MAKALAH STATISTIK UNTUK KIMIA ANALITIK

VALIDASI PADA TABUNG EVAKUASI UNTUK

PENGAMBILAN SAMPEL SENYAWA ORGANIK YANG
MUDAH MENGUAP DI LINGKUNGAN KESEHATAN

Disusun oleh :

Aditya Syamsudin
Andina Herlin Suprihatin
Rika Raniya

PROGRAM KEAHLIAN ANALISIS KIMIA

PROGRAM DIPLOMA
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
2015
KATA PENGANTAR

J3L213
J3L213086
J3L213

Alhamdulillah, segala puji dan syukur penyusun panjatkan kehadirat Allah

SWT yang telah memberikan rahmat dan hidayahnya sehingga penyusun dapat
menyelesaikan makalah ini tanpa suatu halangan yang begitu berarti.Penyusun
menyampaikan ucapan terima kasih kepada Bapak Zulhan Arif M.Si selaku dosen
Statistika untuk Kimia Analitik Diploma IPB, sehingga penulis dapat
menyelesaikan makalah yang berjudul Validasi pada tabung evakuasi untuk
pengambilan sampel senyawa organik yang mudah menguap di lingkungan
kesehatan. Makalah ini disusun sebagai upaya untuk memenuhi tugas responsi
yang telah diberikan.
Penyusun menyadari sepenuhnya di dalam penyusunan makalah yang telah
dilakukan masih banyak kekurangannya. Hal ini sejalan dengan pengalaman dan
ilmu yang kami miliki masih jauh dari sempurna, dengan demikian tim penyusun
akan menerima kritik dan saran yang sifatnya membangun dari semua pihak
sebagai masukan yang sangat berarti, agar dapat terus mengembangkannya dan
bermanfaat di semua kalangan.

Bogor, Mei 2015

Penyusun
DAFTAR ISI

I.

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Studi epidemiologi dalam berbagai kesehatan baru-baru ini telah
melaporkan peningkatan risiko asma yang berhubungan dengan pekerjaan (WRA)
terkait dengan paparan kelompok agen seperti lateks, polusi udara dalam ruangan,
senyawa organik volatil (VOC), bioaerosols, amonia atau klorin yang
mengandung produk chemicals digunakan untuk membersihkan alat atau
permukaan ruangan, dan obat aerosol. Sebuah review oleh Becklake dan rekannya
mencatat kebutuhan data paparan kuantitatif dalam studi kerja penyakit asma
untuk meminimalkan paparan dan untuk mendapatkan respon kuantitatif,
sehingga mendukung perkembangan penentuan nilai batas aman paparan untuk
meminimalkan asma.
Penelitian saat ini adalah bagian dari investigasi epidemiologi yang lebih
besar bertujuan menilai penyebab paparan yaitu termasuk karena pembersih dan
desinfektan produk, yang dapat menyebabkan atau memperburuk asma. Validasi
tabung untuk pengambilan sampel senyawa organik volatil (VOC) di lingkungan
penting dilakukan sebelum digunakan untuk penelitian. Penelitian ini melakukan
validasi metode tabung VOC dalam

tingkat konsentrasi ppb dan ppm

menggunakan pendekatan statistik dari Institut Nasional untuk Keselamatan dan

Kesehatan Kerja, penting untuk diingat bahwa praktik keselamatan dan kesehatan
kerja yang baik tidak hanya melihat salah satu bahaya dan cara mengatasinya, tapi
membuat sebuah sistem yang memungkinkan untuk mengidentifikasi semua
bahaya dan risiko di perusahaan dan untuk menanganinya secara berkelanjutan
serta melibatkan kemitraan dengan pekerja (International Labour Organization
2013).
Senyawa organik mudah menguap yang disebut VOC (Volatile Organic
Compound) dapat didefinisikan sebagai senyawa organik yang tekanan uapnya
lebih besar atau setara dengan 0,1 mmHg pada 20C, untuk tujuan pengaturan,
VOC didefinisikan oleh U.S Enviromental Protection Agency (EPA) sebagai
Semua senyawa karbon, kecuali karbon monoksida, karbon dioksida, asam
karbonat, senyawa logam karbida atau karbonat, dan ammonium karbonat, yang
turut serta dalam reaksi fotokimia atmosfer. Beberapa VOC merupakan polutan

lingkungan yang tidak hanya bersifat toksik, tetapi juga merupakan prekursorprekursor ozon yang penting dalam pembentukan asap atau kabut.
Bagian penting dalam analisis VOC adalah pada sebagian besar kasus, analit
pertama-tama diubah menjadi bentuk fase uap gas dan selanjutnya dianalisis
dengan

menggunakan

instrument

kromatografi

gas

atau

GC

(Gas

Chromatography) merupakan metode instrument pilihan untuk pemisahan dan

analisis untuk senyawa menguap.
I.2 Tujuan
Penelitian pada jurnal bertujuan validasi metode pada tabung evakuasi untuk
pengambilan sampel senyawa organik yang mudah menguap di lingkungan
kesehatan dan menilai penyebab terhadap senyawa organik yang mudah menguap.
II.
II.1.

