II. 4.

PIGMEN EMPEDU
DASAR PERCOBAAN:
Pigmen-pigmen empedu sebagian besar berasal dari hasil penghancuran sel-sel darah
merah. Pigmen yang terbanyak adalah bilirubin dan biliverdin. Yang pertama berwarna
merah/kuning coklat dan yang kedua berwarna hijau. Oksidasi pigmen ini menghasilkan
sejumlah pigmen lain dengan bermacam-macam warna.

II.4.1 TEST GMELIN

CARA KERJA:
1. Isilah sebuah tabung dengan 3 ml HNO3 pekat.
2. Masukkan 3 ml empedu dengan pipet melalui dinding tabung, sehingga tidak
tercampur.
HASIL:
Pada batas kedua cairan terbentuk warna-warna yaitu terlihat 2 cincin hijau: empedu, hitam:
garam empedu.
PEMBAHASAN :
Cairan empedu dihasilkan dari hati dan disimpan didalam kandung empedu yang memiliki
panjang sekitar 5-7 cm dan merupakan membran berotot. Kandung empedu terbagike
dalam sebuah fundus, badan, dan leher. Cairan empedu yang berwarna hijau tua berasal
dari bilirubin yang merupakan pigmen empedu. Bilirubin ini terbentuk dari penguraian
hemoglobin, asam-asam empedu, dan kolesterol. Adanya bilirubin ini dapat dibuktikan
dengan reaksi gmelin sehingga diperoleh hasil positif yang menghasilkan turunan yang
berwarna yang ditandai dengan adanya banyak fase yang terbentuk yang terdiri dari
berbagai warna (Trinaningsih, 2007). Hal ini terjadi akibat oksidasi bilirubin yang merupakan
pigmen empedu oleh HNO3.
Empedu memegang peran penting dalam proses pencernaan lemak. Dimana garam-
garam empedu ini mempunyai peranan sebagai pengemulsi, penghancuran dari molekul-
molekul besar lemak (dalam hal ini yang digunakan adalah minyak) menjadi suspensi dari
lemak. Garam-garam empedu ini bergabung dengan lemak dan membentuk micelles, yaitu
kompleks yang larut dalam air. Hal inilah yang menyebabkan lemak lebih mudah terserap
dalam system pencernaan (efek hidrotrofik) (Jevuska, 2009).
Pada percobaan untuk menyatakan pigmen empedu kami memasukkan 3 mL asam nitrat
(HNO3) pekat dan 3 mL empedu ke dalam tabung reaksi. Pada tabung reaksi terlihat cincin
berwarna hijau pada batas antara larutan asam nitrat pekat dan empedu. Hal ini
dikarenakan asam nitrat (HNO3) merupakan oksidator, dimana asam nitrat (HNO 3)
mengoksidasi pigmen empedu atau bilirubin yang berwarna merah menjadi biliverdin yang
berwarna hijau.

