H

a
k

C
i
p
t
a

B
a
d
a
n

S
t
a
n
d
a
r
d
i
s
a
s
i

N
a
s
i
o
n
a
l
,

C
o
p
y

s
t
a
n
d
a
r

i
n
i

d
i
b
u
a
t

u
n
t
u
k

p
e
n
a
y
a
n
g
a
n

d
i

w
w
w
.
b
s
n
.
g
o
.
i
d

d
a
n

t
i
d
a
k

u
n
t
u
k

d
i

k
o
m
e
r
s
i
a
l
k
a
n

SNI ISO 7932:2012
ICS 07.100.30 Badan Standardisasi Nasional

Standar Nasional Indonesia

























Mikrobiologi bahan pangan dan pakan Metode
horizontal untuk enumerasi Bacillus cereus terduga
Teknik penghitungan koloni pada suhu 30 C

(ISO 7932:2004, IDT)

H
a
k

C
i
p
t
a

B
a
d
a
n

S
t
a
n
d
a
r
d
i
s
a
s
i

N
a
s
i
o
n
a
l
,

C
o
p
y

s
t
a
n
d
a
r

i
n
i

d
i
b
u
a
t

u
n
t
u
k

p
e
n
a
y
a
n
g
a
n

d
i

w
w
w
.
b
s
n
.
g
o
.
i
d

d
a
n

t
i
d
a
k

u
n
t
u
k

d
i

k
o
m
e
r
s
i
a
l
k
a
n

BSN 2012

Hak cipta dilindungi undang-undang. Dilarang menyalin atau menggandakan sebagian atau
seluruh isi dokumen ini dengan cara dan dalam bentuk apapun dan dilarang mendistribusikan
dokumen ini baik secara elektronik maupun tercetak tanpa izin tertulis dari BSN

BSN
Gd. Manggala Wanabakti
Blok IV, Lt. 3,4,7,10.
Telp. +6221-5747043
Fax. +6221-5747045
Email: dokinfo@bsn.go.id
www.bsn.go.id

Diterbitkan di Jakarta

H
a
k

C
i
p
t
a

B
a
d
a
n

S
t
a
n
d
a
r
d
i
s
a
s
i

N
a
s
i
o
n
a
l
,

C
o
p
y

s
t
a
n
d
a
r

i
n
i

d
i
b
u
a
t

u
n
t
u
k

p
e
n
a
y
a
n
g
a
n

d
i

w
w
w
.
b
s
n
.
g
o
.
i
d

d
a
n

t
i
d
a
k

u
n
t
u
k

d
i

k
o
m
e
r
s
i
a
l
k
a
n

SNI ISO 7932:2012

Daftar isi



Daftar isi.....................................................................................................................................i
Prakata ..................................................................................................................................... ii
0 Pendahuluan...................................................................................................................... iii
1 Ruang lingkup.................................................................................................................... 1
2 Acuan normatif................................................................................................................... 1
3 Istilah dan definisi .............................................................................................................. 1
4 Prinsip................................................................................................................................ 2
5 Larutan pengencer, media biakan dan pereaksi................................................................ 2
6 Peralatan teknis dan alat gelas.......................................................................................... 5
7 Pengambilan contoh.......................................................................................................... 5
8 Penyiapan contoh uji ......................................................................................................... 5
9 Prosedur ............................................................................................................................ 6
10 Pernyataan hasil .............................................................................................................. 7
Lampiran A (normatif) Batas kepercayaan dalam estimasi jumlah koloni yang rendah ........ 10
Lampiran B (informatif) Hasil uji banding antar laboratorium................................................. 11
Bibliografi ............................................................................................................................... 14

Tabel 1 - Hasil uji ..................................................................................................................... 7
Tabel A.1 ............................................................................................................................... 10
Tabel B.1 - Hasil analisis data yang diperoleh dengan contoh kentang kering bubuk .......... 11
Tabel B.2 - Hasil analisis data yang diperoleh dengan contoh daging giling......................... 12
Tabel B.3 - Hasil analisis data yang diperoleh dengan contoh keju segar ........................... 12
Tabel B.4 Hasil analisis data yang diperoleh dengan bahan acuan ................................. 13




BSN 2012 i

H
a
k

C
i
p
t
a

B
a
d
a
n

S
t
a
n
d
a
r
d
i
s
a
s
i

N
a
s
i
o
n
a
l
,

C
o
p
y

s
t
a
n
d
a
r

i
n
i

d
i
b
u
a
t

u
n
t
u
k

p
e
n
a
y
a
n
g
a
n

d
i

w
w
w
.
b
s
n
.
g
o
.
i
d

d
a
n

t
i
d
a
k

u
n
t
u
k

d
i

k
o
m
e
r
s
i
a
l
k
a
n

SNI ISO 7932:2012

Prakata



Standar Nasional Indonesia (SNI) Mikrobiologi bahan pangan dan pakan - Metode horizontal
untuk enumerasi Bacillus cereus terduga - Teknik penghitungan koloni pada suhu 30 C
merupakan hasil adopsi identik dengan metode terjemahan dari ISO 7932:2004 Microbiology
of food and animal feeding stuffs Horizontal method for the enumeration of presumptive
Bacillus cereus Colony-count technique at 30 C .

Untuk tujuan penggunaan standar ini, yang dimaksud dengan This International Standard
adalah This National Standar (SNI) dan diterjemahkan menjadi Standar Nasional atau
Standar ini. Apabila terdapat keraguan pada standar ini, maka mengacu pada standar
aslinya.

Standar ISO yang digunakan dalam acuan normatif telah diadopsi identik menjadi SNI, yaitu:

1. ISO 6887-1:1999, Microbiology of food and animal feeding stuffs Rules for the
preparation of the test sample, of initial suspension and of decimal dilutions for
microbiological examination Part 1: General rules for the preparation of the initial
suspension and of decimal dilutions telah diadopsi identik menjadi SNI ISO 6887-1:2012
Mikrobiologi bahan pangan dan pakan Penyiapan contoh uji, suspensi awal dan
pengenceran desimal untuk pengujian mikrobiologi - Bagian 1: Aturan umum untuk
penyiapan suspensi awal dan pengenceran desimal.

