Jurnal Ilmiah Bakti Farmasi, 2016, 1 (1), hal 23-30 23

PERBANDINGAN DAYA ANTIOKSIDAN ANTARA EKSTRAK TOTAL DAN

HASIL FRAKSINASI PETAI DAN KULIT PETAI (Parkia speciosa Hassk)
DENGAN METODE PENANGKALAN RADIKAL BEBAS DPPH

Lasmaryna Sirumapea*, Aswardi

Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Bhakti Pertiwi Palembang
*
e-mail : lasmaryna2906@gmail.com

ABSTRAK

Telah dilakukan penentuan besarnya aktifitas antioksidan dari biji petai ((Parkia
speciosa Hassk) dan kulit petai dengan metode penangkalan radikal bebas DPPH.
Pemeriksaan dilakukan terhadap ekstrak kental, fraksi air, fraksi etil asetat dan fraksi
heksan; masing-masing fraksi mewakili tingkat kepolaran pelarut. Ekstraksi dilakukan
dengan cara maserasi menggunakan pelarut etanol yang dimurnikan dengan proses
destilsi, dan dilanjutkan dengan fraksinasi. Rendemen dari ekstrak biji petai adalah
2,3%; sementara kulit petai memberikan nilai rendemen sebesar 5,86%. Penetapan
aktifitas antioksidan didasarkan atas prinsip penangkalan ekstrak dan hasil fraksinasi
terhadap radikal 1,1 diphenyl pycryl didrazyl (DPPH). Besarnya aktifitas antioksidan
diwakili oleh nilai IC-50, yang menyatakan besarnya konsentrasi yang mampu
menghambat radikal bebas sebesar 50%. Dari penelitian ini didapatkan bahwa fraksi etil
asetat kulit petai memiliki potensi antioksidan terbesar, dengan nilai IC-50 sebesar
85,92 ppm. Sementara pada biji petai aktifitas antioksidan terbesar terdapat pada ekstrak
total dengan nilai IC-50 = 136,29 ppm.

Kata Kunci : aktifitas antioksidan, ekstrak total, fraksi, IC-50, radikal bebas

PENDAHULUAN penyakit degeneratif seperti penyakit

Pemanfaatan tanaman
tradisional sebagai tumbuhan
berkhasiat obat telah banyak digunakan
oleh masyarakat dinegara kita. Untuk
menunjang hal tersebut perlu diteliti
kandungan kimia dari tanaman yang
bersangkutan dan juga apakah tanaman
tersebut memiliki efek farmakologis
tertentu. Misalnya, apakah tanaman
tersebut memiliki efek anti mikroba,
antioksidan, bersifat sitotoksik, dan
sebagainya.
Akhir-akhir ini kajian mengenai
aktivitas antioksidan menjadi perhatian
peneliti. Penggunaan senyawa
antioksidan juga anti radikal saat ini
semakin meluas seiring dengan semakin
besarnya pemahaman masyarakat
tentang peranannya dalam menghambat
jantung, arteriosclerosis, kanker, serta
gajala penuaan. Masalah-masalah ini
berkaitan dengan kemampuan
antioksidan untuk bekerja sebagai
inhibitor (penghambat) reaksi oksidasi
oleh radikal bebas reaktif yang menjadi
salah satu pencetus penyakit-penyakit
diatas (Syamsul, 2003).
Berdasarkan sumber
perolehannya ada 2 macam antioksidan,
yaitu antioksidan alami dan antioksidan
buatan (sintetik) (Hernani, 2005).
Tubuh manusia tidak mempunyai
cadangan antioksidan dalam jumlah
yang berlebih, sehingga jika terjadi
paparan radikal berlebih maka tubuh
membutuhkan antioksidan eksogen.
Adanya kekhawatiran akan
kemungkinan efek samping yang belum
diketahui dari antioksidan sintetik