METODE

Target Analat

Sebuah daftar target dari 14 analit tertentu terpilih karena mereka adalah agenagen yang berkontribusi terhadap asma, 12 pengganti dari eksposur yang
berkontribusi terhadap asma, atau tempat kerja umum eksposur diamati dalam
sampel awal (lihat pengantar tion). Analit ini adalah etanol, heksana, benzena,
toluena, dan alpha-pinene (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO), aseton dan metilen
klorida (Fisher Scientific, Pittsburgh, PA), 2-propanol (Spectrum Kimia, Gardena,
CA), kloroform, metil metakrilat, etilbenzena, m, p-xilena, o-xilena, dan limonene
(Acros Organics, Pittsburgh, PA).
II.2.

Sampel Canister

Dievakuasi 6 tabung L Silonite berlapis (Entech Instrumen, Inc) dan 400 mL

Silonite berlapis Minicans (Entech instrumen KASIH, Inc.) digunakan untuk
mempersiapkan kalibrasi gas fase standar. Metode EPA KE-15 digunakan untuk
pengambilan sampel dan analisis kontaminan udara untuk dikumpulkan dalam
tabung.
3.3. Sampel Prekonsentrasi

Sampel tabung membutuhkan prakonsentrasi sebelum analisis untuk

mendeteksi konsentrasi VOC ppb tingkat rendah. Udara sampel terkonsentrasi
sebelum analisis menggunakan Entech 7032A Autosampler (Minicans) atau
Entech 7016CA (6L tabung). Autosampler dengan 100 Transfer line C
dilampirkan ke Entech 7100 Preconcentrator. Preconcentrator itu melekat ke
6890N/5973N sistem GC-MS (Agilent Technologies, Inc., Santa Clara, CA)
dengan kolom RTX-1 kapiler 60m x panjang 0.32 mm ID x ketebalan film 1mm
(Restek Corporation, Belle-fonte, PA). Kondisi prakonsentrasi adalah sebagai
berikut: dimodifikasi dehidrasi perangkap dingin; modul 1 (kosong) di -20oC,
diserap di 10oC, dan dipanggang di 150oC selama 7 menit; modul 2 (kaca manikmanik) difokuskan pada -80oC, diserap pada 180oC, dan dipanggang di 190oC; dan
modul 3 (focuser) difokuskan pada -150oC. Loop injeksi (untuk tingkat ppm)
mengikuti parameter yang sama.
3.4. Pengaturan Alat
Kondisi analisis kromatografi gas yang ditetapkan sebagai berikut:
Digunakan suhu oven terprogram yang diatur pertama kali 35 oC selama 2 menit,
diikuti oleh 8oC min-1 jalan ke 170oC dan kemudian 20oC min-1 jalan ke suhu akhir
220oC, yang dilakukan selama 3 menit; Suhu injector yaitu 250 oC dengan 20:1
split (split flow 20,2mL min-1); Suhu detektor yaitu 280oC; dan kolom laju aliran
ditetapkan untuk 1 mL min-1. Analisis spektrometer massa. Kondisi yang
ditetapkan sebagai berikut: modus scan untuk 35-350amu untuk menangkap
alkohol; ambang batas pada 150; kecepatan membaca 2.84 scan/s; delay pelarut
untuk 4,5 menit; Suhu sumber di 230oC; dan Suhu kuadrapol pada 150oC.
3.5. Quality Assurance dan Quality Control
QA dan QC protokol yang ditentukan untuk memastikan stabilitas sistem
analisis dan data integritas. Bromofluorobenzene digunakan untuk memantau
respon instrumen dari waktu ke waktu. MS tuning dan kurva kalibrasi yang
dianalisis secara berkala untuk memastikan stabilitas analisis sampel. Sebuah
kalibrasi standar tunggal bromofluorobenzene (10 ppb), dan instrumen
menggunakan gas nitrogen UHP, sampel dianalisis dengan setiap set dalam waktu
per 24 jam metode EPA TO-15.
3.6. Analisis Data

