dianalisis setelah 2, 4, 6, 8 dan 10 h reaksi. Setelah 2 jam reaksi, konversi 21% dari
epoksida 2 adalah diperoleh. Setelah 10 jam reaksi, puncak pada 5,5 ppm, yang sesuai
pada ikatan rangkap dari alkohol, tidak lagi diamati. Sebaliknya, triplet berpusat di 4.13
ppm terdeteksi dan dikaitkan untuk hidrogen metilen sesuai dengan ester oktil dari
sitronelol oksida 3. Senyawa ini dapat menjadi oleh-produk dari reaksi dari sitronelol
oksida 2 dan asam oktanoat, yang diregenerasi dari asam oktanoat peroksi di hadapan
lipase (Skema 1). Sebagai disebutkan sebelumnya, produk 2 dan 3 diperoleh pada 70
dan 30% hasil, masing-masing, setelah 24 jam reaksi (hasil tidak ditampilkan dalam
Gambar 1). Data ini menunjukkan bahwa tergantung pada waktu reaksi, baik produk
dapat diperoleh. Karena fokus utama adalah untuk mendapatkan hasil tertinggi dari
produk 2 atau 3, waktu reaksi 24 jam adalah dipilih untuk percobaan berikutnya.
Gambar 2. Pengaruh UHP pada epoksidasi chemoenzymatic dari sitronelol untuk
pembentukan epoksida ( ) dan epoksida-ester ( ). kondisi reaksi seperti pada Gambar.
1 kecuali untuk UHP (0,1-10 mmol), 24 jam reaksi.
 Efek dari jenis dan jumlah agen
pengoksidasi

Jenis dan jumlah zat pengoksidasi telah dilaporkan mempengaruhi pembentukan asam
peroksi pada langkah pertama dari reaksi [9,15-17]. Untuk lebih memahami pengaruh
agen sehubungan dengan urea-hidrogen peroksida (UHP), jumlah yang berbeda
(0-10 mmol) dari UHP digunakan dalam epoksidasi chemoenzymatic dari sitronelol dan
dievaluasi setelah 24 jam reaksi. Gambar 2). menunjukkan bahwa peningkatan jumlah
UHP 0,5 sampai 5 mmol mengakibatkan peningkatan konversi ke produk 2 (10-76%)
dan 3 (14-33%) Menariknya, ketika 0,5 mmol UHP digunakan, oktil citronellate
juga diperoleh di samping produk 2 dan 3. Hasil ini tidak mengejutkan karena UHP
diperlukan untuk pembentukan asam peroksi, yang digunakan dalam reaksi epoksidasi.
Dalam tidak adanya UHP, citronellate oktil diperoleh sebagai produk tunggal reaksi.
Pada konsentrasi UHP lebih dari 5 mmol, tidak signifikan perubahan dalam
hasil yang diamati baik untuk produk. Serupa percobaan menggunakan 30%
H2O2 (v/v) sebagai agen pengoksidasi dilakukan di bawah kondisi reaksi yang
sama. Hasilnya sama dengan yang diperoleh dengan UHP; setelah 24 jam, baik
produk 2 dan 3 diperoleh hasil panen dari 69% dan 30%, masing-masing. Di
bawah kondisi percobaan yang sama, produk 2 atau 3 tidak terdeteksi dengan
tidak adanya UHP atau 30% H2O2. Studi menunjukkan bahwa penggunaan
UHP menyajikan beberapa keunggulan dibandingkan H2O2 berair; karena itu,
5 mmol dari UHP dipilih untuk digunakan dalam percobaan berikutnya.
 Pengaruh jumlah dan jenis
asil donor

Pengaruh asil panjang rantai donor (C6-C16) pada epoksidasi yang dari sitronelol
dengan UHP kemudian diselidiki. Pada langkah pertama reaksi dikatalisis oleh lipase,
sebuah acylenzyme menengah tetrahedral dibentuk. Dengan demikian, faktor utama
yang mempengaruhi afinitas antara asam dan enzim adalah panjang rantai asam lemak.
Menggunakan induksi-fit model untuk tindakan enzim, Faber menjelaskan ini dalam hal
energi ikat, yang dilepaskan ketika substrat mengikat ke situs aktif. Bentuk dan fisika-
kimia sifat asam lemak scissile situs mengikat juga penting dalam memahami dasar
molekul substrat spesifisitas.
 Gambar. 3. Pengaruh asil donor rantai alkil pada epoksidasi chemoenzymatic dari sitronelol untuk pembentukan
2 (Hitam) dan 3 (Garis2). kondisi reaksi seperti yang dijelaskan dalam Gambar 1, tapi memvariasikan asil donor
(menggunakan 0,2 mmol masing-masing).

