J. Chil. Chem. Soc.

, 62, Nº 4 (2017)

ANTIOKSIDANTAKTIVITASOFAQUEOUS DAN ETANOLEXTRACTS OF CRATAEGUS MEYERI POJARK

DAUN DAN ISI OFVITAMIN, ELEMEN JEJAK

SUAT EKIN 1, MAHIRE BAYRAMOGLU 2, AHMET GOKTASOGLU 3,

FEVZI OZGOKCE 4, HATICE KIZILTAS 5
1 Departemen Kimia, Divisi Biokimia, Universitas Yuzuncu Yil, Van, Turki
2 Bagian Biokimia, Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Siirt, Siirt, Turki
3 Sekolah Pascasarjana Ilmu Pengetahuan Alam dan Terapan, Universitas Yuzuncu Yil, Van, Turki
4 Departemen Biologi, Divisi Botani, Universitas Yuzuncu Yil, Van, Turki
5 Program Tanaman Obat dan Aromatik, Bitlis Eren University, Bitlis, Turki

ABSTRAK

Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui aktivitas antioksidan dan antiradikal dalam ekstrak air dan etanol Crataegus meyeri Daun pojark, sebagai tambahan, untuk menguji beberapa vitamin (A, E,
C), elemen jejak (Cu, Zn, Mn, Se, Cr, Co). Dalam penelitian ini, vitamin C, antioksidan dan sifat antiradikal ditentukan menggunakan spektrofotometer. Hasilnya dibandingkan dengan antioksidan referensi
seperti trolox, Sebuah- tokoferol dan BHT. Kadar vitamin (A, E) diukur dengan metode HPLC. Elemen jejak dilakukan dengan metode ashing kering dengan ICP-MS. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa C.
meyeri daun memiliki kapasitas antioksidan dan kadar vitamin yang tinggi. C. meyeri dianggap dapat digunakan sebagai aditif untuk produk makanan dan industri farmasi dengan sifat antioksidan yang sesuai
dan antioksidan dalam penelitian model hewan percobaan di masa mendatang, melawan radikal bebas yang dihasilkan sebagai respons terhadap stres oksidatif.

Kata kunci: Crataegus meyer i Pojark, antioksidan, elemen jejak, vitamin

PENGANTAR Tujuan dari pekerjaan ini adalah untuk menilai aktivitas antioksidan dari sampel daun C.
meyeri ekstrak etanol dan air dengan metode analisis yang berbeda; aktivitas antioksidan total,
Makanan alami dan antioksidan turunan makanan, seperti vitamin dan fitokimia fenolik telah anion superoksida, DPPH, aktivitas pembersihan radikal DMPD, pengurangan daya,
mendapat perhatian yang semakin meningkat karena mereka dikenal berfungsi sebagai agen pembersihan hidrogen peroksida, efek pengkhelat dan untuk menentukan kandungan total
kemopreventif melawan kerusakan oksidatif [1]. Spesies oksigen reaktif, seperti anion superoksida (O - fenolik dan flavonoidnya, dan untuk menilai profil nutrisi tanaman ini karena elemen jejak
fungsionalnya (Cu, Zn, Mn, Se, Cr, Co) dan vitamin (A, E, C).
kerusakan
dan hidrogen peroksida (H. 2 HAI 2) dapat menyebabkan oxi 2) radikal, radikaldatif pada (OH
hidroksil makromolekul,
•)

termasuk DNA, protein, lipid, dan molekul seluler kecil. Radikal bebas telah terlibat
dalam patologi banyak penyakit, termasuk kanker, aterosklerosis, diabetes [2,3,4,5]. PROSEDUR EKSPERIMENTAL

Antioksidan dapat didefinisikan sebagai senyawa yang dapat menunda atau mencegah
oksidasi lipid atau molekul lain dengan menghambat inisiasi atau penyebaran reaksi berantai
pengoksidasi. Aktivitas antioksidan senyawa fenolik pada tumbuhan terutama karena sifat redoks
dan struktur kimianya, yang dapat memainkan peran penting dalam menetralkan radikal bebas,
mengkelat logam transisi dan mendinginkan singlet dan triplet oksigen, dengan cara delokalisasi
atau penguraian peroksida [6]. Sistem perlindungan antioksidan termasuk enzim (superoksida
dismutase, katalase dan glutathione peroksidase) dan perlindungan non-enzim (glutathione, vitamin
C dan E) memainkan peran penting dalam membersihkan oksidan dan mencegah kerusakan sel [5].
Tanaman obat telah digunakan untuk mengobati penyakit manusia di dunia selama berabad-abad.
Orang lebih tertarik pada tanaman obat karena toksisitasnya yang rendah dan kinerja terapeutik yang baik.
Studi tentang aktivitas antioksidan tanaman obat telah meningkat pesat karena meningkatnya minat akan
potensinya untuk digunakan sebagai sumber antioksidan alami yang kaya. Meskipun sampai saat ini,
sebagian besar penelitian tentang manfaat kesehatan dari pola makan kaya nabati telah difokuskan pada
vitamin yang sudah mapan [7].
2.1. Bahan tanaman dan ekstraksi
C. meyeri daun dikumpulkan pada bulan Mei-Juni dalam tahap berbunga di Gunung
Alacabuk, Bitlis, desa Yalınaqac. Sebuah spesimen disimpan di Herbarium Departemen
Botani, Universitas Yuzuncu Yil, Van F.
13580. Sampel tanaman digiling menjadi bubuk halus menggunakan Kenwood Multi-Mill (Kenwood
Ltd., UK).
Ekstraksi C. meyeri daun berair dan etanol dilakukan sesuai dengan metode Gulcin et al.
[12] dengan sedikit modifikasi. Untuk ekstraksi air, 20 g C. meyeri digiling menjadi bubuk halus di
gilingan dan dicampur dengan 400 mL air mendidih dengan pengaduk magnet selama 15 menit.
Untuk ekstraksi etanol, 20 g C. meyeri sampel digiling menjadi serbuk halus di gilingan dan
dicampur dengan 400 mL etanol. Residu diekstraksi kembali pada kondisi yang sama sampai
pelarut ekstraksi menjadi tidak berwarna. Ekstrak gabungan disaring di atas kertas whatman No.
1. Ekstrak diuapkan sampai kering dalam ruang hampa dengan rotavapor dan etanol kasar dan
ekstrak encer diperoleh melalui liofilisasi dengan pengering-beku. Ekstrak kasar ditempatkan
dalam botol gelap dan disimpan pada suhu -20 ° C sebelum digunakan lebih lanjut.

