Pengecatan Giemsa

Hal hal yang perlu diperhatikan pada pembuatan slide :

Syarat kaca sediaan :

Bersih tidak berdebu dan bebas lemak atau tidak mengandung alkohol.
Jernih tidak bergores dan tidak berjamur.
Tidak buram atau kusam.
Ketebalan kaca sediaan antara 1.1 1.3 mm.
*Yang terbaik menggunakan object glass yang baru

Beberapa hal yang harus diperhatikan dalam penaganan reagen stock :

Giemsa stock disimpan di dalam wadah berwarna gelap dan hindarkan dari sinar matahari
langsung.
Giemsa stock tidak boleh dikocok atau diaduk.
Larutan Giemsa stock yang sudah tercampur dengan larutan buffer jangan dimasukan kembali
kedalam giemsa stock.

Menguji mutu giemsa :

Melakukan pewarnaan pada 1-2 SD hasil sesuai dengan std jika baik, giemsa bisa
digunakan.
Menggunakan kertas Whatman No.2, teteskan 1 -2 tetes giemsa stock 3-4 tetes methyl
alkohol absolute terbentuk 3 lapisan lingkaran. Yaitu lingkaran biru, cincin ungu dan
lingkaran tipis berwarna merah.

Pewarnaan giemsa :

Sediaan darah tipis yang sudah kering difiksasi dengan methanol

Letakan di atas rak pengecatan.
Siapkan larutan giemsa 3% (untuk pewarnaan lambat) atau 10% (untuk pewarnaan cepat)
Tuangkan larutan giemsa diatas sediaan darah tipis secara merata dan diamkan selama 30-45
menit
Cuci sediaan darah tipis dengan air mengalir secara perlahan hingga pewarna giemsa
terbuang dari permukaan sediaan. Kemudian keringkan
Sediaan darah siap dibaca.

Pengecatan
Giemsa
Pembuatan giemsa 3%

Untuk pembuatan giemsa 3% dengan perbandingan 0,3 ml Giemsa : 9,7ml Aquades

Dengan cara dipipet larutan giemsa sebanyak 0,3 ml ditambah dengan 9,7 ml
aquades.
Untuk Cito pembuatan Giemsa 10% dengan perbandingan 1 : 9
Dengan cara dipipet 1 ml larutan giemsa stock dtitambahkan dengan 9 ml larutan
aquades.
Pengecatan dilakukan selama 30 45 menit dan untuk Cito 10 15 menit

Gram
Cara kerja :
Buatlah preparat dari bahan yang akan diperiksa.
Difiksasi di atas api bunsen selama beberapa saat, kemudian tunggu hingga dingin.
Kemudian tetesi dengan larutan gram A secara merata (gentian violet) selama 30 detik
Bilas dengan air mengalir.
Tiriskan. Kemudian tetesi dengan larutan gram B secara merata(lugol) selama 30 detik.
Bilas dengan air mengalir.
Tiriskan. Kemudian tetesi dengan larutan gram C secara merata (alkohol 70%) hingga warna
preparat tidak luntur lagi.
Bilas dengan air mengalir.
Tiriskan. Kemudian tetesi dengan larutan gram D secara merata (Fuchsin) selama 60 detik.
Bilas dengan air mengalir.
Tiriskan dan keringkan dengan cara di angin anginkan.
Periksa preparat dengan mikroskop.
Hasil Pewarnaan :
Gram Positif : Berwarna Biru
Gram negatif : berwarna merah

Pengecatan BTA

Cara kerja :

1. Tuangkan larutan Zhiel Neelsen A (carbol fuchsin 3%) diatas apusan sampai tertutp
semua bagian. Panaskan dengan nyala api spirtus sampai keluar uap ( janagan sampai
gosong/ terlalu kering). Kemudian diamkan hingga dingin selama kurang lebih 5 menit.
2. Bilas dengan air mengalir.
3. Berihkan sisa pewarna dengan larutan Zhiel Neelson B (asam alkohol) hingga sisa cat
menghilang.
4. Bilas dengan air mengalir.
5. Tuangkan larutan Zhiel Neelson C (methylen blue 0,3%) hingga menutupi permukaan
preparat diamkan selama 30 detik.
6. Cuci dengan air mengalir dan dikeringkan pada suhu kamar.
Keterangan Hasil : Hasil (BTA) Basil Tahan Asam berwarna Merah. Hasil pemeriksaan
berdasarkan IUAT dapat digolongkan sebagai :

Negatif (-) :0/100 lapangan pandang.

Positif 1 (+) :10-99/100 lapangan pandang.
Positif 2 (++)
:1-10/ 1 lapangan pandang.
Positif 3 (+++) :>10/ 1 lapangan pandang.