Lasmaryna Sirumapea dkk

24 Jurnal Ilmiah Bakti Farmasi, 2016, 1 (1), hal 23-30
menyebabkan antioksidan alami
menjadi alternatif yang sangat
dibutuhkan (Sunarni, 2005).
Antioksidan alami mampu melindungi
tubuh terhadap kerusakan yang
disebabkan spesies reaktif, mampu
menghambat terjadinya penyakit
degeneratif serta mampu menghambat
peroksidase lipid pada makanan.
Meningkatnya minat untuk
mendapatkan antioksidan alami terjadi
beberapa tahun terakhir ini (Sunarni,
2005). Sebagian radikal bebas juga
dapat menurunkan sistem kekebalan
tubuh. bahwa flavonoid dari tumbuhan
dilaporkan dapat bertindak sebagai
Antioksidan disebabkan kemampuannya
yang dapat menangkal radikal bebas
dan oksigen aktif. Gugus hidroksi
fenolik dari turunan flavonoid
mempunyai kemampuan menangkap
radikal bebas dengan membentuk
radikal baru (Buhler dan Miranda,
2000).
Literatur menginformasikan
bahwa buah petai banyak mengandung
zatberkhasiat, antara lain : protein,
karbohidrat, fosfor, vitamin A, vitamin
C dan zat besi, vitamin dan mineral
lainnya. Petai merupakan sumber energi
yang baik, yaitu 142 kkal per 100 g biji.
Kandungan vitamin C dilaporkan cukup
tinggi yaitu 46 mg per 100 gram buah
(Health Magazine, 2007). Petai juga
mengandung fenolik yang sangat
berperan memerangi radikal bebas
(Kurniawan, 2012). Penelitian terdahulu
menyebutkan bahwa petai cina, masih
dari keluarga petai, memiliki efek
antioksidan yang sangat baik, dan dapat
meningkatkan kadar SOD dalam darah
karena bersifat antioksidan
(Nurhasanah, 2005)
Kulit petai diketahui memilki
manfaat sebagai antioksidan,
antidiabetik, dan antiangiogenik. Hal ini
karena di dalamnya mengandung
senyawa fenol dan flavonoid dalam
Lasmaryna Sirumapea dkk
jumlah yang besar. Dikalangan
masyarakat hanya diketahui bahwa kulit
petai yang mengandung fenol dapat
digunakan untuk anti-inflamasi luar
(Aden dkk, 2013). Peneliti-peneliti yang
pernah meneliti kulit petai antara lain
yaitu Tobing (2013) yang membahas
pemanfaatan ekstrak kulit petai (Parkia
speciosa Hassk) sebagai antioksidan
alami.
Tujuan dapi penelitian ini adalah
menentukan apakah benar biji petai dan
kulit petai potensial sebagai antioksidan
alami. Kandungan senyawa yang
terkandung didalam petai dan kulit petai
memungkinkan untuk menjadikan petai
dan kulit petai sebagai antioksidan
alami yang relatif aman.
METODE PENELITIAN
Alat
Alat yang digunakan pada
penelitian ini antara lain seperangkat
alat destilasi, seperangkat alat rotary
evaporator, botol maserasi, vial,
corong, kertas saring, kapas, pipet tetes,
batang pengaduk, gelas ukur, gelas
kimia, labu ukur, spektrofotometri UV-
VIS (NS11).
Bahan
Bahan yang digunakan pada
penelitian ini antara lain biji petai, kulit
petai (Parkia speciosa Hassk), pereaksi
DPPH (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil),
etanol 96% (C2H5OH), aquadest (H2O),
metanol (CH3OH), kloroform (CHCl3),
asam sulfat (H2SO4), etil asetat
(CH3COOC2H5), n-heksan (C6H14),
vitamin C (C6 H8O6), pereaksi mayer
dan pereaksi Libermann-buchard.
 Jurnal Ilmiah Bakti Farmasi, 2016, 1 (1), hal 23-30
Prosedur
Penelitian ini dilakukan berdasarksan
urutan berikut :
Pemeriksaan kandungan kimia
yaitu flavonoid, fenol, terpenoid dan
steroid. Pemeriksaan ini dilakukan
dengan menggunakan pereaksi yang
