BAB III

METODE PRAKTIKUM

3.1 Waktu dan Tempat

PraktikumPembuatanLarutanStok dilaksanakan pada hari Selasa, 13 Maret
2018danpraktikumPembuatan Media dilaksanakanpadahariSelasa, 20 Maret 2018 pukul 10.50s.d
selesaibertempat di di Laboratorium Bioteknologi, Jurusan Agroekoteknologi, Fakultas
Pertanian, Universitas Sultan Ageng Tirtayasa.

3.2 Alat dan Bahan

Alat yang digunakan pada praktikum PembuatanLarutanStok adalah timbangananalitik, hot
plate, magnetic stirrer, lemaripendingin, alatgelas, alatdiseksi, danbotolkaca. Sedangkan bahan
yang digunakan adalah NH4NO3, KNO3, H3BO3, KI, Na2MoO.2H2, CoCl2.6H2O, KH2.PO4,
CaCl2.2H2O, MgSO4.7H2O, MnSO4.4H2O, ZnSO4.7H2O, CuSO4.5H2O, Na2EDTA, FeSO4.7H2O,
Myo-inositol, Thiamin-HCl (Vit. B1), Niacin (Nicotinic acid, Vit B3), Pyrridoxine-HCl (Vit.B6),
Glycine, aquades, aluminium foil, label, dan ATK.
Alat yang digunakan pada praktikum Pembuatan Media adalah botolkultur, hot plate,
magnetic stirrer, autoclave, lemaripendingin, alatgelas, alatdiseksi, alatpengukur pH, rakkultur,
lampu neon, aludan mortar. Sedangkan bahan yang digunakan adalahlarutanstok, air kelapa,
tomat,aquades, aluminium foil, seal,label, dan ATK.

3.3 Cara Kerja

3.3.1 PembuatanLarutanStok A
Adapun cara kerja pada pembuatanlarutanstok A adalah:
1. Alatdanbahandisiapkanolehpraktikan
2. NH4NO3 ditimbang sebanyak 33 gram dandimasukkankedalam gelas jam lalu
ditambahkan 100 mL aquades
3. Larutan NH4NO3 dihomogenkan dengan hot plate danmagnetic stirrer
4. Larutan NH4NO3 diangkat lalu ditambahkan lagi 100 mL dan dihomogenkan kembali
5. Diberi label dandisimpandalamlemaripendingin
3.3.2 PembuatanLarutanStok B
Adapun cara kerja pada pembuatanlarutanstok B adalah:
1. Alatdanbahandisiapkanolehpraktikan
2. KNO3 ditimbang sebanyak 38 gram dandimasukkan ke dalam gelas jam lalu ditambahkan
100 mL aquades
3. Larutan KNO3dihomogenkan dengan hot plate danmagnetic stirrer.
4. Larutan KNO3 diangkat lalu ditambahkan lagi 100 mL dan dihomogenkan kembali
5. Diberi label dandisimpandalamlemaripendingin