2. ISO 7218:1996, Microbiology of food and animal feeding stuffs - General rules for
microbiological examinations. telah direvisi oleh ISO 7218:2007 Microbiology of food and
animal feeding stuffs -- General requirements and guidance for microbiological
examinations telah diadopsi secara identik menjadi SNI ISO 7218:2012, Mikrobiologi
bahan pangan dan pakan Persyaratan umum dan pedoman untuk pengujian
mikrobiologi.

3. ISO/TS 11133-2:2003 Microbiology of food and animal feeding stuffs Guidelines on
preparation and production of culture media Part 2: Practical Guidelines on
performance testing of culture media telah diadopsi identik menjadi SNI ISO/TS 11133-
2:2012 Mikrobiologi bahan pangan dan pakan Panduan penyiapan dan produksi media
biakan Bagian 2: Panduan praktis pengujian kinerja media biakan

Standar ini disusun oleh Panitia Teknis (PT) 67-04 Makanan dan Minuman. Standar ini telah
dibahas dalam rapat teknis dan terakhir disepakati dalam rapat konsensus pada tanggal
15 Desember 2011 di Jakarta.




BSN 2012 ii

H
a
k

C
i
p
t
a

B
a
d
a
n

S
t
a
n
d
a
r
d
i
s
a
s
i

N
a
s
i
o
n
a
l
,

C
o
p
y

s
t
a
n
d
a
r

i
n
i

d
i
b
u
a
t

u
n
t
u
k

p
e
n
a
y
a
n
g
a
n

d
i

w
w
w
.
b
s
n
.
g
o
.
i
d

d
a
n

t
i
d
a
k

u
n
t
u
k

d
i

k
o
m
e
r
s
i
a
l
k
a
n

SNI ISO 7932:2012

0 Pendahuluan



0.1 Standar ini dimaksudkan untuk memberikan panduan umum untuk pemeriksaan
mikrobiologis produk pangan, tidak terkait dengan Standar Internasional yang ada, dan
harus diperhitungkan oleh organisasi yang mempersiapkan metode uji mikrobiologi yang
diterapkan untuk pangan atau pakan. Karena terdapat berbagai macam produk di bidang
aplikasi ini, panduan ini mungkin tidak sesuai dalam setiap rincian untuk produk tertentu dan
untuk beberapa produk lain mungkin perlu menggunakan metode yang berbeda. Namun
demikian, diharapkan bahwa dalam semua kasus setiap usaha sedapat mungkin akan
dilakukan untuk menerapkan panduan ini dan bahwa penyimpangan hanya akan dilakukan
jika benar-benar diperlukan karena alasan teknis.

Jika standar ini selanjutnya dikaji, pertimbangan akan diambil terhadap semua informasi
yang kemudian tersedia, mengenai sejauh mana pedoman telah diikuti dan alasan
penyimpangan dalam kasus pada produk tertentu.
Harmonisasi metode uji tidak dapat dilakukan dengan segera, dan untuk kelompok produk
tertentu, Standar Internasional dan/atau nasional mungkin sudah ada tetapi tidak sesuai
dengan pedoman. Pada kasus dimana Standar Internasional sudah ada untuk produk yang
akan diuji, standar tersebut harus diikuti, tetapi diharapkan ketika standar tersebut ditelaah,
standar akan diubah agar sesuai dengan Standar Internasional ini sehingga yang harus
dipertimbangkan selanjutnya dari panduan ini adalah hanya yang diperlukan untuk alasan
teknis yang mapan.
0.2 Banyak spora, kalau tidak seluruhnya, strain B.cereus mudah bergerminasi pada
permukaan media biakan yang digunakan untuk enumerasi. Dalam banyak kasus
tampaknya tidak diperlukan perlakuan kejutan panas (heat shock) untuk mendorong
germinasi. Kadang-kadang prosedur kejutan panas diperlukan, misalnya untuk penghitungan
jumlah spora atau untuk menghambat pertumbuhan sel-sel bakteri vegetatif. Dalam kasus
tersebut, direkomendasikan memberikan perlakuan panas selama 10 menit pada suhu 80
C.



BSN 2012 iii

H
a
k

C
i
p
t
a

B
a
d
a
n

S
t
a
n
d
a
r
d
i
s
a
s
i

N
a
s
i
o
n
a
l
,

C
o
p
y

s
t
a
n
d
a
r

i
n
i

d
i
b
u
a
t

u
n
t
u
k

p
e
n
a
y
a
n
g
a
n

d
i

w
w
w
.
b
s
n
.
g
o
.
i
d

d
a
n

t
i
d
a
k

u
n
t
u
k

d
i

k
o
m
e
r
s
i
a
l
k
a
n

SNI ISO 7932:2012

Mikrobiologi bahan pangan dan pakan - Metode horizontal untuk enumerasi
Bacillus cereus terduga - Teknik penghitungan koloni pada suhu 30 C



1 Ruang lingkup

Standar ini menetapkan metode horizontal untuk enumerasi Bacillus cereus terduga yang
hidup (viable) dengan teknik penghitungan koloni pada suhu 30 C. Standar ini berlaku
untuk:
- produk yang ditujukan untuk konsumsi manusia dan pakan hewan, serta
- contoh lingkungan di areal produksi pangan dan penanganan pangan.

CATATAN Dalam rangka mendapatkan metode uji praktis, tahap konfirmasi dibatasi pada
pertumbuhan khas pada media agar MYP dan uji hemolisis. Oleh karena itu, istilah "terduga" diberikan
karena tahap konfirmasi tidak dapat digunakan untuk membedakan B. cereus dari spesies Bacillus
lainnya yang terkait erat tetapi kurang umum ditemui, seperti B. anthracis, B. thuringiensis,
B. weihenstephanensis, B. mycoides. Uji motilitas dapat ditambahkan untuk membantu membedakan
B. cereus dari B. anthracis jika dicurigai adanya B. anthracis pada contoh uji.