MSD Chemstation D.02.00.275 (Agilent Technologies, Inc.) digunakan untuk

akuisisi data. Kromatogram yang dihasilkan dan data yang dihasilkan dipindahkan
ke Microsoft Excel dan dibuat data penanganan sebelum analisis statistik.
Konsentrasi Canister dihitung berdasarkan respon dari standar internal terdekat.
3.7. Kalibrasi
Analit sasaran cair digunakan untuk menghasilkan standar gas dalam 2 Bola L
kaca. Volume gas yang dikenal dari bohlam diperkenalkan untuk satu 6 L tabung
diikuti

oleh

tekanan

udara

menggunakan

nitrogen

UHP

dilembabkan

menggunakan Entech 4600A Dinamis Pengencer, untuk kalibrasi ppb tingkat,

standar gas intro diproduksi dengan preconcentrator untuk menghasilkan
konsentrasi yang berbeda-beda menggunakan volume injeksi 25-500 mL. Standar
internal (46 mL 100 ppb Bromochloromethane, 1,4-difluorobenzene, dan
klorobenzena-d5; Restek-korporasi tion) yang ditambahkan ke dalam tahap
pertama preconcentrator selama analisis untuk memperhitungkan variabilitas
dalam sampel prakonsentrasi dan analisis setiap analit, faktor respon dihitung
sebagai rasio dari respon analit dengan standar internal, baik pada konsentrasi
yang diketahui. Rata-rata respon faktor analit standar internal yang digunakan
untuk mengukur konsentrasi analit.
3.8. LOD dan LOQ
Metode prakonsentrasi yang dilakukan untuk mengukur tingkat ppb akurasi,
presisi, batas deteksi dan kuantifikasi (LOD dan LOQ) untuk setiap analit
ditentukan dengan kalibrasi lima tingkat rendah mulai dari 0,03-1,1 ppb
(tergantung pada analit) disiapkan pada 6L tabung dan dianalisis dengan volume
injeksi 500 mL, untuk metode loop yang digunakan untuk mengukur tingkat ppm,
LODs dan LOQs ditentukan dengan lima kalibrasi berkisar dari 0,1 hingga 2 ppm
(tergantung pada analit). LOD dihitung sebagai 3 kali standard error regresi dibagi
dengan kemiringan regresi, sedangkan LOQ dihitung sebagai 3,33 kali LOD.
III.

HASIL DAN PEMBAHASAN

Keseksamaan diukur sebagai simpangan baku atau simpangan baku relatif

(koefesien variasi). Keseksamaan dapat dinyatakan sebagai keterulangan
(repeatability)

atau

ketertiruan

(reproducibility).

Keterulangan

adalah

keseksamaan metode jika dilakukan berulangkali oleh analis yang sama pada
kondisi sama dan interval waktu yang pendek. Keterulangan dinilai melalui
pelaksanaan penetapan terpisah lengkap terhadap sampel-sampel identik yang
terpisah dari batch yang sama, jadi memberikan ukuran keseksamaan pada kondisi
yang normal. Ketertiruan adalah keseksamaan metode jika dikerjakan pada
kondisi yang berbeda. Kriteria seksama diberikan jika metode memberikan
simpangan baku relatif atau koefisien variasi 2% atau kurang. Kriteria ini sangat
fleksibel tergantung pada konsentrasi analit yang diperiksa, jumlah sampel, dan
kondisi laboratorium. Koefisien variasi berdasarkan penelitian dijumpai
meningkat dengan menurunnya kadar analit yang dianalisis. Pada kadar 1% atau
lebih standar deviasi relatif antara laboratorium adalah sekitar 2,5%, pada satu per
seribu adalah 5%. Pada kadar satu per sejuta (ppm) Relative Standard Deviation
(RSD) nya adalah 16%, dan pada kadar part perbilion (ppb) adalah 32%.