sesuai
Kandungan flavonoid diuji dengan
cara berikut : 4 gram sampel segar
dipotong halus kemudian didihkan
dengan 25 ml etanol, disaring selagi
panas, filtrat diuapkan hingga tinggal
setengahnya, lalu ditambahkan beberapa
tetes HCl pekat dan serbuk Mg. Diamati
perubahan warna yang terjadi, adanya
flavonoid ditandai dengan warna merah.
(Simes et al, 1959).
Kandungan terpenoid, saponin dan
golongan fenol dilakukan sebagai
berikut : Sebanyak 4 gram sampel segar
dipotong halus dan didihkan dengan 25
ml etanol selama 15 menit, disaring
selagi panas, kemudian filtrat diuapkan
sampai kering, ekstrak yang didapat
ditambahkan kloroform dan air suling
(1:1) sebanyak 5 ml masing-masing,
kocok biarkan sejenak sehingga
terbentuk kloroform dan lapisan air.
Sebagian lapisan air kocok kuat-kuat
dalam sebuah tabung reaksi. Bila ada
saponin akan terbentuk busa yang stabil
selama 15 menit. Sebagian dari lapisan
air ditambahkan besi klorida, reaksi
dinyatakan positif mengandung fenol
bila terjadi perubahan warna menjadi
biru atau hitam. Pada lapisan kloroform,
disaring dengan norit, filtrat biarkan
kering pada plat tetes dan ditambahkan
pereaksi Liebermann-Bouchard.
Senyawa terpenoid umumnya
memberikan warna merah, sedangkan
steroid memberikan warna biru-hijau
(Simes et al, 1959).
Ekstraksi dan fraksinasi sampel.
Ekstraksi dilakukan dengan maserasi,
yang dilakukan didalam botol gelap.
25
Sampel yang telah bersih direndam
dengan etanol hasil destilasi Botol
ditutup rapat dan simpan ditempat yang
terlindung dari cahaya matahari,
sesekali dikocok. Biarkan selama 5 hari
lalu ekstrak disaring, ulangi maserasi ini
3 kali. Maserat diuapkan dan dipekatkan
dengan rotary evaporator dan diperoleh
ekstrak kental. Fraksinasi dilakukan
dengan cara : ekstrak kental etanol
dilarutkan di dalam beaker gelas dengan
aquadest sebanyak 300 ml, kemudian
dimasukan ke dalam corong pisah yang
bervolume 500 ml, selanjutnya di
fraksinasi dengan n-heksan sebanyak
200 ml di dalam corong pisah,
fraksinasi dilakukan berulang sampai
pelarut n-heksan berwarna bening
sehingga diperoleh 2 (dua) fraksi yaitu
fraksi air dan fraksi n-heksan. Fraksi n-
heksan diuapkan sehingga didapat fraksi
kental n-heksan. Fraksi air selanjutnya
di fraksinasi lagi dengan menggunakan
etil asetat sebanyak 200 ml, fraksinasi
dilakukan berulang sampai pelarut etil
asetat berwarna bening sehingga
diperoleh 2 (dua) fraksi lagi yaitu fraksi
air dan fraksi etil asetat. Fraksi etil
asetat dan fraksi air kemudian diuapkan
lagi sehingga didapat fraksi kental etil
asetat dan fraksi kental air.
Penentuan aktifitas antioksidan.
dilakukan terhadap ekstrak kental hasil
ekstraksi dan fraksinasi. Ekstrak
sampel dibuat dalam 5 konsentrasi,
yaitu 40, 80, 120, 160 dan 200 ppm.
Untuk penentuan aktivitas antioksidan
dari masing-masing ekstrak diambil 0,2
ml larutan sampel dari berbagai
konsentrasi, kemudian ditambahkan 3,8
ml larutan DPPH 0,05 mM. Campuran
larutan dihomogenkan dan dibiarkan
selama 30 menit ditempat gelap.
Serapan diukur dengan
spektofotmeter UV-Vis pada panjang
gelombang serapan maksimum DPPH
516 nm (atau sesuai hasil pengukuran,
dimana absorman maksimal). Pengujian
Lasmaryna Sirumapea dkk
26 Jurnal Ilmiah Bakti Farmasi, 2016, 1 (1), hal 23-30

