FARMASI • Spektrofotometri merupakan suatu metode untuk menentukan konsentrasi suatu senyawa berdasarkan pengukuran sinar yang diserap atau dilewatkan (ditransmisikan) oleh suatu larutan dengan menggunakan alat spektrofotometer. • Analisis kimia yang didasarkan pada pengukuran intensitas warna larutan yang telah ditentukan konsentrasinya. • Penentuan konsentrasi didasarkan pada absorpmetri; metode analisis kimia yang didasarkan pada pengukuran absorpsi (serapan) radiasi gelombang elektromagnetik. • Spektrofotometer UV-Vis adalah suatu instrument yang digunakan untuk mengukur absorban suatu sampel pada panjang gelombang tertentu. • Spektrofotometri UV VIS adalah teknik analisis spektroskopi yang memanfaatkan sumber radiasi elektromagnetik ultraviolet dekat (panjang gelombang 200-400 nm) dan sinar tampak/visible (panjang gelombang 400-800 nm dengan menggunakan spektrofotometer UV-Vis. Prinsip kerja spektrofotometri UV-Vis adalah interaksi yang terjadi antara energy yang berupa sinar monokromatis dari sumber sinar dengan materi yang berupa molekulSpektrofotometri UV-VPrinsip kerja spektrofotometri UV-Vis adalah interaksi yang terjadi antara energy yang berupa sinar monokromatis dari sumber sinar dengan materi yang berupa molekul
Spektrofotometri UV-Vis merupakan penyerapan sinar tampak atau UV
oleh suatu molekul yang dapat menyebabkan terjadinya eksitasi elektron (transisi elektronik) dari keadaan dasar (ground state) menuju energi yang lebih tinggi (excited state).is merupakan penyerapan sinar tampak atau UV oleh suatu molekul yang dapat menyebabkan terjadinya eksitasi elektron (transisi elektronik) dari keadaan dasar (ground state) menuju energi yang lebih tinggi (excited state). INSTRUMEN SPEKTROFOTOMETRI UV-VIS TERDIRI DARI BEBERAPA KOMPONEN UTAMA YAITU: 1. Sumber energi radiasi yang stabil (sumber cahaya) Sumber
cahaya berfungsi memberikan cahaya untuk dilewatkan
ke dalam sampel. Sumber cahaya pada instrumen
spektrofotometer UV-Vis terdiri atas:
a) Lampu deuterium digunakan untuk daerah ultraviolet.
b) Lampu tungsten/wolfram digunakan untuk daerah visible.
2. Pemilih panjang gelombang yang dapat mengisolasi daerah panjang gelombang tertentu a) Filter berfungsi untuk menyerap warna komplementer sehingga cahaya yang diteruskan merupakan cahaya berwarna yang sesuai dengan panjang gelombang yang dipilih. b) Monokromator Monokromator adalah alat yang akan memecah cahaya polikromatis menjadi cahaya tunggal/ monokromatis dengan komponen panjang gelombang tertentu.
3. Wadah tempat sampel
Wadah tempat sampel (kuvet) mempunyai ketebalan tertentu (b), Bentuknya biasanya bundar atau balok. Bahan kuvet berpengaruh terhadap panjang gelombang yang digunakan. seperti bahan kaca untuk sinar tampak atau bahan kuarsa untuk sinar ultraviolet. 4. Detektor radiasi Detektor berfungsi untuk merubah sinar menjadi energi listrik yang sebanding dengan besaran yang dapat diukur. Syarat ideal sebuah detektor adalah : • Memiliki kepekaan yang itingg • Respon konstan pada berbagai panjang gelombang • Waktu respon cepat dan signal minimum tanpa radiasi • Signal listrik yang dihasilkan harus sebanding dengan tenaga radiasi Detektor yang digunakan pada spektrofotometer UV-Vis adalah detektor foto/ photodiodes (sensor cahaya).
5. Alat pengolah signal dan read out
a) Amplifier berfungsi untuk memperbesar arus yang dihasilkan oleh detektor agar dapat dibaca oleh indikator b) Indikator dapat berupa rekorder atau komputer. – Berdasarkan teknik optika sinar, spektrofotometer dibedakan atas:
• Memiliki sumber cahaya tunggal, dimana sinyal pelarut dihilangkan terlebih dahulu dengan mengukur pelarut tanpa sampel (blanko). Setelah itu larutan sampel dapat diukur. • Sampel dan blanko secara bergantian diukur di wadah yang sama.
• Memiliki sumber cahaya ganda. • Pada alat ini, sampel dimasukkan bersama-sama dengan pelarut yang mengandung sampel. • Alat ini lebih praktis dan mudah digunakan serta memberikan hasil yang optimal. 1. Penggunaannya luas 2. Sensitivitasnya tinggi 3. Selektivitasnya sedang sampai tinggi 4. Ketelitiannya baik 5. Dapat mengukur dengan baik • Absorbsi dipengaruhi oleh pH larutan, suhu dan adanya zat pengganggu dan kebersihan dari kuvet
• Hanya dapat dipakai pada daerah ultra violet yang
panjang gelombang >185 nm
• Pemakaian hanya pada gugus fungsional yang
mengandung elektron valensi dengan energy eksitasi rendah
Spektrofotometri Adalah Suatu Metode Analisis Yang Berdasarkan Pada Pengukuran Serapan Sinar Monokromatis Oleh Suatu Lajur Larutan Berwarna Pada Panjang Gelombang Yang Spesifik Dengan Menggunakan Monokromator Prisma