Gambar 1 Rumus selang kepercayaan terhadap pegukuran sampel

Rumus diatas digunakan untuk menentukan selang kepercayaan terhadap
pengukuran sampel, dimana BAvg merupakan rata rata kisaran ketidakpastian
pengukuran dalam sampel, k adalah level konsentrasi sampel. Cij merupakan hasil
pengukuran pada konsentrasi tertentudan Qij merupakan konsentrasi teoritis yang
ingin dicapai. Penghitungan Bavg didasarkan atas batas selang kepercayaan 95%
sehingga dinyatakan pada i.e., 1.96* terhadap kesalahan standar. Hasil
pengukuran harus berada pada range 1 sampai 10 ppb dan 0,8 sampai 2 ppm .
Presisi juga ditentukan berdasarkan %RSD yang secara rumus dijelaskan sebagai
berikut

Gambar 2 Rumus %RSD terhadap pengukuran sampel

Berdasarkan rumus tersebut, dijelaskan bahwa presisi ditentukan
berdasarkan kelompok data konsentrasi yang berada pada range yang sesuai.
Presisi juga dilakukan terhadap data konsentrasi yang mencakup seluruh range.
Tentunya juga berlaku terhadap seluruh jenis sampel yang dianalisis. Perhitungan
homogenitas presisi dalam jurnal ini digunakan rumus Barnet test. Hasil dari
perhitungan ini menunjukkan berapa akurasi yang terhitung.

Berdasarkan

NIOSH, akurasi data yang baik harus didasarkan pada selang kepercayaan 95%
dimana pada kondisi tersebut nilai perhitungan telah mencakup perkiraan data
yang berada diluar range, untuk itu pengukuran dilakukan minimal sebanyak 9
kali dengan menggunkan 3 konsetrasi yang telah diketahui. Berikut adalah rumus
Barnest Test.

Gambar 2 Rumus barnets untuk mengukur

Gambar 3 Rumus akurasi berdasarkan selang kepercayaan

Kecermatan atau adalah ukuran yang menunjukkan derajat kedekatan hasil
analisis dengan kadar analit yang sebenarnya. Akurasi dapat juga dikatakan
sebagai ketelitian metode analisis atau kedekatan antara nilai terukur dengan nilai
yang diterima baik nilai konversi, nilai sebenarnya, atau nilai rujukan. Uji akurasi
diperiksa dengan menghitung perbedaan nilai yang terukur dengan nilai
sebenarnya. Kecermatan dinyatakan sebagai persen perolehan kembali (recovery)
analit yang ditambahkan (Harmita 2004). Berikut ialah data yang dihasilkan.

Tabel 3 Hasil pengukuran bias, presisi, akurasi, stabilitas analit pada tingkat
konsentrasi ppb

III.1.
III.2.
III.3.

Quality Control dan Quality Assurance

Kalibrasi
LOD dan LOQ

Limit of Detection (LOD) yaitu konsentrasi hasil analitis terendah dalam

sampel yang masih dapat dideteksi, namun tidak selalu dapat dikuantifikasi.
Definisi LOQ yaitu konsentrasi terendah suatu sampel yang dapat dianalisis
secara kuantitatif.
Tabel 2 Limit of detection (LOD) dan limit of quantification (LOQ) analit

Nilai LOD dan LOQ pada analit tercantum dalam Tabel 2. Limit of Detection
untuk tingkat konsentrasi ppb berkisar antara 0,07 ppb (2-propanol) hingga 0,33
ppb (aseton). Ini berarti bahwa pada konsentrasi tersebut masih dapat terbaca
absorbansinya tetapi tidak dapat digunakan dalam perhitungan, karena dapat
membuat bias atau galat dalam perhitungan. Nilai LOD untuk tingkat konsentrasi
ppm berkisar antara 0,08 ppm (o-xylene) hingga 0,32 ppm (metilen klorida). Hal
ini menunjukkan bahwa pada konsentrasi tersebut merupakan konsentrasi terkecil
yang tidak menimbulkan bias dalam perhitungan dan pengukuran data yang
didapat diasumsikan sebagai data yang telah terdisribusi normal. Akurasi, presisi
diukur pada range 1 sampai 10 ppb dan 0,8 sampai 2 ppm sesuai dengan panduan
NIOSH (National Institute for Occupational Safety and Health).
III.4.

Metode Validasi

Validasi metode analisis ialah suatu tindakan penilaian terhadap parameter

tertentu, berdasarkan percobaan laboratorium, untuk membuktikan bahwa
parameter tersebut memenuhi persyaratan untuk digunakannya. Validasi metode
analisis merupakan suatu proses pembuktian melalui pengujian analisis di
laboratorium untuk memberikan data tentang keandalan suatu metode dari suatu
prosedur yang digunakan. Menurut ISO SNI/IEC 17025: 2008 validasi adalah
konfirmasi melalui pengujian dan penyediaan bukti objektif bahwa persyaratan
tertentu untuk suatu maksud terpenuhi. Beberapa parameter analisis harus
dipertimbangkan dalam validasi metode analisis diuraikan dan didefinisikan