VitaminA (retinol) dan vitamin E (α-tocopherol) adalah vitamin yang larut dalam
lemak yang penting untuk kesehatan manusia. [8]. VitaminC (asam askorbat) dianggap
sebagai antioksidan penting yang larut dalam air. Ini melindungi, senyawa dalam ruang
ekstraseluler dan intraseluler di sebagian besar sistem biologis dan mengurangi radikal
tokoferol kembali ke bentuk aktifnya di membran sel. Ini bisa langsung mengais radikal
superoksida, oksigen singlet, hidrogen peroksida, radikal hidroksil [9]. Unsur-unsur jejak
dari gugus logam transisi diketahui dapat mengaktifkan enzim atau dimasukkan ke
dalam metaloenzim sebagai sistem transfer elektron (Cu, Fe, Mn dan Zn) dan juga
mengkatalisis perubahan valensi pada substrat (Cu, Co, Fe dan Mo). Beberapa peran
tertentu dari beberapa elemen jejak (Al, Cu, Co, Mo,
2.2. Penentuan aktivitas antioksidan total
Aktivitas antioksidan C. meyeri Ekstrak air dan etanol ditentukan menurut metode
tiosianat dari Mitsuda et al. [13]. 10 mg ekstrak air dan etanol dilarutkan dalam 10 mL air
dan etanol. 10, 20 dan 30 µg / mL ekstrak atau sampel standar dalam 2,5 mL buffer
kalium fosfat (0,04 M, pH 7,0) ditambahkan ke asam linoleat 2,5 mL emulsi dalam buffer
kalium fosfat. Emulsi asam linoleat 50 mL terdiri dari 175 μg tween 20, asam linoleat 155
μL, dan buffer kalium fosfat. Larutan campuran diinkubasi pada suhu 37 ºC dalam gelas fl
ask dan dalam gelap. Setelah campuran diaduk selama 3 menit, nilai peroksida
ditentukan dengan membaca absorbansi pada 500 nm dalam spektrofotometer.
Penghambatan peroksidasi lipid dalam persentase dihitung dengan persamaan berikut:

Hawthorn ( Crataegus) merupakan tanaman obat tradisional. Pertimbangkan ramuan '' kardiotonik
'', tanaman hawthorn telah digunakan dalam pengobatan tradisional untuk mengobati detak jantung tidak
teratur, tekanan darah tinggi, nyeri dada, pengerasan arteri, dan gagal jantung kongestif; Antioksidan
dalam hawthorn dapat membantu mengontrol tekanan darah tinggi dan kolesterol tinggi. Konstituen yang
bertanggung jawab di bidang farmakologi e ff Efek dari preparat hawthorn termasuk flavonoid dan
Dimana kontrol adalah absorbansi reaksi kontrol dan A Sampel adalah absorbansi dengan
prosianidin oligomer [11].
adanya sampel C. meyeri berair dan etanol
ekstrak [14].

