LOGO

TUTOR KIMIA KLINIK

FOTOMETER SERAPAN

dr. ROUDHOTUL ISMAILLYA NOOR / Dra. SOEHARTINI B.S., MS., Apt

10 MARET 2010
 PENDAHULUAN
 Fotometer Serapan :
Alat analitik untuk mengukur fraksi sinar yang
ditransmisikan / diteruskan melalui sampel larutan
sehingga dapat menentukan kadar zat yang menyerap
sinar dalam sampel larutan tersebut

 Spektrofotometri :
metode analisis pengukuran berdasarkan interaksi obyek
dengan energi dari sinar dalam spektrum elektromagnetik
pada sinar tampak / UV

 Cahaya :
gelombang elektromagnetik yang mempunyai panjang
gelombang, frekuensi dan amplitudo
1
LOGO
 380 450 500 550 600 650

λ = 1/ v = 1/ E
λ makin panjang  Frekuensi makin rendah  Energi makin rendah

2
LOGO
Sinar akan berinteraksi dengan obyek, sifat
interaksi ini ditentukan oleh sifat obyek
tersebut :
1 Transmisi (penembusan)

2 Absorbsi (penyerapan)

3 Scattering (perpencaran)

4 Emisi (perpendaran)

3
LOGO
KOMPONEN FOTOMETER SERAPAN

4
LOGO
 SUMBER CAHAYA
1 2 3
KEUNTUNGAN : KEUNTUNGAN :
 Mengeluarkan sinar KEUNTUNGAN :  Lebih mudah
polikromatik yang bersifat  Menghasilkan sinar mendapatkan
kontinu kontinu sinar dengan panjang
 Lampu yang pertama kali  Mengandung sinar UV gelombang tertentu
untuk memberi energi (monokromatis)
KERUGIAN :  Menghasilkan panjang
KERUGIAN :  Tidak memiliki sinar gelombang yang
 Sulit untuk memisahkan dengan panjang terpencar
panjang gelombang gelombang yang besar
 Membutuhkan energi yang KERUGIAN :
besar untuk mencapai  Tidak semua panjang
warna putih/mendekati sinar gelombang ada
UV

TUNGSTEN / LAMPU LAMPU

WOLFRAM / FLUORESENSI MERCURY
LAMPU PIJAR (Deuterium) (discrete rays)

5
LOGO
 LAMPU
LAMPU
HALOGEN
HALOGEN LAMPU
LAMPU LAIN
LAIN

LAMPU
LAMPUPIJARPIJAR LAMPU
LAMPU::
YANG
YANGBERISI
BERISI NATRIUM
NATRIUM
HALOGEN
HALOGEN BARIUM
BARIUM
(F,
(F,Cl,
Cl,Br,
Br,I)I) KALIUM
KALIUM
Sinar
Sinarbersifat
bersifat STRONSIUM
STRONSIUM
kontinu
kontinu

LENSA CEMBUNG :
Menjadikan Sinar Polikromatik Sejajar dan
Memfokuskan Sinar Sejajar tersebut

6
LOGO
 MACAM – MACAM FOTOMETER SERAPAN
Jenis Monokromator

Sistem Optik  Spektrofotometer

Sumber Cahaya 
(spektroskop)
Spektrofotometer  Filter Fotometer
 Spektrofotometri
Vis (filter)
Single Beam
 Spektrofotometri

UV
Spektrofotometer
 Spektrofotometri
UV – Vis
Double Beam
 Spektrofotometri IR

7
LOGO
 SINGLE – DOUBLE BEAM
 Satu Berkas Sinar
 Blanko, Standar,
Sampel Diperiksa
Bergantian

 Terbagi 2 Berkas Sinar

oleh Chopper
 Sinar I (Kuvet Blanko)
 Sinar II (Kuvet
Sampel /
Standar)
 Tidak perlu mengontrol
titik NOL + tidak
terpengaruh oleh
perubahan voltase

8
LOGO
 MONOKROMATOR
 Fungsi :
mengubah sinar polikromatik menjadi sinar monokromatik

 Kualitas monokromator tergantung pada kemampuan

untuk menghasilkan sinar monokromatik dengan band
pass/band width sempit dan intensitas sinar yang kuat

 Terdiri dari :
1. Celah Masuk (entrance slit )  memfokuskan sinar
2. Dispersi (dispersion )  memilah sinar
3. Celah Keluar (exit slit )  pintu keluar sinar menuju
sampel
9
LOGO
 MONOKROMATOR

SPEKTROSKOP
PRISMA
 Penguraian sinar
tidak merata, rapat
pada daerah dengan
λ yang panjang
 Sinar dibelokkan
tidak linier
 Tidak mahal
DEFRACTION
GRATTING
 Penguraian sinar
merata, band width
seragam pada semua λ
 Sinar dibelokkan
secara linier
 Lebih mahal dari
prisma / filter