3.3.3PembuatanLarutanStok C
Adapun cara kerja pada pembuatanlarutanstok C adalah:
1. Alatdanbahandisiapkanolehpraktikan
2. H3BO3 ditimbang sebanyak 0,124 gramdandimasukkan ke dalam gelas jam lalu
ditambahkan 20 mL aquades
3. Larutan H3BO3 dihomogenkan dengan hot plate danmagnetic stirrer
4. Kl ditimbang sebanyak 0,0166 gram dandimasukkan ke dalam gelas jam dan
ditambahkan 10 mL aquades
5. Larutan Kldihomogenkan dengan hot plate and magnetic stirrer
6. Na2MoO.2H2Oditimbang sebanyak 0,005 gram dandimasukkan ke dalam gelas jam dan
ditambahkan 10 mL aquades
7. Larutan Na2MoO.2H2Odihomogenkan dengan hot plate and magnetic stirrer
8. CoCl2.6H2O ditimbang sebanyak 0,0005 gram dandimasukkan ke dalam gelas jam dan
ditambahkan 10 mL aquades
9. Larutan CoCl2.6H2O dihomogenkan dengan hot plate and magnetic stirrer
10. KH2.PO4 ditimbang sebanyak 3,4 gram dandimasukkan ke dalam gelas jam dan
ditambahkan 10 mL aquades
11. Larutan KH2.PO4 dihomogenkan dengan hot plate and magnetic stirrer
12. Masing-masing larutan H3BO3, Kl, Na2MoO.2H2O, CoCl2.6H2O, dan KH2.PO4 yang
sudah homogen dicampurkan sehingga total larutan 60 ml lalu ditambahkan
aquadeshingga total larutan 200 mL
13. Diberi label dandisimpandalamlemaripendingin
3.3.4PembuatanLarutanStok D
Adapun cara kerja pada pembuatanlarutanstok D adalah:
1. Alatdanbahandisiapkanolehpraktikan
2. CaCl2.2H2O ditimbang sebanyak 8,8 gram dandimasukkan ke dalam gelas jam dan
ditambahkan 100 mL aquades
3. Larutan CaCl2.2H2Odihomogenkan dengan magnetic stirrerdanhot plate
4. Larutan CaCl2.2H2O diangkat lalu ditambahkan lagi 100 mL dan dihomogenkan kembali
5. Diberi label dandisimpandalamlemaripendingin

3.3.5 PembuatanLarutanStok E
Adapun cara kerja pada pembuatanlarutanstok E adalah:
1. Alatdanbahandisiapkanolehpraktikan
2. Ditimbang MgSO4.7H2O sebanyak 7,4 gram, MnSO4.4H2O sebanyak 0,446 gram,
ZnSO4.7H2O sebanyak 0,172 gram, dan CuSO4.5H2O sebanyak 0,0005 gram
dengantimbangananalitik 4 digit di belakangkoma
3. Dicampursemuabahan yang telahditimbangdalamgelas jam dan ditambahkan 100 mL
aquades
4. Larutanstok E dihomogenkandenganmagnetic stirrer danhot plate
5. Larutan stok E diangkat lalu ditambahkan lagi 100 mL aquadesdan dihomogenkan
kembali
6. Diberi label dandisimpandalamlemaripendingin

3.3.6 PembuatanLarutanStok F
Adapun cara kerja pada pembuatanlarutanstok F adalah:
1. Ditimbang Na2EDTA sebanyak 0,746 gram kemudiandituangkedalamgelas jam
2. Ditambahkanaquadessterilsebanyak 100 mL laludihomogenkanmenggunakanmagnetic
stirrer danhot plate
3. Selanjutnyagelas jam larutanNa2EDTA ditutupselagipembuatanlarutan FeSO4.7H2O
dibuat
4. DitimbangFeSO4.7H2O sebanyak0,556 gramkemudiandituangkedalamgelaskaca
 5. Ditambahkanaquadessterilsebanyak 100 mL laludihomogenkanmenggunakanmagnetic
stirrer danhot platesampaiberwarnakuning
6. Setelahhomogen, larutan Na2EDTA yang sudahdibuatdituangkansedikit demi
sedikitkedalamlarutanFeSO4.7H2O yang sedangdipanaskan
7. Gelas jam yang berisilarutanstok F dibungkusdenganaluminium foil
keseluruhbagianbotol
8. Diberi label dandisimpandalamlemaripendingin

3.3.7 PembuatanLarutanStokMyo-inositol
AdapuncarakerjapadapembuatanlarutanstokMyo-inositol adalah:
1. Alatdanbahandisiapkanolehpraktikan
2. Myo-inositolditimbang sebanyak 2 gram diatas neraca analitik yang sudah dialasi dengan
alumunium foil
3. Myo-inositol 2 gram dimasukkan ke dalam gelas jam dan ditambahkan 100 mL aquades
4. Larutan Myo-inositol dihomogenkan dengan hot plate danmagnetic stirrer.
5. Larutan Myo-inositol diangkat lalu ditambahkan lagi 100 mL dan dihomogenkan kembali
6. Diberi label dandisimpandalamlemaripendingin