1. Bagaimana proses pembentukan pigmen empedu dalam tubuh?

Eritrosit pada akhir masa hidupnya (yang sudah terlalu rapuh dalam sirkulasi) membran
selnya pecah dan hemoglobin yang lepas difagositosis oleh RES. Hemoglobin dipecah
menjadi heme dan globin dan cincin heme dibuka untuk memberikan (1) besi bebas yang
ditranspor ke dalam darah oleh transferin, dan (2) rantai lurus dari empat inti pirol, yaitu
substrat yang akan dibentuk menjadi pigmen empedu. Pertama pembentukan biliverdin
berantai lurus. Biliverdin di konversikan ke bilirubin dengan reduksi. Bilirubin (bebas) yang
bersirkulasi dalam plasma terikat albumin (karena bilirubin ini larut lemak). Memasuki hati,
albumin melepaskan ikatan dengan bilirubin, dan memasuki hepatosit. Sekitar 80% Bilirubin
dikonjugasi oleh asam glukuronat melalui mekanisme yang melibatkan biilirubin-UDP
glukuronosil transferase menjadi bilirubin terkonjugasi (larut air), 10% dikonjugasi dengan
sulfat membentuk bilirubin sulfat, dan 10% lainnya berikatan dengan zat lain.
Hati orang dewasa mempunyai kapasitas cadangan untuk mengkonjugasi dan
mengekskresi 5-10 kali biilrubin normal (500 µmol/24 jam). Pada neonatus, enzim ini belum
aktif sepenuhnya, misal aktivitas glukuronosil transferase perlu waktu ±3 minggu untuk
berkembang, sehingga hati neonatus hampir tak mempunyai kapasitas untuk mengekskresi
beban bilirubin normalnya dan bisa meningkat saat terjadi pemecahan eritrosit berlebih.
Ikterus sebelum usia 24 jam adalah abnormal, tapi hiperbilirubinemia moderat (80 µmol/L)
dalam minggu pertama mungkin tak patologis (ikterus fisiologis).
Ikterus adalah pewarnaan jaringan tubuh menjadi kekuning-kuningan pada kulit dan
jaringan dalam. Penyebab umumnya karena sejumlah besar bilirubin masuk dalam cairan
ekstrasel, baik bilirubin bebas atau bilirubin terkonjugasi. Konsentrasi bilirubin normal (baik
bilirubin bebas dan terkonjugasi) ±0.5 mg/dL plasma. Kulit mulai tampak kuning ketika
konsentrasinya meningkat >3 kali dari normal (>1.5 mg/dL).
2. Bagaimana proses pembentukan asam empedu dalam empedu ?
Asam empedu yang dibuat di hati oleh oksidasi P450-dimediasi sitokrom kolesterol.
Mereka terkonjugasi dengan taurin atau asam amino glisin, atau dengan sulfat atau
glukuronat, dan kemudian disimpan dalam kantong empedu. Setelah makan maka, isi
kantong empedu yang disekresi ke dalam usus, dimana asam empedu melayani tujuan
pengemulsi lemak makanan.
Asam empedu dibentuk oleh sintesis dalam hati yang disebut "primer" asam empedu, dan
yang dibuat oleh bakteri yang disebut "sekunder" asam empedu. Dalam hati, sintesis asam
empedu dan garam empedu yang dimulai dengan konversi ester kolesterol (dari beredar
partikel lipoprotein) kolesterol, kemudian ke 7α-hydroxycholesterol kemudian ke 4-
cholesten-7α-ol-3-satu. Kemudian jalur cabang: hidroksilasi 4-cholesten-7α-ol-3-satu sampai
4-cholesten-7α, 12α-diol-3-satu berujung pada pembentukan kolat, sedangkan penurunan
untuk 5β-cholestan-7α-ol-3-satu mengarah ke pembentukan
chenodeoxycholate.Chenodeoxycholate memiliki dua gugus hidroksil pada posisi 3-α dan 7-
α dan merupakan asam empedu kunci. Kelemahan utamanya terletak pada kemampuan
bakteri usus untuk menghapus grup 7-α-hidroksil melalui dehydroxylation. Asam empedu
yang dihasilkan hanya memiliki kelompok 3-α-hidroksil dan disebut asam lithocholic. Untuk
menghindari masalah yang terkait dengan produksi asam lithocholic, kebanyakan mamalia
menambah grup hidroksil ketiga di posisi 12 untuk Chenodeoxycholic asamuntuk membuat
asam kolat. Dengan cara ini, penghapusan berikutnya darikelompok 7-α-hidroksil oleh
bakteri usus akan menghasilkan asam, dihidroksi kurang beracun masih fungsional empedu.
Dalam usus, asam kolat adalah dehydroxylated untuk membentuk empedu dihidroksi Asam
deoxycholic. Dalam hati manusia, sintesis kolat mendominasi. Pada manusia, asam empedu
yang paling penting adalah asam kolat, asam deoxycholic, dan asam chenodeoxycholic.
Sebelum sekresi oleh hati, mereka terkonjugasi dengan baik asam amino glisin atau taurin
melalui konversi ke Koenzim A konjugasi derivatif dan selanjutnya. Dalam tubuh,
glycocholate, taurocholate,glycochenodeoxycholate, dan taurochenodeoxycholate
dilepaskan dari hepatosit ke empedu dan akhirnya ke dalam lumen usus kecil, di mana
mereka berfungsi sebagai deterjen untuk melarutkan lemak makanan. Konjugasi
meningkatkan kelarutan dalam air, mencegah penyerapan kembali pasif sekali disekresi ke
dalam usus kecil. Akibatnya, konsentrasi asam empedu di usus kecil bisa tetap cukup tinggi
untuk membentuk misel dan melarutkan lemak.