Tatang Irianti*, Sylvia Utami Tujung Pratiwi, Kuswandi, Nanan Tresnaasih, Dharmastuti
Cahya, Fatmarahmi, Yulia Paramitha
Faculty of Pharmacy, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta, Indonesia.
ABSTRAK
ABSTRACT
The increasing therapy problem including multidrug-resistant tuberculosis (TB) has made it
important to discover a new anti-TB drug candidate. The aim of this study was to acknowledge the activity of
ethyl acetate extracts of kenikir (Cosmos caudatus H.B.K) and sendok (Plantago major L.) leaves against
Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis) H37Rv. This research used Middlebrook (MB) 7H9 media and
observed the growth of M. tuberculosis using Lowenstein Jensen (LJ) media. The concentration of extracts
were 0.25 mg/ml, 0.50 mg/ml, and 1.00 mg/ml. The result of this study showed that ethyl acetate extracts
exhibited anti-TB activity in 1000 µg/ml of both extracts. The active compound group was detected by thin
layer chromatography (TLC) and the separation of compounds was shown by retardation factor (Rf) and the
color of the spots. Based on TLC chromatograms, it is known that there are types of compounds, such as
ortho-dihydroxy compounds, phenolic compounds, and compound leads to terpenoids for both extracts.
Keywords: tuberculosis, ethyl acetate extract, kenikir (Cosmos caudatus H.B.K), sendok (Plantago major L.),
leaves, M. tuberculosis
setelah pada tahun 2012, Indonesia menduduki sendok mempunyai manfaat antiinflamasi,
peringkat 4. Penyakit TB disebabkan oleh bakterisida, antifungi serta antioksidan, dan
Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis) Samuelsen (2000) menyatakan ekstrak ini
merupakan penyakit menular dan sebagian besar mengandung triterpenoid asam ursolat dan asam
menyerang paru (WHO, 2016). oleanolat. Selanjutnya, penelitian Cantrell et al.
Bakteri M. tuberculosis memiliki bentuk (2001) menyebutkan bahwa isolate senyawa
batang dengan panjang sekitar 1-4 microm dan ursolat dan asam oleanolat memiliki aktivitas
tebal 0,2-0,4 microm serta mempunyai sifat dalam penghambatan M. tuberculosis.
khusus terhadap asam pewarnaan atau tahan Tanaman kenikir merupakan familia
terhadap asam pewarnaan sebagai Basil Tahan Asteraceae dan dari familia ini telah banyak
Asam (Hiswani, 2009). Karakteristik bakteri M. digunakan sebagai obat penyakit tuberculosis di
tuberculosis dapat bertahan hidup ditempat gelap Negara Uganda. Kenikir mengandung saponin,
dan lembab selama beberapa jam tetapi bila flavonoid polifenol dan minyak atsiri yang mudah
terkena sinar matahari secara langsung akan mati. menguap. Beberapa spesies yang digunakan
Sedangkan, dalam jaringan tubuh manusia dapat sebagai agen tuberculosis tersebut adalah daun
tertidur selama beberapa tahun atau disebut Vernonia amygdalina Delle, daun Veronica cinerea
dorman (Anonim, 2002). L, daun Aspilia Africana C.D. Adams, daun
Trend penderita TB selalu meningkat Gnaphalium purpureum L, daun Bidens pilosa L,
jumlahnya, hal ini disebabkan oleh beberapa batang Tithonia diversiola, dan tanaman utuh
faktor seperti kegagalan pengobatan, putus Ageratum conyzoides L (Bunalema et. al, 2014)
pengobatan, pengobatan tidak benar, penderita
dengan penyakit degenerasi system imun, dan Jalannya penelitian
absorpsi obat kurang baik. Beberapa kasus ini Bahan utama yang digunakan adalah daun
dapat mengakibatkan terjadinya resistensi M. kenikir dan daun sendok. Daun kenikir diperoleh
tuberculosis terhadap system pengobatan TB dari daerah PLEMBURAN, SARIHARJO, NGAGLIK,
(Tirtana, 2011). Mono-resistant, multi-drug SLEMAN YOGYAKARTA dan daun sendok dipanen
resistant (MDR), extended-drug resistant (XDR) dari Desa PURWOSARI, SINDUADI, MLATI,
atau totally-drug resistant (TDR) merupakan SLEMAN. Pelarut dalam penelitian ini adalah pro
terjadinya resistensi terhadap M. tuberculosis analisis (Merck) kecuali untuk maserasi dengan
(Anonim, 2012). Menurut JEMM pada tahun 2015 kualitas teknis. Pembanding pada metode KLT
sekitar 32.000 pasien TB mengalami MDR. dari Sigma Aldrich, sedangkan reagen penampak
Rekomendasi dari WHO (2003) tentang bercak dari Laboratorium Fitokimia Departemen
penggunaan obat tradisional termasuk herba Biologi Farmasi UGM.