e-mail: suatekin@hotmail.com 3661

J. Chil. Chem. Soc., 62, Nº 4 (2017)
Berbagai mekanisme, termasuk penurunan kapasitas, pencegahan inisiasi rantai,
pengikatan katalis ion logam transisi, dekomposisi peroksida, pencegahan abstraksi
hidrogen lanjutan dan pembersihan radikal telah diklaim dapat menjelaskan aktivitas
antioksidan [15].
2.3. Mengurangi daya
Kekuatan pengurangan ekstrak ditentukan sesuai dengan metode Oyaizu [16]
dengan sedikit modifikasi. Berbagai konsentrasi C. meyeri
ekstrak air dan etanol (15-45 μgmL- 1) dalam 1 mL akuades dicampur dengan 2,5 mL
dapar natrium fosfat (0,2 M, pH 6,6) dan kalium
besi sianida [K 3 Fe (CN) 6] ( 1%). Campuran diinkubasi pada 50 ° C selama 20 menit. Aporsi (2,5 mL)
TCA (10%) ditambahkan dan disentrifugasi pada 2500 rpm
selama 10 menit. Lapisan atas larutan (2,5 mL 1%) dicampur dengan suling
air (2,5 mL) dan 0,5 mL besi klorida (FeCl 3) ( 0,1%), dan absorbansi diukur pada 700 nm
terhadap blanko. Sebuah- tokoferol dan BHT digunakan
sebagai kontrol positif. Peningkatan absorbansi campuran reaksi menunjukkan peningkatan daya
reduksi [4,17].
2.4. Aktivitas pembersihan hidrogen peroksida
Aktivitas pembersihan untuk hidrogen peroksida diukur sesuai dengan metode
modifikasi Ruch et al [18]. Konsentrasi tanaman yang berbeda
Ekstrak ditambahkan ke 2 ml H. 2 HAI 2 larutan (10 mM) dalam buffer fosfat (50
mM, pH 7,4), dan campuran aksi diinkubasi pada 25 ° C selama 30 menit. Itu
tidak bereaksi H 2 HAI 2 ditentukan dengan mengukur absorbansi campuran aksi mereka pada 230 nm
sehubungan dengan larutan kosong.
2.5. Aktivitas pembersihan radikal anion superoksida
Radikal superoksida dihasilkan dengan metode yang dijelaskan oleh Zhishen et al. [19].
Semua larutan disiapkan dalam buffer fosfat 0,05 M (pH 7,8). Reaksi dimulai dengan
menggunakan lampu fluoresen untuk menerangi campuran reaksi yang mengandung
konsentrasi yang berbeda C. meyeri ekstrak air dan etanol (15-60 μgmL- 1). Reaksi yang
diinduksi foto dilakukan dengan menggunakan lampu fluoresen (20 W). Volume total
campuran reaksi adalah 3 mL. Campuran reaksi diterangi pada 25 ºC selama 40 menit. Itu
fotokimia berkurang ribo flavin dihasilkan O .-
yang mereduksi NBT menjadi bentuk
2
formazan biru. Absorbansi diukur pada 560 nm. BHT dan trolox digunakan sebagai kontrol
positif.
2.6. Aktivitas chelating pada ion besi
Efek chelating ditentukan mengikuti metode Dinis et al. [20]. Konsentrasi yang
berbeda dari C. meyeri ekstrak air dan etanol
(10–30 µg / mL) dalam 0,4 mL metanol ditambahkan ke larutan 0,6 mM FeCl (0,1 mL).
Reaksi dimulai dengan penambahan 5mMferrozine (0.2mL) 2.
Campuran dikocok kuat-kuat dan dibiarkan pada suhu kamar selama 10 menit. Absorbansi
larutan kemudian diukur secara spektrofotometri pada 562 nm [12,20]. Persentase
penghambatan ferrozine-Fe 2+ formasi kompleks dihitung dengan menggunakan rumus yang
diberikan di bawah ini:
2.7. Uji DMPD
DMPD • + aktivitas pemulungan radikal C. meyeri berair dan ekstrak etanol ditentukan sesuai
dengan metode yang dijelaskan oleh Fogliano et al. [21]. Konsentrasi yang berbeda dari C.
meyeri sampel ekstrak air dan etanol (10-30 μgmL- 1) ditambahkan ke kuvet spektrofotometri dan
total volume sampel ini disesuaikan menjadi 1 mL dengan air suling. Dengan adanya larutan
oksidan besi klorida, DMPD, membentuk kation radikal berwarna, DMPD • +. Reaksinya adalah
sebagai berikut: 1 ml 100 mM DMPD ditambahkan ke 100 ml buffer asetat 0,1 M, pH 5,25, dan
radikal diperoleh dengan menambahkan 0,2 mL 0,05 M besi klorida. Hasil pengujian
pemulungan dengan menambahkan
0,1 mL sampel untuk 2 mL larutan radikal dan ukur absorbansi pada 505 nm selama 10
menit setelah penambahan sampel. Persentase DMPD • +
kemampuan memulung C. meyeri Ekstrak air dan etanol dihitung menggunakan persamaan
berikut:
3662
Dimana kontrol adalah absorbansi kontrol, yang mengandung 1 mL
kontrol reaksi dan A Sampel adalah absorbansi dengan adanya C. meyeri
ekstrak air dan etanol. DMPD • + menurun secara signifikan saat terpapar
pemulung radikal [2,21,22].
2.8. Uji fenolik total
Kandungan fenolik total dalam ekstrak air dan etanol diukur dengan menggunakan
metode folin-ciocalteu yang dimodifikasi. Singleton dkk. [23]. 0,1 mL larutan ekstrak, berisi
1000 µg ekstrak diambil dalam volumetrik fl ask, 45 mL akuades dan ditambahkan 1 mL
reagen folin ciocalteu dan fl ask
benar-benar terguncang. Setelah 3 menit, 3 mL larutan Na 2 BERSAMA 3 ( 2%, b / v) ditambahkan dan
campuran didiamkan selama 2 jam dengan pengocokan berselang.
Absorbansi diukur pada 760 nm [24,25]. Prosedur yang sama diulangi dengan semua larutan
asam galat standar (25-250 µgmL- 1). Kandungan fenolik dinyatakan sebagai asam galat ekuivalen
per gram (mg GAE / g) ekstrak. Nilai GAE dinyatakan sebagai sarana ± SEM dari percobaan
rangkap tiga.
2.9. Total flavonoid
Kandungan flavonoid total ditentukan menggunakan metode kolorimetri aluminium klorida
menggunakan quercetin sebagai standar dan menyatakan hasilnya sebagai mg quercetin yang setara
dengan ekstrak. Singkatnya, 1 mL aluminium 2%
triklorida (AlCl 3) dalam metanol dicampur dengan volume yang sama dari ekstrak metanol (2000
µg). Pembacaan absorpsi pada 415 nm diambil setelahnya
10 menit terhadap sampel kosong yang terdiri dari larutan ekstrak 1 mL dengan 1 mL
metanol tanpa AlCl 3 [ 26,27].
2.10. DPPH
Uji DPPH atom hidrogen atau kemampuan donasi elektron dari ekstrak yang sesuai
diukur dari pemutihan larutan metanol DPPH berwarna ungu. Uji spektrofotometri ini
menggunakan radikal stabil
1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) sebagai reagen [28,29]. Lima puluh µL berbagai
konsentrasi ekstrak dalam metanol ditambahkan ke 5 mL a
0,004% larutan metanol DPPH. Setelah periode inkubasi 30 menit pada suhu kamar,
absorbansi dibaca pada blanko pada 517 nm. Antioksidan
aktivitas sampel diekspresikan dalam IC 50 nilai-nilai (µgmL- 1 diperlukan untuk menghambat
pembentukan radikal DPPH sebesar 50%), yang dihitung dari
grafik
sebagaimemplot
saranapersentase
± SEM daripenghambatan terhadap
percobaan rangkap tiga. konsentrasi
Syntheti 5 c 0ekstrak. Nilai IC dinyatakan
antioksidan BHT dimasukkan dalam percobaan sebagai kontrol positif. Penghambatan DPPH
radikal bebas dalam persen dihitung dengan rumus berikut
2.11. Penentuan konten elemen jejak
Sampel yang terkumpul kemudian dicuci dengan air suling ganda, dipotong, dikeringkan pada suhu 105
ºC selama 24 jam. Sampel kering dihomogenisasi dan disimpan dalam botol kaca yang telah dibersihkan
sebelumnya sampai analisis dimulai. Untuk elemental
( Analisis Cu, Zn, Mn, Se, Cr, Co), ICP-MS (Agilent 7500a USA) digunakan dalam penelitian ini.
C. meyeri sampel digiling dengan mortar porselen dan diayak (200 mesh). Satu gram bahan
kering (tiga paralel) ditimbang dalam wadah porselen, diikuti dengan penambahan 2 mL campuran
etil alkohol dan asam sulfat (95: 5) dan dibakar. Abu diperoleh pada suhu 500-550 ºC di dalam
tungku muffle. Kemudian abu dilarutkan dengan 4 mL HCl 3 N dan larutan dipindahkan ke 50 mL
mL yang telah dikalibrasi minta dan diencerkan menjadi 50 mL dengan akuades ganda dan
disaring setelah 5 jam dengan kertas saring pita biru dan diatur menjadi 50 mL.
2.12. Analisis vitamin (A, E)
2.12.1. Solusi dan kalibrasi standar
Sebuah- tokoferol dan larutan stok semua-trans-retinol disiapkan pada 500 μgmL- 1 dalam
metanol. Larutan stok diencerkan secara tepat dengan fase gerak untuk persiapan
larutan standar. Kalibrasi dihitung dengan analisis regresi linier dari area puncak versus
konsentrasi larutan standar.
2.12.2. Prosedur ekstraksi
5 gr C. meyeri diekstraksi dengan heksana dan etanol (mengandung 0,01%
 J. Chil. Chem. Soc., 62, Nº 4 (2017)

