Jurnal Ilmu Farmasi Terapan Vol.

8 (09), hlm 001-006, September, 2018 Tersedia online di

http://www.japsonline.com
DOI: 10.7324 / JAPS.2018.8901 ISSN 2231-3354

Scopoletin dari Lasianthus lucidus Blume (Rubiaceae): Antimikroba

potensial terhadap Pseudomonas aeruginosa yang resistan terhadap
beberapa obat.
Tiwtawat Napiroon1,2, Markus Bacher3, Henrik Balslev4, Kwankamol Tawaitakham5, Wichai
Santimaleeworagun6*, Srunya Vajrodaya2*
1
The Forest Herbarium (BKF), Department of National Parks Wildlife and Plant Conservation, Bangkok 10900, Thailand.
2
Department of Botany, Faculty of Science, Kasetsart University, Bangkok 10900, Thailand.
3
Division of Chemistry of Renewables, University of Natural Resources and Life Sciences (BOKU), 3430 Tulln/Donau, Austria.
4
Department of Bioscience, Faculty of Science and Technology, Aarhus University, Aarhus C-8000, Denmark.
5
Department of Agricultural Resources, Kasetsart University, Sakon Nakhon 47000, Thailand.

Faculty of Pharmacy, Silpakorn University, Nakhon Pathom 73000 Thailand [A Novel Antibiotic Compound Project by
6

Pharmaceutical Initiative for Resistant Bacteria and Infectious Diseases Working Group (PIRBIG)].

INFO ARTIKEL
Article history:
Received on: 03/05/2018
Accepted on: 19/07/2018
Available online: 30/09/2018