2 Acuan normatif

Dokumen berikut merupakan bagian tidak terpisahkan untuk penggunaan dokumen ini.
Untuk acuan bertanggal, hanya edisi yang diacu digunakan. Untuk acuan tidak bertanggal,
edisi terakhir dari dokumen acuan (termasuk amandemen) digunakan

ISO 6887-1:1999, Microbiology of food and animal feeding stuffs Preparation of test
samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination Part 1:
General rules for the preparation of the initial suspension and decimal dilutions.
ISO 7218:1996, Microbiology of food and animal feeding stuffs General rules for
microbiological examinations, and Amd.1:2001.
ISO/TS 11133-2:2003, Microbiology of food and animal feeding stuffs Guidelines on
preparation and production of culture media Part 2: Practical guidelines on performance
testing of culture media.


3 Istilah dan definisi

Untuk penggunaan standar ini, digunakan istilah dan definisi sebagai berikut.

3.1
Bacillus cereus terduga
mikroba yang membentuk koloni khas pada permukaan media biakan selektif dan
menunjukan reaksi konfirmasi positif pada kondisi yang ditetapkani dalam standar ini

CATATAN Lihat catatan dalam Pasal 1.






BSN 2012 1 dari 14

H
a
k

C
i
p
t
a

B
a
d
a
n

S
t
a
n
d
a
r
d
i
s
a
s
i

N
a
s
i
o
n
a
l
,

C
o
p
y

s
t
a
n
d
a
r

i
n
i

d
i
b
u
a
t

u
n
t
u
k

p
e
n
a
y
a
n
g
a
n

d
i

w
w
w
.
b
s
n
.
g
o
.
i
d

d
a
n

t
i
d
a
k

u
n
t
u
k

d
i

k
o
m
e
r
s
i
a
l
k
a
n

SNI ISO 7932:2012

4 Prinsip

4.1 Sejumlah tertentu contoh uji yang ditetapikan untuk, jika produk awal cair, atau untuk
suspensi awal, pada produk lain, diinokulasikan pada permukaan media biakan selektif
padat dalam cawan Petri.

Cawan lain disiapkan dengan kondisi yang sama, menggunakan pengenceran desimal
contoh uji atau suspensi awal.

4.2 Cawan diinkubasi dalam kondisi aerobik pada suhu 30 C selama 18 jam sampai
48 jam.

4.3 Jumlah B. cereus per gram atau per mililiter contoh dihitung berdasarkan jumlah koloni
konfirmasi yang diperoleh dari cawan dengan tingkat pengenceran terpilih dan memberikan
hasil signifikan, serta dikonfirmasi sesuai dengan uji yang ditetapkan.


5 Larutan pengencer, media biakan dan pereaksi

Untuk praktek laboratorium terkini , lihat ISO 7218.

CATATAN dapat digunakan pereaksi komersial siap pakai.

5.1 Larutan Pengencer

Lihat ISO 6887-1 dan setiap standar spesifik yang terkait dengan produk yang akan diuji.

5.2 Media agar (lihat [1])

5.2.1 Media basal

5.2.1.1 Komposisi

Beef extract 1,0 g
Enzymatic digest of casein 10,0 g
D-Manitol 10,0 g
Natrium klorida (NaCl) 10,0 g
Phenol red 0,025 g
Agar 12 g sampai 18 g
a

Air 900 mL
a
Tergantung kekuatan gel agar


5.2.1.2 Penyiapan

Larutkan bahan-bahan atau media lengkap dehidrasi (dehydrated complete medium) dalam
air, dan panaskan bila perlu.

Atur pH, jika diperlukan, sehingga sesudah sterilisasi pH media lengkap (5.2.4) menjadi
7,2 0,2 pada suhu 25 C.

Masukkan 90 mL media basal ini ke dalam labu-labu dengan kapasitas yang sesuai.

BSN 2012 2 dari 14

H
a
k

C
i
p
t
a

B
a
d
a
n

S
t
a
n
d
a
r
d
i
s
a
s
i

N
a
s
i
o
n
a
l
,

C
o
p
y

s
t
a
n
d
a
r

i
n
i

d
i
b
u
a
t

u
n
t
u
k

p
e
n
a
y
a
n
g
a
n

d
i

w
w
w
.
b
s
n
.
g
o
.
i
d

d
a
n

t
i
d
a
k

u
n
t
u
k

d
i

k
o
m
e
r
s
i
a
l
k
a
n

SNI ISO 7932:2012

Sterilisasi dalam otoklaf (6.1) yang diatur pada suhu 121 C selama 15 menit.

5.2.2 Larutan Polymyxin B

5.2.2.1 Komposisi

Polymyxin B sulfate 10
6
IU
Air 100 mL

5.2.2.2 Penyiapan

Larutkan Polymyxin B sulfate dalam air. Sterilkan dengan penyaringan.

5.2.3 Emulsi kuning telur

Gunakan telur ayam segar dengan cangkang utuh. Cuci telur dengan deterjen cair
menggunakan sikat. Bilas dengan air mengalir, celupkan dalam etanol 95 % (berdasarkan
volume) selama 30 detik dan keringkan. Secara aseptis, pecahkan telur dan pisahkan
kuning telur dari putih telur misalnya dengan berulang kali memindahkan kuning telur dari
setengah kulit telur yang satu ke setengah kulit telur lainnya. Masukkan kuning telur dalam
gelas ukur steril dan tambahkan air steril dengan volume empat kali volume kuning telur.
Pindahkan secara aseptik ke dalam labu steril dan campur sampai merata.

Panaskan campuran selama 2 jam dalam penangas air (6.4) yang diatur pada suhu 44 C
hingga 47 C. Biarkan selama 18 jam sampai 24 jam pada suhu 5 C 3 C sampai
terbentuk endapan.

Kumpulkan emulsi supernatan secara aseptis.

Emulsi ini dapat disimpan pada suhu 5 C 3 C selama tidak lebih dari 72 jam.

5.2.4 Media lengkap (MYP agar)

5.2.4.1 Komposisi

Media basal (5.2.1) 90 mL
Larutan Polimiksin B (5.2.2) 1,0 mL
Egg yolk emulsion (5.2.3) 10,0 mL

5.2.4.2 Penyiapan

Lelehkan media basal dan dinginkan dalam penangas air (6.4) yang diatur pada suhu 44 C
hingga 47 C.

Tambahkan bahan lain, campurkan dengan baik pada setiap penambahan.

