PREPARASI SAMPEL PROTEIN DARI SERUM DARAH

Rois Muqsith Fatawy1)

drh. Bhintarti S. Hastari, M.Biomed2), Festy Auliyaur Rahmah, S.Si2)
Nugroho Adi Maulana3), Indhina Reihannisha3)

1)
Mahasiswa Jurusan Biologi, Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas Islam Negeri Syarif
Hidayatullah Jakarta
2)
Dosen Praktikum Biologi Molekuler
3)
Asisten laboratorium Praktikum Biologi Molekuler
Jl. Ir. H. Djuanda, Tangerang Selatan 15412, Indonesia

Email : rois.muqsith@gmail.com
Oktober 2014

ABSTRAK

Darah adalah jaringan yang beredar dalam sistem pembuluh darah. Darah terdiri atas unsur padat
dan cair. Serum digunakan dalam berbagai uji diagnostik termasuk untuk menentukan golongan darah.
Serum terdiri dari semua protein (yang tidak digunakan untuk pembekuan darah) termasuk cairan
elektrolit, antibodi, antigen, hormon, dan semua substansi exogenous. Di dalam darah, serum adalah
komponen yang bukan berupa sel darah dan juga bukan faktor koagulasi. Rumusan umum yaitu (serum
= plasma-fibrinogen-protein faktor koagulasi). Preparasi ini dilakukan dengan mengambil sampel darah
dari probandus sebanyak 3mL yang kemudian dimasukkan kedalam vacutainer tube dan disentrifugasi
dengan kecepatan 6000 rpm pada suhu 4ºC selama 30 menit. Setelah itu terbentuk 2 lapisan bagian atas
merupakan plasma darah yang mengandung serum darah, sedangkan pelet atau bagian bawah yang
mengendap merupakan bahan-bahan darah lain seperti leukosit, trombosit dan eritrosit. serum dengan
mikropipet lalu dipindahkan ke tube yang baru, lalu disimpan pada suhu -200C.