ABSTRAK
Sebuah penelitian yang dipandu bioassay terhadap ekstrak lipofilik kulit batang menyebabkan isolasi
senyawa bioaktif dari spesies Lasianthus lucidus Blume yang terkait dengan pengobatan tradisional
untuk pengobatan infeksi luka, perdarahan, dan demam. Scopoletin (7-hydroxy-6-methoxycoumarin)
dapat diisolasi dari ekstrak kulit batang yang menghasilkan 1,4 μmol / g berdasarkan berat kering.
Konsentrasi hambat minimum dari ekstrak dan skopoletin terbukti efektif terhadap kedua strain
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 (strain penghasil AmpC β-laktamase) dan P. aeruginosa
DMSC 37166 (strain klinis). Mereka mengungkapkan efek antibakteri tertinggi pada 128 μg / ml dan
perubahan morfologis pada sel bakteri ditunjukkan oleh Field Emission Scanning Electron
Microscope. Ekstrak lipofilik dan scopoletin yang dimurnikan dari L. lucidus memiliki aktivitas
antibakteri yang jelas, terutama yang bekerja melawan strain P. aeruginosa. Mereka menghasilkan
lisis sel, dinding sel yang membengkak dan dinding sel yang tenggelam ke dalam sel dengan cara
yang sama.
PENGANTAR
Scopoletin adalah kumarin fenolik yang diisolasi dari banyak tanaman, yang dikenal sebagai senyawa
penting dari kelompok phytoalexin (Tal dan Robeson, 1985). Ini memiliki struktur kristal kuning
dengan berat molekul 192 dan titik lebur 204-206 ° C (Vasconcelos et al., 1998). Berbagai aktivitas
biologisnya telah dilaporkan melalui sejumlah investigasi. Booth et al. (2004) melaporkan bahwa
senyawa tersebut menghasilkan aktivitas biologis spesifik dan kemungkinan implikasi kesehatan bagi
manusia dalam makanan dan obat-obatan. Dalam penggunaan klinis, scopoletin dan kelas zat kumarin
dijelaskan dan diuji untuk mengobati sifat antikonvulsan, gejala kardiovaskular dan neuromuskuler
(Adesina, 1982) serta agen anti-diabetes, digunakan dalam mengurangi resistensi insulin dan
antikoagulan (Chang et al. , 2015). Untuk penyakit menular, kumarin dan scopoletin digambarkan
berpotensi menunjukkan aktivitas antibakteri terhadap bakteri seperti Staphylococcus aureus,
Pseudomonas aeruginosa, Bacillus cereus dan Escherichia coli (Souza et al., 2005 dan Deng et al.,
2007). Dalam studi model hewan, Panda dan Kar (2006) menunjukkan bahwa scopoletin dengan dosis
rendah (1 mg / kg) memiliki potensi untuk mengatur hipertiroidisme dan hiperglikemia. Obasi et al.
(1996) dan Moon et al. (2007) menyarankan kemungkinan peran scopoletin diet dalam beberapa
gangguan pembekuan darah dan metabolisme lipid pada hewan dan efek pada peradangan yang
bekerja pada sel mast. Scopoletin telah memainkan peran penting untuk waktu yang lama dalam
pengobatan tradisional di Afrika, Asia, dan Eropa. Beberapa keluarga tumbuhan, mis. Aceraceae,
Asteraceae, Euphorbiaceae, Fabaceae, Rubiaceae, Combretaceae, Meliaceae, Rutaceae, Solanaceae
dll. Mengandung skopoletin hasil tinggi dan digunakan sebagai obat untuk gejala kejang-kejang dan
nyeri rematik. Buah dan biji Tetrapleura tetraptera (Fabaceae) digunakan di Nigeria dan Ghana,
sedangkan buah Physalis alkekengi (Solanaceae) digunakan untuk mengurangi peradangan di
Kolombia (Ojewole dan Adesina, 1983; Xia et al., 2007). Jus dari buah-buahan dan daun Morinda
citrifolia (Rubiaceae), yaitu dikenal sebagai "Noni" di Asia Pasifik, digunakan untuk pengobatan
diabetes, pengaturan tekanan darah dan sebagai tapal pada luka (Handy et al., 1934 ; McClatchey,
2002). Pada tahun 2003, jurnal resmi Uni Eropa melaporkan bahwa Komisi Eropa menyetujui bahwa
jus buah "Noni" adalah makanan kesehatan yang baru dan aman di Eropa. Selain itu, Nawrot et al.
(2013) dan Dai et al. (2018) melaporkan bahwa scopoletin diisolasi dari kulit batang Cedrelopsis
rakotozafyi. Pipi & Lescot (Rutaceae) digunakan sebagai obat penurun panas atau mengurangi
demam.
Selain itu, kumarin baru ditemukan dari akarnya Terminalia trophophylla H. Perrier (Combretaceae)
dan kulit batang Astrotrichilia sp. (Meliaceae) mengungkapkan aktivitas potensial terhadap garis sel
kanker ovarium manusia A2780 (Dai et al., 2018).
Lasianthus lucidus Spesies Blume dari famili kopi (Rubiaceae) adalah semak asli daerah tropis dan
subtropis Asia, terutama di daerah tropis Cina, India dan Asia Tenggara. Spesies ini tumbuh di hutan
primer, dengan catatan sesekali dari hutan yang terganggu atau tepi hutan (Robbrecht, 1988; Cai et al.,
2005; Zhu et al., 2012). Menariknya, ekstrak daun dan kulit batang telah dilaporkan karena berpotensi
antibakteri terhadap Pseudomonas aeruginosa (Rai dan Lalramnghinglova, 2011; Napiroon et al.,
2017a; Napiroon et al., 2017b). Pseudomonas aeruginosa adalah salah satu bakteri patogen dalam
daftar antimikroba yang resisten atau super untuk pengawasan dan pemantauan oleh laporan
Organisasi Kesehatan Dunia (WHO) (WHO, 2017). Mengembangkan agen antimikroba baru terhadap
P. aeruginosa adalah tugas yang jauh lebih sulit karena adanya penurunan permeabilitas membran dan
pompa eflid multidrug (Morita et al., 2014). Lasianthus lucidus saat ini dipelajari di laboratorium
kami dan digunakan dalam pengobatan tradisional untuk menghentikan pendarahan dari luka dan
diterapkan untuk mengurangi demam yang disebabkan oleh infeksi (Rai dan Lalramnghinglova,
2011). Akibatnya, kami berhipotesis bahwa senyawa bioaktif dari ekstrak L. lucidus dapat memiliki
efek antibakteri. Untuk menguji hipotesis ini, kami melakukan ekstraksi tanaman dan isolasi senyawa
murni yang ditemukan dalam spesies dan akhirnya menguji tindakan anti-pseudomonad mereka.
MATERIAL DAN METODE