BHT), dan sampel di vortex selama 1 menit. [30]. Sampel diekstraksi selama 24 jam dalam gelap. konsentrasi Crataegus meyeri Ekstrak Pojark, Sebuah- tokoferol dan BHT. Tabel 3 menunjukkan
Sampel di vortex dan disentrifugasi pada 7000 putaran / menit selama 10 menit. Supernatan disaring aktivitas antioksidan dari ekstrak air dan etanol C. meyeri.
menggunakan kertas saring whatman, dan 500 μL lapisan heksana diekstraksi dan diuapkan sampai Aktivitas antioksidan total ditentukan dengan metode tiosianat. Kedua C. meyeri ekstrak daun
kering di bawah aliran nitrogen pada suhu 37 ºC. Residu dilarutkan dalam THF (50 μL) dan menunjukkan aktivitas antioksidan yang efektif dan kuat di semua konsentrasi.
ditambahkan metanol (150 μL). Sampel di vortex selama 1 menit. kemudian, 100 μL sampel
diautosampling dengan menggunakan botol kaca amber. Gambar 1 mengilustrasikan aktivitas antioksidan dengan konsentrasi berbeda (dari 10 mg / mL
hingga 30 mg / mL) dari ekstrak air C. meyeri Daun-daun; BHT,
2.12.3. Kondisi kromatografi Sebuah- tokoferol dan trolox akhir 48 th Nilai penghambatan% jam dalam emulsi asam linoleat
Sistem kromatografi terdiri dari Thermo Scientific Finnigan Surveyor dengan ditentukan dengan metode tiosianat.
detektor photodiode array (PDA), dan autosampler baki (-8 ° C). Data diolah
menggunakan Thermo Scientific ChromQuest versi 4.2
perangkat lunak. Pemisahan dilakukan dengan 5 μm Gl Science C 18 kolom fase terbalik
(ID 250 x 4,6 mm). Fase gerak campuran metanol-THF
(80:20, v / v) telah dimodifikasi dari [8,31,32]. Pompa diatur pada kecepatan aliran 1,5 mL /
menit. Kromatogram dipantau dengan deteksi array photodiode array detector (PDA) pada 325
dan 290 nm ( Sebuah- tokoferol dan semua-trans-retinol, masing-masing). Analisis kromatografi
dilakukan pada 40 ºC dengan elusi isokratik.

2.13. Analisis vitamin C.

Larutan stok vitamin C disiapkan pada 4000 mg / ml dalam asam metafosfat. Larutan
stok diencerkan secara tepat dengan air suling ganda untuk persiapan larutan standar.
Kalibrasi dihitung dengan analisis regresi linier dari absorbansi versus konsentrasi larutan
standar. Kandungan vitamin C C. meyeri daun diukur secara spektrofotometri (Shimadzu
UV 1800, Jepang) pada 521 nm menurut metode 2,4-dinitrofenil hidrazin (DNPH) [33].

Gambar 1: Aktivitas antioksidan dari konsentrasi yang berbeda dari ekstrak air dan etanol Crataegus
2.14. Analisis statistik meyeri Pojark, dibandingkan dengan kontrol positif BHT, Sebuah- tokoferol dan trolox dalam
Hasilnya dinyatakan sebagai nilai rata-rata dan kesalahan standar rata-rata ( emulsi asam linoleat ditentukan dengan metode tiosianat.
X ± SEM). Analisis statistik dilakukan dengan One-way analysis of variance (ANOVA)
menggunakan program paket statistik (SPSS 22.0 for Windows). Sampel dilakukan
dalam rangkap tiga. Regresi nonlinier
Analisis digunakan untuk menghitung IC 50 nilai-nilai.

HASIL

Penelitian ini mengevaluasi aktivitas antioksidan in vitro C. meyeri

Ekstrak etanol dan air daun Pojark, ditinjau dari aktivitas antioksidan total, aktivitas
pembersihan radikal DPPH, aktivitas pembersihan radikal bebas DMPD, aktivitas pembersihan
radikal anion superoksida, aktivitas pembersihan radikal peroksida hidrogen, aktivitas
pengkelat logam, daya reduksi total, total fenolik dan vitamin fl avonoid. melacak konten
elemen.
Elemen jejak dan kandungan vitamin C. meyeri Daunnya disajikan pada Tabel 1. Kandungan
Tembaga, Seng, Mangan, Selenium, Kromium dan Dalam Cobalt C. meyeri daun ditemukan 21,99 ±
2,01, 47,32 ± 2,44, 51,01 ± 2,26,
0,091 ± 0,01, 1,72 ± 0,09 dan 1,18 ± 0,05 m g g- 1, isi dari Sebuah- tokoferol, retinol dan asam askorbat
dalam C. meyeri daun ditemukan 2,55 ± 0,19, 0,41 ±
0,024 dan 202,05 ± 12,46 m g g- 1 masing-masing berdasarkan berat kering.

Tabel 1: Kadar Vitamin (E, A, C) dan unsur jejak (Cu, Zn, Mn, Se, Cr, dan Co) dalam Crataegus
meyeri Pojark meninggalkan sampel.

Crataegus meyeri Pojark

(Rosaceae)
Parameter

X ± SEM
Sebuah- tokoferol ( m g g- 1 dw) 2.55 ± 0,19

Retinol ( m g g- 1 dw) Vitamin C 0,41 ± 0,024

(mg 100 g- 1 dw) 202,05 ± 12,46

Cu ( m g g- 1 dw) 21,99 ± 2.01

Zn ( m g g- 1 dw) 47,32 ± 2,44

M N ( m g g- 1 dw) 51,01 ± 2,26

Se ( m g g- 1 dw) 0,091 ± 0,01

Cr ( m g g- 1 dw) 1,72 ± 0,09

Co ( m g g- 1 dw) 1,18 ± 0,05

Semua nilai adalah mean dari penentuan rangkap tiga yang dinyatakan pada basis berat kering. Ini adalah
pekerjaan pertama pada vitamin dan trace element C. meyeri pergi, jadi kami tidak dapat membandingkan data dengan
Gambar 2: Penghambatan radikal DPPH versus konsentrasi Crataegus meyeri Etanol
data pekerja sebelumnya.
pojark dan ekstrak air.
Tabel 2 menunjukkan nilai absorbansi daya reduksi yang berbeda

