Skripsi Siti Bellia Arafah 1207101010161

PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK DAUN SIRSAK
(Annona muricata L.) TERHADAP GAMBARAN

HISTOPATOLOGI AORTA TIKUS WISTAR
(Rattus norvegicus) JANTAN YANG
DIBERI DIET TINGGI LEMAK
SKRIPSI
Diajukan untuk melengkapi tugas-tugas dan

memenuhi syarat-syarat guna memperoleh
gelar sarjana kedokteran
Oleh:
SITI BELLIA ARAFAH

NIM. 1207101010161
PROGRAM STUDI PENDIDIKAN DOKTER

FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS SYIAH KUALA
DARUSSALAM BANDA ACEH
2016
ii
KATA PENGANTAR
Penelitian mengenai ekstrak daun sirsak sebagai fitofarmaka sudah banyak

diteliti. Penulisan skripsi dengan judul "Pengaruh Pemberian Ekstrak Daun Sirsak
(Annona muricata L.) Terhadap Gambaran Histopatologi Aorta Tikus Wistar
(Rattus norvegicus) Jantan yang Diberi Diet Tinggi Lemak" ini disusun dengan
tujuan untuk mengetahui apakah ekstrak daun sirsak memiliki pengaruh terhadap
penurunan ukuran ketebalan dinding dan jumlah sel busa aorta tikus jantan yang
diberi diet tinggi lemak sehingga dapat dijadikan bukti ilmiah terhadap
pemanfaatan daun sirsak sebagai pencegahan untuk berbagai penyakit khususnya
penyakit jantung dan pembuluh darah.
Penulis menyadari bahwa tanpa bantuan dan bimbingan berbagai pihak dari
masa perkuliahan sampai pada penyusunan skripsi ini, sangatlah sulit bagi Penulis
untuk menyelesaikan skripsi ini. Oleh karena itu, Penulis mengucapkan terima
kasih yang sebesar-besarnya kepada:
1. Dr. dr. Mulyadi, SpP (K) selaku Dekan Fakultas Kedokteran Universitas
Syiah Kuala.
2. dr. Istanul Badiri, MS., SpPA dan dr. Muhammad Ridwan, MAppSc., SpJP
(K) selaku Pembimbing I dan Pembimbing II, yang dengan tulus ikhlas dan
penuh kesabaran telah bersedia meluangkan waktu dalam proses
penyusunan skripsi ini.
3. drh. Azmunir., MYc., MSc dan dr. Vera Dewi Mulia, SpPA selaku dosen
penguji yang telah bersedia meluangkan waktu untuk memberikan kritik
serta saran yang bermanfaat agar skripsi ini dapat lebih baik.
4. dr. Purwani Tjahja Handayani selaku dosen wali yang telah membimbing
selama menjalani pendidikan di Fakultas Kedokteran Universitas Syiah
Kuala.
5. Keluarga tercinta Ayahanda Basrahluddin, ST., MT., dan ibunda Elly
Maulida, SE., yang telah memberikan kasih sayang dan mendidik Penulis
serta saudara kandung Siti Bellia Humaira, Muhammad Iqbal, dan
Muhammad Al At Thariq yang selalu memberikan semangat pada Penulis.
6. Seluruh Staf Laboratorium Patologi Anatomi Fakultas Kedokteran,
Kandang Budidaya Hewan Coba Fakultas Kedokteran Hewan,
iii
Laboratorium Herbarium dan Laboratorium Kimia Fakultas MIPA
Universitas Syiah Kuala yang telah memberikan izin dan turut memberikan
bantuan hingga skripsi ini selesai.
7. Sahabat-sahabat terbaik Oriza Sativa, Wardatul Bararah, Cut Lia Listiani,
Siti Rizka Zahrina, Rizka Farhani, dan Nadia Meuthia yang telah membantu
dan selalu menjadi penyemangat dalam penyelesaian skripsi ini.
8. Rekan-rekan mahasiswa angkatan 2012 Program Studi Pendidikan Dokter
Fakultas Kedokteran Universitas Syiah Kuala yang telah bersedia berbagi
ilmu dan memberikan bantuan serta dukungan kepada Penulis.
9. Seluruh Dosen dan rekan seperjuangan Asisten Dosen Laboratorium
Histologi angkatan 2012, 2013 dan 2014 yang senantiasa memberikan
semangat kepada Penulis.
10. Terima kasih juga Penulis sampaikan kepada semua pihak yang telah
membantu Penulis dalam memberi saran dan dorongan moril untuk
menyelesaikan skripsi ini.
Penulis menyadari masih terdapat kekurangan dalam skripsi ini. Untuk itu
Penulis sangat mengharapkan kritik dan saran yang bersifat membangun dari
pembaca sekalian demi kesempurnaan skripsi ini.
Banda Aceh, 18 Januari 2016
Penulis
iv
DAFTAR ISI
Halaman
LEMBAR PENGESAHAN......................................................................... ii
KATA PENGANTAR................................................................................. iii
DAFTAR ISI ............................................................................................... v
DAFTAR GAMBAR................................................................................... viii
DAFTAR TABEL ....................................................................................... ix
DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................... x
DAFTAR SINGKATAN............................................................................. xi
ABSTRAK................................................................................................... xii
ABSTRACT.................................................................................................. xiii
BAB I PENDAHULUAN................................................................... 1
1.1 Latar Belakang .................................................................. 1
1.2 Rumusan Masalah ............................................................. 4
1.3 Tujuan Penelitian............................................................... 4
1.4 Manfaat Penelitian............................................................. 5
1.4.1 Aspek Teoritis...................................................... 5
1.4.2 Aspek Praktis....................................................... 5
1.5 Hipotesis ........................................................................... 5
BAB II TINJAUAN PUSTAKA ......................................................... 6

2.1 Kolesterol dan Aterosklerosis ............................................ 6
2.1.1 Kolesterol ............................................................ 6
2.1.2 Diet Tinggi Lemak, Hiperkolesterolemia dan
Aterosklerosis ...................................................... 10
2.2 Aorta ................................................................................. 10
2.2.1 Histopatologi Aorta.............................................. 12
2.3 Radikal Bebas, Stres Oksidatif, dan Antioksidan ............... 14
2.4 Sirsak (Annona muricata L.).............................................. 15
2.4.1 Taksonomi dan Morfologi.................................... 15
2.4.2 Distribusi Geografis dan Habitat .......................... 17
2.4.3 Manfaat Tanaman Buah Sirsak............................. 17
2.4.4 Kandungan Kimia ................................................ 17
2.4.5 Peran Antioksidan dalam Daun Sirsak terhadap
Aterosklerosis ...................................................... 19
2.4.6 Dosis Ekstrak Daun Sirsak ................................... 20
2.5 Ekstraksi............................................................................ 21
2.6 Tikus Rattus norvegicus sebagai Hewan Coba ................... 22
2.7 Kerangka Teori.................................................................. 23
BAB III METODOLOGI PENELITIAN ............................................ 24

3.1 Jenis dan Rancangan Penelitian ......................................... 24
3.2 Tempat dan Waktu Penelitian ............................................ 25
3.3 Populasi dan Sampel Penelitian ......................................... 25
3.3.1 Populasi Penelitian............................................... 25
3.3.2 Sampel Penelitian ................................................ 25
3.4 Besar Sampel Penelitian .................................................... 25
3.5 Kerangka Konsep .............................................................. 26
v
3.6 Variabel Penelitian dan Definisi Operasional..................... 27
3.6.1 Variabel Penelitian............................................... 27
3.6.2 Definisi Operasional ............................................ 27
3.7 Alat dan Bahan Penelitian.................................................. 28
3.7.1 Alat...................................................................... 28
3.7.2 Bahan .................................................................. 28
3.8 Prosedur Penelitian............................................................ 29
3.8.1 Pembuatan Ekstrak Daun Sirsak........................... 29
3.8.2 Penentuan Dosis Ekstrak Daun Sirsak .................. 29
3.8.3 Pemeliharaan Hewan Coba .................................. 30
3.8.4 Pembuatan Pakan Tinggi Lemak .......................... 30
3.8.5 Perlakuan Hewan Coba ........................................ 31
3.8.6 Pembuatan Sediaan dan Analisis Gambaran
Histopatologi Aorta.............................................. 32
3.9 Analisis Data ..................................................................... 33
BAB IV HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN ...................... 34

4.1 Hasil Penelitian ................................................................. 34
4.1.1 Evaluasi Ketebalan Dinding Aorta Tikus ............. 36
4.1.2 Evaluasi Jumlah Sel Busa Aorta Tikus ................. 38
4.1.3 Gambaran Mikroskopis Histologi Aorta ............... 40
4.2 Pembahasan....................................................................... 42
4.1.1 Ketebalan Dinding Aorta ..................................... 42
4.1.2 Jumlah Sel Busa Aorta ......................................... 45
4.3 Keterbatasan Penelitian ..................................................... 47
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN .............................................. 48

5.1 Kesimpulan ....................................................................... 48
5.2 Saran ................................................................................. 48
DAFTAR PUSTAKA.................................................................................. 49
LAMPIRAN ................................................................................................ 54
vi
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 2.1 Kategori Kadar Profil Lipid dalam Darah ................................... 9
Tabel 2.2 Kandungan Zat Gizi setiap 100 g Buah Sirsak ........................... 18
Tabel 3.1 Rancangan Penelitian ................................................................. 24
Tabel 3.2 Komposisi Ransum T79-4 ......................................................... 30
Tabel 4.1 Kadar Kolesterol Total Sebelum Randomisasi ............................ 35
Tabel 4.2 Kadar Kolesterol Total Hari Ke -30 Perlakuan............................ 35
Tabel 4.3 Kadar Kolesterol Total Hari Terakhir Perlakuan
(Hari Ke-60) ............................................................................... 35
Tabel 4.4 Data Evaluasi Pengukuran Ketebalan Dinding Aorta
Tikus .......................................................................................... 36
Tabel 4.5 Hasil Uji ANOVA Satu Arah Ketebalan Dinding Aorta.............. 36
Tabel 4.6 Hasil uji Tukey Ketebalan Dinding Aorta.................................... 37
Tabel 4.7 Data Evaluasi Jumlah Sel Busa Aorta Tikus................................ 38
Tabel 4.8 Hasil Uji ANOVA Satu Arah Jumlah Sel Busa Aorta ................. 38
Tabel 4.9 Hasil Uji LSD Jumlah Sel Busa Aorta ........................................ 39
vii
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 2.1 Dinding Arteri Elastik (Aorta) Potongan Transversal
Pulasan Hematoksilin Eosin .................................................. 11
Gambar 2.2 Celah Kolesterol dan Bercak Perlemakan (fatty streak) yang
Membuat Penebalan Dinding Pada Aterosklerosis ................. 12
Gambar 2.3 Gambaran Sel Busa dan Otot Polos yang Mengalami
Proliferasi pada Aterosklerosis .............................................. 13
Gambar 2.4 Pembentukan Plak Aterosklerosis .......................................... 13
Gambar 2.5 Daun Sirsak (Annona muricata L.) ......................................... 16
Gambar 2.6 Kerangka Teori ..................................................................... 23
Gambar 3.1 Kerangka Konsep .................................................................. 26
Gambar 4.1 Gambaran Mikroskopis Histologi Perlakuan KN .................... 40
Gambar 4.2 Gambaran Mikroskopis Histologi Perlakuan KP..................... 40
Gambar 4.3 Gambaran Mikroskopis Histologi Perlakuan K1..................... 41
viii
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1. Jadwal Rencana Kegiatan Penelitian ...................................... 54
Lampiran 2. Diagram Alur Tahapan Penelitian .......................................... 55
Lampiran 3. Sistematika Pembuatan Mikroteknik Preparat
Histopatologi.......................................................................... 56
Lampiran 4. Sistematika Pewarnaan Haematoxylin dan Eosin.................... 57
Lampiran 5. Hasil Perhitungan Statistik Ketebalan Dinding Aorta ............. 58
Lampiran 6. Hasil Perhitungan Statistik Sel Busa....................................... 59
Lampiran 7. Titik persentase Distribusi F untuk Probabilitas = 0.05 ........... 60
Lampiran 8. Dokumentasi Penelitian.......................................................... 61
Lampiran 9. Surat Keterangan Hasil Uji Herbarium ................................... 63
Lampiran 10. Surat Keterangan Pembuatan Ekstrak..................................... 64
Lampiran 11. Surat Keterangan Selesai Penelitian FKH Unsyiah ................. 65
Lampiran 12. Surat Keterangan Selesai Penelitian FK Unsyiah.................... 66
Lampiran 13. Surat Keterangan Kelaikan Etik ............................................. 67
Lampiran 14. Riwayat Hidup ....................................................................... 68
ix
DAFTAR SINGKATAN
ACAT : Acyl CoA-cholesterol-o-acyltransferase

ANOVA : Analysis of Variance
CETP : Cholesterol Ester Transfer Protein
EDS / SLE : Ekstrak Daun Sirsak / Soursop Leave Extract
HDL : High DensityLipoprotein
HMG-CoA : 3-hydroxi-3-methylglutaryl coenzyme A
ICAM : Intracellular Adhesion Molecule
KN : Kontrol Negatif; kelompok tikus yang diberi pakan standar
KP : Kontrol Positif; kelompok tikus yang diberi pakan standar dan
diet tinggi lemak
K1 : Kelompok tikus yang diberi pakan standar, diet tinggi lemak, dan
ekstrak daun sirsak dosis 100 mg/kgBB
LAM : Leucocite Adhesion Molecule
LCAT : Lecithin-Cholesterol Acyl Transferase
LDL : Low Density Lipoprotein
LDL-oks : LDL teroksidasi
NO : Nitric Oxide
PDGF-AA : Platelet-Derived Growth Factor-AA
ROS : Reactive Oxygen Species
SR-B1 : Scavenger Receptor class B tipe 1
VCAM : Vascular Cell Adhesion Molecule
VLDL : Very Low Density Lipoprotein
x
ABSTRAK
Penyakit jantung dan pembuluh darah merupakan manifestasi klinik dari

aterosklerosis yang masih menjadi masalah kesehatan dunia karena menjadi
penyebab kematian tertinggi di dunia. Konsumsi makanan yang mengandung
lemak secara berlebihan merupakan faktor risiko perkembangan aterosklerosis.
Upaya pengobatan terhadap penyakit ini telah banyak dilakukan termasuk
penggunaan fitofarmaka. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh
pemberian ekstrak daun sirsak terhadap gambaran histopatologi aorta yaitu
penebalan dinding dan jumlah sel busa tikus jantan yang diberi diet tinggi lemak
selama 60 hari. Penelitian bersifat eksperimental dengan rancangan Post-test Only
Control Group Design. Penelitian ini menggunakan hewan coba tikus sebanyak
30 ekor yang dikelompokan menjadi 5 kelompok yaitu kelompok kontrol negatif,
kelompok kontrol positif, kelompok ekstrak daun sirsak (EDS) 100 mg/kgBB,
EDS 200 mg/kgBB, dan EDS 400 mg/kgBB. Setelah perlakuan hewan coba
dikorbankan untuk diambil aorta kemudian dibuat preparat histopatologi. Analisis
data ketebalan dinding dan sel busa menggunakan one way ANOVA dengan uji
lanjutan uji Tukey untuk data ketebalan dan uji LSD untuk data sel busa. Hasil
analisis data menunjukkan bahwa terdapat perbedaan yang signifikan antar
kelompok hewan coba yaitu p=0.000 (p<0,05). Uji Tukey memperlihatkan bahwa
EDS mengurangi ketebalan dinding aorta dan uji LSD menunjukkan bahwa EDS
mengurangi jumlah sel busa aorta dibandingkan kelompok kontrol positif. Dosis
EDS 100 mg/kgBB sebagai dosis minimum di antara pilihan dosis lainnya yang
dapat mengurangi ukuran ketebalan dinding dan jumlah sel busa aorta.
Kata kunci : aterosklerosis, ketebalan dinding aorta, jumlah sel busa aorta
xi
ABSTRACT
Heart and vascular disease are clinical signs of atherosclerosis which still
become world’s health problem causing highest number of death. Consuming
food containing fat excessively is a risk factor for atherosclerosis. Treatment
efforts have been made including phytopharmacy. The purpose of this study was
to find out the influence of the administration of soursop leaves’ extract on
aortic’s hystopatology description that was the wall thickening and the amount of
foam cells of male mice which given high-fat dietary for 60 days. This was an
experimental study with Post-test Only Control Group Design. This study used 30
mice divided into 5 groups, those was a negative control group, a positive control
group, a soursop leaves’ extract (SLE) 100 mg/kgBW group, SLE 200 mg/kgBW
group, SLE 400 mg/kgBW group. After the administration, the experimental
animals were sacrificed to harvest the aortic then the hystopatological preparat
was made. The data of the wall thickness and foam cells were analyzed by using
one way ANOVA test with Tukey test as an advanced test for the wall thickness
data and LSD test for the foam cells data. The analysis result showed that there is
a significant difference among experimental animals’ group, p value=0.000
(p<0.05). Tukey test showed that SLE decreases aortic’s wall thickness and LSD
test showed that SLE decreases the amount of aortic’s foam cells more than
positive control group. SLE dose 100 mg/kgBW is a minimum dose among other
choices of dose which can decrease the aortic’s wall thicknessand foam cells.
Keywords : atherosclerosis, aortic’s wall thickness, the amount of foam cells
xii
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Penyakit tidak menular pada tahun 2012 menjadi penyebab kematian paling
tinggi di dunia pada usia di bawah 70 tahun. Penyakit jantung dan pembuluh
darah menjadi urutan pertama (37%), diikuti kanker (27%), dan chronic
respiratory disease (8%). Indonesia memiliki angka mortalitas akibat penyakit
jantung dan pembuluh darah sekitar 407,5 per 100.000 pria dan 337 per 100.000
wanita pada tahun 2012.(1) Penyakit jantung dan pembuluh darah di antaranya
yaitu penyakit jantung koroner, stroke,(2) dan aterosklerosis.(3)
Perkembangan teknologi yang tiada henti menuntut masyarakat untuk
“hidup serba mudah”. Hal ini mempengaruhi minat masyarakat yang berlebihan
terhadap pangan dan cenderung salah dalam memilih makanan untuk dikonsumsi,
seperti makanan cepat saji. Makanan seperti ini mengandung lemak dan kolesterol
yang tinggi yang merupakan faktor risiko dalam perkembangan aterosklerosis.(3)
Hasil riset Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Kementerian
Kesehatan RI, proporsi rerata nasional perilaku konsumsi makanan belemak ≥ 1
kali per hari pada penduduk berumur ≥ 10 tahun sebesar (40,7%).(2) Proporsi di
Provinsi Aceh untuk hal tersebut pada tahun 2013 sebesar 21,2%. Angka tersebut
menunjukkan adanya peningkatan dibandingkan tahun 2007 yaitu 15,6%.(4)
Lemak atau lipid sangat bermanfaat dan diperlukan untuk pembentukan
komponen-komponen penting bagi tubuh. Tetapi, bila jumlahnya di dalam tubuh
melebihi batas normal dapat menyebabkan hiperlipidemia. Apabila dibiarkan,
konsentrasinya akan semakin meningkat terutama di dalam darah sehingga
mempengaruhi viskositas darah. Kondisi ini dapat meningkatkan risiko terjadinya
gangguan pada pembuluh darah, seperti penebalan dinding pembuluh darah arteri
atau disebut aterosklerosis.(5)
World Health Organization pada tahun 1958 mendefinisikan aterosklerosis
sebagai perubahan variabel intima arteri yang merupakan akumulasi fokal lemak
(lipid), komplek karbohidrat, darah, jaringan fibrosa, simpanan kalsium, dan
berasosiasi dengan perubahan tunika media.(6) Setengah abad kemudian,
1
2
American Heart Association menegaskan bahwa aterosklerosis disebabkan oleh