aktivitas antioksidan dilakukan triplo dalam membran sel, sehingga

untuk masing-masing konsentrasi
larutan sampel.
Aktivitas antioksidan sampel
ditentukan oleh besarnya hambatan
serapan radikal DPPH melalui
perhitungan persentasi inhibisi serapan
DPPH. Selanjutnya ditentukan nilai IC50
dengan menggunakan persamaan linier
yang didapatkan dari perbandingan
garis lurus antara konsentrasi dan
persen inhibisi. Kemudian dilakukan
perbandingan aktifitas antioksidan
dengan pembanding vitamin C.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil uji fitokimia terhadap
sampel segar pada biji petai
mengandung saponnin, flavonoida dan
golongan fenol sementara pada kulit
petai menunjukkan bahwa kulit petai
mengandung senyawa alkaloid,
flavonoid, fenolik, dan saponin.
Hasil rendemen buah petai (Parkia
bspeciosa), adalah 2,3 % b/b. Ekstraksi
dilakukan secara maserasi karena cara
ini relative sederhana dan aman.
Sederhana,karena hanya perlu direndam
dengan pelarut, aman karena dengan
cara maserasi tidak dikhawatirkan
menghilangnya zat aktif yang tidak
tahan pemanasan. Pelarut etanol
digunakan karena pelarut ini bersifat
universal, melarutkan hampir seluruh
golongan senyawa dan juga relatif aman
bagi peneliti. Dari ekstraksi sebanyak 1
kg sampel segar kulit petai (Parkia
speciosa Hassk) didapatkan ekstrak
kental sebanyak 58,6 gram dengan
persen rendemen 5,86 % b/b. Pada
pelaksanaan ekstraksi, dilakukan
perajangan dengan tujuan untuk
memperluas permukaan sampel, agar
pelarut semakin mudah berpenetrasi ke
mempercepat proses pelarutan senyawa
yang terdapat pada tumbuhan ke dalam
pelarut yang digunakan (Djamal, 2010).
Fraksinasi dilakukan dengan pelarut air
(polar), etil asetat (semi polar) dan n-
heksan (nonpolar). Tujuan dari proses
fraksinasi adalah untuk memisahkan
senyawa kimia berdasarkan tingkat
kepolarannya. Hasil fraksinasi dari
masing-masing ekstrak kemudian
dikentalkan kembali dengan
menggunakan alat rotary evaporator
sehingga didapat ekstrak kental dari
masing-masing fraksi.
Pengujian aktifitas antioksidan
dengan menggunakan metode DPPH
(2,2-difenil-1- pikrilhidrazil) dan
pengukuran dengan Spektrofotometri
Uv-Vis. Aktivitas antioksidan metode
DPPH ditunjukkan oleh hambatan
serapan radikal DPPH pada panjang
gelombang serapan maksimum 516 nm.
(Gambar 1). Pengujian aktivitas
antioksidan metode DPPH ini
dilakukan setelah dibiarkan selama 30
menit dan dilakukan ditempat gelap
dikarenakan DPPH (2,2-difenil-1-
pikrilhidrazil) sangat peka terhadap
cahaya. Aktivitas antioksidan terlihat
dari penurunan serapan larutan DPPH
akibat adanya penambahan sampel.
Apabila DPPH direduksi maka
ditunjukkan dengan penurunan
intensitas warna keunguan menjadi
warna kuning atau bahkan menjadi
bening atau tidak berwarna sesuai
tingkat kekuatan antioksidan. Perubahan
intensitas warna disebabkan oleh
berkurangnya ikatan rangkap
terkonjugasi pada DPPH, karena
elektron pada radikal DPPH
berpasangan dengan atom hidrogen dari
antioksidan menjadi DPPH-H yang
merupakan radikal bebas.

Lasmaryna Sirumapea dkk

 Jurnal Ilmiah Bakti Farmasi, 2016, 1 (1), hal 23-30 27

Gambar 1. Puncak serapan maksimum DPPH sebagai acuan

Penurunan serapan dinyatakan sebagai persen inhibisi yang dapat dihitung

berdasarkan :
Absorban DPPH – Absorban (DPPH + Sampel)
% Inhibisi = × 100
Absorban DPPH