3663
J. Chil. Chem. Soc., 62, Nº 4 (2017)

Hasil mengenai aktivitas pemulungan radikal dari ekstrak yang berbeda ekstrak, BHT, α-tokoferol, dan konsentrasi berbeda trolox (10-30 µg mL-
ditunjukkan pada Gambar 3.
C. meyeri, bersama dengan acuan standar BHT, ditunjukkan pada tabel 3. Aktivitas 1)

pembersihan radikal bebas terbaik diperoleh dengan ekstrak etanol

(IC 50 435,13 ± 2,71 µg mL- 1), sedangkan ekstrak air menunjukkan perbandingan
tingkat aktivitas pembersihan radikal bebas dengan IC 50 nilai 877,73 ± 6,98 µg mL- 1. Daya
reduksi ekstrak air dan etanol C. meyeri
daun meningkat dengan konsentrasi. Pada usia 45 m g mL- 1, daya reduksi lebih tinggi
untuk semua ekstrak. Menurut hasil, ekstrak paling aktif
C. meyeri daun berair dengan nilai absorbansi 0,2110 ± 0,001. Pada nilai konsentrasi ini
ditemukan daya reduksi Sebuah- tokoferol 0,6093 ±
0,002, BHT 0,6090 ± 0,003 dan ekstrak etanol 0,1840 ± 0,001 (Tabel 2) Gambar 3 menunjukkan
kemampuan reduktif C. meyeri ekstrak daun dibandingkan dengan BHT, dan Sebuah- tokoferol.dll
Untuk pengukuran kemampuan reduksi ditentukan nilai absorbansi penurunan Daya pada
konsentrasi yang berbeda (15-45 µg mL- 1).

Meja 2: Nilai absorbansi daya reduksi konsentrasi yang berbeda

Crataegus meyeri Ekstrak Pojark, Sebuah- tokoferol dan BHT.

Konsentrasi
Abs. ( X ± SEM)

C. meyeri Pojark aqueous ext. (15 m g mL- 1) 0,1427 ± 0,001

C. meyeri Pojark aqueous ext. (30 m g mL- 1) 0,1773 ± 0,002

C. meyeri Pojark aqueous ext. (45 m g mL- 1) 0,2110 ± 0,001 a, a1

C. meyeri Pojark ethanol ext. (15 m g mL- 1) 0,1283 ± 0,001

C. meyeri Pojark ethanol ext. (30 m g mL- 1) 0,1480 ± 0,001

C. meyeri Pojark ethanol ext. (45 m g mL- 1) 0,1840 ± 0,001 a2, a3

Sebuah- tokoferol (15 m g mL- 1) 0,2427 ± 0,002

Sebuah- tokoferol (30 m g mL- 1) 0,4283 ± 0,001

Sebuah- tokoferol (45 m g mL- 1) 0,6093 ± 0,002 a, a2

BHT (15 m g mL- 1) 0,2600 ± 0,011

BHT (30 m g mL- 1) 0,4493 ± 0,003

BHT (45 m g mL- 1) 0,6090 ± 0,003 a1, a3

Kontrol 0,1520 ± 0,011

a, a1, a2, a3: p <0,001 (huruf berbeda, perbedaan signifikan antar kelompok)

Seperti yang terlihat pada gambar 3, DMPD • + aktivitas pemulungan radikal bebas C. meyeri
etanol dan ekstrak air ditentukan konsentrasi yang berbeda (15-45 m g mL- 1) dibandingkan
dengan kontrol positif, BHT dan Sebuah- tokoferol.dll Kedua ekstrak tumbuhan tersebut
menunjukkan DMPD tinggi • + aktivitas pemulungan. Hasil analisis statistik (Tabel 3), ditemukan
bahwa tingkat DMPD • + aktivitas pemulungan radikal (%) di C. meyeri aqueous menurun
menurut α- tokoferol (p <0,05), Selain itu, C. meyeri etanol secara signifikan lebih tinggi BHT (p
<0,001).

Efek ekstrak daun diperoleh dari C. meyeri pada anion superoksida yang dihasilkan oleh
NBT ditentukan dan ditunjukkan pada Tabel 3. Konsentrasi yang berbeda dari C. meyeri dalam
ekstrak daun menunjukkan aktivitas antioksidan pada 60 m g mL- 1 konsentrasi dalam uji
pemulungan anion superoksida. Aktivitas pemulungan anion superoksida dari C. meyeri ekstrak
daun (air, etanol), BHT, trolox menyumbang penghambatan 42,74 ± 2,88%,

50,85 ± 2,21% 18,49 ± 4,25% dan 52,65 ± 1,59%, masing-masing,

Hasilnya ditunjukkan pada Tabel 3. Total ekstrak dan fraksi etanol menunjukkan efek
yang kuat, sebanding dengan BHT dan trolox, digunakan sebagai kontrol positif. Aktivitas
pembersihan superoksida terbaik ditunjukkan oleh fraksi etanol, diikuti oleh ekstrak air.
Sediaan ini menghambat perkembangan warna, yang dihasilkan selama reaksi superoksida
dengan NBT sebesar 50,85 ± 2,21 dan 42,74 ± 2,88% masing-masing. Nilai yang diperoleh
mirip dengan trolox (52,65 ± 1,59% penghambatan). Hasil penelitian menunjukkan bahwa
ekstrak air dan etanol memiliki potensi antioksidan sama dengan kontrol positif (trolox).

Mengenai aktivitas pembersihan hidrogen peroksida (%), tampaknya demikian

C. meyeri kadar air dibandingkan dengan BHT menurun (p <0,01) dan diamati bahwa kadar Gambar 3: Nilai absorbansi untuk menurunkan Daya pada konsentrasi yang berbeda (15-45
tersebut C. meyeri etanol menurun masing-masing menurut BHT dan trolox (p <0,001), (p µg mL- 1), DMPD • + aktivitas pemulungan radikal bebas (15-45 m g mL- 1) dan efek pengkelat logam
<0,01) (Tabel 3) (10-30 µg mL- 1) dari ekstrak air dan etanol
Aktivitas pengkelat ion besi C. meyeri etanol dan air Crataegus meyeri Pojark, dibandingkan dengan kontrol positif.

3664
 J. Chil. Chem. Soc., 62, Nº 4 (2017)

Tabel 3: Nilai persen dari aktivitas antioxidan total, DPPH • +, radikal anion superoksida, hidrogen peroksida, DMPD • + aktivitas pemulungan radikal dan ekstrak logam chelating efek yang berbeda Crataegus
meyeri Pojark pergi dibandingkan dengan kontrol positif.