perkembangan plak yang terbuat dari kolesterol, substansi lemak, cellular waste
products, kalsium, dan fibrin (bahan untuk proses penggumpalan darah).(7)
Lesi aterosklerosis berkembang seiring meningkatnya kadar kolesterol pada
pembuluh darah. Hiperkolesterolemia dapat memicu disfungsi endotel melalui
peningkatan pembentukan radikal bebas yang membuat deaktivasi nitrat oksida.
Apabila fungsi endotel terganggu dapat berdampak pada peningkatan
permeabilitas endotel sehingga LDL dapat masuk ke dalam intima. Perubahan
kimiawi lemak dipicu radikal bebas akan menyebabkan LDL teroksidasi (LDL-
oks). LDL-oks kemudian dimakan oleh makrofag melalui scavenger receptor
secara terus-menerus sehingga makrofag membengkak dan berubah menjadi sel
busa. Sel busa ini kemudian bersatu membentuk fatty streak (bercak perlemakan).
Selanjutnya terjadi pertumbuhan sel otot polos pada pembuluh darah dari tunika
media menuju bagian dalam dinding pembuluh (tunika intima) yang
mengakibatkan penambahan ketebalan dinding pembuluh darah sehingga lumen
pembuluh darah mengecil. Serangkaian proses ini turut membuat perubahan
permeabilitas endotel yang pada akhirnya memicu pembentukan plak
aterosklerosis.(8)
Peningkatan kadar kolesterol yang tinggi di dalam pembuluh darah memicu
pembentukan radikal bebas. Proses ini menjadi inisiasi pembentukan
aterosklerosis. Oleh karena itu, aterosklerosis dapat diatasi dengan memberantas
radikal bebas. Radikal bebas dapat dihambat dengan antioksidan. Salah satu
tumbuhan yang kaya akan antioksidan adalah daun sirsak (Annona muricata L).
Pemeriksaan fitokimia menunjukkan bahwa daun Annona muricata L.,
mengandung senyawa antioksidan seperti tanin, flavonoid, dan saponin.(9, 10)
Tanin menghambat pembentukan Reactive Oxygen Species (ROS) yang di
dalamnya terdapat radikal bebas dengan cara menghambat oksidasi LDL
(penghasil ROS). ROS bersifat toksik dan dapat memicu terjadinya proses
aterosklerosis.(11) Tanin juga mampu mereduksi stres oksidatif makrofag dan
menurunkan aktivitas Acyl CoA-cholesterol-o-acyltransferase (ACAT) yang
bertanggung jawab dalam esterifikasi kolesterol. Ia juga berperan dalam
penurunan aktivitas 3-hydroxi-3-methylglutaryl coenzyme A (HMG-CoA)
3
reductase yang menghambat sintesis kolesterol. Flavonoid berperan dalam

menghambat pembentukan LDL-oks yang dipicu radikal bebas, meningkatkan
ekskresi empedu dan ekskresi reseptor LDL, serta menghambat penyerapan
kolesterol.(12) Saponin mendukung efek hipolipidemia melalui peningkatan
ekskresi asam empedu dan penurunan aktivitas HMG-CoA reductase. Dengan
demikian ia membawa dampak pada pengurangan sirkulasi enterohepatik asam
empedu. Saponin juga mampu menekan aktivitas kolesterol dalam serum dengan
membuat resin-like action.(13) Keseluruhan efek antioksidan di atas menunjukkan
bahwa senyawa kimia antioksidan yang terkandung di dalam daun sirsak bersifat
antikolesterol dan anti aterogenesis.(14)
Peran antioksidan dalam menghambat kolesterol tinggi pemicu
aterosklerosis sudah banyak diteliti. Demikian pula dengan penelitian yang
melibatkan daun sirsak. Di antaranya seperti penelitian yang membuktikan
ekstraksi daun sirsak dengan infusa mampu menurunkan kadar kolesterol total
darah tikus(5) dan penelitian yang membuktikan ekstrak daun sirsak mampu
mengurangi kadar kolesterol LDL tikus.(15) Selain penelitian tersebut, juga telah
dilakukan penelitian mengenai peran antioksidan untuk menghambat
aterosklerosis.(14) Penelitian ini menunjukkan tidak terdapat sel busa pada aorta
tikus yang diberi ekstrak daun sirsak dan diet lemak babi. Namun, penelitian ini
bersifat deskriptif dan hanya menjelaskan gambaran ada atau tidak sel busa pada
tiap kelompok, serta belum diuji secara statistik.
Berdasarkan hal tersebut di atas, maka akan dilakukan penelitian mengenai
pengaruh ekstrak daun sirsak terhadap gambaran histopatologi aorta tikus yang
diberi diet tinggi lemak dengan menganalisis secara statistik jumlah sel busa dan
ketebalan dinding aorta (tunika intima sampai tunika media) yang belum diamati
pada penelitian sebelumnya. Baik sel busa maupun ketebalan dinding termasuk
indikator lesi aterosklerosis. Penelitian ini akan melihat efek proteksi dari ekstrak
daun sirsak (preventif).
Pilihan diet tinggi lemak yang diberikan mengacu pada makanan sumber
lemak yang umum dikonsumsi masyarakat sehari-hari. Pada penelitian ini, salah
satu sumber lemak adalah lemak sapi yang memiliki kandungan asam lemak trans
jauh lebih besar dibandingkan lemak babi. Asam lemak trans akan meningkatkan
4
kadar kolesterol LDL yang selanjutnya memicu aterosklerosis.(16) Di samping

itu, lemak sapi relatif lebih mudah didapatkan. Pemberian lemak sapi dengan
beberapa campuran makanan sumber lemak lainnya diharapkan dapat
memberikan efek aterosklerosis yang diinginkan. Berdasarkan uji pendahuluan,
penelitian ini memerlukan waktu 35 hari. Penelitian ini diharapkan dapat menjadi
bukti ilmiah untuk memperjelas pengalaman empirik masyarakat mengenai
pengaruh daun sirsak, dalam hal ini untuk memproteksi pembuluh darah aorta dari
aterosklerosis. Kandungan antioksidan dalam daun sirsak diharapkan dapat
menghambat progresivitas aterosklerosis.
1.2 Rumusan Masalah
1. Apakah ketebalan dinding aorta tikus yang diberi ekstrak daun sirsak dan
pakan tinggi lemak berkurang jika dibandingkan dengan tikus kontrol positif?
2. Apakah jumlah sel busa aorta tikus yang diberi ekstrak daun sirsak dan
pakan tinggi lemak berkurang jika dibandingkan dengan tikus kontrol positif?
3. Berapakah dosis minimum ekstrak daun sirsak yang dapat mengurangi
ketebalan dinding aorta tikus yang diberi pakan tinggi lemak?
4. Berapakah dosis minimum ekstrak daun sirsak yang dapat mengurangi
jumlah sel busa pada aorta tikus yang diberi pakan tinggi lemak?
1.3 Tujuan Penelitian
Tujuan penelitian ini adalah sebagai berikut.

1. Menganalisis ketebalan dinding aorta pada tikus yang diberi pakan tinggi
lemak dan ekstrak daun sirsak.
2. Menganalisis jumlah sel busa pada aorta tikus yang diberi pakan tinggi
lemak dan ekstrak daun sirsak.
3. Menganalisis dosis pilihan ekstrak daun sirsak yang dapat mengurangi
ketebalan dinding aorta tikus yang diberi pakan tinggi lemak.
4. Menganalisis dosis pilihan ekstrak daun sirsak yang dapat mengurangi
jumlah sel busa pada aorta tikus yang diberi pakan tinggi lemak.
5
1.4 Manfaat Penelitian
1.4.1 Aspek Teoritis

Penelitian ini diharapkan dapat membantu untuk menambah referensi dan
menjelaskan bukti empiris pengaruh ekstrak daun sirsak (Annona muricata L.)
khususnya terhadap gambaran ketebalan dinding dan jumlah sel busa pada aorta
tikus wistar (Rattus norvegicus) jantan secara histopatologis.
1.4.2 Aspek Praktis

Apabila terbukti bahwa ekstrak daun sirsak (Annona muricata L.)
berpengaruh terhadap gambaran histopatologi aorta tikus wistar (Rattus
norvegicus) maka diharapkan penelitian ini dapat mengembangkan pemanfaatan
daun sirsak (Annona muricata L.) sebagai pencegahan untuk aterosklerosis
sehingga penelitian ini turut memberikan sumbangan yang dapat dimanfaatkan
dalam rangka meningkatkan mutu kesehatan masyarakat.
1.5 Hipotesis
Hipotesis yang diajukan dalam penelitian ini adalah sebagai berikut.

1. Ketebalan dinding aorta tikus yang diberi ekstrak daun sirsak dan pakan
tinggi lemak berkurang jika dibandingkan dengan tikus kontrol positif.
2. Jumlah sel busa aorta tikus yang diberi ekstrak daun sirsak dan pakan tinggi
lemak berkurang jika dibandingkan dengan tikus kontrol positif.
3. Dosis minimum ekstrak daun sirsak yang dapat menurunkan ketebalan
dinding aorta tikus yang diberi pakan tinggi lemak adalah dosis terkecil.
4. Dosis minimum ekstrak daun sirsak yang dapat menurunkan jumlah sel busa
pada aorta tikus yang diberi pakan tinggi lemak adalah dosis terkecil.
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Kolesterol dan Aterosklerosis
2.1.1 Kolesterol
Kolesterol merupakan salah satu unsur penyusun komponen struktural sel
terutama membran sel. Ia bersama dengan fosfolipid menjadi unggul sebagai
penyusun membran karena tidak mudah rusak. Kolesterol bersifat sangat larut
dalam lemak, berfungsi sebagai pembentuk asam kolat di hati, dipakai dalam
pembentukan hormon steroid, berperan dalam melindungi kulit dari zat yang
dapat menembus kulit, dan menjaga proses evaporasi agar tidak berlebihan.
Kolesterol yang berasal dari sel dalam tubuh (kolesterol endogen) paling banyak
terbentuk di hati, terdapat di sirkulasi dalam protein plasma dan berjumlah lebih
banyak dibandingkan yang diabsorpsi dari saluran cerna (kolesterol eksogen).(17)
Kolesterol dan lemak merupakan substansi yang berbeda meskipun
keduanya termasuk ke dalam golongan lipid atau lemak. Lipid memiliki
trigliserida, fosfolipid, kolesterol, dan asam lemak bebas. Sedangkan kolesterol
tidak memiliki asam lemak. Hanya inti sterol (struktur dasar kolesterol ) berasal
dari gugus molekul asam lemak. Hal ini membuat kolesterol memiliki banyak
sifat kimia dan fisik seperti lemak. Sehingga tidak menutup kemungkinan suatu
makanan memiliki kadar lemak tinggi dan kolesterol rendah atau sebaliknya. Inti
sterol sendiri akan mengalami konversi menjadi kolesterol, asam kolat (dasar dari
asam empedu yang dibentuk di hati), dan beberapa hormon steroid.(17, 18)
Kolesterol bersifat tidak larut dalam darah sehingga ia membutuhkan
carrier untuk membawanya ke seluruh sirkulasi tubuh yang disebut lipoprotein.
Lima kelas lipoprotein yang diklasifikasikan berdasarkan densitasnya dan turut
berperan dalam sistem homeostasis tubuh adalah sebagai berikut.(17-19)
1. Kilomikron, bentuk awal lipoprotein, partikel ini diproduksi oleh sel
usus halus yang berasal dari lemak dan protein yang dimakan,
membawa trigliserida dari makanan ke jaringan lemak dan otot rangka
serta ke hati.
6
7
2. Very Low Density Lipoprotein (VLDL) yang mengandung konsentrasi

tinggi trigleserid, konsentrasi kolesterol dan fospolipid sedang,
disekresi oleh hati untuk mengangkut kolesterol ke jaringan perifer.
3. Intermediate Density Lipoprotein yang berasal dari VLDL, dimana
sebagian besar trigliseridanya sudah dikeluarkan, sehingga kolesterol
dan fosfolipidnya meningkat.
4. Low Density Lipoprotein (LDL), berasal dari VLDL, merupakan
lipoprotein pengangkut kolesterol terbesar pada manusia, hampir
keseluruhan dari trigliserida telah dikeluarkan, konsentrasi kolesterol
dan fosfolipid menjadi cukup tinggi.
5. High Density Lipoprotein (HDL) dimana mengandung protein
berkonsentrasi tinggi, serta kolesterol dan fosfolipid dalam jumlah
yang jauh lebih kecil.
Kelima hal di atas adalah sub-fraksi mayor dari lipoprotein. Kebanyakan
trigliserida diangkut dalam kilomikron atau VLDL, sedangkan kebanyakan
kolesterol diangkut dalam LDL dan HDL.(19) Lipoprotein berfungsi sebagai
mediator transportasi lipid dari hati ke jaringan dan dari jaringan kembali ke hati.
Hal ini untuk melindungi kolesterol dari sifat air plasma dan menjaga homeostasis
kolesterol darah. Lipoprotein memiliki variasi ukuran, bentuk, komposisi, fungsi,
dan variasi dalam kontribusi pada penyakit vaskular. Lipoprotein tersebut dapat
berubah dari jenis lipoprotein yang satu menjadi jenis lipoprotein yang lain
dengan bantuan enzim.(3)
Suatu enzim plasma yang disebut Lecithin-Cholesterol Acyl Transferase
(LCAT) mengkonversi kolesterol bebas menjadi kolesterol ester (bentuk
kolesterol yang lebih hidrofobik) yang kemudian terasingkan ke dalam inti dari
partikel lipoprotein, akhirnya menyebabkan HDL yang baru disintesis berbentuk
bulat. Partikel HDL bertambah besar karena beredar melalui aliran darah sambil
memasukkan lebih banyak kolesterol dan molekul fosfolipid dari sel dan
lipoprotein lainnya. Selanjutnya sebagian kolesterol yang dibawa oleh HDL akan
mengambil dua jalur. Jalur pertama yaitu ke hati dan ditangkap oleh Scavenger
Receptor class B tipe 1 (SR-B1). SR-B1 tidak hanya mengantarkan kolesterol
ester HDL yang tersisa ke hati, tetapi juga meningkatkan aktivitas pengambilan
8
kolesterol HDL baik yang teresterifikasi maupun tidak teresterifikasi tanpa