Kata kunci : darah, protein dan serum

1
I. DASAR TEORI Terdapat 2 kandungan protein
Darah adalah jaringan yang beredar utama dalam serum darah yaitu albumin
dalam system pembuluh darah. Darah dan globulin. Prinsip dasar albumin
terdiri atas unsur padat dan cair. Unsur memberikan tekanan osmotik larutan,
padat meliputi eritrosit, leukosit, dan mencegah tekanan osmotik plasma
trombosit, sedang yang unsur cair adalah berkurang dari pembuluh kapiler. Unsur
plasma darah. Sebagian besar sel-sel darah globulin di dalamnya terdapat enzim
berada di dalam pembuluh darah, akan plasma yang berperan terhadap kekebalan
tetapi seldarah putih dapat bermigrasi dan menghadapi serangan organisme
melintas dinding pembuluh darah guna pengganggu (Guyton, 1997).Tujuan dari
melawan infeksi. Plasma darah terdiri dari praktikum ini adalah agar Praktikan mampu
air, elektrolit, zat makanan protein dan melakukan preparasi sampel protein dari
hormone. Plasma terdiri dari kurang lebih serum darah.
92% air dan 8% adalah zat-zat lainnya.
Semua fungsi darah dilaksanakan oleh I. MATERI DAN METODE
plasma dari konstituennya, kecuali fungsi Waktu Praktikum
seluler yang spesifik seperti pengangkutan Praktikum ini dilakukan pada hari
oksigen dan pertahanan imunologik Jum’at, 31 Oktober 2014 Pukul 13.30 –
(Frandson, 1996). 16.00 WIB di Laboratorium Biologi Dasar,
Di dalam darah, serum adalah Pusat Laboratorium Terpadu (PLT)
komponen yang bukan berupa sel darah dan Universitas Islam Negeri Syarif
juga bukan faktor koagulasi. Serum adalah Hidayatullah Jakarta.
plasma darah tanpa fibrinogen. Serum
protein tidak mengandung fibrin (bukan Alat dan Bahan
merupakan fibrous protein) sehingga dapat Alat-alat yang digunakan dalam
terlarut. Total serum protein dalam darah praktikum preparasi sampel protein dari
sekitar 7,2 -8 g/dl atau sekitar 7% dari serum darah yaitu syring, tourniquete,
volume darah keseluruhan dengan berbagai vacum tube tutup merah (interma vacum
kegunaan: Sirkulasi molekul lipida, tube) dan vacum tube tutup ungu (EDTA-
hormon, vitamin dan zat besi; Enzim, K3 vacum tube), white tip, freezer,
komponen komplemen, protease inhibitor sentrifuga, mikropipet, dan tabung
dan kinin prekursor; dan regulasi aktivitas, ependorff.
fungsional non seluler dalam sistem
kekebalan (Frandson, 1996).
2
 Bahan yang digunakan
praktikum ini yaitu sampel
probandus, kapas, alkohol, dan parafilm.
Cara Kerja
Cara kerja preparasi sampel protein
dari serum darah yaitu hal pertama yang
dilakukan adalah disiapkan alat-alat yang
dibutuhkan dalam pengambilan sampel
darah probandus. Sebelum pengambilan
darah dilakukan, posisi probandus duduk
dan meletakkan tangan dalam keadaan
lurus sejajar dengan tinggi jantung.
Mendesinfeksi bagian lengan yang akan
diambil darahnya menggunakan alkohol
70% dan ditunggu sampai kering. Dipasang
pembendung 3/4 bawah lengan atas yang
akan ditusuk. Kulit di atas
direnggangkan dengan ibu jari supaya vena
tidak bergerak. Kulit ditusuk dengan jarum
spuit menggunakan tangan kanan sampai
jarum masuk ke dalam vena dengan posisi
lubang jarum menghadap ke atas. Vacum
spuit ditarik secara perlahan-lahan sampai
diperoleh darah sebanyak 1 ml.
Pembendung dilepaskan lalu diletakkan
kapas diatas tempat tusukan dan menarik
jarum puit perlahan-lahan. probandus
diminta untuk menekan bekas tusukan
dengan kapas. Luka bekas tusukan ditutup
dengan band aid. Jarum dilepaskan dari
spuit dan mengalirkan 1 ml darah ke dalam
vial, kemudian vial diberi label.
Sampel darah yang telah didapat
kemudian diambil sebanyak 3 mL dan
dalam dimasukkan kedalam vacutainer tube-
darah EDTA K3. Didiamkan dalam suhu ruang
hingga terbentuk 2 lapisan. Diambil lapisan
bagian atas kemudian dimasukkan kedalam
tabung 1,5 mL dan selanjutnya
disentrifugasi dengan kecepatan 6000 rpm
pada suhu 4ºC selama 30 menit. Diambil
supernatan (mengandung serum) dan
dimasukkan kedalam tabung 1,5 mL yang
baru kemudian disimpan pada suhu -20ºC.
II. HASIL DAN PEMBAHASAN
Serum adalah komponen yang
bukan berupa sel darah dan juga bukan
faktor koagulasi yang terdapat di dalam
darah. Serum adalah plasma darah tanpa
fibrinogen. Serum terdiri dari semua protein
vena (yang tidak digunakan untuk pembekuan
darah) termasuk cairan elektrolit, antibodi,
antigen, hormon, dan semua substansi
exogenous. Rumusan umum yaitu (serum =
plasma-fibrinogen-protein faktor
koagulasi). Serum digunakan dalam
berbagai uji diagnostik termasuk untuk
menentukan golongan darah. Serum protein
merupakan salah satu dari tiga jenis protein
di dalam tubuh yang terbentuk dari asam
amino berupa larutan koloidal di dalam