Bahan tanaman
Daun dewasa dan kulit batang L. lucidus dikumpulkan selama tahap berbuah antara November dan
Desember 2016, dari hutan pegunungan evergreen di Thailand. Spesimen voucher L. lucidus (kolektor
no. NT015) disimpan di Departemen Botani, Universitas Kasetsart, Herbarium Hutan Bangkok
(BKF), dan Herbarium Universitas Aarhus (AAU). Perbandingan dibuat dengan spesimen jenis
spesies di herbaria K dan L, foto-foto yang tersedia di web dan literatur terkait (Zhu et al. 2012).
Sampel tanaman diamati di bawah mikroskop stereo. Akronim herbarium mengikuti Index
Herbariorum (sweetgum.nybg.org/science/ih/).
Ekstraksi tanaman
Daun dewasa dan kulit batang dipisahkan dan dikeringkan di bawah naungan, dipotong-potong kecil
dan dijadikan bubuk menggunakan pabrik elektronik. 200 g serbuk dimaserasi dengan metanol
(CH3OH) selama tujuh hari dalam gelap pada suhu kamar. Selanjutnya, ekstrak disaring melalui
kertas saring Whatman No.1 dan kemudian dipekatkan dengan penguapan berputar pada 37 ° sampai
39 ° C, sampai ekstrak kasar semi-padat. Ekstrak kasar terkonsentrasi dipartisi menjadi ekstrak
hidrofilik dalam air suling dan ekstrak lipofilik dalam kloroform. Ekstrak lipofilik disimpan pada suhu
di bawah -45 ° C. Ekstrak lipofilik ditempatkan pada Lapisan Tipis. Kromatografi (KLT) gel silika
yang diprepoasi 60 F piring (20 × 20 cm; Merck) menggunakan sistem pelarut heksana: etil asetat (7:
3 v / v) dan terdeteksi di bawah iradiasi UV (365 nm dan 254 nm). Nilai Rf dari setiap titik fluoresen
ditentukan sebagai pola TLC. Untuk analisis kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC), sampel 10 mg /
mL ekstrak lipofilik dan senyawa murni dalam metanol (CH3OH; kadar HPLC, Merck) adalah
disiapkan dan disaring melalui filter nilon 0,45 μm menggunakan pelarut
sistem, 60% v / v metanol gradien 60 hingga 100% (kadar HPLC; Merck) dalam 40% v / v buffer
berair (0,015 M asam ortofosfat pH 3 dan 0,015 M tetrabutylammonium hidroksida) yang mengikuti
fase gerak yang sesuai untuk deteksi kumarin (Vajrodaya) 1998 dan Vajrodaya et al. 1998). Analisis
HPLC dilakukan dengan Agilent 1100 series dan dideteksi oleh detektor array fotodioda UV dengan
panjang gelombang masing-masing 230 nm, 254 nm, dan 280 nm.
Isolasi
Senyawa bioaktif dievaluasi menggunakan teknik kromatografi cair tekanan sedang (MPLC). Ekstrak
lipofilik kulit batang (670 mg dilarutkan dalam 6 ml MeOH) diaplikasikan ke kolom gelas (400 × 40
mm, Büchi) diisi dengan gel silika 25 hingga 40 μm (gel LiChroprep Silica 60, 25-40 Merck
μm) sebagai penyerap menggunakan laju aliran 12 ml / menit. Tekanan sekitar 4 bar digunakan
(model pompa 1-10 bar, Fluid Metering, pompa kromatografi dari Combiflash, USA). Fraksi 50 ml
dikumpulkan dengan sistem pelarut berikut: Pertama, 30% etil asetat dalam heksan dikumpulkan
dalam 7 fraksi (fraksi 1 sampai 7). Selanjutnya, 50% etil asetat dalam heksan dikumpulkan dalam 9
fraksi (fraksi 8 sampai 16) diikuti oleh 70% etil asetat dalam heksana yang dikumpulkan dalam 9
fraksi (fraksi 17 hingga 25). Kolom dicuci dan dikalibrasi dengan metanol (kelas Analitik, Merck)
sebelum dan setelah masing-masing dijalankan selama 30 menit dengan tekanan diatur ke 4 bar dan
laju aliran 12 ml / menit.
Semua fraksi diperiksa kemurniannya dengan kromatografi lapis tipis (KLT) dan deteksi UV (panjang
gelombang 365 nm). Fraksi dengan komposisi yang sama (fraksi 14-20) digabungkan dan
direkristalisasi dengan dietil eter untuk menghasilkan 54 mg scopoletin murni dalam bentuk kristal
kuning dan kemudian 10 mg scopoletin dilarutkan dalam DMSO untuk uji bioassay.
Aktivitas antibakteri
Untuk tes antimikroba, ekstrak tanaman dievaluasi menggunakan dua strain bakteri patogen dari
Departemen Ilmu Kedokteran, Departemen Kesehatan Masyarakat, Thailand: Pseudomonas
aeruginosa ATCC 27853 (strain penghasil AmpC β-laktamase) dan P. aeruginosa DMSC 37166
(strain klinis). Kontrol kualitas Institut Standar Klinis dan Laboratorium (CLSI 2017) untuk uji
sensitivitas terstandarisasi,
P. aeruginosa ATCC 27853 digunakan sebagai spesies kontrol positif dengan antibiotik standar
termasuk; AMK (Amikacin 30 μg), CIP (Ciprofloxacin 5 μg) dan PIP / TAZ (Piperacillin /
Tazobactam 100/10 µg).
Konsentrasi hambat minimum (MIC) ekstrak dan senyawa murni ditentukan dengan menggunakan
metode mikrodilusi kaldu. Larutan stok 10 mg / mL yang sesuai dengan 0,91% b / b (disiapkan
dengan melarutkan setiap ekstrak dan senyawa murni dalam dimetil sulfoksida (DMSO-Sigma-
Aldrich, AS) secara serial diencerkan dengan konsentrasi 2 kali lipat. Inokula standar bakteri uji
dalam kaldu Mueller-Hinton (MHB-Oxoid, Basingstoke, UK) ditempatkan di sumur terpisah dari
piring 96-sumur menggunakan DMSO sebagai kontrol. Organisme dibudidayakan pada 37 º C selama
18 jam. MIC didokumentasikan sebagai konsentrasi terendah dari ekstrak yang menghambat
pertumbuhan yang terlihat.