mendegradasi apolipoprotein HDL. Jalur kedua adalah kolesterol ester dalam
HDL akan ditukarkan dengan trigliserida dari VLDL dan LDL dengan bantuan
Cholesterol Ester Transfer Protein (CETP). Protein ini mengubah trigliserida dari
VLDL terhadap kolesterol ester HDL. Sebagai hasilnya, VLDL diproses untuk
LDL yang dibuang dari sirkulasi oleh reseptor LDL. Reseptor LDL ini berfungsi
sebagai clearance kolesterol LDL, sehingga bila kadarnya meningkat maka akan
menyebabkan peningkatan clearance kolesterol LDL plasma. Akhirnya, partikel
HDL kecil yang tersisa akan memulai kembali penyerapan kolesterol dari sel.
Kolesterol yang ditranspor ke hati akan dieksresikan ke empedu usus baik secara
langsung maupun tidak langsung setelah konversi menjadi asam empedu.(18)
Jalur sintesis asam empedu dikenal dengan jalur katabolisme kolesterol.
Kolestrol yang dibawa oleh HDL akan diubah menjadi asam kolat dalam jumlah
yang sama. Garam dari asam empedu terutama garam natrium akan disekresi ke
dalam empedu. Garam empedu memiliki dua tugas penting yaitu sebagai
berikut.(20)
1. Emulsifikasi, yaitu garam empedu berperan sebagai deterjen dalam
partikel lemak dan makanan dengan cara bekerja bersama lesitin
dalam empedu untuk membuat gelembung lemak menjadi bentuk
kecil dan siap untuk dipecah oleh pengadukan dengan air di dalam
usus halus. Hal ini bertujuan untuk mengurangi tegangan permukaan
partikel. Proses ini sangat membantu kerja enzim lipase karena enzim
ini hanya dapat menyerang gumpalan lemak pada permukaannya.
2. Bekerja membantu absorpsi asam lemak, monogliserida, kolesterol,
dan lemak lain dalam traktus intestinal dengan cara membentuk
kompleks yang sangat kecil dengan lemak tersebut yang disebut micel.
Kompleks ini semi-larut di dalam kimus. Lemak usus akan diangkut
dalam bentuk kompleks tersebut ke mukosa usus kemudian diabsorpsi
ke dalam darah untuk selanjutnya bergabung dengan protein
(apoprotein) sehingga terbentuk lipoprotein yang beredar dalam
sirkulasi darah. Lemak yang tidak diabsorpsi akan dikeluarkan
bersama tinja.(17) Sebagian besar ekskresi garam-garam empedu
9
diserap kembali ke dalam sirkulasi vena porta, kemudian dibawa

kembali ke hati, dan diekskresi kembali melalui empedu. Ini dikenal
sebagai sirkulasi enterohepatik. Garam-garam,empedu yang tidak
diserap akan diekskresi dalam feses.
HDL diduga memiliki efek antiaterogenik cenderung membawa kolesterol
menjauhi arteri dan kembali ke hati, menyingkirkan kolesterol yang berlebihan di
plak dan menghambat perkembangan plak selama proses aterogenesis.(17)
Sebaliknya LDL bersifat antagonis sistem sirkulasi karena cenderung mengikat
jaringan ikat yang terdapat pada subendotheliale tunika intima arteri.(20)
LDL berfungsi membawa kolesterol ke jaringan perifer untuk dipecah
menjadi energi atau disimpan. Reseptor LDL di dalam hepar mengeluarkan LDL
dari sirkulasi. LDL dapat menembus dinding arteri. Kolesterol yang terkandung di
dalamnya akan teroksidasi dan berikatan dengan trigliserida, fibrin, dan platelet
membentuk plak yang merupakan awal dari proses atherosklerosis.(20)
Tabel 2.1 Kategori Kadar Profil Lipid dalam Darah (21)

Profil Lipid Nilai Kategori
Kolesterol Total <200 Optimal
200-239 Diinginkan
≥240 Tinggi
Kolesterol LDL <100 Optimal
100-129 Medekati optimal
130-159 Diinginkan
160-189 Tinggi
≥190 Sangat Tinggi
Kolesterol HDL <40 Rendah
≥60 Tinggi
Trigliserida <150 Optimal
150-199 Diinginkan
200-499 Tinggi
≥500 Sangat Tinggi
10
2.1.2 Diet Tinggi Lemak, Hiperkolesterolemia dan Aterosklerosis

Lemak netral merupakan pakan unsur utama bahan makanan yang berasal
dari hewan dan sangat sedikit terdapat dalam makanan yang berasal dari
tumbuhan. Lemak netral atau trigliserida adalah lemak yang paling banyak
terdapat dalam diet. Selain itu dalam diet juga terdapat fosfolipid, ester kolesterol,
dan kolesterol. Asam lemak merupakan susunan fosfolipid dan kolesterol
sehingga keduanya dapat dianggap lemak. Berbeda dengan kolesterol yang tidak
mengandung asam lemak. Kendati demikian, kolesterol memiliki sifat fisik dan
kimia dari lemak karena struktur dasar kolesterol yang disebut inti sterol berasal
dari gugus molekul asam lemak. Hal ini yang menjadi dasar kolesterol disebut
turunan lemak, di samping ia dimetabolisme seperti lemak. Oleh karena itu, dari
sudut makanan, merupakan suatu lemak.(17)
Diet lemak jenuh dapat meningkatkan kolesterol darah 15-25%. Asupan
tinggi asam lemak jenuh dan kolesterol menyebabkan konsentrasi kolesterol yang
terdapat di dalam tubuh meningkat. Asam lemak jenuh meningkatkan kadar
kolesterol melalui beberapa mekanisme, yaitu menekan aktivitas reseptor LDL
dan sintesis kolestrol di hati, menurunkan afinitas LDL bagi reseptor LDL, serta
meningkatkan transfer kolesterol bebas. Setiap asupan lemak jenuh 1% dari total
energi sehari dapat meningkatkan 2,7 mg/dl kadar kolesterol.(18)
Asupan kolesterol yang tinggi dari makanan menyebabkan hiperlipidemia
termasuk hiperkolesterol. Hiperkolesterolemia dapat memicu perkembangan lesi
aterosklerosis. Aterosklerosis adalah penumpukan endapan jaringan lemak
(ateroma) dalam arteri. Aterosklerosis terbagi atas tiga tahap yaitu tahap
pembentukan sel busa, pembentukan plak pada jaringan, dan lesi majemuk. Zat-
zat yang merangsang terbentuknya aterosklerosis disebut aterogenik.
Pengendapan lemak seperti ini disebut plak, terutama terdiri atas kolesterol dan
esternya, serta cenderung terjadi di titik-titik percabangan arteri.
2.2 Aorta
Arteri terbagi atas arteri elastik atau arteri besar (aorta), arteri muskular, dan
arteri kecil serta arteriol. Arteri elastik memiliki serat elastik sehingga pembuluh
darah ini dapat memperbesar diameter lumennya saat darah dipompa dari jantung
11
menuju ke sirkulasi sistemik. Proses tersebut membantu untuk menjaga tekanan

darah bersama dengan proses mengerutnya serat elastik selama proses diastol.(22)
Gambar 2.1 Dinding Arteri Elastik (Aorta) Potongan Transversal Pulasan

Hematoksilin Eosin; (1) Tunika Intima; (2) Lamina Elastika Interna; (3) Tunika
Media; (4) Tunika Adventisia (23)
Dinding aorta memiliki tiga lapisan utama seperti pembuluh darah lainnya,
yaitu tunika intima, tunika media, dan tunika adventisia. Tunika intima adalah
lapisan yang paling dekat dengan lumen aorta, memiliki endotel dari epitel pipih
selapis (nukleus menonjol ke dalam lumen) dan stratum subendotheliale. Lamina
elastika interna memisahkan tunika intima dan media, sulit diidentifikasi karena
serat elastin yang banyak pada intima. Tunika media terdiri dari membran
fenestrata dari jaringan ikat elastin dan serat otot polos yang konsentris. Berbeda
dengan tunika media arteri muskular yang terutama teridiri dari otot polos, pada
arteri elastik atau aorta lebih banyak terdapat serat elastin.(23) Lamina elastika
eksterna merupakan bagian tunika media yang berbatasan dengan tunika
adventisia. Tunika adventisia adalah lapisan paling perifer dari lumen dan
mendapatkan nutrisi dari venula serta arteriol vasa vasorum.(22)
12
2.2.1 Histopatologi Aorta

Pada kondisi tertentu seperti hiperlipidemia, terutama hiperkolesterolemia,
kadar LDL akan tinggi pada sirkulasi. Hal ini memicu kerusakan endotel tunika
intima aorta melalui peningkatan pembentukan radikal bebas oleh makrofag atau
sel endotel yang membuat deaktivasi nitrat oksida (vasodilator). Kemudian terjadi
disfungsi endotel yang membuat peningkatkan permeabilitas endotel sehingga
LDL dapat masuk dengan mudah ke dalam intima. Keberadaan radikal bebas
membuat kondisi stres oksidatif yang menyebabkan LDL lebih mudah mengalami
oksidasi (LDL-oks). Peristiwa oksidasi LDL merangsang permukaan sel untuk
menarik monosit ke dalam intima. Monosit di dalam intima berubah menjadi
makrofag dan memakan LDL-oks melalui scavenger receptor. Kemudian
makrofag mentranspor kolesterol intrasel ke HDL yang akan disimpan atau
diekskresikan oleh hati melalui reverse cholesterol transport. Semakin banyak
LDL yang dimakan menyebabkan makrofag penuh dan bengkak sehingga
makrofag berbentuk seperti busa. Retensi kolesterol di dalam makrofag akan
memicu pembentukan sel busa.(8) Selanjutnya membentuk kumpulan sel busa
(fatty streak). Fatty streak merupakan lesi awal terbentuknya aterosklerosis.(18)
Gambar 2.2 Celah Kolesterol dan Bercak Perlemakan (fatty streak) yang
Membuat Penebalan Dinding Pada Aterosklerosis (24)
13
Gambar 2.3 Gambaran Sel Busa dan Otot Polos yang Mengalami Proliferasi
pada Aterosklerosis (24)
Pada tahap berikutnya terjadi pertumbuhan sel otot polos pada pembuluh
darah dari lapisan tengah menuju bagian dalam dinding pembuluh menyebabkan
terbentuk plak sehingga dinding pembuluh darah mengalami penebalan. Semakin
lama plak akan membesar dan lumen semakin menyempit. Selanjutnya plak
semakin majemuk dengan terjadinya penambahan kalsium dan unsur-unsur lain
yang dibawa oleh darah. Hal ini dapat mengakibatkan sobekan dan pendarahan
yang merupakan tahap awal lesi majemuk.(8)
Gambar 2.4 Pembentukan Plak Aterosklerosis (25)

14
2.3 Radikal Bebas, Stres Oksidatif, dan Antioksidan
Dewasa ini, radikal bebas sering disamakan dengan oksidan. Hal ini
disebabkan karena keduanya agresif dalam menangkap elektron lain dan dapat
menyebabkan kerusakan yang sama walaupun prosesnya berbeda. Radikal bebas
merupakan suatu atom atau molekul dengan satu atau lebih elektron tidak
berpasangan pada orbit kulit terluarnya. Dalam tubuh manusia radikal bebas dapat
terbentuk baik dari respon normal rantai biokimia dalam tubuh atau dari polusi
yang didapat dari lingkungan dan bereaksi di dalam tubuh. Pada dasarnya radikal
bebas berguna untuk aktivitas biologis tubuh. Seyawa ini bersifat reaktif dan tidak
stabil. Stabilisasi atom atau molekul dilakukan menarik elektron dari molekul
yang berada disekitarnya. Reaksi ini akan berlangsung terus menerus. Apabila
tidak diantisipasi dengan adanya antioksidan dan terjadi produksi berlebih dari
radikal bebas di dalam tubuh maka dapat menyebabkan suatu keadaan yang
disebut stress oksidatif.(26)
Stres oksidatif merupakan kondisi dimana terjadi peningkatan Reactive
Oxygen Species (ROS) yang di dalamnya terdapat radikal bebas. Produksi
berlebih dari radikal bebas akan menyebabkan terjadinya peroksidasi lipid
membran sel dan merusak organisasi membran sel. Peroksidasi lipid adalah suatu
mekanisme dari trauma sel yang terjadi baik pada tumbuhan, hewan, ataupun
manusia, dengan demikian peroksidasi lipid menjadi indikator dari stress oksidatif
pada sel dan jaringan. Pada akhirnya serangkaian proses ini dapat menyebabkan
terjadinya kerusakan sel, jaringan, dan bahkan organ.(26)
Antioksidan merupakan suatu senyawa yang dapat menangkap produksi
radikal bebas berlebih dalam tubuh dengan cara menyumbangkan satu atau lebih
elektron kepada radikal bebas. Antioksidan didalam tubuh manusia dapat
digolongkan menjadi antioksidan enzim (endogen) dan antioksidan non-enzim
(eksogen). Berdasarkan mekanisme kerjanya dengan radikal bebas, antioksidan
dapat dikelompokkan menjadi tiga kelompok, yaitu antioksidan primer,
antioksidan sekunder, dan antioksidan tersier. Antioksidan primer dalam
menangkap radikal bebas bekerja dengan cara memutuskan rantai reaksinya
menjadi senyawa nonradikal atau senyawa radikal yang lebih stabil. Antioksidan
sekunder bekerja dengan cara mencegah tahapan inisiasi dalam reaksi berantai
15
radikal bebas. Sedangkan antioksidan tersier bekerja dalam memperbaiki molekul-

molekul yang telah mengalami kerusakan dan juga berperan dalam membuang
berbagai molekul yang telah dirusak oleh radikal bebas.(26)
2.4 Sirsak (Annona muricata L.)
2.4.1 Taksonomi dan Morfologi

Annona muricata disebut Soursop di Amerika, Zuurzak di Belanda, Rian-
Nam di Thailand, dan Sirsak di Indonesia.(27) Sirsak berasal dari famili
Annonaceae dan genus Annona.(27-29) Buah ini memiliki sekitar 150 spesies.
(28) Berikut adalah sistematika tanaman sirsak.(30)
Divisi : Spermatophyta
Subdivisi : Angiospermae
Kelas : Dicotyledoneae
Bangsa : Polycarpiceae
Suku : Annonaceae
Marga : Annona
Jenis : Annona muricata Linn
Tanaman sirsak berukuran kecil, bercabang banyak, dan memiliki tinggi
sekitar 3-8 m. Ranting berbentuk silinder dengan warna coklat kemerahan dan
tanpa rambut atau gundul. Bunga berwarna hijau sampai hijau kekuningan. Buah
sirsak dikelilingi duri-duri lunak berwarna hijau atau kuning.(27) Kulit sirsak
tipis dan berwarna hijau tua. Buah sirsak berbentuk bujur telur atau seperti bentuk
hati dengan ukuran panjang sekitar 15 sampai 30 cm dan lebar 10 sampai 20 cm
dengan rata-rata berat 4,5 kg. Daging buah terdiri dari bagian berair dan berserat
yang berwarna putih dan mempunyai rasa asam yang khas. Buah sirsak kaya akan
vitamin B dan C. Biji berwarna coklat tua sampai hitam berukuran panjang sekitar
2 cm dan lebar 1 cm.(29) Biji sirsak berbentuk seperti bujur telur dan rata, tidak
berambut atau gundul serta berkilau.(27)
Sirsak memiliki daun yang berwarna hijau tua dan hijau terang, berbentuk
oblong-obovate, yaitu berbentuk memanjang sampai bulat telur sungsang atau
berbentuk oblongelliptic, yaitu berbentuk antara memanjang sampai elips, serta
memiliki panjang 6-18 cm dengan lebar 3-7 cm. Ujung daun meruncing dan
16
pangkal daun berbentuk segitiga sungsang (baji) atau runcing, serta memiliki
tangkai daun yang pendek.(27) Daun sirsak memiliki bau yang tajam saat
dirobek.(28)
Gambar 2.5 Daun Sirsak (Annona muricata L.) (31)
2.4.2 Distribusi Geografis dan Habitat

Produksi buah sirsak dunia terpusat di beberapa negara di Amerika Selatan,
terutama Venezuela, Brazil, dan Kolumbia. Selain itu, ia juga banyak ditemukan
di Benua Asia.(29) Tumbuhan ini banyak tumbuh di negara tropis, termasuk
Indonesia.(32) Spesies ini biasanya ditanam di kebun rumah dan ditemukan di
lahan kebun pedesaan. Sering juga ditemukan di pesisir dan lereng, baik tumbuh
dengan liar atau alami di semak belukar, padang rumput, dan sepanjang jalan.(27)
Sirsak dapat tumbuh pada daerah tropis dan subtropis. Ia juga dapat tumbuh pada
semua jenis tanah, tetapi tumbuh paling baik pada tanah gembur atau tanah yang
sedikit asam sampai agak alkalis dengan pH sekitar 5,5-6,5.(27, 33) Di samping
itu, tanah juga harus memiliki bahan organik yang tinggi.(33) Sirsak paling baik
ditanam di daerah yang cukup berair dan pada ketinggian di atas 1.000 meter dari
permukaan laut.(32) Suhu udara yang sesuai antara 25–30°C dengan curah hujan
lebih dari 1.000 mm/tahun.(27) Cocok ditanam pada keadaan lahan yang terbuka,
17
tidak ada naungan, dan tidak ada kabut. Tanaman sirsak memerlukan sekitar 50-
70% sinar matahari untuk tumbuh.(33)
2.4.3 Manfaat Tanaman Buah Sirsak