Dinginkan media lengkap dalam penangas air (6.4) pada suhu 44 C hingga 47 C.

5.2.5 Penyiapan cawan agar

Tuang 15 mL sampai 20 mL media lengkap (5.2.4) ke dalam cawan Petri steril (6.6) dan
biarkan memadat.

Cawan dapat disimpan sebelum pengeringan, pada suhu 5 C 3 C sampai dengan 4 hari.
BSN 2012 3 dari 14

H
a
k

C
i
p
t
a

B
a
d
a
n

S
t
a
n
d
a
r
d
i
s
a
s
i

N
a
s
i
o
n
a
l
,

C
o
p
y

s
t
a
n
d
a
r

i
n
i

d
i
b
u
a
t

u
n
t
u
k

p
e
n
a
y
a
n
g
a
n

d
i

w
w
w
.
b
s
n
.
g
o
.
i
d

d
a
n

t
i
d
a
k

u
n
t
u
k

d
i

k
o
m
e
r
s
i
a
l
k
a
n

SNI ISO 7932:2012

Sesaat sebelum digunakan, keringkan cawan, sebaiknya dengan tutup terbuka dan
permukaan media agar menghadap ke bawah dalam lemari pengering atau inkubator (6.2)
yang diatur antara suhu 37 C dan 55 C sampai permukaan media agar kering.

5.2.6 Pengujian kinerja

Lihat ISO/TS 11133-2:2003, Lampiran B.

5.3 Agar darah domba (Sheep blood agar)

5.3.1 Media basal: Blood agar base No. 2

5.3.1.1 Komposisi

Proteose peptone or equivalent peptone 15 g
Liver hydrolysate 2,5 g
Ekstrak kamir 5 g
Natrium klorida (NaCl) 5 g
Agar 12 g sampai 18 g
a

Air 1 000 mL
a
Tergantung kekuatan gel agar.

5.3.1.2 Penyiapan

Larutkan semua bahan atau media lengkap dehidrasi (dehydrated complete medium) dalam
air dengan cara mendidihkan.

Atur pH jika diperlukan, sehingga sesudah sterilisasi pH media lengkap menjadi 7,0 0,2
pada suhu 25 C.

Masukkan ke dalam labu dengan kapasitas yang sesuai dan sterilisasi dalam otoklaf (6.1)
pada suhu 121 C selama 15 menit.

5.3.2 Defibrinated sheep blood

5.3.2.1 Media lengkap

5.3.2.1.1 Komposisi

Media basal (5.3.1) 100 mL
Defibrinated sheep blood 5 mL sampai 7 mL

5.3.2.1.2 Penyiapan

Setelah pendinginan menjadi suhu 44 C sampai 47 C, tambahkan defibrinated sheep blood
pada media basal (5.3.1). Campur sampai merata.

Tuang sedikitnya porsi 12 mL media lengkap ke dalam cawan Petri steril (6.6) dan biarkan
memadat.




BSN 2012 4 dari 14

H
a
k

C
i
p
t
a

B
a
d
a
n

S
t
a
n
d
a
r
d
i
s
a
s
i

N
a
s
i
o
n
a
l
,

C
o
p
y

s
t
a
n
d
a
r

i
n
i

d
i
b
u
a
t

u
n
t
u
k

p
e
n
a
y
a
n
g
a
n

d
i

w
w
w
.
b
s
n
.
g
o
.
i
d

d
a
n

t
i
d
a
k

u
n
t
u
k

d
i

k
o
m
e
r
s
i
a
l
k
a
n

SNI ISO 7932:2012

6 Peralatan teknis dan alat gelas

CATATAN Peralatan teknis sekali pakai (disposable) dapat digunakan jika memiliki spesifikasi
yang sama dengan peralatan yang dapat dipakai ulang.

Perlengkapan laboratorium mikrobiologi yang umum dan khusus adalah sebagai berikut:

6.1 Peralatan teknis untuk sterilisasi kering (oven) atau sterilisasi basah (otoklaf)

Lihat ISO 7218.

6.2 Lemari pengering atau inkubator, berventilasi dengan aliran udara (convection),
untuk mengeringkan cawan agar, dapat dioperasikan antara suhu 37 C 1 C dan
55 C 1 C.

6.3 Inkubator, mampu beroperasi pada suhu 30 C 1 C.

6.4 Penangas air, dapat dipertahankan pada suhu 44 C hingga 47 C.

6.5 pH meter, dengan ketelitian 0,1 unit pH pada suhu 25 C.

6.6 Cawan Petri, terbuat dari gelas atau plastik dengan diameter 90 mm sampai 100 mm
atau, jika perlu 140 mm.

6.7 Pipet berskala, terkalibrasi hanya untuk pengujian bakteriologis, dengan kapasitas 10
mL dengan skala 0,5 mLdan 1 mL dengan skala 0,1 mL, dengan lubang ujung pipet
berdiameter 2 mm sampai 3 mm.

6.8 Penyebar (jenis stik hoki), terbuat dari batang gelas atau plastik diameter sekitar 3,5
mm dan panjang 20 cm, dibengkokkan dengan sudut rata sekitar 3 cm pada salah satu
ujung, dan ujung lain dipotong halus dengan pemanasan.


7 Pengambilan contoh

Penting bagi laboratorium untuk menerima contoh yang benar-benar mewakili dan tidak
rusak atau berubah selama pengangkutan atau penyimpanan.

Pengambilan contoh bukan bagian dari metode yang dipersyaratkan dalam standar ini. Jika
tidak tersedia standar spesifik yang terkait dengan pengambilan contoh produk yang
bersangkutan, direkomendasikan untuk mendapat kesepakatan dari pihak-pihak terkait.

8 Penyiapan contoh uji

Siapkan contoh uji sesuai dengan standar khusus yang sesuai dengan produk terkait.

Jika tidak tersedia standar spesifik, direkomendasikan untuk mendapat kesepakatan dari
pihak-pihak terkait.