Gambar 3. Menunjukkan bahwa dengan menggunakan alkil linier karboksilat asam, yang epoksida 2
hasil meningkat 41-71% sebagai panjang rantai alkil dari asam karboksilat meningkat. Hasil tertinggi
(71%) dicapai ketika asam oktanoat adalah asil donor. Serupa Hasil telah dilaporkan untuk epoksidasi
chemoenzymatic dari 3-Carene dan -pinene dan sintesis N-alkyloxyaziridines dimediasi oleh CAL-B
[10,18,24]. Akibatnya, efek yang berbeda jumlah asam oktanoat (di mmol) dievaluasi.
Gambar 4. Pengaruh jumlah asam oktanoat pada epoksidasi chemoenzymatic dari
sitronelol. Epoksida (Petak) Dan ester-epoksida (Bulat). kondisi reaksi seperti yang
dijelaskan pada Gambar. 1 tapi memvariasikan jumlah asam oktanoat (0,1-2 mmol), 24
jam reaksi.
 Gambar. 4 menunjukkan bahwa hasil produk 2 dan 3 tergantung pada jumlah asam oktanoat
digunakan; produk 2 menghasilkan peningkatan dengan peningkatan jumlah asam oktanoat (hingga
0,5 mmol) dan kemudian tetap hampir konstan di kisaran 70-74%. Menggunakan 0.10 atau 0,25
mmol asam oktanoat, imbal hasil dari produk 2 dan 3 yang 8 atau 0% dan 8 atau 17%, masing-
masing. Hasil ini menyoroti pentingnya menggunakan jumlah tertentu dari donor asil untuk
menghasilkan sesuai peroksi asam untuk digunakan dalam epoksidasi chemoenzymatic. Data ini
juga konsisten dengan laporan sebelumnya pada sintesis -pinene oksida.
Selanjutnya, asam 2-bromoalkyl dan asam 2-etilheksanoat dievaluasi sehubungan dengan
kemampuan mereka untuk menghasilkan yang sesuai asam peroksi. Ketika 2-bromopentanoic
asam, asam 2-bromohexanoic dan asam 2-bromohexadecanoic digunakan, hanya konversi
sederhana (20-34%) ke citronellyl ester diamati, terlepas dari panjang rantai alkil. Produk 2 dan /
atau 3 tidak terdeteksi, dengan demikian menunjukkan tidak ada pembentukan asam peroksi di
hadapan asam ini. Reaksi dengan asam 2-etilheksanoat tidak menghasilkan produk terdeteksi.
Gambar 5. Pengaruh suhu terhadap pembentukan produk 2 (Hitam) Dan 3
(Garis2). kondisi reaksi seperti pada Gambar. 1 tapi memvariasikan
temperatur, reaksi 24jam .
 Pengaruh Suhu

Faktor kunci yang mempengaruhi laju reaksi dikatalisis oleh enzim adalah suhu.
Suhu dapat mempengaruhi aktivitas, selektivitas dan stabilitas biokatalis yang
serta kesetimbangan reaksi. Dalam rangka untuk mengevaluasi efek ini, pengaruh
suhu pada epoksidasi chemoenzymatic dari sitronelol dipelajari di kisaran 15-40◦C
(Gbr. 5). Didalam Kisaran suhu, baik produk 2 dan 3 yang terdeteksi. Itu hasil
tertinggi dari 80% dan 77% untuk epoksida 2 diperoleh pada 20◦C dan 25◦C,
masing-masing. Dalam 30-40 kisaran ◦C, hasil dari produk 2 menurun (71-63%),
dan hasil dari produk 3 meningkat (23-37%). Kemungkinan bahwa pada suhu
yang lebih tinggi, beberapa dekomposisi UHP terjadi dan, dengan demikian,
pembentukan asam peroksi yang sesuai juga menurun.
HASIL Pengaruh Media Organik
 Pengaruh Media Organik