Tanaman buah sirsak memiliki manfaat pada hampir semua bagiannya.(33)
Tumbuhan ini dapat diolah menjadi berbagai bentuk makanan dan minuman,
seperti yoghurt, jus, es krim, madu, sirup, selai, agar-agar, dan sebagainya. Buah
sirsak yang belum matang dan biji sirsak dapat menjadi sayuran serta daging
buahnya yang berwarna putih dapat langsung dimakan.(29)
Seluruh bagian dari tumbuhan sirsak telah digunakan dalam obat tradisional
di berbagai budaya untuk berbagai penyakit. Biji sirsak digunakan sebagai
antimuntah dan dapat pula diolah minjadi minyak yang efektif mengatasi kutu
rambut. Daging buah sirsak diolah sedemikian rupa menjadi plester untuk menarik
tuma. Buah yang belum matang diyakini bersifat konstriktor dan digunakan untuk
diare serta disentri. Buah yang matang dimanfaatkan untuk antiketombe dan juga
digunakan sebagai anticacing. Jus buah sirsak matang sebagai obat diuresis,
hematuria, dan uretritis. Bunga tanaman sirsak sebagai antispasmodic. Batang
tanaman sirsak digunakan dalam bentuk bubuk untuk diare dan disentri olah orang
cina dan sebagai tonik oleh orang melayu di Malaysia.(27)
Daun sirsak adalah salah satu bagian tanaman buah sirsak yang sering
dimanfaatkan sebagai obat tradisional. Studi beberapa tahun terakhir
menunjukkan bahwa daun sirsak berkhasiat menurunkan tekanan darah tinggi dan
untuk pengobatan kanker. Air rebusan daun sirsak dapat dipakai untuk kompres
inflamasi dan dapat mengatasi kutu serta kepinding. Infusa daun sirsak dipercaya
memiliki kemampuan untuk mengeluarkan keringat, antispasmodic, dan
antimuntah. Getah daun muda sirsak digunakan untuk menyembuhkan ekzema
dan erupsi kulit.(27)
2.4.4 Kandungan Kimia

Buah sirsak kaya akan vitamin, serat, dan mineral. Berikut ini adalah
kandungan zat gizi buah sirsak tanpa biji dan kulit (tiap 100 g porsi yang dapat
dimakan) sebagai berikut.(34)
18
Tabel 2.2 Kandungan Zat Gizi setiap 100 g Buah Sirsak (34)
Zat Gizi Kandungan
Air (g) 81,16
Protein (g) 1,00
Lemak (g) 0,30
Karbohidrat (g) 16,84
Serat / dietary fiber (g) 3,3
Kalsium (mg) 14
Magnesium (mg) 21
Kalium (mg) 278
Sodium (mg) 14
Vitamin C (mg) 20,6
Thiamin (mg) 0,070
Riboflavin (mg) 0,050
Niasin (mg) 0,900
Asam pantotenat (mg) 0,253
B-karoten (mg) 1
Vitamin B-6 (mg) 0,059
Vitamin K (mg) 0,4
Uji fitokimia terhadap daun sirsak menunjukkan kandungan yang positif

dari acetogenin,(35) fenol,(31, 36) flavonoid, tanin, alkaloid, saponin dan
steroid/triterpenoid.(10, 37, 38) Acetogenin telah diteliti dapat mendukung banyak
aktivitas biologis, seperti antikanker/antitumor,(32) antispasmodic, antimalaria,
antiprotozoa, antiviral, antimikroba, immunosuppressant, antifeedant, anticacing
dan pestisida.(27)
Senyawa lain yang aktivitas biologisnya hampir serupa dengan acetogenin
adalah alkaloid.(39) Alkaloid dalam Annonaceae dapat melakukan aktivitas
biologis tertentu, di antaranya adalah antikanker, sitotoksisitas, analgesik,
antimikroba, memblokir reseptor dopaminergik, dan antikonvulsan.(40)
Flavonoid adalah salah satu turunan senyawa fenol yang terkenal ampuh
untuk hipolipidemia.(41) Senyawa tersebut memiliki efek antioksidan yang kuat.
Senyawa non-enzim ini membantu organisme dalam proteksi terhadap oksidan
19
yang beraksi untuk merusak makromolekul seperti protein, lemak, enzim, dan
DNA.(31) Flavonoid bekerja dengan mencegah terjadi stres oksidatif melalui
stabilisasi radikal bebas, yaitu dengan menyempurnakan elektron radikal bebas
dan menghambat reaksi berantai pembentukan radikal bebas.(39)
Tanin merupakan salah satu senyawa turunan fenol yang dapat
menyebabkan hipolipidemia.(41) Hasil penelitian eksperimental pada tikus
hiperkolesterolemia menunjukkan bahwa suplementasi tanin dapat menurunkan
71% aktivitas HMG-COA reductase kolesterol dan 23% kolesterol LDL serta
meningkatkan kolesterol HDL secara bermakna. Hal ini menyebabkan terjadi
penghambatan sintesis kolestrol.(42)
Saponin merupakan bentuk lain dari triterpenoid atau steroid. Kerja saponin
dalam penurunan kolesterol berhubungan dengan peningkatan ekskresi asam
empedu. Setelah itu sintesis kolesterol di hati akan terhambat. Pada akhirnya
proses tersebut akan menciptakan keadaan hipokolesterolemia.(43)
2.4.5 Peran Antioksidan dalam Daun Sirsak terhadap Aterosklerosis

Komponen utama ekstrak daun sirsak yang memiliki efek hipolipidemia
adalah tanin, flavonoid, dan saponin. Tanin merupakan golongan senyawa
polifenol yang berperan sebagai antioksidan. Senyawa antioksidan (polifenol)
menurunkan oksidasi LDL dan mencegah inflamasi pada endotel. Nitric oxide
adalah vasodilator endogenous yang mempunyai kemampuan anti aterosklerosis.
Polifenol akan mencegah oksidasi LDL. Oksidasi LDL akan menghasilkan ROS
yang bersifat toksik dan dapat memicu terjadinya proses aterosklerosis. Apabila
berikatan dengan NO akan membentuk peroksinitrit oksidan. Polifenol sebagai
antioksidan mempunyai efek yang menguntungkan pada fungsi endotel yaitu
menurunkan oksidasi LDL dan meningkatkan produksi nitric oxide (NO). LDL
akan menginduksi respon inflamasi dengan memproduksi leukosit dan sitokin
pada endotel.(11)
Tanin juga berperan dalam penurunan aktivitas HMG-CoA reductase yang
berperan mensintesis kolesterol dan enzim ACAT yang bertanggung jawab dalam
esterifikasi kolesterol sehingga menekan penggabungan kolesterol ester
membentuk kilomikron dan meningkatkan ketersediaan kolesterol bebas untuk
transpor kolesterol terbalik sehingga mencegah akumulasi lipid di makrofag.
20
Terhambatnya aktivitas HMG-COA reductase akan menurunkan sintesis

kolesterol di hati sehingga menurunkan sintesis Apo B-100 dan meningkatkan
reseptor LDL pada permukaan hati. Dengan demikian, kolesterol LDL darah akan
ditarik ke hati sehingga menurunkan kolesterol LDL dan VLDL.(42)
Flavonoid adalah salah satu turunan senyawa fenol yang bersifat sebagai
koagulator protein.(36) Senyawa flavonoid terkenal ampuh untuk
hipolipidemia.(41) Flavonoid dapat menghambat pembentukan LDL-oks yang
dipicu radikal bebas, meningkatkan ekskresi empedu dan menghambat
penyerapan kolesterol. Flavonoid mampu mengaktivasi reseptor LDL.
Peningkatan reseptor LDL mengindikasikan terjadinya penurunan kolesterol
LDL.(12) Flavonoid dapat menurunkan kadar kolesterol darah dengan cara
meningkatkan ekskresi asam empedu dan mengurangi kekentalan (viskositas)
darah sehingga mengurangi terjadinya pengendapan lemak pada pembuluh darah.
Flavonoid berperan pula dalam memperkuat efek vitamin C sebagai
antioksidan.(38)
Saponin meningkatkan ekskresi asam empedu dan penurunan aktivitas
(HMG-CoA) reductase yang menghambat sintesis kolesterol. Saponin mampu
mengubah absorbsi lemak dan asam empedu dengan menginterupsi formasi micel,
sehingga lemak, terutama kolesterol, tidak dapat diabsorbsi. Saponin berperan
pula dalam meningkatkan pergantian atau pengelupasan sel usus melalui tindakan
membranolytic sehingga meningkatkan hilangnya kolesterol di membran sel ke
dalam sel yang terkelupas.(43)
2.4.6 Dosis Ekstrak Daun Sirsak

Penelitian yang pernah dilakukan sebelumnya menyebutkan bahwa dosis
≥1000 mg/kgBB toksik terhadap ginjal tikus dan dapat membuat berat badan tikus
jantan menurun secara signifikan. Di samping itu, dosis ekstrak daun sirsak 2500
mg/kgBB dapat meningkatkan kreatinin dan limfosit. Dosis 1000 mg/kgBB dapat
memberikan efek toksik terhadap tubuh tikus dengan mengganggu fungsi
lambung dan menurunkan efisiensi konversi makanan. Ekstrak daun sirsak pada
dosis ini juga mampu menurunkan albumin plasma. Hal ini merupakan pertanda
bahwa terdapat gangguan pada fungsi ginjal tikus. Pada dosis 100 mg/kgBB
disebutkan bahwa ekstrak daun sirsak dapat menurunkan kolesterol LDL yang
21
mengindikasikan bahwa dosis tersebut dapat menurunkan faktor risiko gangguan

pada kardiovaskular.(15) Penelitian lain juga menuturkan bahwa dosis tersebut
aman untuk tikus.(41)
2.5 Ekstraksi
Ekstraksi adalah kegiatan penarikan kandungan kimia yang dapat larut
sehingga terpisah dari bahan yang tidak dapat larut dengan pelarut cair. Terdapat
dua jenis ekstraksi, yaitu ekstraksi dengan menggunakan pelarut dan esktraksi
destilasi uap (untuk minyak atsiri). Ekstraksi menggunakan pelarut terbagi dalam
dua cara, yakni cara dingin dan cara panas. Refluks, sokletasi, digesti, infus, dan
dekok adalah metode ekstraksi cara panas. Sedangkan metode ekstraksi cara
dingin adalah yang umum digunakan. Pilihan metode ekstraksinya yaitu maserasi
dan perkolasi.(44) Cara dingin memiliki keuntungan karena sederhana dan
ekstrak tidak dipanaskan sehingga kecil kemungkinan bahan alam akan terurai.
Pemilihan ekstraksi disesuaikan dengan sifat bahan mentah obat.(45)
Hasil ekstraksi adalah ekstrak berupa sediaan kental. Ekstrak diperoleh
dengan mengekstraksi zat aktif dari simplisia nabati atau hewani menggunakan
pelarut yang sesuai, kemudian semua atau hampir semua pelarut diuapkan.(44, 45)
Dalam pemilihan pelarut sebagai cairan penyari harus memenuhi beberapa
kriteria, antara lain murah, mudah diperoleh, stabil secara fisika dan kimia,
bereaksi netral, tidak mudah menguap dan terbakar, serta selektif. Selektif yang
dimaksud yaitu hanya menarik zat berkhasiat yang dikehendaki, tidak
mempengaruhi zat berkhasiat, dan diperbolehkan oleh peraturan.(46)
Pelarut yang diperbolehkan untuk digunakan adalah air, alkohol (seperti
etanol), dan campuran (air dan alkohol).(45) Air dipertimbangkan sebagai
penyari karena murah, mudah didapat, stabil, tidak mudah menguap, tidak mudah
terbakar, tidak beracun, alamiah, dan mampu mengekstraksi banyak bahan
kandungan simplisia. Kelemahan air yaitu tidak selektif, memerlukan waktu yang
lama memekatkan ekstrak, sari dapat ditumbuhi kapang atau kuman, serta cepat
rusak. Sedangkan etanol bersifat lebih selektif, kapang dan kuman sulit tumbuh
dalam etanol dengan konsentrasi 20% ke atas, tidak beracun, netral, absorbsinya
baik, dapat mengendapkan albumin dan menghambat kerja enzim. Selain itu,
22
etanol dapat bercampur dengan air pada segala perbandingan dan panas yang
diperlukan untuk pemekatan lebih sedikit.(46)
2.6 Tikus Rattus norvegicus sebagai Hewan Coba

Tikus merupakan hewan yang biasa digunakan sebagai hewan coba dalam
berbagai penelitian karena tikus memiliki daya adaptasi yang sangat tinggi
terhadap lingkungan. Tikus putih (Rattus norvegicus) merupakan hewan yang
mewakili dari kelas mamalia sehingga kelengkapan organ, kebutuhan nutrisi,
metabolisme biokimia, sistem reproduksi, pernafasan, peredaran darah dan
ekskresi menyerupai manusia.(39) Umur tikus 3-4 bulan menunjukkan tikus
berada pada usia dewasa sehingga jalur metabolisme dan sirkulasi telah teratur
dengan baik. (47)
23
2.7 Kerangka Teori
Diet Tinggi Lemak Ekstrak Daun Sirsak
Absorpsi Lemak ↑
Antioksidan
Hiperkolesterolemia
Kolesterol LDL
di sirkulasi ↑
LDL-oks(8)
ROS ↑ (8, 11)
Disfungsi Endotel(8, 25)

 NO ↓
 Permeabilitas ↑
Agregasi Platelet
dan Unsur Lain yang
Dibawa Darah(8)
Aktivasi/Akumulasi Proliferasi Miosit ke

Monosit/Makrofag(8, 9) Tunika Intima(8)
Dinding Pembuluh
Sel Busa(8, 9)
Darah Menebal(8)
Terbentuk Plak(8)
Keterangan:
= Diteliti Penyempitan Lumen
Pembuluh Darah(8)
= Tidak Diteliti
= Menghambat /
Mengurangi Lesi Aterosklerosis(8)
Gambar 2.6 Kerangka Teori

BAB III
METODOLOGI PENELITIAN
3.1 Jenis dan Rancangan Penelitian
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental laboratorik dengan

pendekatan Post-test Only Control Group Design menggunakan hewan coba
tikus tikus putih (Rattus norvegicus) jantan strain Wistar. Tikus dibagi dengan
rancangan acak lengkap (RAL) menjadi lima kelompok, terdiri dari 3 kelompok
perlakuan dan 2 kelompok kontrol (kontrol positif dan negatif). Setiap kelompok
terdiri dari 6 tikus coba (pengulangan sebanyak 6 kali). Adapun rancangan
penelitian ini sebagai berikut.
Tabel 3.1 Rancangan Penelitian

Pengulangan
Perlakuan
A B C D E F
KN KNA KNB KNC KND KNE KNF
KP KPA KPB KPC KPD KPE KPF
K1 K1A K1B K1C K1D K1E K1F
Keterangan:
KN : Kontrol Negatif; kelompok tikus yang diberi pakan standar
KP : Kontrol Positif; kelompok tikus yang diberi pakan standar dan diet
tinggi lemak
A s.d. F : Berturut-turut adalah pengulangan (sampel) ke-I s.d ke-VI dalam setiap
perlakuan (kelompok)
24
25
3.2 Tempat dan Waktu Penelitian
Pembuatan ekstrak etanol daun sirsak dan uji herbarium dilakukan di

Laboratorium Kimia Fakultas Metematika dan Ilmu Pengetahuan Alam (FMIPA)
Universitas Syiah Kuala. Pemeliharaan hewan uji dilakukan di Fakultas
Kedokteran Hewan (FKH) Universitas Syiah Kuala, sedangkan pengukuran
ketebalan aorta dan jumlah sel busa dilakukan di Laboratorium Patologi Anatomi
Fakultas Kedokteran (FK) Universitas Syiah Kuala. Waktu penelitian mulai
Oktober 2015 sampai Desember 2015 (Lampiran 1).
3.3 Populasi dan Sampel Penelitian
3.3.1 Populasi Penelitian

Target populasi dari penelitian ini adalah tikus putih (Rattus norvegicus)
jantan strain Wistar yang diperoleh dari petshop di Medan.
3.3.2 Sampel Penelitian

Sampel pada penelitian ini ditetapkan berdasarkan kriteria berikut.
1. Kriteria Inklusi
a. Tikus putih (Rattus norvegicus) strain Wistar berjenis kelamin
jantan
b. Umur 3-4 bulan
c. Berat Badan 150-200 g
d. Tidak tampak abnormalitas anatomis makro
e. Kadar kolesterol dalam rentang normal sebelum dilakukan
penelitian
2. Kriteria Drop Out
a. Tikus sakit selama masa adaptasi
b. Tikus mati selama perlakuan berlangsung
3.4 Besar Sampel Penelitian
Besar sampel tiap kelompok dihitung dengan rumus Federer berikut.(48)

( − 1) ( − 1) > 15
26
Sehingga dalam penelitian ini, jumlah sampel minimal yang dibutuhkan tiap
kelompok adalah sebagai berikut.
( − 1) (5 − 1) > 15
4 −4 > 15
4 > 19
> 4,75
=5
Keterangan :
= Besar ulangan dari tiap kelompok
= Jumlah kelompok
Untuk mengantisipasi hilangnya unit eksperimen, dilakukan koreksi dengan

rumus sebagai berikut.(48)
= + 20%
’= 5 + 1
’= 6
Keterangan :
’ = Besar sampel / ulangan setelah dikoreksi
Dengan demikian, besar sampel (pengulangan) dari setiap kelompok adalah
6 ekor tikus. Total seluruh subjek penelitian ini adalah 30 ekor hewan coba tikus
Rattus norvegicus strain Wistar jantan yang terbagi menjadi 5 kelompok.
3.5 Kerangka Konsep
Kerangka konsep penelitian ini adalah sebagai berikut.