10
LOGO
 MONOKROMATOR
FILTER
MULTILAYER
MULTILAYER
INTERFERENCE
INTERFERENCE
GLASS
GLASS FILTER
FILTER INTERFERENCE
INTERFERENCE
FILTER
FILTER FILTER
FILTER
•• Lempeng
Lempengtransparan
transparan •• Band
Bandwidth
width55––10
10
•• Kaca
Kacaberwarna
berwarna •• Band
Bandwidth
width10
10––1717 nm
nm
•• Hanya
Hanyameneruskan
meneruskan nm
nm •• TT==60
60––9090%%
λλ •• TT==4040––60
60% % •• Semakin baik
Semakin baik
yang
yangtidak
tidakdiabsorbsi
diabsorbsi •• Sinar
Sinaryang
yang karena
karena
sampel
sampel ( T =22––
( T = diteruskan
diteruskan band
bandwidth
widthmakin
makin
20%)
20%) hanya
hanyasinar
sinaryang
yang sempit
sempittapi
tapienergi
energi
•• Band
Bandwidth
width50
50nm
nm dibutuhkan,
dibutuhkan,sinar
sinarlain
lain yang
yangdihasilkan
dihasilkan
dipantulkan
dipantulkan makin
makinrendah
rendah

11
LOGO
BAND WIDTH :
Rentang panjang gelombang sinar monokromatik
yang dihasilkan monokromator, yaitu antara 2 λ
yang mengapit panjang gelombang nominal
dimana transmiten = ½ transmiten puncak

12
LOGO
 KUVET DETEKTOR
 KUVET BULAT  Photo Voltaic Cell
 KUVET PERSEGI :  Photo Conductive Cell
 Scattering <<<  Photo Tube
 Diameter sama semua  Photo Multiplier
 Tidak mudah bergerak
 Flow Through Cuvet 
kuvet tidak perlu diganti /
diangkat

13
LOGO
 JARUM
CERMIN
SINAR

ALAT UKUR
KOMPUTER
LISTRIK

SKALA
RECORDER DIGITAL
PRINTER

14
LOGO
 PENGGUNAAN FOTOMETER SERAPAN

HUKUM
HUKUM LAMBERT
BEER
Text Jika sinar Text
Jumlah sinar monokromatik
monokromatik
PENENTUAN dijatuhkan pada
yang
Textdiserap oleh KADAR BAHAN larutan suatuText
suatu bahan bahan, bila kadar
dalam larutan
LARUTAN bahan meningkat
berbanding
Text secara linierText
/ lurus
lurus dengan maka sinar yang
kadar dan diteruskan akan
tebalnya larutan berkurang /
yang dilalui sinar menurun secara
logaritmik

Au Cu Au
= Cu = x Cst
Ast Cst Ast
15
LOGO
 Alat dengan linearitas, akurasi, presisi dan kalibrasi
panjang gelombang yang baik.
 Pemanasan alat supaya semua komponen stabil
 Memilih panjang gelombang :
 ditentukan dalam petunjuk metode
 dicari dalam spektrum serapan

16
LOGO
 Mengatur titik 0 pada absorben dengan bahan yang tidak
menyerap sinar dan titik 0 pada transmiten dengan bahan
yang tidak tembus sinar
 Mengetahui apakah memenuhi Hukum Beer dengan
pembuatan kurva baku. Bila memenuhi maka kurva akan
lurus / linier tapi bila tidak memenuhi maka kurva akan
melengkung

Tidak memenuhi Hukum Beer :

 Kadar rendah masih linier tapi saat kadar tinggi
melengkung  perlu pengenceran bila kadar larutan
melewati batas maksimal linearitas
 Bila kurva sudah melengkung sejak dari awal  Extrapolasi

17
LOGO
 Skala Linier T % terhadap konsentrasi larutan
 Skala Logaritmis T % terhadap konsentrasi larutan ( A = 2 – log T %)
 Skala Linier Absorben terhadap konsentrasi larutan  meningkat
secara linier

18
LOGO
 KALIBRASI – MONITORING FOTOMETER
Quality control checking menurut AACC
(American Association for Clinical Chemistry)
Pengawasan teratur
akurasi panjang gelombang
 Lampu Mercury, Hydrogen /
Deuterium ( λ maximal absorbans Linearitas Stray Light
486 nm, 658 nm dan 380 nm)
 Glass Filter Dydium (puncak me↓ hasil
absorbance pada 573, 586, 685, Metode pembacaan nilai
741, dan 803 nm)  kalibrasi band terbanyak absorbance sampel
pass lebar mengukur
 Holmium Oxide Filter (puncak maka terjadi
absorbance diantara spektrum sinar linearitas ke-tidaklinear-an
tampak dan UV)  kalibrasi band fotometer kadar sampel dan
pass sempit
 Kalibrasi sekunder Lart. absorbance
Filter Glass Metode tersering
Chromogenic stabil
(Cobalt Chloride, Cobalt Ammonium Neutral Filter Cut Off Glass
Sulfate, Potassium Chromate, Nickel
Sulfat)
19
LOGO
 20
LOGO
LOGO
TUTOR KIMIA KLINIK