Total aktivitas antioksidan%

Konsentrasi (48.jam)
( X ± SEM)

C. meyeri Pojark aqueous ext. (10 m g mL- 1) 68,42 ± 4,61 c, c1, c2

C. meyeri Pojark aqueous ext. (20 m g mL- 1) 71,45 ± 5,88

C. meyeri Pojark aqueous ext. (30 m g mL- 1) 74,27 ± 4,37

C. meyeri Pojark ethanol ext. (10 m g mL- 1) 84,67 ± 1,11 c

C. meyeri Pojark ethanol ext. (20 m g mL- 1) 84,63 ± 0,85 c1

C. meyeri Pojark ethanol ext .. (30 m g mL- 1) 85,22 ± 0,43 c2

Sebuah- tokoferol (30 m g mL- 1) 81,08 ± 0,73

BHT (30 m g mL- 1) 82,09 ± 0,39

Trolox (30 m g mL- 1) 81,23 ± 1,05

Tanaman ext. Aktivitas pemulungan DPPH%

C. meyeri Pojark aqueous ext. 50,59 ± 0,19

C. meyeri Pojark ethanol ext. 53,84 ± 0,09

BHT 52,95 ± 0,41

Konsentrasi (45 µg mL- 1) DMPD • + % aktivitas pemulungan radikal

C. meyeri Pojark encer 45,83 ± 0,2257 c

C. meyeri Pojark etanol 50,61 ± 0,8034 Sebuah

BHT 39,17 ± 0,2397 Sebuah

α- tokoferol 48,41 ± 0,4599 c

Konsentrasi (60 µg mL- 1) Aktivitas pembersihan radikal anion superoksida%

C. meyeri Pojark berair 42,74 ± 2,88 b

C. meyeri Etanol Pojark 50,85 ± 2,21 Sebuah

BHT 18,49 ± 4,25 b, a,

Trolox 52,65 ± 1,59

Konsentrasi (60 µg mL- 1) Aktivitas pembersihan hidrogen peroksida%

C. meyeri Pojark berair 48,14 ± 0,8652 b

C. meyeri Etanol Pojark 53,37 ± 1.008 a, b1

BHT 40,93 ± 0,7256 b, a

Trolox 46,98 ± 1.141 b1

Konsentrasi (30 µg mL- 1) Efek chelating logam%

C. meyeri Pojark berair 54,23 ± 10,07 b, b1

C. meyeri Etanol Pojark 63,16 ± 1.033 a, b2, a1

BHT 19,93 ± 2.165 b, a

trolox.dll 32,33 ± 0,3307 b2

Sebuah- tokoferol.dll 21,68 ± 2.501 b1, a1

a, a1: p <0,001, b, b1, b2: p <0,01, c, c1, c2: p <0,05 (huruf berbeda, perbedaan signifikan antar kelompok)

Fenolat total berbagai ekstrak tumbuhan diukur dengan uji folin-ciocalteau sedangkan Kandungan flavonoid diekstrak dari C. meyeri ekstrak air dan etanol adalah 2,15 ± 0,008
total flavonoid diperkirakan menggunakan metode aluminium klorida untuk flavonoid. mg QE g- 1 dan 3,56 ± 0,012 mg QE g- 1, masing-masing.
Kandungan fenolik dan flavonoid total dari ekstrak tumbuhan ditentukan dan diekspresikan Daya serap ( l 415nm) = 0,012 x [QE (mg)] -0,0149 (r 2: 0,9962)
dalam mg asam galat dan ekuivalen karcetin.
DISKUSI
Daya serap ( l 760nm) = = 0,0011 x [GAE (mg)] + 0,0747 (r 2: 0,9930)
Total kandungan fenolik dan flavonoid pada penelitian ini dilakukan Spesies oksigen reaktif seperti radikal hidroksil, superoksida, dan peroksil dibentuk dalam sel
mengevaluasi total kandungan fenolik dan flavonoid dari C. meyeri ekstrak air dan etanol. manusia oleh faktor-faktor endogen dan secara eksogen mengakibatkan kerusakan oksidatif
Kandungan total fenolik yang umum ditemukan pada tumbuhan dilaporkan memiliki ekstensif yang pada gilirannya menyebabkan kondisi degeneratif geriatri, kanker, dan berbagai
beberapa aktivitas biologis termasuk aktivitas antioksidan. Isi fenolik total ekstrak dari C. penyakit manusia lainnya. Karotenoid, pigmen alami dari tumbuhan bereaksi cepat dengan radikal
meyeri air dan etanol adalah 9.056 ± 0,35 mg GA g- 1 dan 11.291 ± 0,021 mg GA g- 1, masing-masing.
bebas ini dan memperlambat atau mengurangi tingkat kerusakan oksidatif [17].