BSN 2012 5 dari 14

H
a
k

C
i
p
t
a

B
a
d
a
n

S
t
a
n
d
a
r
d
i
s
a
s
i

N
a
s
i
o
n
a
l
,

C
o
p
y

s
t
a
n
d
a
r

i
n
i

d
i
b
u
a
t

u
n
t
u
k

p
e
n
a
y
a
n
g
a
n

d
i

w
w
w
.
b
s
n
.
g
o
.
i
d

d
a
n

t
i
d
a
k

u
n
t
u
k

d
i

k
o
m
e
r
s
i
a
l
k
a
n

SNI ISO 7932:2012

9 Prosedur

9.1 Porsi uji, suspensi awal dan pengenceran

Lihat ISO 6887-1 dan standar spesifik yang sesuai dengan produk terkait.

9.2 Inokulasi dan inkubasi

9.2.1 Pindahkan dengan pipet steril (6.7) 0,1 mL contoh uji untuk produk cair atau
0,1 mLsuspensi awal untuk produk lain, masing-masing pada dua media agar (5.2.5). Ulangi
prosedur ini menggunakan pengenceran desimal jika diperlukan.

9.2.2 Ketika produk tertentu diperkirakan mempunyai jumlah B. cereus yang rendah, batas
deteksi dapat ditingkatkan dengan faktor 10, dengan cara memindahkan 1,0 mL contoh uji
untuk produk cair, atau 1,0 mL suspensi awal untuk produk lainnya. Distribusikan 1 mL
inokulum pada permukaan media agar dalam cawan Petri besar (140 mm) atau dalam tiga
cawan kecil (90 mm) menggunakan penyebar steril (6.8). Untuk kedua kasus tersebut,
siapkan duplo dengan menggunakan dua cawan besar atau enam cawan kecil.

9.2.3 Sebarkan inokulum dengan hati-hati secepat mungkin pada permukaan media agar
tanpa menyentuh sisi cawan dengan penyebar (6.8). Gunakan penyebar steril baru untuk
setiap cawan. Biarkan cawan dengan posisi tertutup selama sekitar 15 menit pada suhu
kamar supaya inokulum terserap dalam media agar.

9.2.4 Balikkan cawan yang telah diisiapkan (9.2.3) dan inkubasikan selama 18 jam sampai
24 jam dalam inkubator (6.3) pada suhu 30 C. Jika koloni tidak jelas terlihat, inkubasikan
kembali selama 24 jam sebelum dihitung.

9.3 Enumerasi koloni

Setelah inkubasi (9.2.4), pilih cawan yang mengandung kurang dari 150 koloni, sebaiknya
dari dua pengenceran berturutan.

Hitung koloni B. cereus terduga pada setiap cawan. Koloni yang terduga adalah koloni
besar, berwarna merah muda (menunjukkan fermentasi manitol tidak terjadi, lihat Catatan 1)
dan umumnya dikelilingi oleh zona presipitasi (menunjukkan produksi lecithinase, lihat
Catatan 2).

Jika terdapat kurang dari 15 koloni khas pada cawan yang diinokulasi dengan produk cair
atau pengenceran terendah untuk produk lain, hitung perkiraan jumlah seperti yang
dijelaskan dalam Pasal 10.

CATATAN 1 Jika pada cawan terdapat banyak mikroba yang dapat memfermentasi manitol yang
memproduksi asam, maka warna merah muda khas koloni B. cereus dapat berkurang atau
menghilang seluruhnya.

CATATAN 2 Beberapa strain B. cereus hanya memproduksi lecithinase sedikit atau tidak sama
sekali. Koloni strain ini tidak akan dikelilingi oleh zona presipitasi. Koloni ini juga harus dilakukan
konfirmasi.

Jika inokulum 1,0 mL disebarkan pada tiga cawan (lihat 9.2.2), perlakukan cawan-cawan ini
sebagai satu cawan pada semua prosedur penghitungan berikutnya dan konfirmasi.




BSN 2012 6 dari 14

H
a
k

C
i
p
t
a

B
a
d
a
n

S
t
a
n
d
a
r
d
i
s
a
s
i

N
a
s
i
o
n
a
l
,

C
o
p
y

s
t
a
n
d
a
r

i
n
i

d
i
b
u
a
t

u
n
t
u
k

p
e
n
a
y
a
n
g
a
n

d
i

w
w
w
.
b
s
n
.
g
o
.
i
d

d
a
n

t
i
d
a
k

u
n
t
u
k

d
i

k
o
m
e
r
s
i
a
l
k
a
n

SNI ISO 7932:2012

9.4 Konfirmasi

9.4.1 Pemilihan dan pemurnian koloni untuk konfirmasi

Pilih lima koloni terduga dari setiap cawan menurut 9.3. Jika terdapat kurang dari lima koloni
pada cawan, ambil semua koloni terduga ini. Lakukan konfirmasi koloni ini sebagaimana
ditentukan dalam 9.4.2 dan 9.4.3.

Jika cawan penuh dan tidak mungkin memilih koloni yang terpisah dengan baik, goreskan
lima koloni terduga pada media agar lengkap (5.2.4). Inkubasikan dalam inkubator (6.3)
pada suhu 30 C selama 18 jam sampai 24 jam.

Pilih dari setiap cawan setidaknya satu koloni yang terpisah dengan baik yang berwarna
merah muda. Lakukan konfirmasi koloni ini sebagaimana ditentukan dalam 9.4.2 dan 9.4.3.

9.4.2 Uji hemolisis pada agar darah domba (Sheep blood agar)

Goreskan koloni yang dipilih (9.4.1) pada permukaan media agar darah domba (5.3)
sehingga reaksi hemolisis yang baik dapat diperoleh.

Inkubasikan pada suhu 30 C selama 24 jam 2 jam dan interpretasikan reaksi hemolisis
yang terjadi.

9.4.3 Interpretasi biokimia.

Lihat Tabel 1.

Tabel 1 - Hasil uji

Uji Hasil konfirmasi Bacillus cereus terduga
MYP agar (9.4.1)
Terbentuknya koloni berwarna merah muda yang
dikelilingi zona presipitasi (lihat Catatan 1 pada 9.3)
Hemolisis (9.4.2) Reaksi positif
a

a
Lebar zona hemolisis dapat bervariasi.


10 Pernyataan hasil

10.1 Jumlah koloni B. cereus terduga

Lihat ISO 7218:1996/Amd.1: 2001 untuk perhitungan.