Mikroskop Elektron Pemindaian Lapangan (FE-SEM)

Untuk mikroskop elektron pemindaian emisi lapangan (FE-SEM), suspensi Pseudomonas aeruginosa
ATCC 27853 (strain penghasil β-laktamase AmpC) dan P. aeruginosa DMSC 37166 (strain klinis)
105 CFU / mL dalam ekstrak lipofilik dan skopoletin pada level terendah Konsentrasi MIC
dikombinasikan dengan Mueller-Hinton Broth (MHB) diinkubasi pada suhu 37ºC selama enam jam
dan kemudian disaring melalui kertas saring 0,22 μM. Bakteri pada kertas filter difiksasi dengan 2,5%
glutaraldehyde dalam 0,2 M sodium dapar salin fosfat (pH 7,2) selama 12 jam pada suhu 4ºC. Bakteri
difiksasi dicuci tiga kali dengan buffer salin natrium fosfat 0,2 M (pH 7,2) selama sekitar 15 menit
setiap kali dan kemudian diperbaiki dengan 1% osmium tetroxide (OsO4) dalam air suling selama
satu jam menerapkan metode fiksasi sel dari Cardozo et al. (2013). Setelah itu, kertas saring
dibersihkan menggunakan tiga siklus (15 menit) air suling. Sampel tetap didehidrasi dalam
konsentrasi aseton gradien (20, 40, 60, 80 dan 100%) dan kemudian dikeringkan pada titik kritis CO2
(Polaron Range SC7620 Sputter Coater & CA7625 Carbon Accessary). Akhirnya, kertas saring pada
pita karbon dilapisi dengan platinum (AUTOLAB, Spin coater) dan diamati di bawah FE-SEM
(HITACHI FE-SEM SU8010 Resolusi Ultra-Tinggi (1,0 nm); Jepang).

HASIL

Analisis kromatografi ekstrak kulit batang dan senyawa murni

Profil HPLC menunjukkan empat puncak dominan dalam ekstrak daun sementara hanya satu puncak
dominan muncul dalam ekstrak kulit batang. Hasil penelitian menunjukkan bahwa karakter kimia dari
ekstrak lipofilik kulit batang menunjukkan karakteristik yang mirip dengan senyawa murni pada
waktu retensi perkiraan 3,7 menit dalam fase gerak yang sama. Kromatogram HPLC dari ekstrak
lipofilik kulit batang dan senyawa murni disediakan pada Gambar 1. Skopoletin murni memiliki
waktu retensi sekitar 3,7 menit, spektrum UV, dan kromatogram HPLC ditunjukkan pada Gambar 2.
Setelah fraksinasi, kombinasi fraksi 14 hingga 20 muncul sebagai bintik-bintik biru muda berpendar
pada pelat TLC yang dikembangkan (sistem pelarut, heksana: etil asetat (7: 3 v / v)), ketika diamati
dengan iradiasi UV, pada panjang gelombang 365 nm. Fraksi-fraksi itu menghasilkan bercak biru
muda paling pekat. Ekstrak kulit batang L. lucidus dan fraksi juga menghasilkan tempat yang sama
dengan bagian depan relatif (Rf) 0,5 (Gambar 1).
Gambar 1: Kromatogram HPLC dari ekstrak lipofilik kulit batang dan skopoletin yang diisolasi dari
ekstrak lipofilik kulit batang L. lucidus dalam konsentrasi 10 mg / mL (seluler
tahap; buffer berair: methanal, 40:60 v / v).
Penjelasan struktur senyawa murni dan Nuclear Magnetic Resonance (NMR)
Kristal berwarna kekuning-kuningan menerangi fluoresensi
di bawah sinar UV (panjang gelombang 365 nm) dan menunjukkan fisik properti menggunakan 1D
(1H, NOE) dan 2D (HSQC) NMR sebagai berikut;
1H NMR (400 MHz, AcCN) δ: 3,90 (3H, s, OMe), 6,18 (1H, d, J
= 9.5 Hz, H-3), 6.82 (1H, s, H-8), 7.09 (1H, s, H-5), 7.75 (1H, d,
J = 9,5 Hz, H-4). Spektrum 1H NMR dari senyawa murni