Variabel Bebas Variabel Tergantung
Gambaran Histologi Aorta :

Ekstrak
a. Ketebalan Dinding
Daun Sirsak
b. Jumlah Sel Busa
Gambar 3.1 Kerangka Konsep

27
3.6 Variabel Penelitian dan Definisi Operasional
3.6.1 Variabel Penelitian

a) Variabel bebas dalam penelitian ini adalah dosis ekstrak daun sirsak
(Annona muricata L.).
b) Variabel tergantung pada penelitian ini adalah ketebalan dinding aorta
dan jumlah sel busa.
c) Variabel kontrol adalah jenis kelamin, umur, berat badan, lingkungan,
dan pakan standar yang diberikan selama perlakuan.
3.6.2 Definisi Operasional

a. Pemberian Ekstrak Daun Sirsak (Annona muricata L.)
Pemberian ekstrak daun sirsak kepada tikus secara oral dengan
menggunakan sonde lambung. Daun sirsak yang digunakan dalam
penelitian ini sebelumnya diekstrak terlebih dahulu dengan metode
maserasi menggunakan pelarut etanol 70%, kemudian dibuat dalam
tiga tingkatan dosis, yaitu 100 mg/kgBB, 200 mg/kgBB, dan 400
mg/kgBB. Volume ekstrak yang diberikan kepada tikus sebanyak 2
ml. Skala pengukuran yang digunakan adalah skala numerik.
b. Gambaran Pembuluh Darah Aorta
Keadaan pembuluh darah yang akan diamati adalah ketebalan dinding
aorta dan jumlah foam cell (sel busa). Ketebalan dinding aorta adalah
indikator lesi aterosklerosis dengan mengukur ketebalan penampang
melintang aorta mulai dari tunika intima sampai tunika media (satuan
ukuran mikron) menggunakan mikroskop dengan pembesaran 400X
(10X40) pada 8 zona (jam 12.00, 13.30, 15.00, 16.30, 18.00, 19.30,
21.00, 22.30), kemudian dilakukan perhitungan rata-rata pada ke 8
zona tersebut. Jumlah sel busa adalah indikator lesi aterosklerotik
dengan menghitung sel busa secara kuantitatif pada potongan
melintang aorta dengan pembesaran 400X. Skala pengukuran yang
digunakan adalah skala numerik.
c. Diet Tinggi Lemak
28
Diet tinggi lemak yang dimaksud adalah pemberian pakan yang

mengandung lemak tinggi. Pakan tersebut adalah campuran 50 gr
lemak sapi, 30 gr kuning telur puyuh, 10 gr mentega, 5 gr minyak
jelantah, 5 gr keju. Semuanya dicampur dan diberikan sebanyak 2 ml
kepada masing-masing tikus secara intermitten menggunakan sonde
lambung. Untuk itu, perlu dilakukan uji proksimal untuk melihat
kolesterol total tikus.
3.7 Alat dan Bahan Penelitian
3.7.1 Alat
a. Untuk pemeliharaan dan pemberian perlakuan adalah kandang
pemeliharaan hewan coba yang dilengkapi dengan tempat makan dan
minum serta alas kandang dari serbuk kayu (disiapkan sebanyak lima
kandang yang disesuaikan dengan jumlah perlakuan atau kelompok
penelitian), sonde lambung, spuit injeksi, tabung reaksi 500 ml, gelas
ukur, dan timbangan.
b. Untuk pembuatan ekstrak daun sirsak yaitu pisau, blender, gelas ukur,
pipet tetes, tabung reaksi, rak tabung, batang pengaduk, vacum rotary
evaporator.
c. Untuk membuat preparat histologi dan menganalisis ketebalan dinding
serta sel busa aorta berupa alat bedah minor (minor set), microtome,
alat tulis, object glass, cover glass, hotplate, wadah berbentuk kubus,
botol, inkubator, masker, mikroskop elektrik, dan Optilab.
3.7.2 Bahan
a. Untuk pemeliharaan dan pemberian perlakuan yaitu tikus putih
(Rattus norvegicus) jantan, air, dan pakan standar, lemak sapi, kuning
telur puyuh, mentega, keju, dan minyak jelantah.
b. Untuk pembuatan ekstrak daun sirsak yaitu daun sirsak (daunnya lebar
dan masih segar) diperoleh dari kebun di Aceh Besar, dan pelarut
etanol dengan konsentrasi 70%.
c. Untuk membuat preparat histologi dan menganalisis ketebalan dinding
serta sel busa aorta yaitu sarung tangan, formalin 10%, paraffin, xilol
29
murni, pewarnaan histopatologi (Hemotoksilin dan Eosin), aquadest,

alkohol dengan konsentrasi tertentu.
3.8 Prosedur Penelitian
3.8.1 Pembuatan Ekstrak Daun Sirsak

Daun sirsak yang dipilih memiliki daun yang lebar, tangkai dan daunnya
berwarna hijau cerah dan tidak sobek. Persiapan pembuatan ekstrak daun sirsak
yaitu daun sirsak sebanyak 1,5 kg dicuci bersih lalu ditiriskan. Daun sirsak
dipotong kecil-kecil lalu dikeringkan selama 5 hari pada suhu ruangan namun
tidak terkena cahaya matahari. Daun sirsak yang telah kering diblender sampai
halus kemudian dimaserasi dengan menggunakan 2 L pelarut etanol 70% selama
3x24 jam. Hasil maserasi disaring beberapa kali sampai didapat larutan yang
jernih (hingga tidak tersisa residu atau padatan). Setelah itu hasil filtrasi diuapkan
pelarutnya hingga didapatkan fraksi yang kental menggunakan vacum rotary
evaporator.(49) Maserasi dipilih karena proses pengerjaan yang mudah dan
peralatan yang cukup sederhana serta biaya yang terjangkau.
3.8.2 Penentuan Dosis Ekstrak Daun Sirsak

Dosis Ekstrak daun sirsak yang digunakan yaitu 100, 200, dan 400
mg/kgBB. Pemilihan dosis tersebut didapatkan dari penelitian sebelumnya yang
menyebutkan bahwa dosis 200 mg/kgBB ekstrak daun sirsak tidak toksik dan
aman digunakan, pada hewan coba.(15, 41) Dosis pertengahan untuk penelitian ini
diambil berdasarkan temuan tersebut yaitu 200 mg/kgBB.(39, 41) Dosis pertama
ekstrak etanol daun sirsak (Annona muricata L.) diambil dari setengah dosis
pertengahan tikus, dan dosis ketiga diambil dari hasil pengalian 4x dari dosis
pertama atau 2x dari dosis kedua (pertengahan). Cara penentuan dosis ekstrak
etanol daun sirsak yang harus diberikan (misal bobot tikus 200 gr = 0,2 kg) adalah
sebagai berikut.
⁄1000 = ⁄
200⁄1000 = ⁄200
1000 = 40000
= 40 /0,2
30
a. Dosis I : 100 mg/kgBB × 0,2 kg (berat badan tikus) = 20 mg

b. Dosis II : 200 mg/kgBB × 0,2 kg (berat badan tikus) = 40 mg
c. Dosis III : 400 mg/kgBB × 0,2 kg (berat badan tikus) = 80 mg
Kapasitas normal lambung tikus maksimal 5 ml. Volume ekstrak etanol

daun sirsak (Annona muricata L.) yang digunakan pada penelitian ini tidak lebih
dari kapasitas normal tersebut guna mencegah dilatasi lambung dan robeknya
saluran cerna tikus yaitu sebanyak 2 ml.(11)
3.8.3 Pemeliharaan Hewan Coba

Tikus ditempatkan pada kandang yang sebelumnya sudah dikeringkan di
bawah sinar matahari dan diberikan alas serbuk kayu. Kandang dibersihkan dan
alas serbuk kayu diganti sedikitnya 3 hari sekali. Kandang diatur agar sirkulasi
udara juga cahaya yang cukup. Pada pemeliharaan hewan sebelum intervensi
dilakukan adaptasi terlebih dahulu selama 1 minggu. Selama proses adaptasi,
berat badan dan aktivitas tikus harus terus diperhatikan. Tikus diberikan pakan
standar ad libitium dan aquadest. Pakan standar yang digunakan adalah ransum
T79-4.
Tabel 3.2 Komposisi Ransum T79-4

No Nutrisi Jumlah
1 Kadar Air (g) 12%
2 Kadar Abu (g) 12%
3 Lemak (g) 6%
4 Protein (g) 16%
5 Serat Kasar (g) 8%
6 Karbohidrat (g) 46%
*ditentukan dari ransum yang digunakan
3.8.4 Pembuatan Pakan Tinggi Lemak

Pakan tinggi lemak yang digunakan pada penelitian ini terdiri dari campuran
50 gr lemak sapi, 30 gr kuning telur puyuh, 10 gr mentega, 5 gr minyak jelantah,
dan 5 gr keju. Lemak sapi, mentega, dan minyak jelantah masing-masing
dipanaskan terlebih dahulu, kemudian kuning telur puyuh dicampurkan dalam
ketiga bahan tersebut, dan terakhir dicampurkan keju. Semua bahan tersebut
diaduk agar homogen. Campuran tersebut diberikan dengan sonde lambung 3 kali
31
sehari, sebanyak 2 ml/kali beri. Pakan tinggi lemak ditentukan sebesar 3-4%
BB.(50)
3.8.5 Perlakuan Hewan Coba

Pada akhir masa adaptasi masing-masing tikus ditimbang untuk mengetahui
berat badan guna menyesuaikan dengan kriteria inklusi yang telah ditetapkan.
Tikus dipuasakan selama 10-12 jam kemudian dilakukan pengambilan darah tikus
dari vena ekor (vena coccygeal). Sampel darah ini berfungsi untuk menentukan
kadar kolesterol total tikus sebelum perlakuan. Pemeriksaan kadar kolesterol total
tikus juga dilakukan di pertengahan dan di akhir masa perlakuan sebelum tikus
dibunuh.
Selanjutnya sebanyak 30 ekor tikus dibagi secara acak menjadi 5 kelompok
perlakuan, setiap perlakuan terdiri dari 6 ekor tikus (Lampiran 2). Adapun
masing-masing kelompok tikus diperlakukan sebagai berikut.
a. Kelompok KN sebagai kontrol negatif yaitu tikus yang diberi pakan
standar selama 60 hari.
b. Kelompok KP sebagai kontrol positif yaitu tikus yang diberi diet
tinggi lemak tanpa diberi ekstrak daun sirsak selama 60 hari.
c. Kelompok K1 sebagai kelompok perlakuan I yaitu tikus yang diberi
diet tinggi lemak dan diberi ekstrak daun sirsak sebanyak 20 mg/200
grBB setiap hari selama 60 hari.
d. Kelompok K2 sebagai kelompok perlakuan II yaitu tikus yang diberi
e. Kelompok K3 sebagai kelompok perlakuan III yaitu tikus yang diberi
Ekstrak daun sirsak diberikan sebanyak 2 ml/kali beri dengan menggunakan
sonde lambung. Ekstrak diberikan 15 menit sebelum pemberian pakan tinggi
lemak 3 kali sehari selama 60 hari. Setelah itu semua tikus dibunuh dengan cara
pemberian anestesi inhalasi menggunakan kloroform dengan konsentrasi 10%.
Anestesi inhalasi tidak merusak morfologi aorta. Pada saat dianestesi, tikus
diisolasi dalam ruangan tertutup. Kemudian aorta dipisahkan secara lengkap dari
32
tubuh tikus, dicuci dengan larutan fisiologis NaCl, dan disimpan di dalam tabung
reaksi yang telah diisi dengan formalin 10% untuk pemeriksaan selanjutnya.
3.8.6 Pembuatan Sediaan dan Analisis Gambaran Histopatologi Aorta

Setelah minggu ke‒8 , perlakuan dihentikan kemudian tikus dibius dengan
kloroform untuk diterminasi. Selanjutnya dilakukan pembedahan untuk
pengambilan aorta dan dibuat sediaan histopatologi dengan cara sebagai berikut.
1. Fiksasi
Jaringan difiksasi dalam larutan formalin buffer 10% selama 18-24
jam kemudian dimasukkan dalam larutan aquadest selama 1 jam
untuk menghilangkan larutan fiksasi.
2. Dehidrasi
Dilakukan dehidrasi dengan larutan alkohol bertingkat dari
konsentrasi terkecil sampai terbesar.
3. Clearing
Jaringan dimasukkan dalam larutan alkohol xylol selama 1 jam dan
xylol murni selama 2 x 2 jam.
4. Impregnasi
Jaringan dimasukkan dalam paraffin cair selama 2 x 2 jam.
5. Embedding
Dilakukan embedding (pencelupan) dalam paraffin cair yang diikuti
pendinginan sampai memadat dan terbentuk blok paraffin.
6. Pemotongan
Jaringan dalam blok paraffin dipotong dengan menggunakan
microtome setebal 5 mikron secara melintang kemudian potongan
diletakkan di atas object glass yang sebelumnya telah diolesi polilisin.
Pencairan dan pembuangan paraffin dari potongan sediaan dilakukan
dengan pemanasan dalam inkubator.
7. Pewarnaan
Setelah bersih, dilakukan pewarnaan HE dan diberi balsam Canada
lalu ditutup dengan cover glass.(51)
8. Pemeriksaan di bawah mikroskop
33
Setelah pembuatan preparat selesai dilakukan, kemudian dilakukan

pengukuran ketebalan dinding aorta dengan menggunakan mikroskop
dan alat Optilab mulai dari tunika intima sampai tunika media (satuan
ukuran mikron) dengan pembesaran 400X (10X40) pada 8 zona (jam
12.00, 13.30, 15.00, 16.30, 18.00, 19.30, 21.00, 22.30), kemudian
dilakukan perhitungan rata-rata pada ke 8 zona tersebut. Pemeriksaan
sel busa dengan pembesaran 400X dan dihitung semua sel busa pada
penampang melintang aorta.
3.9 Analisis Data
Data yang diperoleh adalah hasil pengamatan terhadap ketebalan dinding

aorta dan jumlah sel busa. Data hasil penelitian dianalisis apakah memiliki
distribusi normal (p>0,05) atau tidak secara statistik dengan uji normalitas
Kolmogorov-Smirnov. Jika varians data berdistribusi normal, akan dilanjutkan
dengan uji analisis one way ANOVA dan jika p<0,05 dilanjutkan dengan uji Pos
Hoc LSD dan Tukey untuk mengetahui kelompok mana yang memiliki perbedaan
paling bermakna. Namun, apabila distribusi data tidak normal (tidak memenuhi
syarat parametrik), akan diuji dengan uji Kruskal Wallis dan jika p<0,05
dilanjutkan dengan uji Mann-Whitney.
BAB IV
HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasil Penelitian
Penelitian ini menggunakan 30 ekor tikus Rattus norvegicus jantan strain

Wistar, berumur 3-4 bulan dengan berat badan 150-200 gram. Hewan coba
kemudian dibagi secara acak menjadi 5 perlakuan dan ditempatkan di kandang
hewan coba Laboratorium Hewan Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Syiah
Kuala. Kandang hewan coba berukuran 30x40x30 cm3 disesuaikan dengan jumlah
hewan coba dalam satu perlakuan dan diisi sekam padi, tempat makanan, dan
minuman hewan coba.
Kandang hewan coba terdiri dari kandang untuk kelompok hewan coba
kontrol negatif (KN), kelompok hewan coba kontrol positif (KP), kelompok
hewan coba perlakuan I atau hewan coba yang diberi ekstrak daun sirsak dosis
100 mg/kgBB (K1), kelompok hewan coba perlakuan II atau hewan coba yang
diberi ekstrak daun sirsak dosis 200 mg/kgBB (K2), dan kandang untuk kelompok
hewan coba perlakuan III atau hewan coba yang diberi ekstrak daun sirsak dosis
400 mg/kgBB (K3). Setiap kandang berisi enam ekor hewan coba yang sudah
diadaptasi selama tujuh hari. Penelitian dilakukan mulai tanggal 30 Oktober 2015
sampai dengan Januari 2016. Hewan coba diberi makanan rutin berupa ransum
standar T79-4 dan dijaga kebersihan kandangnya setiap seminggu sekali untuk
menghindari terjadinya infeksi.
Selama penelitian dilakukan tiga kali pemeriksaan kadar koleterol total,
yaitu sebelum randomisasi, hari ke-30 perlakuan, dan hari terakhir perlakuan (hari
ke-60) sebelum tikus diterminasi. Kadar koleterol total hewan coba yang
didapatkan adalah sebagai berikut:
34
35
Tabel 4.1 Kadar Kolesterol Total Sebelum Randomisasi

KN KP K1 K2 K3
104 125 115 117 117
Kadar 109 124 132 115 116
Kolesterol 127 117 123 119 112
Total 113 119 101 114 114
121 112 107 115 114
116 101 122 127 102
Rata-rata 115.0 116.3 116.7 117.9 112.5
Tabel 4.2 Kadar Kolesterol Total Hari Ke -30 Perlakuan

KN KP K1 K2 K3
118 228 182 188 128
Kadar 111 203 188 192 135
Kolesterol 115 198 138 186 171
Total 122 273 179 143 159
113 254 196 145 137
114 187 132 148 140
Rata-rata 115.5 190.5 169.2 167.0 145.0
Tabel 4.3 Kadar Kolesterol Total Hari Terakhir Perlakuan (Hari Ke-60)
KN KP K1 K2 K3
99 343 119 110 114
Kadar 96 357 176 157 110
Kolesterol 78 370 117 163 129
Total 104 410 167 127 138
99 395 123 125 112
114 318 124 131 141
Rata-rata 98.3 365.5 137.7 135.5 124.0
Berdasarkan hasil pemeriksaan kadar kolesterol total hewan coba,

didapatkan peningkatan kadar kolesterol total pada hewan coba kelompok
perlakuan KP, perlakuan K1, perlakuan K2 dan perlakuan K3 pada hari ke 30
perlakuan. Pada pemeriksaan setelah diberi ekstrak daun sirsak selama 60 hari,
terlihat penurunan kadar kolesterol total pada kelompok perlakuan K1, perlakuan
K2 dan perlakuan K3.
36
Selama penelitian berlangsung tidak ada sampel yang memenuhi kriteria

drop-out dan tidak ada sampel yang mati. Oleh karena itu, tidak dilakukan analisis
statistik terhadap ketebalan dinding dan jumlah sel busa aorta tikus yang menjadi
cadangan.
4.1.1 Evaluasi Ketebalan Dinding Aorta Tikus