10.2 Tidak ada koloni

Jika dua cawan contoh uji untuk produk cair atau suspensi awal untuk produk lain tidak
mengandung koloni B. cereus terduga, laporkan hasil uji sebagai berikut:
- kurang dari 1 mikroba per mililiter (produk cair);
- kurang dari 1/d mikroba per gram (produk lain), dengan d adalah faktor pengenceran
suspensi awal.




BSN 2012 7 dari 14

H
a
k

C
i
p
t
a

B
a
d
a
n

S
t
a
n
d
a
r
d
i
s
a
s
i

N
a
s
i
o
n
a
l
,

C
o
p
y

s
t
a
n
d
a
r

i
n
i

d
i
b
u
a
t

u
n
t
u
k

p
e
n
a
y
a
n
g
a
n

d
i

w
w
w
.
b
s
n
.
g
o
.
i
d

d
a
n

t
i
d
a
k

u
n
t
u
k

d
i

k
o
m
e
r
s
i
a
l
k
a
n

SNI ISO 7932:2012

10.3 Presisi

10.3.1 Uji banding antar laboratorium

Rincian presisi metode pada uji banding antar laboratorium telah dipublikasikan (lihat [7] dan
[8]) dan diringkas pada Lampiran B. Batas repetabilitas dan reprodusibilitas ditetapkan
menggunakan tiga jenis pangan dengan berbagai tingkat kontaminasi dan bahan acuan.
Nilai yang diperoleh dari uji banding antar laboratorium kemungkinan tidak dapat diterapkan
untuk kisaran konsentrasi dan matriks yang berbeda.

10.3.2 Batas repetabilitas

Perbedaan mutlak antara dua nilai tunggal hasil uji (jumlah B. cereus per gram atau per
mililiter) yang di transformasi-log
10
atau rasio dua hasil uji dari hasil yang lebih tinggi
terhadap hasil yang lebih rendah pada skala normal, diperoleh dengan menggunakan
metode yang sama contoh yang sama, dengan operator yang sama dan menggunakan
peralatan teknis yang sama dalam interval waktu singkat yang layak, akan tidak lebih dari
5 % kasus memberikan hasil lebih besar daripada batas repetabilitas (r).

Sebagai petunjuk umum batas repetabilitas (r), nilai berikut dapat digunakan untuk menguji
contoh pangan secara umum:
r = 0,29 (dinyatakan sebagai perbedaan antara hasil uji yang ditransformasi-log
10
, atau
r = 2,0 (dinyatakan sebagai rasio antara hasil uji).

Untuk bahan acuan (lihat [4]), nilai berikut dapat digunakan:
r = 0,12 (dinyatakan sebagai perbedaan antara hasil uji yang ditransformasi-log
10
, atau
r = 1,3 (dinyatakan sebagai rasio antara hasil uji).


CONTOH Hasil uji pertama ditemukan 10 000 atau 1,0 10
4
B. cereus per gram produk
pangan. Pada kondisi repetabilitas, rasio antara hasil uji pertama dan kedua sebaiknya tidak
lebih besar dari 2,0. Sehingga, hasil uji kedua sebaiknya antara 5 000 (= 10 000/2,0) dan
20 000 (10 000 2,0) B. cereus per gram.

10.3.3 Batas reprodusibilitas

Perbedaan mutlak antara dua hasil uji nilai tunggal (transformasi-log
10
) untuk jumlah B.
cereus per gram atau per mililiter atau atau perbandingan dua hasil uji pada skala normal
dari yang lebih tinggi ke yang lebih rendah, diperoleh dengan menggunakan metode yang
sama pada contoh yang sama dalam laboratorium yang berbeda dengan operator yang
berbeda dan menggunakan peralatan yang berbeda, akan tidak lebih dari 5 % kasus yang
memberikan hasil lebih besar daripada batas reprodusibilitas(R).

Sebagai indikasi umum batas reprodusibilitas (R), nilai berikut dapat digunakan untuk
menguji contoh pangan secara umum:
R = 0,42 (dinyatakan sebagai perbedaan antara hasil uji yang ditransformasi-log
10
), atau
R = 2,6 (dinyatakan sebagai rasio antara hasil uji).

Untuk bahan acuan (lihat [4]), nilai berikut dapat digunakan:
R = 0,23 (dinyatakan sebagai perbedaan antara hasil uji yang ditransformasi-log
10
), atau
R = 1,7 (dinyatakan sebagai rasio antara hasil uji).
BSN 2012 8 dari 14

H
a
k

C
i
p
t
a

B
a
d
a
n

S
t
a
n
d
a
r
d
i
s
a
s
i

N
a
s
i
o
n
a
l
,

C
o
p
y

s
t
a
n
d
a
r

i
n
i

d
i
b
u
a
t

u
n
t
u
k

p
e
n
a
y
a
n
g
a
n

d
i

w
w
w
.
b
s
n
.
g
o
.
i
d

d
a
n

t
i
d
a
k

u
n
t
u
k

d
i

k
o
m
e
r
s
i
a
l
k
a
n

SNI ISO 7932:2012


CONTOH 1 Hasil uji oleh laboratorium pertama menunjukkan 10 000 atau 1,0 10
4

B. cereus per gram produk pangan. Pada kondisi reprodusibilitas yang diulang, rasio antara
hasil uji oleh laboratorium pertama dan kedua sebaiknya tidak lebih besar dari 2,6.
Sehingga, hasil uji oleh laboratorium kedua sebaiknya antara 3800 (= 10 000/2,6) dan
26 000 (10 000 2,6) B. cereus per gram.