dalam pemeliharaan kesehatan masyarakat, Serbuk kering daun kenikir dan daun
pencegahan dan pengobatan penyakit terutama sendok sebanyak masing-masing 1,0 kg dari daun
penyakit kronis, degenerative dan kanker. segar 10,0 kg, dimaserasi dengan 7 bagian pelarut
Keanekaragamanan hayati di Indonesia etil asetat (1:7, sebuk:pelarut). Proses ini
sangat besar dan luas, terdapat sekitar 40.000 dilakukan selama 48 jam dengan pengadukan
jenis tumbuhan tersebar diseluruh pelosok setiap 3 jam sekali pada siang harinya, kemudian
Negara kita. Kandungan kimia dalam bahan alam didiamkan serta selanjutnya disaring. Penyaringan
dapat banyak jenisnya, sehingga mampu untuk dilaksanakan dengan corong Buchner serta
bahan pangan, kosmetika dan obat obatan penyedot udara melalui pompa vakum, kemudian
(Agusta, 2000). Hal ini kebanyakan tanaman filtrate diuapkan sampai diperoleh ekstrak kental.
mengandung golongan senyawa flavonoid dan
akan lebih poten dengan perlakuan hidrolisis Pembuatan ekstrak
dengan asam yang mampu melepaskan flavonoid Sebanyak masing-masing 10 kg daun segar
bebas dari ikatan glikosidanya (Irianti, et. al., dikeringkan dalam oven dengan suhu 50 oC
2015a dan 2015b). Penelitian Fabricant dan selama 48 jam kemudian dibuat serbuk. Sebanyak
Farnsworth (2001) menunjukkan 80% dari 122 1 kg serbuk kering dari masing-masing direndam
komponen senyawa pada 94 spesies tanaman dengan 7 liter etil asetat teknis selama 48 jam.
digunakan untuk tujuan etnomedisin. Sebanyak Pengadukan dilakukan secara berulang tiap 3 jam
39% dari 520 obat yang disetujui antara tahun pada siang hari dan didiamkan pada malam hari.
1983 sampai 1994 berasal dari produk alam atau Filtrat hasil maserasi diuapkan menggunakan
turunannya, dan 60-80% dari antibakteri dan penangas air bersuhu 60 oC dibantu dengan aliran
antikanker berasal dari bahan alam (Wahyono, udara dari kipas angin hingga diperoleh ekstrak
2008). Daun sendok dan daun kenikir merupakan kental etil asetat (bila wadah dimiringkan, tidak
contohnya bisa dieksplorasi kegunaannya. Daun mengalir).
Gambar 1. Hasil uji aktivitas anti tuberkulosis metode dilusi cair dengan media Middlebrook 7H9 (A: Daun
kenikir dan B: Daun Sendok). K(+) : Kontrol positif; K(M): Kontrol media Middlebrook 7H9; K(P): Kontrol
pelarut (DMSO 5%); K(A): Kontrol antibiotik (Rifampicin 40 g/ml); K: Ekstrak etil asetat daun kenikir
dengan konsentrasi 0,25; 0,5; dan 1 mg/ml; DS: Ekstrak etil asetat daun sendok dengan konsentrasi 0,25;
0,5; dan 1mg/ml
Gambar 2. Hasil uji aktivitas anti tuberkulosis metode dilusi padat dengan media Lowenstein Jensen (A
daun kenikir dan B daun sendok). K(+): Kontrol positif; K(M): Kontrol media; K(P): Kontrol pelarut (DMSO
5%); K(A): Kontrol antibiotik (Rifampicin 40 g/ml); K: Ekstrak etil asetat daun kenikir dengan
konsentrasi 0,25; 0,5; dan 1 mg/ml; DS: Ekstrak etil asetat daun sendok dengan konsentrasi 0,25; 0,5; dan
1 mg/ml
Keterangan : K(+): Kontrol Positif; K(-) : Kontrol Negatif; K(P): Kontrol Pelarut; K(M): Kontrol Media; +3: 200-500
koloni; +2: 100-200 koloni; +1: 20 -100 koloni
Setelah uji aktivitas anti tuberkulosis pada Konsentrasi 0,5 mg/ml memberikan hasil
media cair Middlebrook 7H9 selesai, maka pengamatan yaitu media LJ menjadi berwarna
dilanjutkan dengan metode dilusi padat kuning tetapi kepadatannya tetap dan tidak luruh.
