MAKALAH INDIVIDU KIMIA HASIL PERTANIAN

EVALUASI AKTIFITAS ANTIOKSIDAN MOLASE DELIMA DENGAN

METODE 2,2-Diphenyll-pikrilhidrazil (DPPH)

Oleh:

1. RIZKI RENTISIA MUKTI

2. STEFI CALISTA
3. SISNI SIPAYUNG
4. BUDI
5. NILDA KARTIKA
6. NICO WARDANA

PROGRAM STUDI TEKNOLOGI HASIL PERTANIAN

JURUSAN TEKNOLOGI PERTANIAN
FAKULTAS PERTANIAN
UNIVERSITAS RIAU
2016
 I. PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Dalam beberapa tahun terakhir, kepentingan ilmiah telah difokuskan pada
pemahaman mengenai mekanisme aplikasi obat tradisional berdasarkan produk
pangan dan makanan fungsional yang bernutrisi. Buah delima (Punica granatum L.),
salah satu buah-buahan tertua yang dapat dimakan dan tumbuh luas di banyak negara
tropis dan negara-negara subtropis yang telah mempertimbangkan kesehatan saat
mempromosikan makanan. Buah ini telah menonjol di semua agama-agama besar
dunia dan telah digunakan untuk pengobatan berbagai penyakit. Kandungan kimia
yang unik dari pohon delima telah menghasilkan banyak studi yang telah dilakukan
untuk mengevaluasi efektivitas kerja buah ini. Pentingnya delima sebagai tanaman
obat tradisional dalam penelitian ilmiah, mengakibatkan permintaan pasar dan
produksi produk delima menunjukkan peningkatan yang cukup besar. Senyawa-
senyawa di setiap bagian buah telah terbukti memiliki efek pencegahan dan
pelemahan terhadap kegiatan berbagai penyakit kronis dan kesehatan yang
mengancam seperti kanker prostat, aterosklerosis dan penyakit kardiovaskular,
oksidasi kepadatan rendah lipoprotein (LDL), high density lipoprotein (HDL) dan
kolesterol, diabetes tipe 2, hipertensi, arthritis, anemia dan penyakit Alzheimer
Komposisi kimia dari buah delima tergantung pada kultivar, daerah berkembang dan
iklim, tahap kematangan buah , praktek-praktek budaya dan sistem manufaktur .
Bagian yang dapat dimakan dari buah delima terdiri dari 40% selaput
pembungkus biji dan 10% biji. Jus arils/selaput pembungkus biji (jus delima) terdiri
dari 85% air, 10% total gula (glukosa, sukrosa, dan fruktosa), dan 1,5% pektin, asam
organik (sitrat, malat, tartarat, suksinat, fumarat, asam askorbat), asam lemak (Yaitu
asam linoleat terkonjugasi, asam linoleat, asam punicic dan asam eleostearic) dan
asam amino (misalnya prolin, valin, dan metionin) dan senyawa bioaktif (fenolat dan
flavonoid). Bijinya merupakan sumber yang kaya akan total lipid; dan minyak biji
delima terdiri dari 12% sampai 20% dari total berat biji. Asam lemak dominan dalam
minyak biji 9,11,13- octadeca-trienoic asam (acid punicic), sebuah linolenat
terkonjugasi Karakteristik asam dari biji delima, dengan isi antara 3523 dan 10.586
mg 100 g-1 biji [21] - [27]
Seperti yang kita tahu bahwa bukti menunjukkan efek yang menguntungkan
bagi kesehatan dari buah-buahan dan sayuran dalam pencegahan penyakit adalah
karena senyawa bioaktif seperti asam fenolik, flavonoid, tanin dan sifat antioksidan.
Antioksidan adalah senyawa yang memiliki kemampuan untuk menangkap radikal
dan melindungi tubuh manusia dari stres. Tingkat antioksidan dalam jus delima lebih
tinggi daripada yang ditemukan di banyak jus buah, seperti blueberry, cranberry, dan
oranye. Dalam beberapa penelitian menunjukkan bahwa jus delima dan biji ekstrak
memiliki 2-3 kali lipat lebih banyak kapasitas in vitro antioksidan dari anggur merah
atau teh hijau. Ellagitannins, terutama punicalagins, diketahui lebih dari 50% aktivitas
antioksidan dari buah delima bertanggungjawab terhadap kesehatan.
Dari uraian di atas peneliti tertarik untuk mengevaluasi aktifitas antioksidan
dari buah Delima Molase (Punica granatum L) menggunakan metode DPPH. Metode
peredaman radikal bebas DPPH didasarkan pada reduksi dari larutan methanol
radikal bebas DPPH yang berwarna oleh penghambatan radikal bebas. Ketika larutan
DPPH yang berwarna ungu bertemu dengan bahan pendonor elektron maka DPPH
akan tereduksi, menyebabkan warna ungu akan memudar dan digantikan warna
kuning yang berasal dari gugus pikril.