CONTOH 2 Suatu laboratorium ingin mengetahui tingkat maksimum yang boleh ditemukan
dan masih sesuai dengan batas yang telah ditetapkan (misalnya batas 100 000 atau 5 dalam
log
10
). Untuk ini, nilai R (pada skala log) harus dikalikan dengan faktor 0,59. Nilai ini adalah
0,25 (0,42 0,59) sebagai perbedaan antara hasil uji transformasi-log
10
atau 1,78 (10
0,25
)
sebagai rasio antara hasil-hasil uji. Sehingga menghasilkan log
10
5,25 (log
10
5 + log
10
0,25)
atau 178 000 (100 000 1,78) menunjukkan ketidaksesuain terhadap batas reprodusibilitas.
Faktor 0,59 mencerminkan kenyataan bahwa uji dengan kisaran 95 % satu sisi digunakan
untuk menguji apakah batas tersebut terlampaui. Faktor 0,59 diperoleh dari rumus berikut:

1,64
0,59 =
1,96 2


11 Laporan hasil uji

Laporan hasil uji harus menyatakan:
a) semua informasi yang diperlukan dalam identifikasi contoh secara lengkap;
b) metode pengambilan contoh yang digunakan, jika diketahui;
c) metode uji yang digunakan, dengan mengacu pada standar ini;
d) suhu inkubasi;
e) semua rincian tahapan pengujian yang tidak ditentukan dalam standar ini, atau dianggap
sebagai opsional, bersama dengan rincian setiap kejadian yang mungkin mempengaruhi
hasil;
f) hasil uji yang diperoleh, atau jika repetabilitas telah diperiksa, hasil akhir yang dikutip.
BSN 2012 9 dari 14

H
a
k

C
i
p
t
a

B
a
d
a
n

S
t
a
n
d
a
r
d
i
s
a
s
i

N
a
s
i
o
n
a
l
,

C
o
p
y

s
t
a
n
d
a
r

i
n
i

d
i
b
u
a
t

u
n
t
u
k

p
e
n
a
y
a
n
g
a
n

d
i

w
w
w
.
b
s
n
.
g
o
.
i
d

d
a
n

t
i
d
a
k

u
n
t
u
k

d
i

k
o
m
e
r
s
i
a
l
k
a
n

SNI ISO 7932:2012

Lampiran A
(normatif)
Batas kepercayaan dalam estimasi jumlah koloni yang rendah



Batas-batas kepercayaan pada tingkat 95 % untuk estimasi jumlah koloni yang rendah,
ketika jumlah koloni pada cawan ditemukan kurang dari 15, diberikan dalam Tabel A.1.

Tabel A.1

Batas kepercayaan pada tingkat 95 %
Jumlah koloni
Bawah Atas
1 < 1 2
2 < 1 4
3 < 1 5
4 1 6
5 2 9
6 2 10
7 2 12
8 3 13
9 4 14
10 4 16
11 5 18
12 6 19
13 7 20
14 7 21
15 8 23
BSN 2012 10 dari 14

H
a
k

C
i
p
t
a

B
a
d
a
n

S
t
a
n
d
a
r
d
i
s
a
s
i

N
a
s
i
o
n
a
l
,

C
o
p
y

s
t
a
n
d
a
r

i
n
i

d
i
b
u
a
t

u
n
t
u
k

p
e
n
a
y
a
n
g
a
n

d
i

w
w
w
.
b
s
n
.
g
o
.
i
d

d
a
n

t
i
d
a
k

u
n
t
u
k

d
i

k
o
m
e
r
s
i
a
l
k
a
n

SNI ISO 7932:2012

Lampiran B
(informatif)
Hasil uji banding antar laboratorium



Uji kolaborasi internasional yang melibatkan 20 laboratorium di 17 negara telah dilakukan
pada produk keju, daging, bubuk kentang kering dan bahan acuan. Contoh pangan tersebut
masing-masing diuji pada tiga tingkat kontaminasi yang berbeda. Uji diselenggarakan pada
bulan Oktober 1997 oleh National Institute of Public Health (RIVM) sebagai bagian dari
proyek Eropa SMT4 CT-96 2098 yang didanai oleh Komisi Eropa.

Metode yang disampaikan pada sidang antar laboratorium adalah ISO 7932:1993 termasuk
uji konfirmasi pada media agar MYP, media glukosa agar, media VP dan media nitrat.

Parameter berikut dihitung menurut ISO 5725-1:1994 [5], untuk memberikan data presisi
yang ditunjukkan pada Tabel B.1 sampai B.4.

Tabel B.1 - Hasil analisis data yang diperoleh dengan contoh kentang kering bubuk

Contoh (tingkat kontaminasi)
Parameter
bubuk kentang
kering
(tingkat rendah)
bubuk kentang
kering
(tingkat medium)
bubuk kentang
kering
(tingkat tinggi)
Jumlah contoh 2 2 2
Jumlah laboratorium setelah outlier dieliminasi 18 18 18
Jumlah outliers 0 0 0
Jumlah contoh yang diterima (accepted) 36 35 36
Nilai rerata a (log
10
koloni/g) 3,3 4,7 6,1
Standar deviasi repetabilitas s
r
(log
10
koloni/g) 0,09 0,05 0,10
Standar deviasi relatif repetabilitas (%) 2,63 1,16 1,60
Batas repetabilitas r:

sebagai perbedaan pada skala log
10
(log
10
koloni/g) 0,24 0,15 0,27
sebagai ratio pada skala normal (koloni/g) 1,7 1,4 1,9
Standar deviasi reprodusibilitas sR (log
10
koloni/g) 0,11 0,09 0,10
Standar deviasi relatif reprodusibilitas (%) 3,24 1,98 1,71
Batas reprodusibilitas R:

sebagai perbedaan pada skala log
10
(log
10
koloni/g) 0,30 0,26 0,29
sebagai ratio pada skala normal (koloni/g) 2,0 1,8 2,0