menggunakan media Lowenstein-Jensen (L-J). Perubahan warna media menjadi kuning dapat
Media L-J merupakan suatu media berbasis telur diakibatkan kontaminasi pada tip saat proses
yang digabungkan dengan penggunaan elektrolit pemindahan dari media cair ke media padat di
dan malachite green. Media ini umum digunakan konsentrasi 0,5 mg/ml. Perubahan warna media
dalam isolasi, kultur dan studi kerentanan M. menyebabkan pengamatan ada atau tidaknya
tuberculosis terhadap obat (Coban, A.Y., dkk, pertumbuhan koloni dari M.tuberculosis menjadi
2006). Telur pada pembuatan media Lowenstein lebih sukar jika dibandingkan apabila tidak terjadi
Jensen (L-J) ini memiliki karakteristik berupa perubahan warna.Konsistensi media yang tetap
telur ayam atau telur bebek segar dengan usia baik dan tidak luruh membuat pertumbuhan
kurang drai 7 hari dan bebas dari antibiotik pada koloni M.tuberculosis pada konsentrasi 0,5 mg/ml
pakan ternak tersebut. Penggunaan malachite dapat diamati dari permukaan media LJ. Apabila
green bertujuan untuk menghindari kontaminasi terdapat pertumbuhan koloni maka permukaan
bakteri lain dimana malachite green memiliki sifat media LJ akan terlihat kasar atau tidak rata.
bakteriostatik terhadap bakteri lain. Penambahan Permukaan media pada konsentrasi 0,5 mg/ml
gliserol bertujuan untuk dijadikan sumber karbon yaitu tetap halus dan rata sehingga tidak ada
dan energi untuk metabolisme dan mempercepat pertumbuhan koloni M.tuberculosis. Namun,
pertumbuhan M. tuberculosis (Kennedy, A.D., konsentrasi 0,50 mg/ml bukanlah nilai KBM
2011) Hasil uji aktivitas anti tuberkulosis karena adanya perbedaan warna media
dengan metode dilusi padat menggunakan media dikhawatirkan terjadi pengurangan nutrisi di
Lowenstein Jensen dapat dilihat dari gambar 2. media LJ sehingga menyebabkan M.tuberculosis
Aktivitas antimikroba secara kuantitatif tidak tumbuh. Apabila konsentrasi 0,50 mg/ml
untuk ekstrak tidak dianjurkan lebih dari 1 mg/ml sebagai nilai KBM dapat menyebabkan data
sedangkan untuk isolat tidak lebih 0,1 mg/ml. menjadi bias.
Aktivitas antimikroba secara kuantitatif sangat Data ekstrak etil asetat daun sendok dan
baik bila kurang dari 100 μg/ml untuk ekstrak daun kenikir dengan konsentrasi 1,00 mg/ml
dan kurang dari 10 μg/ml untuk isolat (Rios, J.L., memberikan hasil tidak adanya pertumbuhan
dan Recio, M.C., 2005). M.tuberculosis di semua pengulangan. Media LJ
Berdasarkan hasil penelitian, ekstrak etil yang tetap berwarna hijau-biru , permukaan tetap
asetat daun kenikir dan daun sendok terhadap halus, dan media tidak rusak ataupun luruh.