(Tabel 1). Menggunakan n-heksana atau kloroform, produk 2 dan 3 yang diperoleh pada hasil dari 19
atau 38% dan 45 atau 19%, masing-masing, setelah 8 jam waktu reaksi (Tabel 1, entri 1 dan 2).
Menggunakan t-butanol, MTBE, etil eter atau metanol tidak menghasilkan produk akhir terdeteksi di
bawah kondisi reaksi ini, terlepas dari waktu reaksi (Tabel 1, entri 3, 4, 8 dan 11). Menggunakan etil
asetat, dengan atau tanpa donor asil, dan etanol mengakibatkan pembentukan hanya epoksida 2 di hasil
dari 23, 19, dan 4%, masing-masing (Tabel 1, entri 6, 7 dan 9). Diklorometana atau asetonitril juga
menghasilkan single produk, epoksida 2, dalam hasil dari 68 dan 85%, masing-masing, setelah 8 jam
waktu reaksi. Namun, dengan menggunakan asetonitril selama 24 jam reaksi waktu mengakibatkan
pembentukan kedua produk 2 dan 3, dengan 75 dan 25% derajat konversi, masing-masing (Tabel 1,
entri 5 dan 10). Menariknya, ketika diklorometana atau kloroform adalah digunakan selama 24 jam dari
waktu reaksi, hampir kuantitatif (> 99%) jumlah dari epoksida 2 diperoleh, menunjukkan selektivitas
yang tinggi dari proses.
APLIKASINYA
Penggunaan enzim dalam epoksidasi chemoenzymatic ganda obligasi telah
banyak digunakan. Kesederhanaan proses, efisiensi pada suhu normal dan
tekanan serta usabilitas dari enzim telah terbukti menjadi keuntungan yang
signifikan. Penggunaan enzim amobil, misalnya, lipase dari Candida antarctica
B bergerak pada support berpori (CALB atau Novozyme 435), dalam
epoksidasi chemoenzymatic olefin baru-baru ini dilaporkan. Lipase ini telah
disorot karena efisiensi yang luar biasa dalam katalisis dari perhydrolysis asam
oktanoat, menampilkan stabilitas yang baik dan kemungkinan penggunaan
kembali. Warwel dan Klass telah berhasil menggunakan kembali CAL-B 15
hingga berkali tanpa kehilangan aktivitas dalam diri epoksidasi asam oleat
dengan perlahan-lahan menambahkan 60% hidrogen peroksida untuk sistem
reaksi. Selanjutnya, penggunaan pertama CAL-B untuk diri epoksidasi asam
oleat dengan 30% hidrogen peroksida dilaporkan; enzim segar ditampilkan
dengan kehilangan sekitar 50 % dalam kegiatan.
Lipase ini digunakan untuk mengkatalisasi pembentukan
asam oktanoat peroksi dari yang sesuai asam karboksilat
dan hidrogen peroksida dalam toluena . The peroksi
karboksilat asam yang terbentuk digunakan in situ untuk
oksidasi -pinene untuk yang sesuai epoksida . Selama
proses tersebut , jumlah bervariasi hidrogen peroksida
diuji lebih dari lima siklus reaksi . kegiatan ini lipase
menurun 60-90 % setelah lima siklus , tergantung pada
jumlah hidrogen peroksida yang digunakan
 KESIMPULAN

Epoksidasi chemoenzymatic dari sitronelol dilakukan dalam kondisi ringan.

CAL-B adalah katalis yang paling efektif, dan reaksi itu tergantung pada waktu
reaksi, agen oksidan, suhu dan asil donor; produk 2 dan / atau 3 yang diproduksi
di sedang sampai jumlah yang baik. Efek elektronik dan sterik dari donor asil
yang berbeda juga dievaluasi. Medium organik memiliki pengaruh terbesar pada
reaksi. Menggunakan kloroform atau diklorometana,> 99% dari produk 2
diperoleh setelah 24 jam. Dengan penggunaan campuran pelarut organik dan
imidazoliumbased cairan ionik, hasilnya tergantung pada kedua pelarut dan
kontra ion IL digunakan. Menggunakan [BMIm] [PF6] dalam campuran dengan
nhexane atau MTBE menunjukkan hasil yang lebih baik dari yang diperoleh
dalam pelarut organik murni. Singkatnya, data yang dilaporkan menunjukkan
bahwa media organik adalah salah satu yang paling penting parameter
eksperimental di epoksidasi chemoenzymatic dari sitronelol. Bio-katalis dalam
cairan ionik adalah menarik, berkembang bidang penelitian, dan karena itu,
penyelidikan masa depan harus dilakukan pada reaksi epoksidasi yang berbeda.
Lipase (triasilgliserol hidrolase ester, EC 3.1.1.3) adalah enzim-
enzim di alam mengkatalisis pembelahan obligasi ester di tri-, di-,
dan monoacylglycerols menjadi gliserol dan asam lemak bebas. Di
media organik, lipase juga mengkatalisis esterifications,
transesterifications dan interesterifications. Enzim ini digunakan
dalam beberapa proses industri termasuk sintesis biopolimer,
produksi obat-obatan, bahan kimia pertanian, kosmetik, rasa,
pengolahan limbah kaya lipid dan biodiesel sintesis oleh
transesterifikasi trigliserida dengan rantai pendek alkohol.