menunjukkan dua doublet pada δ 6,18 ppm dan δ 7,75 ppm (masing-masing, 1H, d, J = 9,5 Hz),
karakteristik proton H-3 dan H-4 dari cincin pyrone. Selain itu, dua singlet pada  6.82 ppm dan 
7.09 ppm masing-masing ditugaskan untuk H-5 dan H-8, tiga singlet proton pada 
3,90 ppm dikaitkan dengan kelompok 6-O-metil dan titik lebur 204-206 ° C. Data NMR sesuai
dengan data yang dilaporkan untuk scopoletin. Spektrum NMR direkam pada a

Bruker Avance II 400 (frekuensi resonansi 400,13 MHz untuk 1H dan 100,63 MHz untuk 13C)
dilengkapi dengan 5 mm observ broadband head head (BBFO) dengan gradien z pada suhu kamar.
Sampel dilarutkan dalam 0,6 ml CD3CN (99,8% D). Pergeseran kimia diberikan dalam ppm,
direferensikan ke sinyal pelarut residu (1,94 ppm untuk 1H). properti menggunakan 1D (1H, NOE)
dan 2D (HSQC) NMR sebagai berikut;
1H NMR (400 MHz, AcCN) δ: 3,90 (3H, s, OMe), 6,18 (1H, d, J
= 9.5 Hz, H-3), 6.82 (1H, s, H-8), 7.09 (1H, s, H-5), 7.75 (1H, d,
J = 9,5 Hz, H-4). Spektrum 1H NMR dari senyawa murni
menunjukkan dua doublet pada δ 6,18 ppm dan δ 7,75 ppm (masing-masing, 1H, d, J = 9,5 Hz),
karakteristik proton H-3 dan H-4 dari cincin pyrone. Selain itu, dua singlet pada  6.82 ppm dan 
7.09 ppm masing-masing ditugaskan untuk H-5 dan H-8, tiga singlet proton pada 
3,90 ppm dikaitkan dengan kelompok 6-O-metil dan titik lebur 204-206 ° C. Data NMR sesuai
dengan data yang dilaporkan untuk scopoletin. Spektrum NMR direkam pada a

Bruker Avance II 400 (frekuensi resonansi 400,13 MHz untuk 1H dan 100,63 MHz untuk 13C)
dilengkapi dengan 5 mm observ broadband head head (BBFO) dengan gradien z pada suhu kamar.
Sampel dilarutkan dalam 0,6 ml CD3CN (99,8% D). Pergeseran kimia diberikan dalam ppm,
direferensikan ke sinyal pelarut residu (1,94 ppm untuk 1H).

Gambar 2: A. Kromatogram KLT dari scopoletin yang diisolasi dari L. lucidus, dilarutkan dengan
metanol dalam fase gerak; heksana: etil asetat (7: 3 v / v) B. Kromatogram HPLC
dan spektrum UV scopoletin (fraksi gabungan 14 hingga 20), dilarutkan dengan metanol dalam fase
gerak; buffer berair: metanol (40:60 v / v). Struktur kimia scopoletin (7-hydroxy-6- methoxy
coumarin) ditunjukkan pada Gambar 3.

Gambar 3: Scopoletin (7-Hydroxy-6-methoxycoumarin).

Aktivitas antibakteri
Tes MIC dari ekstrak tanaman menunjukkan kemanjuran tertinggi terhadap kedua jenis P. aeruginosa
(DMSC 37166 dan ATCC 27853) (Tabel 1). MICs dari ekstrak daun L. lucidus, ekstrak kulit batang,
dan scopoletin masing-masing adalah 256, 128 dan 128 ug / ml. Ekstrak kulit batang lipofilik dan
scopoletin murni memiliki efek penghambatan efektif yang sama pada P. aeruginosa ATCC 27853
(strain penghasil AmpC-lactamase) pada 128 μg / ml seperti yang ditunjukkan pada Tabel 1.