M.tuberculosis di media memberikan hasil yang Berdasarkan hasil penelitian , konsentrasi 1,00
dapat dilihat pada gambar 2, seri kadar 0,25 mg/ml merupakan nilai konsentrasi bunuh
mg/ml menunjukkan adanya pertumbuhan minimum (KBM) ekstrak etil asetat daun kenikir
koloni. Hal tersebut menunjukkan bahwa dan daun sendok terhadap pertumbuhan
konsentrasi 0,25 mg/ml belum dapat memberikan M.tuberculosis dan memiliki aktivitas sebagai anti
nilai kadar bunuh minimum (KBM) untuk tuberkulosis.
pertumbuhan M.tuberculosis. Kromatografi lapis tipis digunakan melihat
profil kromatogram ekstrak larut etil asetat daun Pengujian untuk terpenoid dilakukan
kenikir dan daun sendok. Fase diam yang menggunakan fase diam silika gel 60 F254 dengan
digunakan silika gel 60 F254 dan mengandung fase gerak toluena: etil asetat: metanol (3:2:1, v/v)
senyawa berfluoresensi pada gelombang baik untuk ekstrak larut etil asetat daun kenikir
maksimum 254 nm sehingga keberadaan senyawa maupun daun sendok. Penelitian ini menggunakan
dapat dideteksi dengan adanya pemadaman timol sebagai pembanding. Sistem KLT dalam
bercak pada zona tertentu. Deteksi KLT dilakukan deteksi senyawa golongan terpenoid fase diam
dengan sinar tampak, sinar UV254 dan sinar silica gel 60 F254 dan eluen toluene: etil asetat:
UV366, dan bertujuan untuk mengetahui adanya methanol (3:2:1, v/v), sedangkan jarak elusi 8 cm
senyawa-senyawa yang memiliki ikatan rangkap serta pembanding adalah timol.
terkonjugasi dalam sampel. Plat silika gel 60 F254 Profil kromatogram hasil identifikasi
akan berfluoresensi kuning-hijau jika terkena golongan senyawa terpenoid dengan reagen
sinar UV254. Jika senyawa mempunyai ikatan semprot anisaldehid-asam sulfat dapat dilihat
rangkap terkonjugasi dalam strukturnya maka pada gambar 3A dan 3B. Anisaldehid - asam sulfat
sinar UV tidak dapat mengeksitasi indikator merupakan pereaksi untuk identifikasi senyawa
sehingga tidak terjadi pancaran sinar. Hasil visual steroid, karbohidrat, glikosida, sapogenin, dan
terlihat berupa pemadaman pada plat KLT. minyak atsiri atau terpenoid (Jork dkk., 1990).
Adanya ikatan rangkap terkonjugasi Deteksi terpenoid menggunakan anisaldehid-
memperlihatkan zona gelap dengan latar belakang asam sulfat dilakukan setelah plat KLT
berfluoresensi hijau (Gritter et. al., 1985; Wagner dipanaskan pada suhu 100-105 °C selama 10
dan Bladt, 1996). Deteksi dengan sinar UV366 menit sebagai percepatan reaksi (Sutrisno, 1986).
akan menunjukkan adanya pemendaran bercak Reaksi ini didasarkan pada gugus aromatik
dengan warna tertentu (Wagner dan Bladt, 1996). anisaldehid sehingga mengakibatkan munculnya
Pereaksi semprot sitroborat digunakan gugus penarik atau penerima elektron. Adanya
untuk identifikasi golongan senyawa yang gugus tersebut memicu terjadinya kondensaasi
mempunyai gugus orto dihidroksi (Harborne, dengan molekul organik target. Kondensasi
1987). Berdasarkan hasil identifikasi dengan tersebut membentuk senyawa trifenilmetan
sitroborat, kromatogram terdapat bercak dengan dengan ikatan rangkap terkonjugasi dan semakin
warna kuning, cokelat dan hijau dari ekstrak lerut panjang sehingga berwarna pada pengamatan
etil asetat daun kenikir pada nilai Rf 0,6; 0,66; dan sinar tampak. Deteksi terpenoid dengan pereaksi
0,95 serta daun sendok 0,39; 0,44; 0,49; 0,74; 0,80 ini akan memberikan bercak dengan warna ungu,
dan 0,86. Sedangkan pembanding muncul dengan biru, merah, cokelat atau hijau pada plat KLT
bercak tunggal berwarna hijau pada nilai Rf 0,54. (Harborne, 1987).