Selanjutnya dari perhitungan Tabel 1. Nilai IC-50 ekstrak dan fraksi

persen inhibisi masing-masing hasil biji petai
ekstraksi kemudian dihitung IC50.
Untuk menentukan IC50 dari ekstrak No Sampel IC-50, ppm
kulit petai hasil ekstraksi secara 1 Ekstrak total 136,29
maserasi dari beberapa fraksi air, etil 2 Fraksi n-heksan 1064,955
asetat dan fraksi n-heksan dilakukan 3 Fraksi etil asetat 177,56
dengan memasukkan nilai hasil 4 Fraksi air 48,42
perhitungan kedalam persamaan linier
dengan konsentrasi (ppm) sebagai absis Tabel 2. Nilai IC-50 ekstrak dan fraksi
( X ) dan nilai persentase inhibisi kulit petai
sebagai ordinat ( Y ). Nilai IC50 dari
perhitungan pada saat persen inhibisi No Sampel IC-50, ppm
sebesar 50% dengan persamaan y = ax 1 Ekstrak total 110,16
+ b. 2 Fraksi n-heksan 704,27
Berikut ini adalah tabel yang 3 Fraksi etil asetat 85,92
menyatakan nilai IC-50 dari ekstrak dan 4 Fraksi air 222,73
hasil fraksi biji petai dan kulit petai
pada masing-masing fraksi.

Lasmaryna Sirumapea dkk

28 Jurnal Ilmiah Bakti Farmasi, 2016, 1 (1), hal 23-30
Semakin kecil nilai IC50, maka
semakin besar aktivitas antioksidan
pada sampel uji dalam mereduksi
radikal bebas. Pada sampel kulit petai,
fraksi etil asetat lebih cepat mereduksi
senyawa radikal bebas yang ada pada
DPPH sehingga memiliki efektivitas
yang lebih besar dibandingkan dengan
ekstrak total, fraksi air dan fraksi n-
heksan. Dari ketiga fraksi tersebut,
didapatkan hasil bahwa nilai IC50 fraksi
etil asetat dari ekstrak kulit petai
memiliki nilai aktivitas antioksidan
terbaik yaitu 85,92 ppm dan dari
literatur diketahui bahwa nilai ini
tergolong dalam golongan aktivitas
antioksidan yang bersifat kuat (Armala,
2009).
Aktivitas antioksidan yang
dimiliki oleh fraksi etil asetat kulit petai
disebabkan kandungan polifenol yang
mengandung flavonoid, seperti yang
diketahui bahwa senyawa flavonoid
yang termasuk dalam polifenol dapat
berfungsi sebagai antioksidan karena
adanya gugus hidroksil yang terikat
pada strukturnya (Rohman, 2005).
Fraksi etil asetat yang bersifat semipolar
juga mengandung lebih banyak
komponen senyawa antioksidan seperti
isoflavon dalam bentuk aglikon (non
polar) maupun glikon (polar), hal ini
menyebabkan lebih beragamnya
kandungan komponen isoflavon dalam
fraksi etil asetat dibandingkan dengan
ekstrak total, fraksi air dan fraksi n-
heksan (Irianti dkk, 2011).
Aktivitas antioksidan pada
ekstrak total bersifat sedang dengan
nilai IC50 sebesar 110,16 ppm lebih
rendah dari fraksi etil asetat. Hal ini
dikarenakan senyawa-senyawa kimia
yang ada di ekstrak total bekerja tidak
sinergis sehingga aktivitas
antioksidannya lebih rendah
dibandingkan dengan fraksi etil asetat
dan masih terkandung senyawa-
senyawa didalamnya yang bersifat polar
Lasmaryna Sirumapea dkk
dan non polar (Marliana dan Saleh,
2011).
Pada sampel biji petai,
komponen senyawa yang menyebabkan
sifat antioksidan pada ekstrak petai pada
ekstrak kental, fraksi air maupun fraksi
etil asetat adalah golongan senyawa
polifenol dan flavonoid yang
menyumbangkan elektron bebasnya
sehingga raidkal bebas (DPPH) dapat
berpasangan dan dengan demikian
menyebabkan sifat radikal bebas nya
menurun. Semakin banyak kandungan
senyawa golongan fenol dan flavonoid,
maka keradikalan akan semakin
berkurang (Majewska, 2011). Fraksi
heksan memiliki persen inhibisi dan
nilai IC-50 terkecil kemungkinan
disebabkan kandungan senyawa pada
fraksi tersebut tidak memiliki elektron
bebas sehingga tidak dapat mengurangi
keradikalan dari DPPH. Ekstrak kental
memiliki efek antioksidan terbesar,
kemungkinan disebabkan oleh karena
ekstrak tersebut paling banyak memiliki
kandungan senyawa aktif yang bersifat
antioksidan (memiliki elektron bebas)
yaitu dari golongan senyawa polifenol.
(Djamal, 2010)
SIMPULAN
Dari hasil penelitian yang
dilakukan, dapat disimpulkan bahwa
salah satu atau lebih fraksi dari masing-
masing ekstrak yang memiliki potensi
sebagai antioksidan. Pada ekstrak biji
petai, fraksi air dengan IC-50 = 48,42
ppm dan fraksi etil asetat dari ekstrak
etil asetat dengan IC-50 = 85,92 ppm
dapat dinyatakan berpotensi sebagai
antioksidan.
DAFTAR PUSTAKA
Aden, Aisyah Zahroh., Herlina
Mawardika., Novembya Vilansari.,
Firda Agustin., dan Ganys Tris
 Jurnal Ilmiah Bakti Farmasi, 2016, 1 (1), hal 23-30 29

