Validasi & Verifikasi

Metode Analisis Salmonella

-LABMANIA INDONESIA-
105 menit
Memahami konsep validasi dan verifikasi

Memahami prinsip pemilihan metode

Memahami metode analisis Salmonella

Memahami cara verifikasi metode analisis

Salmonella
Guidance Notes C&B AND ENV 002 Method
Validation of Microbiological Methods - Sacsinglas

ISO/IEC 17025 : 2017

ISO 6579-1-2017
Kesalahan Pemilihan Metode

Metode tidak
tertelusur

Tidak mutakhir

Belum divalidasi
atau diverifikasi

Tidak konsisten
Validasi Metode

Definisi

Konfirmasi melalui pengujian dan pengadaan bukti yang

objektif bahwa metode tersebut telah memenuhi
persyaratan yang telah ditentukan
Verifikasi Metode

Definisi

Konfirmasi melalui pengujian dan pengadaan bukti yang obyektif bahwa

laboratorium mampu menggunakan metode analisis baku/standar pada
kondisi nyata di laboratoriumnya melalui pemenuhan persyaratan yang
ditentukan oleh metode
 MENGAPA METODE STANDAR
HARUS DIVERIFIKASI???

Menunjukkan bahwa pengujian

dilakukan dengan benar
(memenuhi persyaratan tertentu)

Mengetahui unjuk kerja analis

dalam melakukan pengujian
Mengetahui masalah dengan metode tersebut
yang timbul dalam
menerapkan metode tersebut
Meyakinkan bahwa metode
tersebut dapat diterapkan terhadap
jenis sampel yang diuji
STUDI KASUS
ISO 6579-1
 Menggunakan peralatan yang
1 terkalibrasi

Dilakukan oleh personil yang

Persyaratan Validasi 2 kompeten
dan Verifikasi Metode
Media/Reagent yang digunakan
3 sesuai spesifikasinya

Kondisi lingkungan memadai

4
 Autoclave

Pastikan autoclave dikalibrasi dan dilakukan

pengecekan efektivitas sterilisasi menggunakan
biological indicator
Personil Kompeten

Pastikan personil telah teruji kompetensinya.

Uji Kompetensi dapat dilakukan melalui uji
blind sample menggunakan CRM kultur
bakteri
Media Berkualitas

Selain media yang digunakan

sesuai spesifikasinya, pastikan juga
media mikrobiologi telah dilakukan
pengujian kinerja (GPT) dengan
menggunakan kultur bakteri
standar yang tertelusur (CRM)
Enviromental Monitoring

Pemantauan mikrobiologi lingkungan harus

mencerminkan fasilitas yang digunakan
(ruangan) dan mencakup kombinasi metode
pengambilan sampel udara dan permukaan
yang sesuai dengan fasilitas
Enviromental Monitoring

Pemantauan mikrobiologi bisa

dilakukan dengan :
1. active air sampling;
2.settle (exposure) plates;
Enviromental
Monitoring

Pemantauan lingkungan mikroba dari zona steril, uji sterilitas harus

dilakukan selama setiap analisa di bawah kondisi operasional pengujian.
TAHAPAN VALIDASI & VERIFIKASI METODE

Memilih Organisme Uji

1
Pemilihan Organisme Uji
CRM - CULTURE BACTERIA
COA CRM CULTURE
BACTERIA
TAHAPAN VALIDASI & VERIFIKASI METODE

Memilih Organisme Uji

1
Memilih matriks sample
2
 Melakukan pengujian sesuai
prosedur 3

4
Interpretasi hasil
PENGUJIAN SALMONELLA
ISO 6579-1-2017
 ISO 6579-1-2017

Ruang Lingkup

Standar ini berlaku untuk produk yang ditujukan untuk konsumsi manusia dan pakan hewan;
Sampel Lingkungan di bidang produksi pangan dan penanganan pangan;
Sampel dari tahap produksi primer seperti kotoran hewan, debu dan usap/swab.
ISO 6579-1-2017