Dari hasil penelitian, didapatkan data ketebalan dinding aorta tikus yang
disajikan pada tabel berikut.
Tabel 4.4 Data Evaluasi Pengukuran Ketebalan Dinding Aorta Tikus

Perlakuan
Ulangan KN KP K1 K2 K3
(µm) (µm) (µm) (µm) (µm)
A 166,8 417,9 399,3 202,9 152,0
B 189,2 510,0 295,5 274,1 212,8
C 181,6 423,4 269,8 257,7 202,3
D 195,5 456,6 281,7 226,9 195,0
E 186,2 451,9 364,4 246,3 185,3
Total 919,3 2259,8 1610,5 1207,8 947,3
Rata-rata 183,86 451,96 322,12 241,58 189,48
SD 10,79 36,63 56,60 2,62 23,24
Keterangan :
A s.d. E : Berturut-turut adalah pengulangan (sampel) ke-I s.d ke-V dalam setiap
SD : Standar deviasi
Analisis data hasil evaluasi ketebalan dinding aorta dengan menilai
distribusi data menggunakan uji normalitas Saphiro-Wilk, didapatkan distribusi
data normal (Lampiran 5). Oleh karena itu, uji dapat dilanjutkan dengan
menggunakan uji Analysis of Variance (ANOVA) satu arah, Hasil uji ANOVA
satu arah data evaluasi ketebalan dinding aorta disajikan dalam tabel 4.5.
Tabel 4.5 Hasil Uji ANOVA Satu Arah Ketebalan Dinding Aorta
Jumlah Kuadran Rerata Kuadran P
F
Skor Simpangan Skor Simpangan value/Sig.
Antar Kelompok 251165,012 62791,253 52,634 0,000
Dalam Kelompok 23859,448 1192,972
Total 275024,460
37
Keterangan : Nilai p dihitung menggunakan uji ANOVA satu arah p value <
0.05 (didapatkan perbedaan) dengan F tabel = 2,76
Berdasarkan uji ANOVA satu arah didapatkan F hitung > F tabel
(52,634>2,76) atau signifikannya 0,000 (p<0,05), maka dapat disimpulkan bahwa
hasil uji ANOVA satu arah menunjukkan adanya perbedaan (p<0,05) pada
kelompok penelitian. Selanjutnya dilakukan uji lanjutan, yaitu uji Tukey untuk
melihat perbedaan antara perlakuan kontrol negatif (KN), kontrol positif (KP),
kelompok perlakuan I (K1), kelompok perlakuan II (K2), dan kelompok perlakuan
III (K3). Hasil analisis uji Tukey dapat dilihat pada tabel 4.6.
Tabel 4.6 Hasil uji Tukey Ketebalan Dinding Aorta

Kelompok KN KP K1 K2 K3
KN - 0,000* 0,000* 0,100 0,999
KP 0,000* - 0,000* 0,000* 0,000*
K1 0,000* 0,000* - 0,011* 0,000*
K2 0,100 0,000* 0,011* - 0,160
K3 0,999 0,000* 0,000* 0,160 -
Keterangan : Tanda (*) menunjukkan perbedaan yang bermakna (p < 0,05)
Tabel 4.6 di atas menunjukkan perbedaan yang bermakna antara kelompok
kontrol negatif (KN) dengan kelompok kontrol positif (KP), antara kelompok
kontrol negatif (KN) dengan kelompok perlakuan I (K1), antara kelompok kontrol
positif (KP) dengan kelompok perlakuan I (K1), antara kelompok kontrol positif
(KP) dengan kelompok perlakuan II (K2), antara kelompok kontrol positif (KP)
dengan kelompok perlakuan III (K3), antara kelompok perlakuan I (K1) dengan
kelompok perlakuan II (K2), dan antara kelompok perlakuan I (K1) dengan
kelompok perlakuan III (K3). Namun tidak didapatkan perbedaan yang bermakna
antara kelompok kontrol negatif (KN) dengan kelompok perlakuan II (K2), antara
kelompok kontrol negatif (KN) dengan kelompok perlakuan III (K3), dan antara
kelompok perlakuan II (K2) dengan kelompok perlakuan III (K3).
Hasil ini menunjukkan bahwa pemberian diet tinggi lemak dapat menambah
ketebalan dinding aorta, sedangkan pada pemberian ekstrak daun sirsak dengan
variasi dosis 100 mg/kgBB (K1), 200 mg/kgBB (K2), dan 400 mg/kgBB (K3)
diketahui ukuran ketebalan dinding aorta tikus putih strain Wistar jantan yang
38
diberi diet tinggi lemak berkurang jika dibandingkan dengan kelompok kontrol
positif (KP). Varian dosis terkecil yaitu 100 mg/kgBB (K1) menjadi dosis
minimum yang dapat menurunkan ketebalan dinding aorta tikus.
4.1.2 Evaluasi Jumlah Sel Busa Aorta Tikus

Dari hasil penelitian, didapatkan data jumlah sel busa aorta tikus yang
disajikan pada tabel berikut.
Tabel 4.7 Data Evaluasi Jumlah Sel Busa Aorta Tikus

Perlakuan
Ulangan KN KP K1 K2 K3
(µm) (µm) (µm) (µm) (µm)
A 0 24 6 0 0
B 0 19 2 0 0
C 0 19 0 0 0
D 0 25 0 0 0
E 0 21 4 0 0
Total 0 108,0 12,0 0 0
Rata-rata 0,00 21,60 2,40 0,00 0,00
SD 10,79 2,79 2,61 2,62 23,24
Keterangan :
A s.d. E : Berturut-turut adalah pengulangan (sampel) ke-I s.d ke-V dalam setiap
SD : Standar deviasi
Analisis data hasil evaluasi jumlah sel busa aorta dengan menilai distribusi
data menggunakan uji normalitas Saphiro-Wilk, didapatkan distribusi data normal
(Lampiran 6). Oleh karena itu, uji dapat dilanjutkan dengan menggunakan uji
Analysis of Variance (ANOVA) satu arah, Hasil uji ANOVA satu arah data
evaluasi jumlah sel busa aorta disajikan dalam tabel 4.6.
Tabel 4.8 Hasil Uji ANOVA Satu Arah Jumlah Sel Busa Aorta
Jumlah Kuadran Rerata Kuadran P
F
Skor Simpangan Skor Simpangan value/Sig.
Antar Kelompok 1785,600 446,400 152,877 0,000
Dalam Kelompok 58,400 2,920
Total 1844,000
Keterangan : Nilai p dihitung menggunakan uji ANOVA satu arah p value <
0.05 (didapatkan perbedaan) dengan F tabel = 2,76
39
Berdasarkan uji ANOVA satu arah didapatkan F hitung > F tabel

(152,877>2,76) atau signifikannya 0,000 (p<0,05), maka dapat disimpulkan
bahwa hasil uji ANOVA satu arah menunjukkan adanya perbedaan (p<0,05) pada
kelompok penelitian. Selanjutnya dilakukan uji lanjutan, yaitu uji LSD untuk
melihat perbedaan bermakna antara perlakuan kontrol negatif (KN), kontrol
positif (KP), kelompok perlakuan I (K1), kelompok perlakuan II (K2), dan
kelompok perlakuan III (K3). Hasil analisis uji LSD dapat dilihat pada tabel 4.9.
Tabel 4.9 Hasil Uji LSD Jumlah Sel Busa Aorta

Kelompok KN KP K1 K2 K3
KN - 0,000* 0,038* 1,000 1,000
KP 0,000* - 0,000* 0,000* 0,000*
K1 0,038* 0,000* - 0,038* 0,038*
K2 1,000 0,000* 0,038* - 1,000
K3 1,000 0,000* 0,038* 1,000 -
Keterangan : Tanda (*) menunjukkan perbedaan yang bermakna (p < 0,05)
Tabel 4.7 menunjukkan perbedaan yang bermakna antara kelompok kontrol

negatif (KN) dengan kelompok kontrol positif (KP), antara kelompok kontrol
negatif (KN) dengan kelompok perlakuan I (K1), antara kelompok kontrol positif
(KP) dengan kelompok perlakuan I (K1), antara kelompok kontrol positif (KP)
dengan kelompok perlakuan II (K2), antara kelompok kontrol positif (KP) dengan
kelompok perlakuan III (K3), antara kelompok perlakuan I (K1) dengan kelompok
perlakuan II (K2), dan antara kelompok perlakuan I (K1) dengan kelompok
perlakuan III (K3). Namun tidak didapatkan perbedaan yang bermakna antara
kelompok kontrol negatif (KN) dengan kelompok perlakuan II (K2), antara
kelompok kontrol negatif (KN) dengan kelompok perlakuan III (K3), dan antara
kelompok perlakuan II (K2) dengan kelompok perlakuan III (K3).
Hasil ini menunjukkan bahwa pemberian diet tinggi lemak dapat menambah
jumlah sel busa aorta, sedangkan pada pemberian ekstrak daun sirsak dengan
variasi dosis 100 mg/kgBB (K1), 200 mg/kgBB (K2), dan 400 mg/kgBB (K3)
diketahui jumlah sel busa aorta tikus putih strain Wistar jantan yang diberi diet
tinggi lemak berkurang jika dibandingkan dengan kelompok kontrol positif (KP).
40
Varian dosis terkecil, yaitu 100 mg/kgBB (K1) menjadi dosis minimum yang
dapat menurunkan jumlah sel busa aorta tikus.
4.1.3 Gambaran Mikroskopis Histologi Aorta

Penampang histologi aorta tikus yang diberi perlakuan kemudian diamati
melalui mikroskop dengan pembesaran objektif 40 untuk mengukur ketebalan
dinding dan menghitung jumlah sel busa aorta tikus. Pada pembesaran tersebut
terlihat perbedaan struktur aorta pada masing-masing perlakuan.
(a) (b)
Gambar 4.1 (a) Gambaran mikroskopis penampang histologi ketebalan dinding aorta
kelompok KN pada perbesaran 40x10, (b) Gambaran mikroskopis
penampang histologi aorta kelompok KN pada perbesaran 40x10 di mana
tidak dijumpai sel busa; L= lumen
Sel Busa
(a) (b)
kelompok KP pada perbesaran 40x10, (b) Gambaran mikroskopis
penampang histologi sel busa aorta kelompok KP pada perbesaran 40x10
41
Sel Busa
L
(a) (b)
kelompok K1 pada perbesaran 40x10, (b) Gambaran mikroskopis
penampang histologi sel busa aorta kelompok K1 pada perbesaran 40x10
L L
(a) (b)
penampang histologi aorta kelompok K2 pada perbesaran 40x10 di mana
tidak dijumpai sel busa
(a) (b)
penampang histologi aorta kelompok K3 pada perbesaran 40x10 di mana
tidak dijumpai sel busa
42
Berdasarkan hasil pengamatan struktur histologi aorta tikus di atas, dapat

diketahui bahwa aorta kelompok kontrol negatif (KN) terlihat utuh, tidak terdapat
adanya kerusakan endotel, dan komponen penyusun dinding seperti jaringan ikat
dan otot polos terlihat jelas. Di samping itu, tidak terjadi penebalan dinding aorta
dan tidak ditemukan sel busa. Sedangkan pada aorta kelompok kontrol positif
(KP) yaitu kelompok yang diberi diet tinggi lemak, endotel terlihat kasar dengan
bentukan lapisan sel pipih yang tidak teratur, otot polos pada tunika intima terlihat
mengalami proliferasi dan terjadi penebalan dinding serta ditemukan adanya sel
busa.
Pada aorta K1 yaitu kelompok yang diberi diet tinggi lemak dan ekstrak
daun sirsak dosis 100 mg/kgBB, terlihat perbaikan bentukan sel endotel yang
mulai tersusun rapi dengan ukuran ketebalan yang lebih kecil dibandingkan aorta
KP dan ditemukan sel busa dalam jumlah yang sangat sedikit. Namun, masih
terdapat beberapa bagian endotel yang kasar dengan bentukan lapisan sel pipih
yang tidak teratur. Pada aorta K2 yaitu kelompok yang diberi diet tinggi lemak
dan ekstrak daun sirsak dosis 200 mg/kgBB dan aorta K3 yaitu kelompok yang
diberi diet tinggi lemak dan ekstrak daun sirsak dosis 400 mg/kgBB, terlihat
perbaikan lapisan sel endotel yang rapi, halus, ukuran ketebalan dinding aorta
mendekati KN, dan tidak ditemukan adanya sel busa.
4.2 Pembahasan
Penelitian ini menggunakan analisis statistik dengan one way ANOVA

untuk melihat adanya perbedaan signifikansi (bermakna) antar kelompok. Hasil
yang diperoleh baik pada data ketebalan dinding maupun jumlah sel busa adalah
sama, p=0,000 (p<0,05) yang menunjukkan bahwa terdapat perbedaan bermakna
data ketebalan dinding aorta dan jumlah sel busa antar kelompok hewan coba.
Selanjutnya, dilakukan uji post hoc untuk mengetahui perbedaan yang lebih
spesifik antar kelompok.
4.2.1 Ketebalan Dinding Aorta

Berdasarkan hasil analisis post hoc Tukey dapat dilihat bahwa kelompok
kontrol positif (KP) memiliki perbedaan bermakna terhadap kontrol negatif (KN)
43
dengan nilai p=0,000 (p<0,05). Hal ini menunjukkan bahwa induksi diet tinggi
lemak dapat menambah ketebalan dinding aorta secara bermakna.
Kelompok perlakuan dosis ekstrak daun sirsak 100 mg/kgBB (K1) memiliki
perbedaan bermakna terhadap kontrol negatif (KN) dengan nilai p=0,000 (p<0,05)
sementara kelompok perlakuan dosis ekstrak daun sirsak 200 mg/kgBB (K2) dan
kelompok perlakuan dosis ekstrak daun sirsak 400 mg/kgBB (K3) tidak memiliki
perbedaan bermakna terhadap kontrol negatif (KN) yaitu berturut-turut p=0,100
dan p=0,999 (p>0,05). Hal ini kemungkinan disebabkan oleh kurangnya dosis
pemberian. Namun, proses penambahan ketebalan berkaitan dengan banyaknya
kolesterol LDL.(8) Sebagaimana penelitian yang telah dilakukan sebelumnya,
dosis 100 mg/kgBB ekstrak daun sirsak dapat menurunkan kadar kolesterol
LDL.(15) Apabila kadar kolesterol LDL berkurang, maka akan berkurang jumlah
LDL teroksidasi yang merangsang proliferasi miosit pembuluh darah sehingga
menghambat penambahan ukuran ketebalan dinding. Pada penelitian ini,
kelompok perlakuan dosis ekstrak daun sirsak 100 mg/kgBB (K1) mengurangi
ketebalan dinding aorta meskipun secara statistik tidak signifikan.
Kelompok perlakuan dosis ekstrak daun sirsak 100 mg/kgBB (K1),
kelompok perlakuan dosis ekstrak daun sirsak 200 mg/kgBB (K2), dan kelompok
perlakuan dosis ekstrak daun sirsak 400 mg/kgBB (K3) memiliki perbedaan
secara bermakna dengan kelompok kontrol positif (KP) dengan nilai p yang sama,
yaitu p=0,000 (p<0,05). Hal ini menunjukkan bahwa ketiga kelompok perlakuan
dengan ekstrak daun sirsak tersebut memiliki pengaruh terhadap pengurangan
ketebalan dinding aorta dibandingkan dengan kontrol positif (KP). Kelompok
kontrol positif (KP) yang hanya diberi diet tinggi lemak tanpa ekstrak mengalami
penambahan ukuran ketebalan dinding aorta. Penelitian ini sesuai dengan
penelitian sebelumnya yang melaporkan bahwa pemberian diet makanan dengan
sumber lemak tinggi dapat meningkatkan ketebalan aorta.(50) Konsumsi diet
lemak tinggi akan menimbulkan hiperlipidemia dan meningkatkan kadar
kolesterol LDL di sirkulasi. Sesuai dengan teori yang ada, keadaan hiperlipidemia
dan hiperkolesterolemia mengakibatkan pembentukan radikal bebas. Keberadaan
radikal bebas menyebabkan stres oksidatif. Di samping itu, kerusakan endotel
pada kelompok kontrol positif (KP) meningkatkan permeabilitas endotel sehingga
44
memudahkan masuknya LDL ke dalam tunika intima aorta. Di sini LDL berubah
menjadi LDL-oks yang keberadaannya akan merangsang proliferasi miosit dari
tunika media ke arah tunika intima sehingga terjadilah penebalan dinding aorta.(8)
Akumulasi LDL yang mengalami oksidasi (LDL-oks) merangsang proliferasi
miosit melalui dua cara, yaitu dengan aktivasi produksi platelet-derived growth
factor-AA (PDGF-AA) endogen yang berada di dalam sel sehingga terjadi
stimulasi autocrine dari pertumbuhan sel dan melalui peningkatan jumlah reseptor
PDGF yang membuat stimulasi PDGF lebih responsif.(52) . Pernyataan ini sesuai
dengan penelitian yang menyebutkan bahwa LDL-oks berperan penting dalam
proses ketebalan dinding arteri.(53) Disfungsi endotel juga dapat menghambat
kerja inhibitor pertumbuhan sel otot polos seperti heparin sulfat, NO, interferon
gamma, dan TGF-β.(50, 54)
Kelompok perlakuan dosis ekstrak daun sirsak 200 mg/kgBB (K2) dan
kelompok perlakuan dosis ekstrak daun sirsak 400 mg/kgBB (K3) memiliki
perbedaan secara bermakna dengan kelompok perlakuan dosis ekstrak daun sirsak
100 mg/kgBB (K1) berturut-turut yaitu p=0,011 dan p=0,000 (p<0,05). Pada
perbandingan antara kelompok perlakuan dosis ekstrak daun sirsak 200 mg/kgBB
(K2) dan kelompok perlakuan dosis ekstrak daun sirsak 400 mg/kgBB (K3)
terdapat perbedaan ukuran ketebalan dinding meskipun secara statistik tidak
signifikan. Hal ini menunjukkan bahwa semakin meningkat dosis ekstrak daun
sirsak, semakin berpengaruh terhadap pengurangan ketebalan dinding aorta tikus.
Penurunan ketebalan dinding aorta pada kelompok perlakuan yang diberi ekstrak
daun sirsak disebabkan oleh kandungan senyawa antioksidan yang terdapat di
dalam daun sirsak, seperti flavonoid, tanin, dan saponin.
Tanin mampu menekan aktivitas HMG-CoA reductase yang memiliki peran
dalam proses sintesis kolesterol dan enzim ACAT yang bertanggung jawab dalam
esterifikasi kolesterol dan meningkatkan ketersediaan kolesterol bebas untuk
transpor kolesterol terbalik (reverse cholesterol transport) yang akhirnya mampu
mencegah akumulasi lipid di makrofag. Terhambatnya aktivitas HMG-CoA
reductase akan menurunkan sintesis kolesterol di hati dan meningkatkan reseptor
LDL pada permukaan hati. Dengan demikian, kolesterol LDL di dalam darah akan
ditarik ke hati sehingga menurunkan kolesterol LDL. Pernyataan ini didukung
45
dengan laporan hasil penelitian eksperimental pada tikus hiperkolesterolemia yang