Mikroskop Elektron Pemindaian Lapangan (FE-SEM)

Analisis FE-SEM menunjukkan perubahan morfologis yang signifikan pada P. aeruginosa ATCC
27853 setelah paparan ekstrak lipofilik dan skopoletin mengenai nilai MIC-nya. Ekstrak jelas
menghasilkan lisis seluler, pembengkakan yang meningkat muncul di dinding sel dan pemanjangan
sel bila dibandingkan dengan bakteri yang tidak diobati (kontrol) (Gambar 4).

DISKUSI
Pemisahan ekstrak dilakukan dengan menggunakan teknik MPLC dengan fase gerak yang sesuai,
TLC dan HPLC digunakan untuk menentukan dan menyelidiki kemurnian senyawa yang diisolasi
(Kupiec, 2004 dan Lukaza dan Minika, 2009). Proses HPLC kami dikonfirmasi dalam tes rangkap
tiga yang menunjukkan semua informasi spektrum UV yang sama dari scopoletin. Hasil ini
menunjukkan spektrum UV yang sama (ƛ maks) sebagai informasi dari scopoletin dari laporan
Ferdinal et al sebelumnya. (2015).
Tabel 1: Efek penghambatan (MIC, μg / ml) ekstrak dan skopoletin dari L. lucidus terhadap
Pseudomonas aeruginosa.

Senyawa * MIC µg / mL
P. aeruginosa ATCC 27853 (AmpC
Strain penghasil β-laktamase) P. aeruginosa DMSC 37166 (Strain klinis)
Ekstrak daun Ekstrak batang kulit 256
128 256
128
Scopoletin (µM) 0,66 0,66
* Setiap sampel diuji dalam rangkap tiga.

Dari penelitian kami, kedua teknik kromatografi membantu untuk menemukan scopoletin dari ekstrak
lipofilik kulit batang L. lucidus. Profil dapat menyediakan alat prediksi tren akumulasi yang dapat
diharapkan pada spesies yang belum dipelajari, tetapi terkait erat dalam genus, sehingga memfasilitasi
penyelidikan untuk senyawa bioaktif (Murray et al., 1982). Penelitian kami juga mendeteksi coumarin
dan scopoletin yang pertama kali diisolasi dari ekstrak lipofilik kulit batang L. lucidus (Rubiaceae).
Demikian pula, Murray et al. (1982) mengumpulkan informasi dari kelompok kumarin yang
ditemukan di Rubiaceae seperti spesies dalam genus Morinda, Hymenodictyon dan Hedyotis dll.
(Gnonlonfin et al., 2012). Spesies ini mengandung scopoletin (7-hydroxy-6-methoxycoumarin) baik
di daun, kulit batang dan akar. Telah ditemukan di beberapa tanaman lain mengungkapkan
konsentrasi yang berbeda di setiap bagian tanaman (Ishikura et al., 1979). Pada 1979 Ishikura et al.
menggambarkan untuk pertama kalinya terjadinya skopoletin di Lasianthus dengan mengisolasi dari
L. japonicus. Kami mengisolasi scopoletin dari L. lucidus menghasilkan 1,4 μmol / g dari kulit
batang, (200 g berat kering), yang memberikan hasil tertinggi scopoletin
bila dibandingkan dengan laporan terkait di pabrik lain, yaitu laporan hasil panen dari Gnonlonfin et
al. (2012).
Mengenai peran dalam pertahanan, scopoletin telah menunjukkan sifat antibakteri yang potensial,
yaitu coumarin dan scopoletin, terdeteksi dalam Morinda citrifolia (Rubiaceae) atau Noni,
menghambat pertumbuhan bakteri patogen tertentu, seperti S. aureus, P. aeruginosa, P. aeruginosa,
Morganella morgaii, Bacillus subtilis, Escherichia coli dan Salmonella spp. (More et al., 2012).
Demikian pula ekstraknya

dari beberapa tanaman dalam genus Lasianthus (Rubiaceae) telah menghambat bakteri patogen
terutama dalam strain P. aeruginosa dan yang terkait dengan penyakit infeksi tradisional (Napiroon et
al., 2017a; Napiroon et al., 2017b). Dengan demikian, para penulis ini telah menjelaskan bahwa
scopoletin tampaknya merupakan antimikroba yang efektif sebagaimana dibuktikan oleh bioassay.
Dari laporan sitotoksisitas, scopoletin relatif tidak beracun pada garis sel fibroblast McCoy,
menunjukkan IC50-nya 132,50 μg / mL (Hayes dan Orr, 1983).