1.2 Tujuan Penelitian

Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengevalusi aktifitas antiksidan pada
buah delima
 II. BAHAN DAN METODE

2.1 Bahan
Sampel buah delima molase dibeli dari pasar lokal di Bursa. Semua bahan
kimia untuk analytical kelas reagen diperoleh dari sumber-sumber berikut: 2,2-
diphenyl-1-pikrilhidrazil (DPPH), reagen Folin-Ciocalteu, Na2CO3; asam galat dan
etanol.

2.2 Metode
2.2.1. Analisis Kimia PM
Larutkan dalam air isi bahan kering (brix) dari sampel dinyatakan sebagai g
100g-1 dengan menggunakan Abbe refraktometer. Viskositas diukur dalam mPa.s
menggunakan Viscosimeter rotary. Keasaman total ditentukan dari asam sitrat,
dengan titrasi sampel terhadap larutan NaOH yang diketahui normalitas. pH diukur
secara potensiometri oleh Nel-pH 890 Model pH meter. Invert (membalikan atau
kebalikian ) dan total gula yang ditentukan dengan metode Luff Schoorl.

2.2.2. Analisis Jumlah fenolik Isi PM

Sampel diencerkan sampai 14 brix dan 1 mililiter sampel dan 10 mL larutan
ekstraksi (Methanol untuk TPC, ethanol untuk AC) dicampur dan dikocok pada 20
C selama 10 menit. Kemudian suspensi disentrifugasi pada 3 500 rpm selama 10
menit dan disaring
Kandungan fenol total molase delima ditentukan secara spektrofotometri pada
725 nm dimodifikasi dengan metode kolorimetri. Setelah menambahkan 0,1 mL
ekstrak, 2,3 mL air destilasi, 0,15 mL reagen Folin-Ciocalteu dan vortexed selama 15
detik. Setelah 5 menit 0,30 mL Na2CO3 35%ditambahkan dan dicampur lalu
didiamkan pada suhu kamar dalam keadaan gelap selama 120 menit. Sampel diukur
725 nm. Sebuah standar kurva kalibrasi diplot menggunakan asam galat.

2.2.3. Pengukuran Aktivitas Antioksidan oleh DPPH

 Aktivitas antioksidan dari molase delima yang ditentukan sesuai dengan
metode yang dirancang. 0,1 mL disiapkan supernatan dan 3,9 mL DPPH (6 10- 5
M) lalu dicampur. Campuran digoyang atau dihomogenkan dan pada suhu kamar
didiamkan selama 30 menit sebelum penurunan absorbansi diukur pada 515 nm.
aktivitas antioksidan ditentukan sebagai persentase DPPH menurunkan menggunakan
persamaan:
Penghambatan% = (Abst = 0 -Abst = 30 menit) / Abst = 0 100

Abs t = 0 adalah absorbansi DPPH pada waktu 0.

Abst = 30 menit adalah absorbansi DPPH setelah 30 menit dari inkubasi.
Inhibisi (%) dihitung menurut trolox kurva kalibrasi sebagai "umol trolox ekuivalen
per gram sampel
 III. PEMBAHASAN