menunjukkan bahwa suplementasi tanin dapat menurunkan 71% aktivitas HMG-
COA reductase kolesterol dan 23% kolesterol LDL.(42) Flavonoid dapat
menghambat pembentukan LDL-oks yang dipicu radikal bebas, meningkatkan
ekskresi empedu dan menghambat penyerapan kolesterol. Flavonoid mampu
mengaktivasi reseptor LDL. Peningkatan reseptor LDL mengindikasikan
terjadinya penurunan kolesterol LDL.(12) Saponin memiliki fungsi yang hampir
mirip dengan tanin maupun flavonoid. Saponin meningkatkan ekskresi asam
empedu dan penurunan aktivitas HMG-CoA reductase. Saponin mampu
mengubah absorbsi lemak dan asam empedu dengan menginterupsi formasi micel,
sehingga lemak, terutama kolesterol, tidak dapat diabsorbsi.(43)
Mekanisme kerja tanin, saponin, dan flavonoid pada intinya akan
mengurangi kadar koleterol LDL di sirkulasi. Dengan demikian hal ini akan
mengurangi risiko disfungsi endotel dan keberadaan LDL-oks. Pada akhirnya
risiko stimulasi proliferasi miosit akan berkurang pula sehingga penebalan
dinding aorta dapat dicegah.
4.2.2 Jumlah Sel Busa Aorta

Berdasarkan hasil analisis post hoc LSD dapat dilihat bahwa kelompok
kontrol positif (KP) memiliki perbedaan bermakna terhadap kontrol negatif (KN)
dengan nilai p=0,000 (p<0,05). Hal ini menunjukkan bahwa induksi diet tinggi
lemak dapat menambah jumlah sel busa aorta secara bermakna.
Kelompok perlakuan dosis ekstrak daun sirsak 100 mg/kgBB (K1) memiliki
perbedaan bermakna terhadap kontrol negatif (KN) dengan nilai p=0,000 (p<0,05)
sementara kelompok perlakuan dosis ekstrak daun sirsak 200 mg/kgBB (K2) dan
kelompok perlakuan dosis ekstrak daun sirsak 400 mg/kgBB (K3) tidak memiliki
perbedaan bermakna terhadap kontrol negatif (KN) berturut-turut yaitu p=0,100,
p=0,999 (p>0,05). Hal ini kemungkinan disebabkan oleh kurangnya dosis
pemberian. Namun, proses penambahan jumlah sel busa berkaitan dengan
banyaknya kolesterol LDL.(8) Sebagaimana penelitian yang telah dilakukan
sebelumnya, dosis 100 mg/kgBB ekstrak daun sirsak dapat menurunkan kadar
kolesterol LDL.(15) Apabila kadar kolesterol LDL berkurang, maka akan
berkurang jumlah LDL teroksidasi yang merangsang proses adhesi makrofag ke
46
endotel sehingga peningkatan jumlah sel busa dapat dicegah. Pada penelitian ini,
dosis 100 mg/kgBB ekstrak daun sirsak sudah mampu menurunkan jumlah sel
busa aorta meskipun secara statistik tidak signifikan.
Kelompok perlakuan dosis ekstrak daun sirsak 100 mg/kgBB (K1),
kelompok perlakuan dosis ekstrak daun sirsak 200 mg/kgBB (K2), dan kelompok
perlakuan dosis ekstrak daun sirsak 400 mg/kgBB (K3) memiliki perbedaan
secara bermakna dengan kelompok kontrol positif (KP) dengan nilai p yang sama,
yaitu p=0,000 (p<0,05). Hal ini menunjukkan bahwa ketiga kelompok perlakuan
dengan ekstrak daun sirsak tersebut memiliki pengaruh terhadap pengurangan
jumlah sel busa aorta dibandingkan dengan kontrol positif (KP). Kelompok
kontrol positif (KP) yang hanya diberi diet tinggi lemak tanpa ekstrak mengalami
penambahan jumlah sel busa yang sejalan dengan terjadinya kondisi
hiperlipidemia. Peningkatan kadar kolesterol LDL menyebabkan peningkatan
permeabilitas endotel sehingga LDL dapat dengan mudah masuk ke subendotel
dan menimbulkan jejas. Endotel yang terkena jejas akan melepaskan Reactive
Oxygen Species (ROS) yang dapat menstimulasi LDL dan merangsang endotel
untuk melepaskan sitokin LAM, ICAM-1, VCAM-1 dan E-selektin yang dapat
menyebabkan adhesi monosit pada endotel. Sel endotel kemudian melepaskan
MCS-F yang merubah monosit menjadi makrofag. Kemudian makrofag dengan
scavenger receptor yang dimilikinya akan memfagosit LDL-oks sehingga
terbentuk sel busa. Jumlah sel busa yang banyak menunjukkan semakin banyak
kolesterol LDL-oks yang ditangkap makrofag melalui pengikatan pada reseptor
LDL, maka jumlah partikel LDL dalam tunika intima juga akan meningkat.(8, 55-
57) Pernyataan ini sesuai dengan penelitian yang menyebutkan bahwa LDL-oks
berperan penting dalam proses pembentukan jumlah sel busa.(53)
Kelompok perlakuan dosis ekstrak daun sirsak 200 mg/kgBB (K2) dan
kelompok perlakuan dosis ekstrak daun sirsak 400 mg/kgBB (K3) memiliki
perbedaan secara bermakna dengan kelompok perlakuan dosis ekstrak daun sirsak
100 mg/kgBB (K1) berturut-turut yaitu p=0,011 dan p=0,000 (p<0,05). Pada
perbandingan antara kelompok perlakuan dosis ekstrak daun sirsak 200 mg/kgBB
(K2) dan kelompok perlakuan dosis ekstrak daun sirsak 400 mg/kgBB (K3)
terdapat perbedaan jumlah sel busa meskipun secara statistik tidak signifikan. Hal
47
ini menunjukkan bahwa semakin meningkat dosis ekstrak daun sirsak, semakin
berpengaruh terhadap pengurangan jumlah sel busa aorta tikus. Penurunan jumlah
sel busa aorta pada kelompok perlakuan yang diberi ekstrak daun sirsak
disebabkan oleh kandungan senyawa antioksidan yang terdapat di dalam bahan
ini. Hasil penelitian ini didukung oleh salah satu penelitian deskriptif tentang
pemberian ekstrak daun sirsak bersamaan dengan diet lemak yang secara
kuantitatif menyatakan bahwa tidak didapatkan gambaran histologi sel busa pada
aorta tikus wistar dengan pemberian ekstrak daun sirsak bersamaan dengan diet
lemak.(14) Hal ini disebabkan oleh kandungan daun sirsak yaitu tanin, flavonoid,
dan saponin yang mampu menghambat proses penambahan jumlah sel busa aorta.
Sebagaimana yang telah dijelaskan pada pembahasan hasil penelitian
ketebalan dinding aorta, baik tanin, saponin, maupun flavonoid, ketiganya akan
mengurangi kadar kolesterol LDL di sirkulasi meskipun bekerja dengan
mekanisme yang berbeda. Pengurangan kadar kolesterol LDL akan mengurangi
risiko disfungsi endotel dan keberadaan LDL-oks. Hal ini akan mengurangi risiko
adhesi monosit ke endotel dan mengurangi aktivitas fagosit makrofag terhadap
LDL-oks yang akhirnya membuat berkurang jumlah sel busa yang terbentuk.
Bukti ilmiah daun sirsak mempunyai pengaruh dalam menurunkan jumlah
sel busa sudah pernah dilakukan oleh Maramis yang menyatakan bahwa
pemberian ekstrak daun sirsak dosis 30 mg bersamaan dengan diet lemak babi
dapat menurunkan jumlah sel busa (efek protektif).(14) Namun, berdasarkan hasil
penelitian ini, ternyata pada dosis 20 mg (100 mg/kgBB) sudah mampu
mengurangi jumlah sel busa tikus meskipun secara statistik tidak signifikan.
4.3 Keterbatasan Penelitian
Keterbatasan penelitian ini yaitu daun sirsak tidak berasal dari 1 pohon yang
sama dikarenakan bila hanya mengambil pada 1 pohon saja tidak cukup untuk
memenuhi kebutuhan penelitian.
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan dapat disimpulkan:

1. Pemberian ekstrak daun sirsak (Annona muricata L.) dengan dosis 100
mg/kgBB, 200 mg/kgBB, dan 400 mg/kgBB dapat mengurangi
ketebalan dinding aorta secara dibandingkan kelompok kontrol
positif.
2. Pemberian ekstrak daun sirsak (Annona muricata L.) dengan dosis 100
mg/kgBB, 200 mg/kgBB, dan 400 mg/kgBB dapat mengurangi jumlah
sel busa secara dibandingkan kelompok kontrol positif.
3. Dosis 100 mg/kgBB sebagai varian dosis terkecil yang mampu
mengurangi ketabalan dinding aorta.
4. Dosis 100 mg/kgBB sebagai varian dosis terkecil yang mampu
mengurangi jumlah sel busa aorta.
5.2 Saran
Penelitian lebih lanjut dapat mempertimbangkan beberapa hal sebagai

berikut.
1. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut tentang efek samping
pemberian ekstrak daun sirsak (Annona muriata L.).
2. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk mencari dosis toksik
ekstrak daun sirsak (Annona muriata L.).
3. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut terkait lama pemberian ekstrak
daun sirsak (Annona muriata L.) yang lebih bervariasi.
48
DAFTAR PUSTAKA
1. World Health Organization. Global Status Report on Noncommunicable

Diseases 2014. Switzerland: World Health Organization, 2014.p.156-7.
2. Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Kementerian Kesehatan RI.
Riset Kesehatan Dasar (RISKESDAS) 2013. Jakarta; 2013.p.143-4.
3. Umarudin, Susanti R, Yuniastuti A. Efektivitas Ekstrak Tanin Seledri
Terhadap Profil Lipid Tikus Putih Hiperkolesterolemi. 2012;1(2):79-85.
4. Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Departemen Kesehatan RI.
Riset Kesehatan Dasar (RISKESDAS) 2007. Jakarta: 2008.p. 205-6.
5. Uneputty JP, Yamlean PVY, Stien KN. Potensi Infusa Daun Sirsak (Annona
muricata L.) Terhadap Kadar Kolesterol Darah Tikus Putih Jantan (Rattus
norvegicus). Pharmacon Jurnal Ilmiah Farmasi. 2013;2:56-60.
6. World Health Organization. Classification of Atherosclerotic Lesions.
Geneva: 1958.p.4-8.
7. American Heart Association. Atherosclerosis. 2014 [cited 2015 May 12];
(Cholesterol). Available from: http://www.heart.org/HEARTORG/
Conditions/Cholesterol/WhyCholesterolMatters/Atherosclerosis_UCM_305
564_Article.jsp.
8. Kumar V, Abbas AK, Aster JC. Robbins and Cotran Pathologic Basis of
Disease. 9th ed: Elsevier Saunders; 2015.
9. Haro G, Puji Utami N, Sitompul E. Study of The Antibacterial Activities of
Soursop (Annona muricata L.) Leaves. International Journal of PharmTech
Research. 2014;8:676-81.
10. Torres RC, Manalo CO, Walde RZML, Garbo AG. Characterization of the
Leaf Extract of Annona muricata and Larvicidal Activity against Aedes
aegypti. Time Journals. 2014;2:33-40.
11. Ngatidjan. Metode Laboratorium dalam Toksikologi. Yogyakarta: Bagian
Farmakologi dan Toksikologi Fakultas Kedokteran Universitas Gadjah
Mada; 2006.
12. Agustina D. Pengaruh Pemberian Jus Biji Pepaya (Carica papaya L.)
Terhadap Rasio Kolesterol LDL : HDL Tikus Sprague Dawley
Dislipidemia. Journal of Nutrition College. 2013;2:302-11.
13. Adeneye A, and Olagunju J. Preliminary Hypoglycemic and Hypolipidemic
Activities of the Aqueous Seed Extract of Carica papaya Linn in Wistar
Rats. Biol Med. 2009;1(1):1-10.
14. Maramis R, Kaseke M, Tanudjaja GN. Gambaran Histologi Aorta Tikus
Wistar dengan Diet Lemak Babi Setelah Pemberian Ekstrak Daun Sirsak
(Annona Muricata L.) Jurnal e-Biomedik (eBM). 2014;2:431-5.
49
50
15. Arthur FKN, Woode E, Terlabi EO, Larbie C. Evaluation of Acute and
Subchronic Toxicity of Annona muricata (Linn.) Aqueous Extract in
Animals. Pelagia Research Library. 2011;1:115-24.
16. Hermanto S, Muawanah A, Harahap R. Profil dan Karakteristik Lemak
Hewani (Ayam, Sapi dan Babi) Hasil Analisa FTIR dan GCMS [skripsi].
[Jakarta]: Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah; 2008.
17. Guyton AC dan Hall JE. Buku Ajar Fisiologi Kedokteran. 11th ed. Jakarta:
EGC; 2012. p. 883-93.
18. Murray RK, Granner DK, Rodwell VW. Biokimia Harper. 27th ed. Jakarta:
EGC; 2009.
19. American Heart Association. ACC/AHA Guideline on The Treatment of
Blood Cholesterol to Reduce Atherosclerotic Cardiovascular Risk In Adults.
American Heart Association, 2013.
20. Daniels T, Killinger K, Michal J, Wright JR, Jiang Z. Lipoproteins,
Cholesterol Homeostasis and Cardiac Health. International Journal of
Biological Sciences. 2009;5(5):474-88.
21. Adam JM. Dislipidemia. In: Aru W, Bambang S, Idrus A, Marcellus S, Siti
S, editors. Buku Ajar Ilmu Penyakit Dalam Jilid III. 4th ed. Jakarta: Balai
Penerbit FKUI; 2006.
22. Eroschenko VP. Atlas Histologi diFiore dengan Kolerasi Fungsional.
Jakarta: EGC; 2012.
23. Wolfgang KM. Color Atlas of Cytology, Histology, and Microscopic
Anatomy. New York: Thieme Stuttgart; 2003.
24. Pathology Department School of Medicine University of Tasmania.
Atherosclerosis. Tasmania: University of Tasmania.
25. Cefalu WT. Animal Models of Type 2 Diabetes: Clinical Presentation and
Pathophysiological Relevance to the Human Condition. ILAR Journal.
2006;47(3):186-98.
26. Agarwal A, Cocuzza M, Abdelrazik H, Sharma R. Oxidative Stress
Measurement in Patient with Male and Female Factor Infertility. Handbook
of Chemiluminescent Methods in Oxidative Stress Assessment.2008.
27. Lim TK. Annona muricata. Edible Medicinal and Non-Medicinal Plants. 1:
Springer Netherlands; 2012. p. 190-200.
28. Sawant TP, and Gogle DP. A Brief Review on Recent Advances in Clinical
Research of Annona Muricata. International Journal of Universal
Pharmacy and Bio Sciences (ISSN): 2319-8141. 2014;3(3):267-304.
51
29. Coêlho de Lima MA, Alves RE. 18 - Soursop (Annona muricata L.). In:
Yahia EM, editor. Postharvest Biology and Technology of Tropical and
Subtropical Fruits. Cambridge: Woodhead Publishing; 2011. p. 363-92e.
30. Sunarjono H. Berkebun 21 Jenis Tanaman Buah. Depok: Niaga Swadaya;
2006.
31. Gavamukulya Y, Abou-Elella F, Wamunyokoli F, Ael-Shemy H.
Phytochemical Screening, Anti-Oxidant Activity and in Vitro Anticancer
Potential of Ethanolic and Water Leaves Wxtracts of Annona muricata
(Graviola). Asian Pacific Journal of Tropical Medicine. 2014;7, Supplement
1(0):S355-S63.
32. Zuhud E. Bukti Daun Sirsak Menumpas Kanker. Jakarta: PT Agromedia
Pustaka; 2011.
33. Purwatresna E. Aktivitas Antidiabetes Ekstrak Air dan Etanol Daun Sirsak
Secara In Vitro Melalui Inhibisi Enzim Α-Glukosidase [skripsi]. [Bogor]:
Institut Pertanian Bogor; 2012.
34. Agricultural Research Service U.S. Department of Agriculture. USDA
National Nutrient Database for Standard Reference, Release 27. United
States Department of Agriculture, 2015. p. 1-2.
35. Gajalakshmi S, Vijayalakshmi S, Devi Rajeswari V. Phytochemical and
Pharmacological Properties of Annona muricata: A Review. International
Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences. 2012;4(2):3-6.
36. Fitriani E. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Sirsak (Annona
Muricata L.) terhadap Shigella Flexneri Secara In Vitro [skripsi].
[Pontianak]: Universitas Tanjung Pura; 2014.
37. Haro G, Masfria, Richa M. The Phytochemical Screening and The
Antibacterial Activities of The Leaves Extract of Soursop (Annona muricata
L.). International Seminar on Natural Product Medicines; 22-23 November
2012; West and East Hall Bandung Institute of Technology. Bandung–
Indonesia.
38. Vijayameena C, Subhashini G, Loganayagi M, Ramesh B. Original
Research Article Phytochemical screening and assessment of antibacterial
activity for the bioactive compounds in Annona muricata. Int J Curr
Microbiol App Sci. 2013;2(1):1-8.
39. Supratanda FE. Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanol Daun Sirsak (Annona
muricata Linn) Terhadap Gambaran Histopatologi Sel Hepar Tikus Putih
(Rattus norvegicus) Galur Sprague Dawley yang Diinduksi DMBA
[skripsi]. [Lampung]: Universitas Lampung; 2014.
52
40. Lúcio ASSC, Almeida JRGdS, da-Cunha EVL, Tavares JF, Barbosa Filho
JM. Chapter Five - Alkaloids of the Annonaceae: Occurrence and a
Compilation of Their Biological Activities. In: Hans-Joachim K, editor. The
Alkaloids: Chemistry and Biology. Volume 74: Academic Press; 2015. p.
233-409.
41. Adewole SO, dan Ojewole JAO. Protective Effects of Annona Muricata
Linn. (Annonaceae) Leaf Aqueous Extract on Serum Lipid Profiles and
Oxidative Stress in Hepatocytes of Streptozotocin-Treated Diabetic Rats.
African Journal of Traditional, Complementary, and Alternative Medicines.
2009;6(1):30-41.
42. Do GM, Kwon EY, Ha TY, Park YB, Kim HJ, Jeon SM, et al. Tannic Acid
is More Effective Than Clofibrate for the Elevation of Hepatic Beta-
Oxidation and the Inhibition of 3-Hydroxy-3-Methyl-Glutaryl-CoA
Reductase and Aortic Lesion Formation in Apo E-Deficient Mice. British
Journal of Nutrition. 2011;106(12):1855-63.
43. Afrose S, Hossain MS, Salma U, Miah AG, Tsujii H. Dietary Karaya
Saponin and Rhodobacter capsulatus Exert Hypocholesterolemic Effects by
Suppression of Hepatic Cholesterol Synthesis and Promotion of Bile Acid
Synthesis in Laying Hens. Cholesterol. 2010;2010.
44. Fathurrachman DA. Pengaruh Konsentrasi Pelarut terhadap Aktivitas
Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Sirsak (Annona muricata Linn) dengan
Metode Peredaman Radikal Bebas DPPH [skripsi]. [Jakarta]: UIN Syarif
Hidayatullah; 2014.
45. Istiqomah. Perbandingan Metode Ekstraksi Maserasi dan Sokletasi
Terhadap Kadar Piperin Buah Cabe Jawa (Piperis retrofracti fructus [skripi]
[Jakarta]: UIN Syarif Hidayatullah; 2013.
46. Pratiwi E. Perbandingan Metode Maserasi, Remaserasi, Perkolasi dan
Reperkolasi dalam Ekstraksi Senyawa Aktif Andrographolide dari Tanaman
Sambiloto (Andrographis paniculata (Burm.F.) Nees) [skripi]. [Bogor]:
Institut Pertanian Bogor; 2010.
47. Vanessa R, Purwijantingsih LME, Aida Y. Pemanfaatan Minuman Serbuk
Instan Kayu Manis (Cinnamomum burmanii Bi.) Untuk Menurunkan Kadar
Kolesterol Total Darah Pada Tikus Putih (Rattus norvegicus). 2014.
48. Supranto J. Teknik Sampling Untuk Survei dan Eksperimen. Jakarta: PT
Rineka Cipta; 2000.
49. Hermawan GP, Laksono H, Sumantri I. Ekstraksi Daun Sirsak (Annona
muricata L) Menggunakan Pelarut Etanol. Jurnal Teknologi Kimia dan
Industri Universitas Diponegoro. 2013;2:111-5.
53
50. Kustiah I, Prasetyo A, Sarjadi. Pengaruh Berbagai Variasi Dosis Ekstrak