3.3.8 PembuatanLarutanStok Vitamin

Adapuncarakerjapadapembuatanlarutanstok vitamin adalah:
1. Alatdanbahan yang diperlukanuntukmembuatlarutanstok vitamin
disiapkanolehpraktikan
2. Dilakukanpenimbanganbeberapajenis vitamin seperti Thiamin-HCl (Vit. B1) sebanyak
0,002 gram, Niacin (Nicotinic acid, Vit. B3) sebanyak 0,01 gram, Pyrridoxine-HCl (Vit.
B6) sebanyak 0,01 gram, dan Glycine sebanyak 0,04 gram
3. Masing-masingbahanhasilpenimbangankemudiandimasukkankedalamglass
jamdanditambahkanakuadessebanyak 100 ml
4. Larutaninikemudiandihomogenkandenganbantuanmagnetic stirrer
5. Kedalamglass jamkemudianditambahkankembali 100 ml
akuadesdandihomogenkankembali
6. Larutanstok yang telahjadikemudiandisimpandalamshow case.
3.3.9Pembuatan Media
Adapun cara kerja pada pembuatan media adalah:
1. Disiapkan alat dan bahan oleh praktikan
2. Dipipet sebanyak 3 ml larutan stok ke dalam gelas beaker
3. Ditambahkan 45 ml air kelapa ke dalam larutan media
4. Ditambahkan 9 gram gula ke dalam larutan media
5. Ditambahkan 45 gram tomat yang telah ditumbuk ke dalam larutan media
6. Ditambahkan aquades secukupnya kemudian dihomogenkan
7. Diukur pH larutan media dengan pH meter
8. Ditambahkan aquades hingga larutan media 300 ml lalu dipanaskan di atas hot plate
9. Selagi larutan dipanaskan lalu ditambahkan 2,1 gram agar ke dalam larutan media dan
dibiarkan mendidih
10. Setelah mendidih larutan media segera dituang ke dalam botol kultur kurang lebih 20 ml
11. Botol kultur ditutup dengan aluminium foil dan direkatkan dengan seal.
12. Selanjutnya media di dalam botol kultur disterilisasi menggunakan autoklaf dan
disimpan di rak kultur

3.3.1 Cara Kerja Pembuatan Media MS

Adapun cara kerja pembuatan media MS adalah :
1. Disiapkan alat dan bahan yang akan digunakan
2. Diambil larutan stok A-F, Myo Inositol, dan vitamin sebanyak 3 mL kedalam gelas beaker
3. Ditambahkan 45 mL air kelapa
4. Ditambahkan gula, lalu dihomogenkan dengan magnetic stirrer
5. Ditambahkan aquades steril (jangan sampai 300 mL)
6. Diukur pH larutan dengan menggunakan pH meter, karena larutan memiliki pH <5 maka
ditambahkan NaOH beberapa tetes sampai pH mencapai 5,6-5,7
7. Ditambahkan agar sebanyak 2,1 gr (u/ media 300 mL), kemudian diaduk
8. Dituangkan larutan kedalam panic, lalu dimasak dengan menggunakan kompor sampai
mendidih
9. Dimasukan larutan media yang sudah dipanaskan kedalam botol kultur sebanyak 20 mL,
kemudian bagian atas botol kaca ditutp dengan alumunium foil dan dilapisi plastic wrap.
10. Disterilisasi dengan menggunakan autoklaf selama 20 menit pada suhu 121oC
dengan tekanan 1 atm.
11. Setelah media di sterilisasi kemudian disimpan pada rak kultur.