plasma darah (Frandson, 1996).
Serum darah diambil dari
probandus melalui vena mediana cubital
yang terdapat di lengan atas bagian bawah.
Pengambilan serum harus dilakukan oleh
seseorang yang sudah ahli dan mempunyai
wewenang dalam hal menyuntik untuk
3
mengurangi resiko yang fatal. Sebelumnya
area yang akan dilakukan pengambilan
darah dibersihkan dengan alcohol supaya
tetap steril dan bersih dari mikroba yang
dapat menginfeksi ketika luka setelah
penyuntikan. Kemudian sampel darah
diambil sebanyak 3-5 mL dari probandus
dan dimasukkan ke dalam tabung yang
berbeda, yaitu tabung vakum dengan tutup
berwarna merah dan warna ungu. Tabung
dengan tutup berwarna merah ini
sebelumnya telah berisi reagen clot
activator yang akan mempercepat
pembekuan darah. Waktu pembekuan ideal
yaitu 60 menit, tetapi bias disentrifuge
dibawah 60 menit asalkan sampel sudah
mengental. Sampel disentrifuge dengan
kecepatan 1300-2000 rpm selama 10 menit,
hal ini dilakukan untuk memisahkan serum
dengan bahan-bahan darah yang lain.
Penyimpanan sampel yang dianjurkan
adalah pada suhu 22°C (dapat digunakan
sampai 8 jam), 4°C (dapat digunakan 8-48
jam), dan -20°C (dapat digunakan diatas 48
jam). Sedangkan tabung dengan tutup
berwarna ungu sebelumnya telah berisi
antikoagulan K3EDTA, yang berfungsi
untuk menjaga koagulasi dari sampel darah.
Tabung ini seringkali digunakan untuk
pemeriksaan Hematologi.
K3-EDTA yang mempunyai
stabilitas yang lebih baik daripada garam
EDTA yang lain karena mempunyai pH
mendekati pH darah. EDTA mencegah
koagulasi dengan cara mengikat Kalsium
(Ca), sehingga EDTA memiliki keunggulan
dibandingkan dengan antikoagulan lain,
yaitu tidak mempengaruhi sel – sel darah
sehingga ideal untuk pengujian hematologi,
seperti pemeriksaan hemoglobin,
hematokrit dan lainnya. Hal yang harus
diperhatikan yaitu konsentrasi darah yang
harus sesuai dengan jumlah EDTA yang
digunakan. Jumlah EDTA yang kurang,
akan dapat menyebabkan darah mengalami
koagulasi, sebaliknya bila EDTA
berlebihan, eritrosit mengalami krenasi dan
trombosit membesar (Aulia,
2013).Setelah itu disentrifugasi dengan
kecepatan 6000 rpm selama 30 menit untuk
mendapatkan serum darah, sehingga
terbentuk 2 lapisan yaitu cair dan padatan.
Supernatan atau bagian atas merupakan
plasma darah yang mengandung serum
darah, sedangkan pelet atau bagian bawah
yang mengendap merupakan bahan-bahan
darah lain seperti leukosit, trombosit dan
eritrosit. Hal ini dikarenakan berat molekul
antara sel-sel darah mengendap dibawah
dna plasma berada diatas(Marshall dan
Halnan,1946).
Serum yang diambil yaitu bagian
atas yang berupa cairan bening agak
kekuningan. Frandson (1981)berpendapat
apabila darah menggumpal di dalam suatu
tabung reaksi terbentuklah suatu massa
padat yang berwarna merah akan tetapi bila
dibiarkan agak lama gumpalan itu akan
4
berkontraksi dan menghasilkan cairan
kuning supernatan yang dinamakan serum.
Pada intinya serum adalah plasma darah
tanpa fibrinogen dan faktor
penggumpalan darah. Selain itu Hames
(1998), berpendapat bahwa serum adalah
salah satu bagian dari plasma darah yaitu
pada protein. protein memiliki molekul
yang cukup besar. Jika darah diputar dalam
sentrifuge, maka protein tersebut akan
mengendap, sisanya berupa cairan bening
dan jernih yang disebut serum. Setelah
dilakukan pengambilan serum dengan
mikropipet lalu dipindahkan ke tube yang
baru, lalu disimpan pada suhu -200C.
III. KESIMPULAN
1. Serum adalah plasma darah tanpa
faktor koagulasi
2. Sampel serum darah dapat diambil
melalui dua tahap pemisahan yaitu
pemisahan antara komponen seluler
darah (sel-sel darah) dengan plasma.
Pemisahan kedua yaitu antara serum
dengan protein faktor koagulan.
3. Serum berwarna bening
kekuningan dan terletak di lapisan atas
dari hasil sentrifugasi
Aulia, Rienda. 2013. Antikoagulasi: EDTA.
Kesmas press. Jakarta
Jusuf.2001. Genetika I: Struktur dan
Ekspresi gen. Sagung Seto. Jakarta
faktor Frandson, R. D., 1981. Anatomy and
Physiology of Farm Animals 3th
Edition. Lea and Febiger
Phyladelphia.
Frandson, R. D. 1996. Anatomi dan
Fisiologi Ternak, edisi keempat.
Gadjah Mada University Press.
Yogyakarta
Guyton, Arthur C. & John E. Hall.
1997.Buku Ajar Fisiologi
Kedokteran, edisi 9. Editor: Irawati
Setiawan. EGC. Jakarta
Hames, B.D., 1998. Gel Electrophoresis of
protein. Oxford University Press.
New York
Marshall, F. H. and E. T. Halnan. 1948.
Physiology of Farm Animal.
Cambridge at The University Press,
New York
dan

IV. DAFTAR PUSTAKA

Alberida, H. 2003. Struktur Protein
Membran.
Jurnal Eksakta, Vol. 1, No. 1, Februari
2003, Hal. 65-75.