Hasil ini menunjukkan adanya senyawa dalam Berdasarkan profil kromatogram pada
ekstrak larut etil asetat daun kenikir dan daun gambar 3A dan 3B, bercak timol muncul sebagai
sendok yakni substituen orto- dihidroksi. bercak tunggal dan hanya bisa diamati pada sinar
Pereaksi semprot FeCl3 digunakan untuk UV254 sebelum di semprot anisaldehid-asam
identifikasi adanya senyawa fenol dalam ekstrak sulfat. Hal ini dikarenakan ikatan ganda pada
larut etil asetat daun kenikir dan daun sendok. timol yang termasuk golongan monoterpenoid
Adanya bercak berwarna hijau, merah, biru, abu- sangat terbatas sehingga hanya dapat diamati
abu, atau hitam yang kuat menunjukkan pada sinar UV254 dengan pemadaman plat KLT.
senyawa fenol (Harborne, 1987). Pereaksi FeCl3 Pengamatan bercak timol pada sinar tampak dan
akan bereaksi dengan ion fenolat membentuk ion sinar UV366 tidak terlihat dikarenakan timol
kompleks [Fe(Oar)6]3+. Berdasarkan profil tidak muncul warna sehingga tidak dapat diamati
kromatogram tersebut, bercak setelah disemprot pada sinar tampak dan timol tidak mampu
dengan FeCl3, bercak ekstrak uji pada UV366 menyerap paparan UV dengan panjang gelombang
muncul sebanyak 6 bercak dengan warna lebih tinggi di UV366. Bercak pada ekstrak larut
beragam mulai dari abu-abu, hijau, kuning, hijau etil asetat daun kenikir pada Rf 0,16 dan Rf 0,25
gelap, dan kehijauan pada nilai Rf 0; 0,06; 0,6; hanya muncul pada sinar UV254 seperti bercak
0,92; 0,95 dan 0,99 sedangkan bercak pembanding timol namun memiliki warna
pembanding kuersetin muncul sebagai bercak berbeda. Pada daun sendok terdapat bercak pada
tunggal berwana cokelat pada nilai Rf 0,54. Pada Rf 0,15; 0,29; 0,48; 0,54; 0,60; 0,66; 0,73; 0,84 dan
daun sendok ada enam bercak yang positif fenolik 0,96.
yaitu pada Rf 0,45; 0,53; 0,58; 0,89 dan 0,94. Hasil Bercak tersebut diduga merupakan
ini menunjukkan bahwa ekstrak larut etil asetat senyawa terpenoid dengan ikatan ganda terbatas
daun kenikir dan daun sendok memiliki seperti pada pembanding timol. Berdasarkan
kandungan senyawa fenol. profil kromatogram pada gambar 3, ekstrak larut
etil asetat daun kenikir dan daun sendok muncul Biakan, Identifikasi, dan Uji Kepekaan
bercak dengan warna beragam yang mayoritas Mycobacterium tuberculosis pada Media
berwarna ungu sedangkan timol sebagai Padat, Kementrian Kesehatan RI, Jakarta.
pembanding menunjukkan bercak tunggal pada Rf Anonim,2012b, Taxonomy-Mycobacterium
0,94 dengan warna merah tebal. Warna bercak tuberculosis complex,
muncul karena ikatan rangkap terkonjugasi dalam www.uniprot.org/taxonomy77643, 19
struktur hasil reaksi dengan anisaldehid-asam November 2016.
sulfat. Senyawa-senyawa memiliki karakteristik Brennan, P.J., 2003, Structure, function and
dengan perubahan warna tertentu pada pengaruh biogenesis of the cell wall of
durasi pemanasan tertentu. Mycobacterium tuberculosis, Tuberculos, 83
Senyawa yang mengarah ke orto dihidroksi, : 91-97.
senyawa fenol, dan senyawa terpenoid dalam Bunamela, J.G., Martinez Moralis, Stashenko E.,
ekstrak larut etil asetat daun kenikir dan daun and Ribon W., (2014), Antitubercular
sendok diduga berkontribusi terhadap aktivitas activity of eleven aromatic and medicinal
anti-tuberkulosis. Sedangkan golongan senyawa plants occvuring in Africa, Biomedica, Vol.