Morinda citrifolia Terhadap Kadar Lipid Serum dan Perkembangan Lesi
Aterosklerotik pada Aorta Abdominalis Tikus Wistar. Media Medika
Indonesia. 2003;38.
51. Tim Dosen Biologi Umum. Petunjuk Praktikum Biologi Umum. Malang;
2014.
52. Rahman A, Nilsson A, Regnstrom J, Hamten A, Nilsson J. Native and
Oxidazed LDL Enhances Production of PDGF-AA and Surface Expression
of PDGF Receptor In Cultured Human Smooth Muscle Cells. Artherioscler
Thromb Vasc Bio. 1992;12:1099.
53. Steinberg D. Low Density Lipoprotein Oxidation and It's Pathobiologycal
Significance. JBC Online. 1997;34:20963-6.
54. Stary H. Proliferation of Arterial Cell In Athersclerosis. Adv Exp Med Biol.
1974;43:59-81.
55. Libby P. Inflammation and Atheroslerosis. Circulation. 2002;105:1135-43.
56. Davis. Atherosclerosis An Inflamatory Process. Insur Med. 2005;37:72-5.
57. Bonneux J, Barendregt., Meeter K, Bonsel G. Estimating Clinical Morbidity
Due To Ischemic Heart Disease and Congestive Heart Failure : The Future
Rise of Heart Failure. American Journal of Public Health. 2001;84(1):20-8.
54
Lampiran 1
Jadwal Rencana Kegiatan Penelitian
2015 2016
No Kegiatan
3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 1
1 Studi Kepustakaan
2 Pembuatan Proposal
3 Seminar Proposal
4 Perbaikan Proposal
5 Persiapan Penelitian
6 Penelitian
7 Pengolahan Data
8 Pembuatan Skripsi
9 Sidang Skripsi
10 Perbaikan Skripsi
55
Lampiran 2
Diagram Alur Tahapan Penelitian
Pembuatan ekstrak daun sirsak dan penentuan dosis ekstrak yang digunakan
Pengadaan 30 ekor tikus putih sesuai dengan kriteria inklusi
Aklimatisasi (7 hari)
Mengukur berat badan tikus dan kadar kolesterol total
Pembuatan Pembuatan pakan

Randomisasi
pakan standar tinggi lemak
Kelompok Kelompok Kelompok Kelompok Kelompok

KN KP K1 K2 K3
(6 ekor tikus) (6 ekor tikus) (6 ekor tikus) (6 ekor tikus) (6 ekor tikus)
Perlakuan I Perlakuan II Perlakuan

Kontrol (-) : Kontrol (+)
: diberi : diberi III : diberi
diberi :
pakan pakan pakan
pakan diberi pakan
standar, standar, standar,
standar dan tinggi lemak
pakan tinggi pakan tinggi pakan tinggi
tidak diberi dan tidak
lemak dan lemak dan lemak dan
ekstrak diberi
ekstrak 100 ekstrak 200 ekstrak 400
ekstrak
mg/kgBB mg/kgBB mg/kgBB
Pada hari ke-60 semua tikus dikorbankan
Pembuatan preparat aorta
Pengamatan gambaran aorta :

ketebalan dinding dan sel busa
Pendataan
56
Lampiran 3
Sistematika Pembuatan Mikroteknik Preparat Histopatologi

I. Fiksasi
1. Formalin 24 jam
II. Dehidrasi
1. Alkohol 80% 2 jam
4. Absolut 100% I 2 jam
5. Absolut 100% II 2 jam
III. Clearing
1. Xylol I 30 menit
2. Xylol II 30 menit
3. Xylol III 30 menit
IV. Infiltrasi
1. Parafin I 30 menit
2. Parafin II 30 menit
3. Parafin III 30 menit
V. Embedding
Dimasukkan dalam air
Dimasukkan dalam lemari es
Lakukan pemotongan
Dilakukan pewarnaan
57
Lampiran 4
Sistematika Pewarnaan Haematoxylin dan Eosin

1. Xylol I 2 menit
2. Xylol II 2 menit
3. Alkohol Absolut I 2 menit
4. Alkohol Absolut II 2 menit
5. Alkohol 96% I 2 menit
6. Alkohol 96% II 2 menit
7. Alkohol 90% 2 menit
8. Air Mengalir sampai bersih
9. Haematoxylin 5 menit
10. Air Mengalir sampai bersih
11. Acid Alkohol 1 x celup
12. Air 1 x celup
13. Eosin 5 menit
14. Alkohol 96% I 2 x celup
15. Alkohol 96% II 2 x celup
16. Absolut I 1 menit
17. Absolut II 1 menit
18. Xylon I 2 menit
19. Xylon II 2 menit
20. Balsem Canada tutup dengan cover glass
58
Lampiran 5
Hasil Perhitungan Statistik Ketebalan Dinding Aorta
Descriptives
Std. Lower Upper
Kelompok Mean
Deviation Bound Bound
KN 183.86 10.79 170.46 197.26
KP 451.96 36.63 406.48 497.44
K1 322.12 56.60 251.84 392.40
K2 241.58 27.62 207.29 275.87
K3 189.48 23.24 160.62 218.34
Tests of Normality
Shapiro-Wilk
Kelompok
Statistic df Sig.
Ketebalan KN .939 5 .659
KP .893 5 .373
K1 .877 5 .295
K2 .983 5 .948
K3 .917 5 .511
59
Lampiran 6
Hasil Perhitungan Statistik Sel Busa
Descriptives
Std. Lower Upper
Kelompok Mean
Deviation Bound Bound
KN 0.00 0.00 0.00 0.00
KP 21.60 2.79 18.13 25.07
K1 2.4 2.60 -0.84 5.64
K2 0.00 0.000 0.00 0.00
K3 0.00 0.000 0.00 0.00
Tests of Normality
Shapiro-Wilk
Kelompok
Statistic df Sig.
Sel_Busa KP .865 5 .246
K1 .902 5 .421
60
Lampiran 7
Titik persentase Distribusi F untuk Probabilitas = 0.05

61
Lampiran 8
Dokumentasi Penelitian
Pembuatan Pakan Tinggi Lemak Kandang Hewan Coba
Penjemuran Daun Sirsak Pembuatan Ekstrak Daun Sirsak
Ekstrak Daun Sirsak Pemberian Pakan dengan

Sonde Lambung
62
Tikus Dikorbankan dengan Anestesi Pembedahan Pengambilan Organ Jantung

Kloroform dan Aorta
63
Lampiran 9
Surat Keterangan Hasil Uji Herbarium

64
Lampiran 10
Surat Keterangan Pembuatan Ekstrak

65
Lampiran 11
Surat Keterangan Selesai Penelitian FKH Unsyiah

66
Lampiran 12
Surat Keterangan Selesai Penelitian FK Unsyiah

67
Lampiran 13
Surat Keterangan Kelaikan Etik
68
Lampiran 14
Riwayat Hidup
1. Nama : Siti Bellia Arafah

2. Tempat / Tanggal Lahir : Banda Aceh / 30 Juli 1995
3. Asal / Tahun Lulus, Nyatakan
a. SD : MIN Seutuy Banda Aceh (2007)
b. SMP : SMPN 19 Percontohan Banda Aceh
(2010)
c. SMA : SMAN Modal Bangsa Aceh (2012)
4. Tahun Masuk Universitas : 2012
5. Nomor Mahasiswa : 1207101010161
6. Program Studi : Pendidikan Dokter
JUDUL SKRIPSI : Pengaruh Pemberian Ekstrak Daun Sirsak
(Annona muricata L.) Terhadap Gambaran
Histopatologi Aorta Tikus Wistar
(Rattus norvegicus) Jantan yang Diberi
Diet Tinggi Lemak
7. Dosen Pembimbing I : dr. Istanul Badiri, MS., SpPA
8. Dosen Pembimbing II : dr. Muhammad Ridwan, MAppSc.,
SpJP (K)
9. Pengalaman :-
10. Pekerjaan Sekarang :-
Alamat Sekarang : Ateuk Jawo, Banda Aceh
11. Status : Belum Menikah
Nama Istri / Suami :-
Jumlah Anak :-
12. Nama Ayah : Basrahluddin
Pekerjaan Ayah : PNS
Nama Ibu : Elly Maulida
Pekerjaan Ibu : Karyawati
Alamat Lengkap Orang Tua : Ateuk Jawo, Banda Aceh

Skripsi Siti Bellia Arafah 1207101010161

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Deskripsi Asli:

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Skripsi Siti Bellia Arafah 1207101010161

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK DAUN SIRSAK

(Annona muricata L.) TERHADAP GAMBARAN

Diajukan untuk melengkapi tugas-tugas dan

SITI BELLIA ARAFAH

PROGRAM STUDI PENDIDIKAN DOKTER

Penelitian mengenai ekstrak daun sirsak sebagai fitofarmaka sudah banyak

Banda Aceh, 18 Januari 2016

BAB II TINJAUAN PUSTAKA ......................................................... 6

BAB III METODOLOGI PENELITIAN ............................................ 24

BAB IV HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN ...................... 34

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN .............................................. 48

ACAT : Acyl CoA-cholesterol-o-acyltransferase

Penyakit jantung dan pembuluh darah merupakan manifestasi klinik dari

Keywords : atherosclerosis, aortic’s wall thickness, the amount of foam cells

1.1 Latar Belakang

American Heart Association menegaskan bahwa aterosklerosis disebabkan oleh

reductase yang menghambat sintesis kolesterol. Flavonoid berperan dalam

kadar kolesterol LDL yang selanjutnya memicu aterosklerosis.(16) Di samping

1.2 Rumusan Masalah

1.3 Tujuan Penelitian

Tujuan penelitian ini adalah sebagai berikut.

1.4 Manfaat Penelitian

1.4.1 Aspek Teoritis

1.4.2 Aspek Praktis

Hipotesis yang diajukan dalam penelitian ini adalah sebagai berikut.

2.1 Kolesterol dan Aterosklerosis

2. Very Low Density Lipoprotein (VLDL) yang mengandung konsentrasi

kolesterol HDL baik yang teresterifikasi maupun tidak teresterifikasi tanpa

diserap kembali ke dalam sirkulasi vena porta, kemudian dibawa

Tabel 2.1 Kategori Kadar Profil Lipid dalam Darah (21)

2.1.2 Diet Tinggi Lemak, Hiperkolesterolemia dan Aterosklerosis

menuju ke sirkulasi sistemik. Proses tersebut membantu untuk menjaga tekanan

Gambar 2.1 Dinding Arteri Elastik (Aorta) Potongan Transversal Pulasan

2.2.1 Histopatologi Aorta

Gambar 2.4 Pembentukan Plak Aterosklerosis (25)

2.3 Radikal Bebas, Stres Oksidatif, dan Antioksidan

radikal bebas. Sedangkan antioksidan tersier bekerja dalam memperbaiki molekul-

2.4 Sirsak (Annona muricata L.)

2.4.1 Taksonomi dan Morfologi

Gambar 2.5 Daun Sirsak (Annona muricata L.) (31)

2.4.2 Distribusi Geografis dan Habitat

2.4.3 Manfaat Tanaman Buah Sirsak

2.4.4 Kandungan Kimia

Uji fitokimia terhadap daun sirsak menunjukkan kandungan yang positif

2.4.5 Peran Antioksidan dalam Daun Sirsak terhadap Aterosklerosis

Terhambatnya aktivitas HMG-COA reductase akan menurunkan sintesis

2.4.6 Dosis Ekstrak Daun Sirsak

mengindikasikan bahwa dosis tersebut dapat menurunkan faktor risiko gangguan

2.6 Tikus Rattus norvegicus sebagai Hewan Coba

2.7 Kerangka Teori

Diet Tinggi Lemak Ekstrak Daun Sirsak

ROS ↑ (8, 11)

Disfungsi Endotel(8, 25)

Aktivasi/Akumulasi Proliferasi Miosit ke

Gambar 2.6 Kerangka Teori

3.1 Jenis dan Rancangan Penelitian

Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental laboratorik dengan

Tabel 3.1 Rancangan Penelitian

3.2 Tempat dan Waktu Penelitian

Pembuatan ekstrak etanol daun sirsak dan uji herbarium dilakukan di

3.3 Populasi dan Sampel Penelitian

3.3.1 Populasi Penelitian

3.3.2 Sampel Penelitian