2.1 Antioksidan
Sesuai mekanisme kerjanya antioksidan memiliki dua fungsi. Fungsi
pertama merupakan fungsi utama dari antioksidan yaitu sebagai pemberi atom
hidrogen. Antioksidan (AH) yang mempunyai fungsi utama tersebut sering disebut
sebagai antioksidan primer. Senyawa ini dapat memberi atom hidrogen secara cepat
ke radikal lipida (R, ROO) atau mengubahnya ke bentuk stabil, sementara turunan
radikal antioksidan (A) tersebut memiliki keadaan lebih stabil dibanding radikal
lipid. Fungsi kedua merupakan fungsi sekunder antioksidan, yaitu memperlambat
laju antioksidan dengan berbagai mekanisme di luar mekanisme pemutusan
rantai oksidan dengan mengubah radikal lipida ke bentuk lebih stabil
Penambahan antioksidan (AH) primer dengan konsentrasi rendah pada lipida
dapat menghalangi reaksi oksidasi pada tahap inisiasi maupun propagasi. Radikal-
radikal antioksidan (A) yang terbentuk pada reaksi tersebut stabil dan tidak
mempunyai cukup energi untuk dapat bereaksi dengan molekul lipida lain
membentuk radikal lipida baru. Radikal-radikal antioksidan dapat saling
membentuk produk non radikal. Reaksi penghambatan antioksidan primer
terhadap radikal lipid
adalah sebagai berikut : Inisiasi : R + AH RH + A
Propagasi : ROO + AH ROOH + A
Antioksidan bereaksi dengan radikal bebas dengan cara mengurangi
konsentrasi oksigen, mencegah pembentukan singlet oksigen yang reaktif,
mencegah inisiasi rantai pertama dengan menangkap radikal primer seperti radikal
hidroksil, mengikat katalis ion logam, mendekomposisi produk-produk primer
radikal menjadi senyawa non-radikal, dan memutus rantai hidroperoksida. Dari
penelitian-penelitian sebelumnya dapat diambil kesimpulan bahwa perbedaan
struktur antioksidan berpengaruh terhadap daya antioksidan. Senyawa BHT dengan
subtituen t-butil pada dua posisi ortho dan para-nya menyumbang aktivitas
antioksidan lebih kuat dibanding dengan BHA. Senyawa fenol tersubstitusi telah
banyak digunakan sebagai antioksidan dan banyak terdapat pada berbagai
tumbuhan tropis berupa senyawa turunan polifenol seperti flavonoid, flavon,
flavonol, dll.

2.2 Radikal Bebas

Radikal bebas adalah molekul yang sangat reaktif karena memiliki elektron
tidak berpasangan pada orbital luarnya sehingga dapat bereaksi dengan molekul sel
tubuh dengan cara mengikat elektron sel tersebut, dan mengakibatkan reaksi
berantai yang menghasilkan radikal bebas baru.
Radikal bebas adalah atom atau gugus apa saja yang memiliki satu atau
lebih elektron tidak berpasangan. Karena jumlah elektron ganjil, maka tidak semua
elektron dapat berpasangan. Suatu radikal bebas dapat bermuatan positif atau
negatif, maka spesies semacam ini sangat reaktif karena adanya elektron tidak
berpasangan. Sumber radikal bebas dapat berasal dari dalam tubuh kita sendiri
(endogen) yang terbentuk sebagai sisa proses metabolisme (proses pembakaran),
protein, karbohidrat, dan lemak yang kita konsumsi.
Radikal bebas dapat pula diperoleh luar tubuh (eksogen) yang
berasal dari polusi udara, asap kendaraan, berbagai bahan kimia, makanan, yang
telah hangus (carbonated). Radikal bebas yang terbentuk di dalam tubuh akan
merusak sel target seperti lemak, protein, karbohidrat dan DNA. Radikal bebas
disebut juga sebagai spesies oksigen yang reaktif (ROS), suatu istilah yang
mencakup semua molekul yang berisi oksigen yang sangat reaktif. Istilah ROS
merupakan radikal oksigen yang memusat seperti superoksid (O2) dan hidroksil
(OH) dan juga spesies bukan radikal yang berasal dari oksigen seperti hidrogen
peroksida (H2O2) singlet oksigen ('O2) dan asam hipolorus (HOCl).