terpenoid seperti seskuiterpenoid lakton memiliki 29: 51-60
gugus epoksida yang reaktif dan sifat lipofiliknya Cantrell, C.L., Franzblau, S.G., Fischer N.H., 2001,
berpengaruh terhadap permeabilitas membran Antimycobacterial Plant Terpenoids, Planta
sel bakteri M. tuberculosis dengan dinding sel Med 67: 685-694..
tebal. Coban AY, Cihan CC, & Bilgin K., 2006, Blood agar
for susceptibility testing of Mycobacterium
KESIMPULAN tuberculosis against first-line drugs, Int J
Ekstrak larut etil asetat daun kenikir Tuberc Lung Dis, 10: 450–453.
(Cosmos caudatus H.B.K) dan daun sendok Dias, H. M., Falzon, D, Fitzpatrick, C., Floyd, K.,
(Plantago major L.) memiliki aktivitas sebagai Glaziou, P., & Hiatt, T., 2012, Global
anti-tuberkulosis. Konsentrasi Bunuh Minimum Tuberculosis Report 2012, World Health
(KBM) kedua ekstrak etil asetat daun kenikir dan Organization, Geneva.
daun sendok terhadap M. tuberculosis yaitu 1,0 Fansworth, N.R., & Fabricant, D.S., 2001,The value
mg/mL. Ekstrak etil asetat daun kenikir dan daun of plants used in traditional medicine for
sendok mengandung senyawa fenolik, senyawa drug discovery, Environ Health Perspect,
orto-hidroksi, dan senyawa triterpenoid asam 109: 69-75.
ursolat dan asam oleanolat. Gritter, R.J., J.M. Robbit, & A.E. Schwarting,
1991, Pengantar Kromatografi,
DAFTAR PUSTAKA diterjemahkan oleh Kosasih Padmawinata,
Agusta, A., (2000), Minyak Atsiri Tumbuhan Edisi 2, 34-81, ITB, Bandung.
Tropika Indonesia, Penerbit: ITB-Ganesha, Harborne JB., 1987, Metode Fitokimia: Penuntun
Bandung, hal. 101 Cara Modern Menganalisa Tumbuhan,
Akbar, Hendra Rizki. 2010. Isolasi dan Identifikasi Padmawinata K penerjemah, Penerbit ITB,
Golongan Flavonoid Daun Dandang Gendis Bandung. Terjemahan dari: Phytochemical
(Clinacanthus Nutans) Berpotensi Sebagai Methods: A Guide to Modern Techniques of
Antioksidan (Skripsi). Bogor: IPB. Plant Analysis.
Anonim, 1995, Farmakope Indonesia, Edisi IV, Hiswani, 2009, Tuberkulosis Merupakan Penyakit
Kementrian Kesehatan RI Jakarta. Infeksi Yang Masih Menjadi Masalah
Anonim, 2002, Pedoman Nasional Kesehatan Masyarakat,
Penanggulangan Tuberkulosis Edisi 9, http://library.usu.ac.id/download/fkm-
Departemen Kesehatan RI, Jakarta. hiswani-6.pdf2009, 7 Januari 2017.
Anonim, 2007, Pedoman Nasional Irianti, T., Puspitasari, A., Machwiyyah, L., dan
Penanggulangan Tuberculosis, Edisi II, Rabbani, H.R., (2015a), The Activity of
Kementrian Kesehatan RI, Jakarta. Radical Scavenging 2-2’diphenil-1-
Anonim, 2010, Cosmos caudatus Kunth, Malaysian Picrylhydrazyl (DPPH) by Ethanolic
Herbal Monograph, Extract of Mengkudu leaves, brotowali
http://www.globinmed.com/index.php?opt stem, its water fraction and its hydrolyzed
ion=com_content&view=article fraction, Traditional Medicine Journal Vol.
&id=104892:cosmos-caudatus- 20 No. 3, Yogyakarta, Indonesia.
kunth&catid=209<emid=143, 2 Irianti, T., Puspitasari, A., Suryani, E., Rabbani, HR.,
September 2016. Kuswandi and Kusumaningtyas RA.