Gambar 4: Gambar FE-SEM dari Pseudomonas aeruginosa (strain penghasil AmpC β-laktamase); A.
Sel tanpa adanya senyawa (kontrol), B. Sel dalam ekstrak kulit batang menunjukkan lisis sel dan
pembengkakan yang meningkat pada dinding sel, C. dan D. Sel setelah pengobatan dengan skopoletin
diisolasi dari ekstrak kulit batang. Catatan: dinding sel menunjukkan pembengkakan (C) dan dinding
sel yang meresap ke dalam sel (D).
Penelitian kami mengungkapkan efek ekstrak L. lucidus lipophilic dan senyawa murni, scopoletin,
dari ekstrak kulit batang pada P. aeruginosa untuk pertama kalinya. Ekstrak lipofilik kulit batang dan
skopoletin memiliki aktivitas terhadap P. aeruginosa bahkan pada konsentrasi rendah (128 ug / ml)
yang karenanya dapat digunakan sebagai sumber agen antibakteri yang efektif. Selain itu, kami
menemukan perubahan seluler morfologis yang didokumentasikan dengan mikroskop elektron.
Dinding sel pembengkakan yang membengkak, sel yang berkepanjangan dan kebocoran konten
diamati. Fenomena ini tampaknya mirip dengan mekanisme antibiotik pada kelompok β-laktam, yang
menghambat protein pengikat penisilin yang mengarah pada struktur dinding sel yang cacat seperti
perpanjangan, lesi, dan lisis (Hayes dan Orr, 1983; Cardozo et al., 2013) ). Dengan demikian,
scopoletin dapat berfungsi sebagai agen antibakteri penuh harapan ketika dikembangkan lebih lanjut
untuk digunakan sebagai sumber antibiotik.

KESIMPULAN
Scopoletin yang diisolasi dari ekstrak lipofilik kulit batang L. lucidus menunjukkan sifat antibakteri
yang signifikan dengan cara yang sama; dari tindakan ini perubahan morfologis dapat diamati pada
sel bakteri setelah diobati dengan senyawa. Ekstrak lipofilik menunjukkan diucapkan

aktivitas anti-pseudomonas terhadap P. aeruginosa, yang dapat menjelaskan penggunaan tanaman

dalam mengobati demam dan infeksi luka yang disebabkan oleh bakteri seperti P. aeruginosa.
Aktivitas biologis L. lucidus yang ditemukan dalam penelitian ini dikaitkan dengan konsentrasi tinggi
scopoletin 1,4 µmol / g dari kulit batang (200 g berat kering). Hasil MIC dari scopoletin dalam
penelitian ini menunjukkan aktivitas sebagai agen anti-Pseudomonas. Metode analisis yang digunakan
dalam penelitian ini menunjukkan juga pola senyawa yang dapat direproduksi yang berguna untuk
mengidentifikasi skopoletin dan kumarin lainnya di Lasianthus.
PATEN
Karya ini telah menerima no paten kecil. 14069 dari Departemen Kekayaan Intelektual, Thailand pada
bulan Juli 2018.
PENGAKUAN
Para penulis ingin mengucapkan terima kasih kepada otoritas dari Departemen Taman Nasional
Margasatwa dan Konservasi Tumbuhan, Thailand. Herbarium Hutan (BKF), Herbarium Universitas
Aarhus, Denmark (AAU), Herbarium Kebun Raya Ratu Sirikit, Chiang Mai (QBG), Pangeran
Herbarium Universitas Songkla (PSU) dan Herb Herbarium, London (K).
KONFLIK KEPENTINGAN
Tidak ada potensi konflik kepentingan yang dilaporkan oleh penulis.