sesuai dengan cara penentuannya. Parameter yang digunakan ialah batas deteksi
dan kuantitasi, presisi, akurasi, dan linearitas. Selain itu digunakan pula parameter
keterulangan (repeatability) dan ketangguhan (rudgedness) (Harmita 2004).
Presisi adalah suatu ukuran penyebaran (dispersi suatu kumpulan hasil),
kedekatan dari suatu rangkaian pengukuran berulang-ulang satu sama lain. Presis
diterapkan pada pengukuran berulang-ulang sehingga menunjukkan hasil
pengukuran individual didistribusikan sekitar nilai rata-rata tanpa menghiraukan
letak nilai rata-rata terhadap nilai benar (Arifin 2006). Presisi adalah ukuran
kedekatan antar serangkaian hasil analisis yang diperoleh dari beberapa kali
pengukuran pada sampel homogen yang sama (Rohman 2009). Presisi dapat
dievaluasi dengan menentukan standar deviasi relatif tiap konsentrasi (Satria
2014). Tabel 1 menunjukkan hasil penghitungan standar deviasi relatif

dari

masing-masing analit.
Tabel 1 Nilai Rataan dan %RSD Analit

Faktor respon rata-rata dan standar deviasi relatif persen untuk masingmasing 14 analit target ditunjukkan pada Tabel 1. Persen standar deviasi relatif
terhadap respon ppm sebagai tingkat konsentrasinya yang menggunakan metode
loop, umumnya lebih besar dari tingkat ppb sebagai konsentrasi yang

menggunakan metode prakonsentrasi. Presisi dinyatakan sebagai persentase

standar deviasi relatif (RSD) (Stulzer 2009). Nilai RSD antara 1-2% biasanya
dipersyaratkan untuk senyawa-senyawa aktif dalam jumlah banyak; sedangkan
untuk senyawa-senyawa dengan kadar sekelumit, RSD berkisar antara 5-15%
(Rohman 2009). Percobaan dilakukan dengan membandingkan analat pada tingkat
konsentrasi ppb dan ppm, sehingga nilai RSD dikatakan cukup baik jika berkisar
antara 5-15%. Nilai RSD pada tabel masih ada nilai yang tidak masuk dalam
kisaran tersebut.
IV.

SIMPULAN

Studi ini mengevaluasi sampling dan analisis parameter yang dapat digunakan
untuk menilai tingkat konsentrasi campuran, di mana beberapa tingkat rendah
VOC. Hasil penelitian validasi ini menunjukkan bahwa tabung evakuasi sampel
ditambah dengan prakonsentrasi dan GC-MS analisis adalah layak (akurat dan
stabil) sampling udara methodology untuk mengukur konsentrasi udara yang
sangat rendah beberapa VOC serta konsentrasi VOC jauh lebih tinggi (misalnya,
alkohol) ditemukan bersama-sama dalam pengaturan yang sama.
DAFTAR PUSTAKA
Harmita. 2004. Petunjuk pelaksanaan validasi metode dan cara perhitungannya.
Majalah Ilmu Kefarmasian 1(3):117-135
Hellen Karine Stulzer, Monika Piazzon Tagliari, Gislaine Kuminek, Paulo Renato
Oliveira, Charise Dallazen Bertol, Marcos Antonio Segatto Silva. 2009.
Development and validation of stability indicating lc method to quantify
captopril in tablets of controlled release. Chromatographia Supplement.
Vol 69: 123-128
International Labour Organization. 2013. Keselamatan dan Kesehatan Kerja di
Tempat Kerja Sarana untuk Produktivitas. Score : Jakarta (ID).
Rohman A. 2009. Kromatografi untuk Analisis Obat. Yogyakarta (ID) : Graha
Ilmu.
Satria R Gagak Donny Satria, Bambang S, Andi T, dan Agustina Dwi W. 2014.
Pengoptimalan metode kromatografi cair kinerja tinggi dalam analisis
senyawa deltamethrin sebagai residu dalam produk asal hewan validation

of high performance liquid chromatography method to analyze residue of

deltamethrin in animal product. Jurnal Kedokteran Hewan. 8(1): 68-71
Zainal Arifin, Darmono, Agus Safuan dan Rina Pratama. 2006. Validasi metode
analisis logam copper (cu) dan plumbum (pb) dalam jagung dengan cara
spektrofotometer serapan atom (method validation of copper (Cu) and (Pb)
analysis in corn using atomic absorption spectrophotometer). Seminar
Nasional

Teknologi

Peternakan

Universitas Pancasila : Jakarta (ID).

dan

Veteriner. Fakultas

Farmasi