HITUNG SEL DENGAN HEMOSITOMETER

Hemasitometer adalah suatu alat yang dapat digunakan untuk melakukan perhitungan sel
secara cepat dan dapat digunakan untuk konsentrasi sel yang rendah.Penentuan konsentrasi
sel penting untuk mikrobiologi, biakan sel, dan banyak aplikasi yang membutuhkan
penggunaan dari larutan sel. Seringkali densitas sel dari suatu larutan dapat ditentukan secara
spektrofotometrik. Namun bentuk penentuan seperti itu tidak dapat menentukan viabilitas
sel dan jenis sel.

Hemasitometer terdiri atas suatu ruang kaca dengan sisi yang menjulang dan kaca penutup
yang akan menahan cairan tepat 0.1 mm dari atas lantai ruang kaca. Ruang hitung memiliki
total luas permukaan 9 mm2. Gambar di bahwa ini menunjukkan dimensi dari suatu
hemasitometer.
Penghitungan konsentrasi sel pada hemasitometer didasarkan pada volume di bawah kaca
penutup. Satu kotak besar (W dalam Gambar I.4) memiliki volume 0,0001 ml (panjang x lebar
x tinggi = 0,1 cm x 0,1 cm x 0,01 cm = 0,0001 cm3 = 0,0001 ml). Hemasitometer diisi oleh gaya
kapiler. Satu tetes dari larutan campuran sel yang terlarut dengan baik dipipet pada ujung
tepi dari hemasitometer dan kemudian perlahan-lahan dibuang kelebihannya supaya cairan
tertarik masuk ke dalam ruang oleh gaya kapiler.
Pewarnaan sel seringkali membantu visualisasi dan penghitungan, baik campuran sel dengan
volume trypan blue (0,4% (w/v) trypan blue dalam PBS) yang setara untuk menentukan
penghitungan sel hidup atau mati (sel mati berwarna biru) atau membunuh sel dengan 10%
formalin dan kemudian mewarnai dengan trypan blue atau pewarna lain (untuk
meningkatkan visualisasi dari semua sel).
Terdapat dua metode sederhana seperti yang digambarkan untuk penghitungan sel
berdasarkan pada luas permukaan dari hemasitometer yang digunakan untuk menentukan
jumlah sel. Pemilihan metode bergantung pada konsentrasi sel dan keakuratan prosedur
bergantung pada jumlah sel yang terhitung. Ketika konsentrasi sel rendah, harus dihitung
lebih banyak kotak.
v Metode A
Dihitung jumlah sel pada 4 kotak luar (kotak sebelah kiri pada Gambar I.4)
Kosentrasi sel dihitung sebagai berikut :
Konsentrasi sel per mililiter = Total sel terhitung dalam 4 kotak x 2500 x faktor pengenceran
v Metode B
Diperkirakan konsentrasi sel dengan menghitung 5 kotak dalam kotak besar tengah (kotak
sebelah kanan pada Gambar I.4).
Konsentrasi sel per mililiter = Total sel terhitung dalam 5 kotak x 50,000 x faktor pengenceran

Contoh di bawah ini menunjukkan garis merah di mana sel pada garis akan dihitung. Jika titik
merah adalah sel, maka pada gambar di bawah terdapat 3 sel pada bagian atas tengah kotak
besar.
Semua dari 25 kotak besar dapat dihitung, atau suatu pola penghitungan dengan
menggunakan jumlah kotak yang lebih sedikit dapat digunakan sepeti pada gambar di bawah.