Aktivitas xanthine oksidase Inhibitor

dari Ekstrak Etanol dan Fraksi Roselle

Calyx ( Hibiscus sabdariffa L.) secara
In Vitro.
Melinda / 1613015114
NurIslamy Indah / 161305144
 PENDAHULUAN

Pasien menderita gout atau hyperuricemia di Indonesia adalah sekitar 6-7%, dan akan meningkat
setiap 1-3 tahun. Hiperurisemia adalah keadaan kadar asam urat tinggi, yang mencapai tingkat kadar
asam urat pada darah untuk ≥7 mg / dl pada pria dan ≥6 mg / dl pada wanita. Tingginya kadar asam urat
dalam darah pengakibatkan pengendapan asam urat dalam sendi dan menyebabkan spam dan beberapa
kondisi patologis yaitu gout.

Menurunkan tingkat asam urat tinggi dalam darah dapat dicapai dengan xanthin inhibitor oksidase dan
inhibitor dari reabsorpsi urat ginjal. Asam urat adalah produk akhir dari purin katabolisme dalam tubuh
akan dibuang melalui ginjal. Dalam metabolisme purin, xanthine dan hipoksantin dioxidase akan diubah
menjadi asam urat oleh enzim xantin oksidase. Produksi berlebihan asam urat dalam tubuh bisa
mempengaruhi ekskresi asam urat oleh ginjal; dapat menurunkan ekskresi asam urat dan menyebabkan
hyperuricemia
Gout akan menyebabkan penyakit gangguan ginjal, hipertensi, diabetes, kanker.
hiperurisemia kronis dapat merangsang sistem rennin-angiotensin dan menghambat
pelepasan endotel nitrat oksidase, menyebabkan vasokonstriksi ginjal dan
meningkatkan tekanan darah. Hyperuricemia juga dapat menyebabkan sindrom
metabolik melalui disfungsi endotel, peradangan, serta penyakit ginjal, dan penyakit
ginjal prognosis yang ada
HIBISCUS SABDARIFFA L
Bahan tanaman yang dapat digunakan untuk menurunkan
kadar asam urat. Salah satu tanaman yang dapat
digunakan untuk menurunkan asam urat adalah kelopak
bunga rosela yang secara tradisional telah digunakan
untuk mengobati hipertensi, diabetes, menurunkan
kolesterol, sebagai diuretik, melindungi infeksi, sirkulasi
darah, mencegah penyakit jantung dan dapat menurunkan
kadar asam urat 7,8. Karena potensi kelopak bunga
rosela, perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk
mengembangkan ekstrak etanol kelopak bunga rosela
sebagai antihyperuricemia
 TUJUAN PENELITIAN

Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengevaluasi aktivitas inhibitor

xantin oksidase ekstrak etanol dan fraksi kelopak bunga rosela (Hibiscus
sabdariffa L) in vitro .
 ALAT DAN BAHAN

ALAT BAHAN
• Seperangkat Rotari Evaporator • Kelopak Rosella diperoleh dari Lembang,
Jawa Barat.
• Seperangkat Alat Soxhlet

• Toples • Enzim xantin oksidase berasal dari sapi

• Spektrofotometer (Sigma Aldrich, USA)

• xanthine (Sigma Aldrich, USA)
• Pipet tetes
• Buffer fosfat Ph 7,5
• Pipet ukur
• HCl 1 N

• Pelarut etanol, air, etil asetat, dan n-heksan

• allopurinol
 METODE PENELITIAN

Penyiapan Ekstrak dan Fraksi

Ekstraksi :

Kelopak rosela dikeringkan

Di ekstraksi dengan alat soxhlet menggunakan pelarut

etanol 96%

Filtrat di pekatkan di pada alat rotav

Hasil ekstrak yang didapatkan yaitu 35,8%

Fraksinasi :