3665
J. Chil. Chem. Soc., 62, Nº 4 (2017)
Hasil aktivitas antioksidan total saat ini menunjukkan bahwa penghambatan (%) dari C. meyeri ext
berair. (10 m g mL- 1) secara signifikan lebih rendah dari etanol ext. (10, 20, 30 m g mL- 1) ( p <0,05), (p
<0,05), (p <0,05) masing-masing. C. meyeri
Ekstrak etanol menunjukkan aktivitas antioksidan yang tinggi. Ekstrak air memulung lebih sedikit radikal daripada
ekstrak etanol.
Aktivitas pembersihan radikal bebas DPPH merupakan model yang banyak digunakan untuk
mengevaluasi kemampuan pembersihan radikal bebas dari berbagai senyawa. Absorbansi menurun
pada 517 nm, menghasilkan perubahan warna dari ungu menjadi kuning, karena radikal dihilangkan
oleh antioksidan melalui sumbangan hidrogen untuk membentuk molekul DPPH yang stabil.
Konsentrasi sampel
diperlukan untuk mengurangi konsentrasi awal DPPH hingga 50% (IC 50) di bawah
kondisi eksperimental ditentukan. Nilai yang lebih rendah jika IC 50 menunjukkan aktivitas antioksidan yang
lebih tinggi [3]. Konsentrasi sampel diperlukan untuk mereduksi
konsentrasi awal DPPH sebesar 50% (IC 50) dalam kondisi eksperimental
ditentukan. Turunkan nilai IC 50 menunjukkan aktivitas antioksidan yang lebih tinggi. Aktivitas
pembersihan radikal bebas terbaik diperoleh dengan ekstrak etanol
(IC 50 435,13 ± 2,71 µg mL- 1), sedangkan ekstrak air menunjukkan perbandingan
tingkat aktivitas pembersihan radikal bebas dengan IC 50 nilai 877,73 ± 6,98 µg mL- 1. Dapat
disimpulkan bahwa ekstrak etanolik buah C. meyeri ( Ara
2) menunjukkan aktivitas antioksidan in vitro yang lebih kuat, dengan persentase penghambatan yang lebih tinggi,
dibandingkan dengan ekstrak encer C. meyeri ( Gambar 2).
Barreira et al., [34] telah melaporkan hal itu Crataegus monogyna Ekstrak etanol dan
cairan ditemukan 167 ± 6,0 µg mL- 1 811 ± 14 µg mL- 1
masing-masing. Dalam penelitian ini diperoleh C. meyeri ekstrak etanol daun (IC
- 1), sedangkan ekstrak air menunjukkan kadar yang sebanding 0
435,13 ± 2,71 µg mL
aktivitas pembersihan radikal bebas dengan IC 50 nilai 877,73 ± 6,98 µg mL- 1.
Itu terlihat dalam penelitian kami bahwa aktivitas pemulungan DPPH (%), C. meyeri Daun-daun
Ekstrak etanol dan air ditentukan% 53,84 ± 0,09 dan% 50,59 ±
0,19, namun Liu et al., [35] menemukan% 55,34 ± 0,85 pada buah hawthorn. Daya reduksi yang
digunakan untuk mengukur kemampuan reduksi antioksidan dievaluasi dengan transformasi Fe
(III) menjadi Fe (II) dengan adanya ekstrak air dan etanol. C. meyeri Daun-daun. Antioksidan
mengurangi Fe 3+ ferricyanide complex menjadi bentuk besi dengan mendonasikan sebuah
elektron. Warna larutan uji kemudian berubah dari kuning menjadi warna hijau dan biru yang
berbeda [3]. Absorbansi C. meyeri ext berair. secara signifikan lebih rendah daripada kontrol
positif Sebuah- tokoferol dan BHT (p <0,001), (p <0,001). Di samping itu, C. meyeri ethanol ext.
secara signifikan lebih rendah daripada kontrol positif Sebuah- tokoferol dan BHT (p <0,001), (p
<0,001) masing-masing.
Umumnya, anion superoksida diubah menjadi oksigen dan hidrogen peroksida dengan superoksida
dismutase, atau mereka bereaksi dengan oksida nitrat untuk membentuk peroksinitrit. Hidrogen peroksida
dapat diubah menjadi air dan oksigen dengan katalase. Oleh karena itu, kapasitas pembersihan superoksida
dalam tubuh manusia sangat penting sebagai garis perlindungan pertama terhadap stres oksidatif [1].
Aktivitas pemulungan radikal anion superoksida (%) dari semua ekstrak tanaman secara signifikan lebih
tinggi dibandingkan dengan aktivitas BHT (p <0,01), (p <0,001). Aktivitas pemulungan anion superoksida
dari C. meyeri ekstrak air tidak menunjukkan perbedaan yang signifikan dibandingkan dengan C. meyeri ekstrak
etanol (Tabel 3).
Ion logam transisi bivalen memainkan peran penting sebagai katalisator proses oksidatif, yang
mengarah pada pembentukan radikal hidroksil dan reaksi dekomposisi hidroperoksida melalui kimia
fenton. Prosesnya dapat ditunda dengan kelasi besi dan deaktivasi. Oleh karena itu, kemampuan
ekstrak untuk mengkelat ion besi (II) dievaluasi dan dinyatakan sebagai% kapasitas khelasi [7].
Hasil penelitian menunjukkan bahwa efek pengelat logam (%) C. meyeri kadar air lebih tinggi dari
BHT dan Sebuah- tokoferol (p <0,01), (p <0,01) masing-masing. Di sisi lain, C. meyeri tingkat etanol
secara signifikan lebih tinggi BHT, trolox dan
Sebuah- tokoferol (p <0,001), (p <0,01), (p <0,001) masing-masing (Tabel 3).
Kandungan fenolik ekstrak air C. meyeri untuk membandingkan ekstrak etanol secara
signifikan berbeda ff erent (P <0,001), Di sisi lain, total konten avanoid C. meyeri ekstrak air
secara signifikan lebih rendah dari ekstrak etanol (P <0,01). Total kandungan fenolik dan
flavonoid dari C. meyeri
Ekstrak etanol daun lebih tinggi daripada kandungan ekstrak air, hasil ini menunjukkan bahwa
tingkat aktivitas antioksidan yang lebih tinggi disebabkan oleh adanya komponen fenolik dan
flavonoid.
Senyawa fenolik dan flavonoid mungkin bertanggung jawab atas aktivitas pembersihan radikal
bebas yang diamati. Konsentrasi total fenol yang dinyatakan ekivalen dengan asam galat menunjukkan
korelasi dengan aktivitas antioksidan. Dalam studi ini, kami menemukan bahwa kandungan fenolik dan
flavonoid total C. meyeri
ekstrak air dan etanol daun sebanding dengan tingkat yang ditemukan oleh para peneliti
[35,36]. dan juga ditemukan bahwa rerata kadar fenolik total etanol dan ekstrak air
ditemukan 9.056 ± 0,35 mg GA g- 1 dan 11.291 ± 0,021 mg GA g- 1, total fl kadar avanoid
etanol dan ekstrak air 2,15 ± 0,008 mg QE g- 1 dan 3,56 ± 0,012 mg QE g- 1. Hasil ekstrak
daun tersebut
3666
lebih rendah dari [35] yang menentukan total fenolik (32,75 ± 1,20 mg GA g- 1) dan fl avonoid (50,97
± 2,24 mg RE g- 1) kandungan dalam buah hawthorn, dalam penelitian lain [36] melaporkan itu Crataegus
azarolus Daun metanol dan ekstrak air ditemukan kandungan fenolik total 30,6 ± 2,5 mg GA g- 1 dan
13,6 ±
1,8 mg GA g- 1 masing-masing.
Ekstrak etanol dari C. meyeri memiliki aktivitas antioksidan total yang lebih tinggi, aktivitas
pembersihan radikal DPPH, DMPD, aktivitas pembersihan radikal bebas, aktivitas pembersihan
radikal anion superoksida, aktivitas pembersihan hidrogen peroksida, efek pengkelat logam,
kandungan total fenolik dan fl avonoid daripada ekstrak airnya. Sebaliknya, daya reduksi total ekstrak
etanol lebih rendah daripada ekstrak air. C. meyeri Ekstrak air memiliki daya reduksi yang baik. Oleh
karena itu, ekstrak etanol C. meyeri dapat menjadi antioksidan yang lebih efektif daripada ekstrak
airnya.
Semua ekstrak terbukti memiliki aktivitas pembasmi radikal bebas dan mengurangi daya, tetapi
pada tingkat yang berbeda. Aktivitas antioksidan diukur terhadap spesies radikal yang dihasilkan
dalam sistem aksinya, seperti radikal DPPH (uji aktivitas pemulung DPPH) atau dengan efek reduksi
pada Fe. 3 + / ferricyanide complex (uji daya pereduksi). Ekstrak etanolik memberikan antioksidan yang
lebih tinggi
aktivitas (EC lebih rendah 50 nilai-nilai; daripada ekstrak air, yang sesuai dengan kandungan fenolat
tertinggi yang ditemukan pada ekstrak etanol.
KESIMPULAN
5
C. meyeri ekstrak daun menunjukkan kapasitas antioksidan yang unggul dan kuat dalam hal
aktivitas antioksidan total, aktivitas pemulungan radikal DPPH, aktivitas pembersihan radikal bebas
DMPD, aktivitas pemulungan radikal anion superoksida, aktivitas pembersihan hidrogen peroksida,
pengujian efek chelating logam, dan hasil ini konsisten dengan nilai kandungan total fenolik,
flavonoid dan vitamin (A, E, C) yang tinggi. Penelitian ini menunjukkan tingginya kandungan fenolik,
flavonoid dan potensi antioksidan C. meyeri ekstrak etanol dan air daun yang dapat berkontribusi
untuk mempertahankan status antioksidan dan melindungi dari kerusakan akibat radikal bebas. C.
meyeri dianggap digunakan sebagai
bahan tambahan untuk produk makanan dan industri farmasi dengan tepat
sifat antioksidan dan antioksidan dalam penelitian model hewan percobaan di masa mendatang, melawan
radikal bebas yang dihasilkan sebagai respons terhadap stres oksidatif;
Selain itu, diperkirakan data tersebut akan menjadi acuan untuk penelitian selanjutnya.
UCAPAN TERIMA KASIH
Studi ini didukung oleh dana dari Kepresidenan Proyek Penelitian Ilmiah Universitas
Yuzuncu Yil (2011-FED-B041).
REFERENSI
1.- S. Kim, M. Yang, OH Lee, SM Kang, Lwt-Ilmu dan Teknologi Pangan
44, 1328 (2011).
2.- MS Fernández-Pachón, D. Villaño, MC Garc´Ia-Parrilla, AM Troncoso. Analytica
Chimica Acta, 513, 113, (2004).
3.- E. Nandhakumar, P. Indumathi. Jurnal Studi Akupunktur dan Meridian, 6, 142,
(2013).
4.- J. Wang, Q. Zhang, Z. Zhang, H. Song, P. Li. Jurnal Internasional Makromolekul
Biologi. 46, 6, (2010).
5.- MA Esmaeili, A. Sonboli. Toksikologi Makanan dan Kimia. 48, 846, (2010).
6.- SS Chun, DA Vattem, YT Lin, K. Shetty. Proses Biokimia. 40,
809, (2005).
7.- P. Nisha, P. Abdul Nazar, PA Jayamurthy, Toksikologi Pangan dan Kimia.
47, 2640, (2009).
8.- IA Al-Saleh, G. Billedo, I..I. El-Doush. Jurnal Komposisi dan Analisis Pangan. 19.167,
(2006).
9.- I. Klimczak, M. Malecka, M. Szlachta, A. Gliszczynska- Swiglo. Jurnal Komposisi dan
Analisis Pangan. 20, 313, (2007).
10.- A. Kataba-Pendias, H. Pendias. Elemen jejak di tanah dan tanaman, 2001
Edisi ke-3. Crc, Washington, Usa.
11.- A. Sokoł-Łetowska, J. Oszmianski, A. Wojdyło. Kimia Pangan. 103,
853, (2007).
12.- I. Gulcin, I. Gungor Sat, S. Beydemir, M. Elmastas, OI Kufrevioglu.
Kimia Pangan. 87, 393, (2004).
13.- H. Mitsuda, K. Yuasumoto, K. Iwami. Eiyo To Shokuryo. 19, 210, 1996. Technologie.32,
14.- PD Duh, YY Tu, GC Yen. Lebnesmittel-Wissenchaft und
269, (1999).
15.- Y. Wang, F. Mao, X. Wei. Polimer Karbohidrat. 88, 146, (2012).
16. - M. Oyaizu. Japan Journal of Nutrition, 44, 307, (1986).