BSN 2012 11 dari 14

H
a
k

C
i
p
t
a

B
a
d
a
n

S
t
a
n
d
a
r
d
i
s
a
s
i

N
a
s
i
o
n
a
l
,

C
o
p
y

s
t
a
n
d
a
r

i
n
i

d
i
b
u
a
t

u
n
t
u
k

p
e
n
a
y
a
n
g
a
n

d
i

w
w
w
.
b
s
n
.
g
o
.
i
d

d
a
n

t
i
d
a
k

u
n
t
u
k

d
i

k
o
m
e
r
s
i
a
l
k
a
n

SNI ISO 7932:2012

Tabel B.2 - Hasil analisis data yang diperoleh dengan contoh daging giling

Contoh (tingkat kontaminasi)
Parameter
daging giling daging giling daging giling

(tingkat rendah) (tingkat medium) (tingkat tinggi)
Jumlah contoh 2 2 2
Jumlah laboratorium setelah outlier dieliminasi 18 18 18
Jumlah outliers 0 0 0
Jumlah contoh yang diterima (accepted) 36 36 36
Nilai rerata a (log
10
koloni/g) 3,1 3,9 4,9
Standar deviasi repetabilitas sr (log
10
koloni/g)
0,13 0,14 0,08
Standar deviasi relatif repetabilitas (%) 4,15 3,49 1,56
Batas repetabilitas r:
sebagai perbedaan pada skala log
10
(log
10
koloni/g)
0,36 0,38 0,21
sebagai ratio pada skala normal (koloni/g) 2,3 2,4 1,6
Standar deviasi reprodusibilitas sR (log
10
koloni/g)
0,15 0,14 0,11
Standar deviasi relatif reprodusibilitas (%) 4,72 3,49 2,30
Batas reprodusibilitas R:
sebagai perbedaan pada skala log
10
(log
10
koloni/g)
0,41 0,38 0,31
sebagai ratio pada skala normal (koloni/g) 2,5 2,4 2,1


Tabel B.3 - Hasil analisis data yang diperoleh dengan contoh keju segar

Contoh (tingkat kontaminasi)
Parameter Keju segar
Keju segar Keju segar

(tingkat rendah) (tingkat medium) (tingkat tinggi)
Jumlah contoh 2 2 2
Jumlah laboratorium setelah outlier dieliminasi 12 12 12
Jumlah outliers 0 0 0
Jumlah contoh yang diterima (accepted) 23 23 23
Nilai rerata a (log
10
koloni/g) 3,4 4,1 6,2
Standar deviasi repetabilitas sr (log
10
koloni/g)
0,05 0,06 0,12
Standar deviasi relatif repetabilitas (%) 1,50 1,57 1,95
Batas repetabilitas r:
sebagai perbedaan pada skala log
10
(log
10
koloni/g)
0,14 0,18 0,33
sebagai ratio pada skala normal (koloni/g) 1,4 1,5 2,2
Standar deviasi reprodusibilitas sR (log
10
koloni/g)
0,08 0,10 0,17
Standar deviasi relatif reprodusibilitas (%) 2,28 2,38 2,78
Batas reprodusibilitas R:
sebagai perbedaan pada skala log
10
(log
10
koloni/g)
0,22 0,27 0,48
sebagai ratio pada skala normal (koloni/g) 1,6 1,9 3,0
BSN 2012 12 dari 14

H
a
k

C
i
p
t
a

B
a
d
a
n

S
t
a
n
d
a
r
d
i
s
a
s
i

N
a
s
i
o
n
a
l
,

C
o
p
y

s
t
a
n
d
a
r

i
n
i

d
i
b
u
a
t

u
n
t
u
k

p
e
n
a
y
a
n
g
a
n

d
i

w
w
w
.
b
s
n
.
g
o
.
i
d

d
a
n

t
i
d
a
k

u
n
t
u
k

d
i

k
o
m
e
r
s
i
a
l
k
a
n

SNI ISO 7932:2012

Tabel B.4 Hasil analisis data yang diperoleh dengan bahan acuan

Parameter Bahan acuan
Jumlah contoh 2
Jumlah laboratorium setelah outlier dieliminasi 18
Jumlah outliers 0
Jumlah contoh yang diterima (accepted) 36
Nilai rerata a (log
10
koloni/kapsul) 3,9
Standar deviasi repetabilitas sr (log
10
koloni/kapsul)
0,04
Standar deviasi relatif repetabilitas (%) 1,12
Batas repetabilitas r:
sebagai perbedaan pada skala log
10
(log
10
koloni/ kapsul)
0,12
sebagai ratio pada skala normal (koloni/ kapsul) 1,3
Standar deviasi reprodusibilitas sR (log
10
koloni/ kapsul)
0,08
Standar deviasi relatif reprodusibilitas (%) 2,16
Batas reprodusibilitas R:
sebagai perbedaan pada skala log
10
(log
10
koloni/ kapsul)
0,23
sebagai ratio pada skala normal (koloni/kapsul) 1,7
BSN 2012 13 dari 14

H
a
k

C
i
p
t
a

B
a
d
a
n

S
t
a
n
d
a
r
d
i
s
a
s
i

N
a
s
i
o
n
a
l
,

C
o
p
y

s
t
a
n
d
a
r

i
n
i

d
i
b
u
a
t

u
n
t
u
k

p
e
n
a
y
a
n
g
a
n

d
i

w
w
w
.
b
s
n
.
g
o
.
i
d

d
a
n

t
i
d
a
k

u
n
t
u
k

d
i

k
o
m
e
r
s
i
a
l
k
a
n

SNI ISO 7932:2012

Bibliografi



[1] MOSSEL, D.A.A., KOOPMAN, M.J. and JONGERIUS, E. Appl. Microbiol., 15, 1967, pp.
650-653
[2] ICMSF. Microorganisms in foods, Vol. 1, 2nd edn., University of Toronto Press, 1978
[3] COWELL and MORISETTI J. Sci. Fd. Agric., 20, 1969, p. 573
[4] IN 'T VELD, P.H., SOENTORO, P.S.S. and NOTERMANS, S.H.W. I. J. Food Microbiol.,
20, 1993, pp. 23-36
[5] ISO 5725-1:1994, Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and
results Part 1: General principles and definitions
[6] ISO 5725-2:1994, Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and
results Part 2: Basic method for the determination of repeatability and reprodusibilitas
of a standard measurement method
[7] SCHULTEN, S.M., VAN de LUSTGRAAF, B.E.B., NAGELKERKE, N.J.D. and IN 'T
VELD, P.H. Report No. 286555001, National Institute of Public Health and the
Environment, Bilthoven, The Netherlands, 1998
[8] SCHULTEN, S.M., IN 'T VELD, P.H., NAGELKERKE, N.J.D., SCOTTER, S., DE
BUYSER, M.L., ROLLIER, P. and LAHELLEC, C. I. J. Food Microbiology, 57, 2000, pp.
53-61
BSN 2012 14 dari 14