Silvana. 2013. Uji Efektivitas Antibakteri Ekstrak Kasar Etanol,

Ekstrak Kulit Petai (Parkia speciosa Fraksi n-Heksan, Etil Asetat dan
hassk) Pada Mencit Balb/c Sebagai Metanol dari Buah Labu Air
Obat Anti-Inflamasi Rheumatoid (Lagenari siceraria (Molina)
Arthtristis. Laporan akhir program Standl). Jurnal Kimia Mulawarman.
kreativitas mahasiswa. Malang : Vol.8: 63-69.
Universitas Brawijaya. Miranda, Cristobal, 2004, Antioxidant
Armala, M. M. 2009. Daya Antioksidan Activities of Flavonoids (Online),
Fraksi Air Ekstrak Herba Kenikir http://www.pdpersi.co.id/pdpersi/ne
(Cosmos caudatus H. B. K.) dan ws/alternarif.php). diakses 19
Profil KLT, Skripsi. Yogyakarta: Oktober 2011.
Fakultas Farmasi Universitas Islam Nurhasanah, Fatty, 2005, Efek
Indonesia. Antioksidan dari Ekstrak Biji Petai
Djamal, Rusjdi. 2010. Kimia Bahan Cina pada Tikus Putih Jantan,
Alam: Prinsip-prinsip dasar Fakultas Farmasi Universitas
isolasidan identifikasi . Padang : Pancasila, Jakarta
Universitas Baiturrahman. Simes, J.J.H., Tracey, J.G., Webb, l.G.
Hernani, dan Rahardjo, M. 2005. and Dunstan, W.J. 1959. An
Tanaman Berkhasiat Antioksidan. Australia Phaytochemical Survey
Jakarta: Penebar Swadaya. Saponins and Esters Australian
Irianti, tatang., Andayana Puspitasari., Flowering Plant. Australia :
dan Ema suryani. 2011. Aktivitas Commonwelth Scintific and
Penanngkapan Radika 1,1-Difenil-2- Industrial Research Organization.
Pikrilhidrazil Oleh Ekstrak Etanolik Sunarni, T. 2005. Aktivitas Antioksidan
Batang Brotowali (Tinospora Crispa Penangkap Radikal bebas Beberapa
(L) Miers) Dan Fraksi-Fraksinya. Kecambah Dari Biji Tanaman
Majalah Obat Tradisional. Vol.16: Familia Papilionaceae. Jurnal
138-144. Farmasi Indonesia. Vol 2: 53-61.
Majewska, Monika., Michal, Skrzycki., Arief, Sjamsul.2006. Radikal bebas.
Malgorzta, Podsiad and Hanna Bandung : Universitas Airlangga
Czeczot. 2011. Evalution of Tobing, Tetty VWL. 2013.
Antioxidant Potential of Flavonoids Pemanfaatan Ekstrak Kulit Petai
:An In Vitro Study. Acta Poloniae (Parkia speciosa) Sebagai Aktivitas
Pharmaceutica – Drug Research. Alami. Medan: Universitas Negeri
Vol. 68: 611-616. Medan.
Marliana, Eva dan Chairul Saleh. 2011.
Uji Fitokimia dan Aktivitas

Lasmaryna Sirumapea dkk