17.- KS Chandini, P. Ganesan, N. Bhaskar. Kimia Pangan. 107, 707, (2008).
18. - RJ Ruch, SJ Cheng, JE Klaunji. Karsinogenesis. 10, 1003, (1989).
19.- J. Zhishen, T. Mengcheng, .W. Jianming. Kimia Pangan. 64, 555, (1999).
20.- TCP Dinis, VMC Madeira, LM Almeida. Arsip Biokimia dan Biofisika. 315.161,
(1994).
21.- V. Fogliano, V. Verde, G. Randazzo, A. Ritieni. J. Agric. Kimia Pangan.
47, 1035, (1999).
22.- I..Gulcin, R. Elias, A. Gepdiremen, A. Chea, F. Topal. J. Enzym. Menghambat. Med. Chem. 25,
44, (2010).
23. - VL Singleton, R. Orthofer, RM Lamuela Raventos. Dalam Enzimologi.
299, 152, (1999).
24.- N. Gamez-Meza, JA Noriega-Rodriguez, LA Medina-Juarez, J. Ortega- Garcia, R.
Cazarez-Casanova, O. Argulo-Guerreo. Jaocs. 76, 1445, (1999).
25.- OS Yi, A. Meyer, N. Frankel. Jaocs.74, 1301, (1997).
26.- JL Lamasion, A. Carnat, C. Petitjean ,. Ann. Pharm. 48, 335, (1990)
27. - E. Urgeova, L. Polivka. Nova Biotechnologica. 9, 327, (2009).
28.- Y. Chen, H. Chang, C. Wang, F. Cheng. Jurnal Asia-Australia
J. Chil. Chem. Soc., 62, Nº 4 (2017)
Ilmu Peternakan. 22, 1587, (2009).
29. - M. Cuendet, .K. Hostettmann, O. Potterat. Helv. Chim. Acta. 80, 1144, (1997).
30. - Q. Su, KG Rowley, NDH Balazs. Jurnal Kromatografi B.781, 393, (2002).
31. - R. Bruni, .M. Muzzoli, M. Ballero, MC Loi, A. Fantinc, F..Polid. Fitoteraphia. 75, 50,
(2004).
32.- A. Sahin, Y. Kiran, F. Karatas, S. Sonmez. Jurnal Biologi Tanaman Integratif. 47, 487,
(2005).
33. - NA Golubkina, OV Prudnik. Jurnal Kimia Analisis. 44, 1091, (1989).
34. - JCM Barreira, S. Rodrigues, AM Carvalho, ICFR Ferreira. Tanaman Industri dan Produknya.
42, 175, 2013
35.- H. Liu, N. Qiu, H. Ding, R. Yao. Food Research International. 41, 363, (2008).
36.- AH Al-Mustafa, .; OY Al-Thunibat ,. Pak J Biol Sci., 11.351, (2008).
3667