Anonim, 2012a, Petunjuk Teknis Pemeriksaan (2015b), Scavenging Activity Of Radical 2-
2’diphenil-1-Picrylhydrazyl (DPPH) by Acid Saric, D., Bojic, M., Haas, V.S, dan Males, Z., 2013,
Fraction and Aqueous Hydrolyzed Fraction Determination of Flavonoids, Phenolic
of Tinospora Crispa L. Ethanolic Extract, Acids, and Xanthines in Mate Tes (Illex
ICEOH-Johor-Malaysia, Conference. paraguariensis St.-Hill), Journal of Analytical
Jork, H., Werner, F., Walter, F., dan Hans, W., 1990, Methods in Chemistry, Vol. 2013.
Thin-Layer Chromatography, Reagen and Sutrisno, (2016), Eksplorasi Potensi Senyawa
Detection Methods, VCH Publisher, USA. Organik Bahan Alam Dengan Pendekatan
Kennedy AD, (2011), Biochemical profil of Berbasis Struktur dan Implikasinya Pada
mycobacterium tuberculosis gron under Pembelajaran Kimia Organik di perguruan
hypoxic conditions (snow globe model, Tinggi, Prosisding Seminar Nasional Kimia,
SG7), (online) www.metabolon.com. ISBN: 978-602-0951-12-6, Universitas
Negeri Surabaya, hal 11.
Merfort, I., 2002, Review of the analytical Taofik, et. al. 2010. Isolasi dan Identifikasi
techniques for sesquiterpenes and Senyawa Aktif Ekstrak Air Daun Paitan
sesquiterpene lactones, Journal of (Thitonia Diversifolia) Sebagai Bahan
Chromatography A, 967: 115-130. Insektisida Botani Untuk Pengendalian
Middlebrook, G.M.D dan Cohn, M.L., 1957, Hama Tungau Eriophydae. Alchemy Vol.
Bacteriology of Tuberculosis: Laboratory 2(1): 104- 157.
Methods, American Journal Public Health, Tirtana, B.T., 2011, Faktor-Faktor yang
48(7). Mempengaruhi Keberhasilan Pengobatan
Munawaroh, A.L., Dwi Y.N.H., dan Yulian W.U., pada Pasien Tuberkulosis Paru dengan
2015, Studi komparasi media kultur Coco Resistensi Obat Tuberkulosis di Wilayah
Blood Malachite Green (CBM) dengan Jawa Tengah, Skripsi, Fakultas Kedokteran
Lowenstein Jensen (LJ) untuk diagnosis Universitas Diponegoro, Semarang.
cepat, spesifik, dan sensitif pada sputum Wagner H., Bladt S., dan Zgainski, E. M., 1984,
pasien suspek tuberkulosis, Majalah Plant Drug Analysis, A Thin Layer
Kesehatan FKUB, Vol. 2 (2). Chromatography Atlas, Springer, Berlin.
Purba, R.D 2001. Analisis Komposisi Alkaloid Daun Wahyono, 2008, Tanaman Sebagai Sumber Obat-
Handeuleum (Graptophyllum pictum (Linn), Obatan, Sidang Pengukuhan Guru Besar
Griff) yang Dibudidayakan dengan Taraf UGM, Yogyakarta.
Nitrogen yang Berbeda (Skripsi). Bogor: World Health Organization (WHO), 2016,
Institut Pertanian Bogor. Tuberculosis country profiles,
Rios dan Recio, 2005, Medicinal plants and http://www.who.int/tb/country/data/profil
antimicrobial activity, Journal of es/en 18 Oktober 2017.
Ethnopharmacology, 100: 80–84. World Health Organization (WHO), 2003,
Rowe, R.C., Shekey, P.J. dan Quinn, M.E., 2009, Adherence to long-term therapies: evidence
Handbook of Pharmaceutical Excipients for action, World Health Organization,
Sixth Edition, Pharmaceutical Press and Geneva.
American Pharmacist Association, USA. World Health Organization (WHO), 2016, Global
Samuelsen, A.B., 2000, A Review: The traditional Tuberculosis Report 2016, World Health
uses, chemical constituents and biological Organization, Geneva.
activities of Plantago major L., J.
Ethnopharmacol., 71, 1-21