Prinsip Pengujian
Deteksi Salmonella dilakukan dengan empat tahap :
1. Pengayaan dalam media cair non selektif
2. Pengayaan pada / dalam media selektif
3. Penumbuhan pada selektif padat
4. Konfirmasi
 PREPARASI ALAT & BAHAN METODE UJI SALMONELLA
PERALATAN BAHAN

Tabung reaksi ulir Ose/Ose disposable Waterbath BPW

RVS broth atau MSRV Agar
MKTTn broth
XLD Agar
Nutrient Agar
TSI Agar
Rak tabung Mikropipet + pipet tips
Urea Agar
L-Lysine decarboxylation medium (LDC)
β-galactosidase reagent
Medium and reagent for indole reaction
Saline solution
Inkubator Cawan petri Wadah sampel Antisera
 Pra-Pengayaan Sampel + Buffered peptone water (BPW): pengenceran 10 kali, Prosedur Uji
18 jam ± 2 jam pada suhu 340C -380C

0,1 ml biakan + 10 ml RVS broth atau

1 ml biakan + 10 ml MKTTn broth, 24
Pengayaan selektif MSRV agar, 24 jam ± 3 jam pada suhu
jam ± 3 jam pada suhu 37 0 C ± 10C
41,50 C ± 10C

Pertumbuhan XLD Agar

selektif 24 jam ± 3 jam pada suhu 37 0 C ± 10C + agar
isolasi kedua

Uji setidaknya 1 koloni khas atau terduga,

jika negatif, uji 4 koloni tambahan yang
sudah ditandai
Konfirmasi

Agar non-selektif (misalnya NA)

24 jam ±3 jam pada suhu 340C-380C

Konfirmasi Biokimia Konfirmasi serologi

Pernyataan Hasil
 Parameter 1 Sensitivitas
Verifikasi Metode
Salmonella
2 Spesifisitas
SENSITIFITAS

Definisi

Kemampuan metode dalam memberikan hasil positif terhadap sampel

presumtif positif
 SPESIFISITAS

Definisi

Kemampuan metode dalam memberikan hasil negatif terhadap sampel

presumtif negatif
 Siapkan sampel sebanyak 15 sampel
1

Buat konsentrasi kontaminan yang

Sensitifitas 2 berbeda (tanpa spike, level rendah

& Selektifitas
dan tinggi)

Analisis sampel sesuai prosedur pada

3 metode yang dipilih

4 Catat hasil dari setiap uji penduga dan

konfirmasi
 Apabila hasil uji penduga positif, tetapi
5 uji konfirmasi positif maka disimpulkan
sebagai True Positive

Apabila hasil uji penduga negatif,

Sensitifitas 6 tetapi uji konfirmasi positif maka

& Selektifitas
disimpulkan sebagai False Negative

Apabila hasil uji penduga negatif,

7 tetapi uji konfirmasi negatif maka
disimpulkan sebagai True Negative

Apabila hasil uji penduga positif, tetapi

8 uji konfirmasi negatif maka disimpulkan
sebagai False Positive
 Sensitifitas & Spesifisitas
Presumtive
Confirmed
Positive Negative
Positive A B
(Positive) (False Negative)
Negative C D
(False Positive) (Negative)

% Sensitifitas = A/(A+B) x 100 Result according to International

interlaboratory studies in ISO 6579-
% Spesifisitas = D/(C+D) x 100 1:2017 standard :
Specificity 100%
Sensitivity 94,4%
 Studi Kasus
Laboratorium XYZ memilih metode standar Salmonella menggunakan ISO 6579-1-
2017. Selanjutnya laboratorium sebelum menggunakan metode tersebut,
laboratorium memastikan melalui verifikasi metode apakah metode tersebut dapat
digunakan di laboratorium.

Berdasarkan hasil verifikasi metode. Tentukan berapa nilai sensitivitas dan

spesifisitas berdasarkan data pada tabel berikut ini ??
Studi Kasus
THANK YOU