Ekstrak rosela

Di fraksinasi dengan metode ekstraksi cair-

cair

Dilakukan Fraksi bertahap

Menggunakan Pelarut N-Heksan, Etil

Asetat dan Air
 Pengukuran Aktivitas Penghambatan Xantin
Oksidase
Kontrol Positif ( Allopurinol)

Ditambhakan 1,9 ml buffer phosfat Ditambahkan 1 ml

ph 7,5 xanthin

Allopurinol dibuat seri

Ditambahkan enzim Diinkubasi selama 10
konsentrasi 5,10,20,50
xanthin oksidase 100 ml menit suhu 37°C
dan 100 ug/ml

Diinkubasi selama 30 Diukur absorbansi pada

menit, suhu 37°C panjang gelombang
tambahkan 1 mL HCl 290nm
Kontrol negatif

Ditambhakan 1,9 ml
Ditambahkan 1 ml xanthin
buffer phosfat ph 7,5

Ditambahkan enzim Diinkubasi selama 10

xanthin oksidase 100 ml menit suhu 37°C

Diinkubasi selama 30 Diukur absorbansi pada

menit pada suhu 37°C panjang gelombang
Tambahkan 1 mL HCl 290nm
Pengujian aktivitas xanthin oksidase

Ditambhakan 1,9 ml buffer phosfat

Ditambahkan 1 ml xanthin
ph 7,5

Ekstrak dan fraksi rosella di buat

Diinkubasi selama 10 menit pada
dengan seri konsentrasi
suhu 37°C
100,200,300,400 dan 500 ug/mL

Ditambahkan enzim xanthin Diinkubasi selama 30 menit pada

oksidase 100 ml suhu 37°C

Diukur absorbansi pada panjang

gelombang 290 nm
HASIL PENELITIAN
 PEMBAHASAN
Prinsip uji penghambatan aktivitas xantin oksidase adalah pengukuran jumlah asam urat yang terbentuk
dalam reaksi dikatalisis oleh xantin oksidase. Tes ini merupakan in vitro assay dilakukan
Spektrofotometri pada panjang gelombang maksimum (λ 290). Xantin oksidase penghambatan assay
dilakukan pada ekstrak dan fraksi dengan menggunakan berbagai varian konsentrasi, yang tujuan adalah
untuk melihat efek penghambatan dalam meningkatkan konsentrasi. Konsentrasi ekstrak dan fraksi yang
berada 100 - 500 ug / ml.

Ekstrak dan fraksinya menunjukkan aktivitas untuk mengurangi kadar asam urat, tetapi memiliki aktivitas
yang lebih rendah dibandingkan dengan allopurinol. ekstrak etanol dan fraksi air memiliki kemampuan
untuk menghambat enzim xanthine oxidase yang ekstrak etanol puncak penghambatan yang terbaik
adalah pada konsentrasi 200 mg / ml serta dalam fraksi air, tetapi terdapat penurunan penghambatan
osidase enzim xantin.
Hasil penelitian juga menunjukkan bahwa ekstrak etanol kelopak bunga rosela dapat
menghambat enzim xantin oksidase pada 100 ug/ml dengan 25,13%, sedangkan fraksi air
pada 100 ug/ml pada 25,81% dan fraksi etil asetat dapat menghambat enzim xantin oksidase
oleh 32,25%, sedangkan referensi allopurinol obat pada 20 ug/ml sudah menyediakan
menghambat oleh 65,57%. Hal ini menunjukkan bahwa aktivitas xanthine penghambatan
oksidase ekstrak dan fraksi itu masih rendah bila dibandingkan dengan allopurinol.
 KESIMPULAN

Mekanisme kerja in vitro Tes menunjukkan bahwa penghambatan aktivitas

oksidase xanthine pada 100 ug / ml ekstrak etanol dapat menghambat aksi oksidase
xanthine oleh 25,12%, fraksi air dengan 25,81 dan fraksi etil asetat oleh 32,25%. Ada
kemungkinan bahwa ekstrak dan fraksi kelopak bunga rosela memiliki aktivitas
antihyperuricemia.
TERIMAKASIH