2.3 Metode DPPH (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil) untuk Uji Aktivitas Antioksidan

Untuk uji aktivitas antioksidan digunakan metode DPPH (2,2-difenil-1-
pikrilhidrazil). DPPH adalah radikal bebas stabil berwarna ungu yang digunakan
secara luas untuk pengujian kemampuan penangkapan radikal bebas dari
 beberapa komponen alam seperti komponen fenolik, antosianin atau ekstrak
kasar. Metode DPPH berfungsi untuk mengukur elektron tunggal seperti transfer
hidrogen sekaligus juga untuk mengukur aktivitas penghambatan radikal bebas.
Senyawa yang aktif sebagai antioksidan mereduksi radikal bebas DPPH menjadi
difenil pikril hidrazin. Besarnya aktivitas penangkap radikal bebas dinyatakan
dengan EC50 yaitu besarnya konsentrasi larutan uji yang mampu menurunkan 50%
absorbansi DPPH dibandingkan dengan larutan blanko. Metode ini sangat cocok
untuk skrining awal berbagai sampel terutama ekstrak
tumbuhan karena hasilnya terbukti akurat, reliabel, relatif cepat dan praktis
DPPH (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil) merupakan radikal bebas stabil berwarna
ungu yang digunakan secara luas untuk pengujian kemampuan penangkapan radikal
bebas dari beberapa komponen alam seperti komponen fenolik. Metode DPPH
berfungsi untuk mengukur elektron tunggal seperti transfer hidrogen sekaligus juga
untuk mengukur aktivitas penghambatan radikal bebas.
Campuran reaksi berupa larutan sampel dan DPPH yang dilarutkan dalam
etanol absolut dan diinkubasi pada suhu 37C selama 30 menit dan dibaca pada
panjang gelombang 517 nm. Metode ini sering digunakan untuk mendeteksi
kemampuan antiradikal suatu senyawa sebab hasilnya terbukti akurat, reliabel,
relatif cepat dan praktis. Sebagai akibatnya, penambahan senyawa yang bereaksi
sebagai antiradikal akan menurunkan konsentrasi DPPH ini. Adanya penurunan
konsentrasi DPPH akan menyebabkan penurunan absorbansinya dibandingka
dengan absorbansi kontrol yang tidak diberi dengan senyawa uji yang diduga
mempunyai aktivitas antiradical. . Nilai absorbansi DPPH berkisar antara 515-520
nm. Metode peredaman radikal bebas DPPH didasarkan pada reduksi dari larutan
methanol radikal bebas DPPH yang berwarna oleh penghambatan radikal bebas.
Ketika larutan DPPH yang berwarna ungu bertemu dengan bahan pendonor
elektron maka DPPH akan tereduksi, menyebabkan warna ungu akan memudar dan
digantikan warna kuning yang berasal dari gugus pikril. Mekanisme penghambatan
radikal DPPH dapat dilihat pada Gambar berikut:
 Gambar. Mekanisme Penghambatan Radikal DPPH

2.4 DPPH pada Molase Delima

DPPH radikal telah digunakan secara luas di gratis penilaian aktivitas
antioksidan karena kemudahan dan kenyamanan reaksi. Di hadapan ekstrak arbutus
dan solusi standar absorbansi larutan DPPH menurun, dari yang ditemukan antara
16,11-75,22%, menunjukkan bahwa aktivitas radikal tergantung konsentrasi
penangkap Bisa dikatakan bahwa aktivitas antioksidan molase delima tergantung
pada beberapa faktor, seperti kultivar dan kondisi iklim selama pematangan buah dan
pematangan dan bagian buah yang digunakan.
 DAFTAR PUSTAKA

Gil, Maria I; Francisco A. Tomas-Barberari; Betty hess-Pierce; Deirdre M. Holcroft;

and Adel A. Kader. 2000. Antioxidant Activity of Pomegranate Juice and Its
Relationship with Phenolic Composition and Processing. Journal Agric Food
Chem, 48
Tristanti, D., A. Ismawati ., B.T. Pradana., dan J.G. Jonatan. 2016. Pengujian
Aktivitas Antioksidan Menggunakan Metode DPPH pada Daun Tanjung
(Mimusops elengi L). Prosiding Seminar Nasional Teknik Kimia
Kejuangan, Yogyakarta
Zuhra, C.F., Julianti,. Dan Herlince.S. 2008. AKTIVITAS ANTIOKSIDAN SENYAWA
FLAVONOID DARI DAUN KATUK (Sauropus androgunus (L) Merr.). Jurnal
Biologi Sumatera. Vol.3 No.1