UJI AKTIVITAS INHIBISI TERHADAP

ENZIM TIROSINASE DARI EKSTRAK

ETANOL DAUN PEPAYA (Carica papaya
L.) SECARA IN VITRO

Kelompok 4 :
Bella Olivia Irwan 1754051005
M Ibnu Sinaga 1714051025
Puput Lestari 1714051005
Vera Oktaviana Wijayanti 1714051018
Vico Regian Havip 1654051016
Yossy Safitri 1654051027
 Tujuan penelitian

untuk mengetahui ada

tidaknya efek daya inhibisi
ekstrak etanol daun pepaya
terhadap enzim tirosinase
melalui uji in vitro
 Pentingnya Tujuan Penelitian

 daun pepaya, memiliki tingkat keamanan yang lebih aman dari pada sintesis. Ekstrak
etanol daun pepaya diperkirakan memiliki aktivitas inhibitor tirosinase karena
mengandung senyawa flavonoid. Inhibitor tirosinase digunakan dalam kosmetik
sebagai pencegah terjadinya hiperpigmentasi.
 ada 2 reaksi yaitu proses hidroksilasi tirosin menjadi dihidroksi-fenilalanin ( L-
DOPA ) dan oksidasi L-DOPA menjadi DOPA kuinon. Tirosinase pada jaringan kulit
diaktifasi oleh radiasi sinar UV matahari sehingga mempercepat proses produksi
melanin . dapat diinhibisi (dihambat) oleh suatu penghambatan reaksi enzimatis
berupa ion atau molekul yang disebut inhibitor tirosinase. Beberapa inhibitor
tirosinase, diantaranya adalah arbutin, asam kojat , merkuri, dan hidroquinon. Salah
satu tanaman yang telah dilakukan uji aktivitas inhibitor tirosinase adalah daun
pepaya yang mengandung vitamin C dan flafonoid.
 PROSEDUR PENELITIAN
PEMBUATAN EKSTRAK PEMBUATAN LARUTAN
DAUN PEPAYA ASAM KOJAT

UJI KUALITAS
EKSTRAK EKSTRAK DAUN
UJI KUALITAS LARUTAN ASAM
EKSTRAK PEPAYA KOJAT
SUSUT
PENGERINGAN
6 KONSENTRASI 5 KONSENTRASI
EKSTRAK DAUN LARUTAN ASAM
PEPAYA KOJAT

UJI AKTIVITAS UJI AKTIVITAS TANPA INHIBITOR

INHIBITOR TIROKINASE
TIROKINASE (ASAM KOJAT)

% INHIBISI % INHIBISI
 PROSEDUR
PERSIAPAN
PEMBUATAN LARUTAN
PEMBUATAN EKSTRAK SAMPEL UJI ASAM KOJAT
DAUN PEPAYA
Maserasi etanol 70%, saring, penguapan 5 mg asam kojat + dapar
I (48C), penguapan II (50C) fosfat 0,05 M pH 6,5
SUSUT
PENGERINGAN
UJI
5 mg ekstrak
KUALITAS 10 mL larutan asam kojat
EKSTRAK (500 µg/mL)
+ 1 mL DMSO, + dapar pospat 0,05 pH UJI KUALITAS
6,5 EKSTRAK
+diambil 5 mL + dapar
pospat 0,05 pH 6,5
10 mL larutan ekstrak
etanol daun pepaya

10 mL larutan asam kojat

(250 µg/mL)
Pengenceran

konsentrasi asam kojat konsentrasi asam kojat

10000 ; 5000 ; 2500 ; 125 ; 62,5 ; 31,25 ; 15,625 ;
1250 ; 625 ; 312,5 µg/mL 7,8125 µg/mL
UJI AKTIVITAS INHIBITOR UJI AKTIVITAS TANPA INHIBITOR
TIROKINASE TIROKINASE (ASAM KOJAT)
Dimasukkan ke dlm 96 Dimasukkan ke dlm 96
well-microtiter plate well-microtiter plate

+ 30 µl larutan enzim 70 µl 70 µl + 30 µl larutan enzim

tirosinase 333 unit/mL larutan larutan tirosinase 333 unit/mL
sampel Asam
kojat
+ 110 µl larutan substrat L- + 110 µl larutan substrat L-
DOPA 0,002 M DOPA 0,002 M

Dihomogenkan PROSEDUR UJI Dihomogenkan

Inkubasi suhu 37°C,

selama 30 menit
IN VITRO Inkubasi suhu 37°C,
selama 30 menit

Diukur absorbansi dengan Diukur absorbansi dengan

microplate rader, α = 490 nm microplate rader, α = 490 nm

  Perhitungan % inhibisi

% inhibisi
SIMPLIKASI Tirosin Enzim Tirosinase Sinar UV

UJI IN VITRO oksidase

Inhibitor L-DOPA L-DOPA

Enzim Enzim
Ekstrak daun pepaya Atau Atau
Tirosinase Tirosinase
(vitamin C dan alkaloid) Dihidroksi- fenilalanin Dihidroksi- fenilalanin

DAERAH
oksidase
Inhibitor akan berkompetisi dengan enzim tirosinase
untuk berikatan dengan L_DOPA
SIMPLIKASI
DOPA kuinon
Bereaksi spontan
L_DOPA sisa / yang tidak berikatan dengan inhibitor
akan berikatan dengan tirosinase teroksidasi autooksidasi
menghasilkan produk dopakrom warna jingga tua
hingga merah Produk Dopakrom

Diukur absorbansi dengan DAERAH

microplate rader, α = 490 nm DHI atau DHICA
UJI IN VITRO
DAERAH
Perhitungan % inhibisi PERISTIWA eumelanin
 
DI KULIT
% inhibisi Kulit menjadi coklat atau
hyperpigment
Kelebi
han
• Mudah dilakukan
• Waktu yang digunakan relatif singkat
• Memberikan kebebasan pada peneliti untuk mengakses organisme
hidup
• Dapat dilakukan kontrol, dalam jurnal digunakan kontrol asam kojat
Kekuran
gan
• Kegagalan dalam meniru kondisi selular secara tepat terutama pada
mikroba
• Dapat menghasilkan ketidaksesuaian antara kesimpulan dengan
keadaan organisme hidup
• Tidak diketahuinya biokompatibilitas dari ekstrak etanol daun pepaya
Tabel 1. Persentase Penghambatan
Aktivitas
Tirosinase oleh Asam Kojat
Gambar 1. Kurva Penghambatan Aktivitas
Tirosinase oleh Asam Kojat
Tabel 2. Persentase Penghambatan
Aktivitas
Tirosinase Ekstrak Etanol Daun Pepaya
Gambar 2. Kurva
Penghambatan
KESIMPULA
N

• Berdasarkan penelitian yang dilakukan, maka dapat disimpulkan

bahwa ekstrak etanol daun pepaya (Carica papaya L.) mempunyai
aktivitas inhibitor tirosinase dengan nilai IC50 sebesar 12.158,87
μg/ml. Kemampuan aktivitas daun papaya untuk menginhibisi enzim
tirosinase memiliki potensi yang sangat lemah yaitu dengan nilai
potensi relatif sebesar 6,879x10 -3 kali asam kojat.
Terima Kasih
 LAMPIRAN
(screenshoot diskusi kelompok oleh Vera Oktaviana
W)