SUMBER PENDANAAN
Penelitian ini didukung oleh fellowship peneliti postdoctoral dari Yayasan Carlsberg, Universitas
Aarhus, Denmark di bawah Proyek Flora Thailand dan Lembaga Penelitian dan Pengembangan
Universitas Kasetsart (KURDI).
REFERENSI
Adesina SK. Studi tentang resep antikonvulsan herbal nigeria.
Int J Crude Drug Res, 1982; 20: 93-100.
Booth NL, Nikolic D, Richard B, Breemen V, Geller SE, Banuvar S, Shulman LP, Farnsworth NR.
Kebingungan tentang kumarin antikoagulan dalam suplemen makanan. Clin Pharmacol Ther, 2004;
76: 511-16.
Cai ZQ, Rijkers T, Bongers F. Phytosynthetic aklimasi terhadap perubahan cahaya pada spesies kayu
hutan hujan tropis berbeda dalam perawakan dewasa. Tree Physiol, 2005; 25: 1023-1031.
Cardozo VF, Oliveira AG, Nishio EK, Perugini MR, Andrade CG, Silveira WD, Durán N, Andrade
G, Kobayashi RKT, Nakazato
G. Aktivitas antibakteri senyawa ekstraseluler yang diproduksi oleh strain Pseudomonas terhadap
strain Staphylococcus aureus (MRSA) yang resisten methicillin. Ann Clin Microbiol Antimicrob,
2013; 12: 1-8.
WC Chang, Wu SC, Xu KD, Liao SM, Wu JF, Cheng AS. Scopoletin melindungi terhadap
hiperglikemia yang diinduksi metilglioksal dan resistensi insulin yang dimediasi oleh penindasan
generasi produk akhir glikasi maju (AGEs) dan anti glikasi. Molekul, 2015; 20: 2786-801.
Dai Y, Liu Y, Rakotondraibe LH. Novel produk bioaktif alami yang diisolasi dari tumbuhan
Madagaskar dan organisme laut (2009-2017). Chem Pharm Bull, 2018; 66 (5): 469-482.
Deng S, Palu AK, BJ Barat, Su CX, Zhou BN, Jensen JC. Konstituen penghambat lipoksigenase dari
Buah Noni (Morinda citrifolia) dikumpulkan di Tahiti. J Nat Prod, 2007; 70: 859-62.
Ferdinal N, Alfajri R, Arifin B. Isolasi dan karakterisasi scopoletin dari kulit kayu uji fagraea
ceilanica Thumb and Antioksidan. IJASEIT. 2015; 5: 126-130.
Gnonlonfin GJB, Sanni A, Brimer L. Ulasan Scopoletin - A Coumarin Phytoalexin dengan Sifat Obat.
Crit Rev Plant Sci, 2012; 31: 47-56.
Berguna ESC, Pukui MK, Livermore K. 1934. Garis Besar Terapi Fisik Hawaii. Hawaii, AS: Buletin
Museum Bernice P. Bishop.
Hayes MV, Orr DC. Cara kerja ceftazidime: afinitas untuk protein pengikat penisilin dari Escherichia
coli K12, Pseudomonas aeruginosa dan Staphylococcus aureus. J Antimicrob Chemother, 1983; 12:
119-126.
Ishikura N, Sugahara K, Kurosawa K. Eriodictyol-7-glucoside dan Fenolik Lainnya dalam Buah Biru
Lasiauthus japonica. Notizen, 1979; 34: 628-629.
Kupiec T. Metode analisis kontrol kualitas: Kromatografi cair kinerja tinggi. Int J Pharm Compd,
2004; 8: 223-227.
Lukasz C, Monika WH. Kromatografi lapis tipis dua dimensi dalam analisis metabolit tumbuhan
sekunder. J Chromatogr, 2009; 1216: 1035-1052.
McClatchey W. Dari tabib Polynesia ke toko makanan kesehatan: mengubah perspektif Morinda
citrifolia (Rubiaceae). Integr Cancer Ther, 2002; 1: 110-20.
PD Bulan, Lee BH, Jeong HJ, An HJ, Taman SJ, Kim RH, Ko SG, Um JY, Hong SH, Kim HM.
Penggunaan scopoletin untuk menghambat produksi sitokin inflamasi melalui penghambatan kaskade
sinyal IkB / NF-kB dalam garis sel mast manusia HMC-1. Eur J Pharmacol, 2007; 555: 218-25.
Lebih banyak G, Lall N, Hussein A, Tshikalange TE. Konstituen Antimikroba dari Artemisia afra
Jacq. ex Willd. terhadap Patogen Periodontal. Alternatif Alternatif Pelengkap, 2012; 2012: 1-7.
Morita Y, Tomida J, Kawamura Y. Tanggapan dari Pseudomonas aeruginosa terhadap antimikroba.
Mikrobiol Depan, 2014; 4: 1-8.
Murray RDH, Mendez J, Brown SA. 1982. The Natural Coumarin. Kebangkitan, Kimia, dan
Biokimia. Chichester, Inggris: John Wiley and Sons.
Napiroon T, Balslev H, Duangjai S, Sookchaloem D, Chayamarit K, Santimaleeworagun W,
Vajrodaya S. Asia Tenggara J Trop Med Kesehatan Masyarakat, 2017a; 48: 117-123.
Napiroon T, Vajrodaya S, Santimaleeworagun W, Balslev H, Chayamarit K. Aktivitas Antibakteri
dari Tiga Ekstrak Obat Lasianthus (Rubiaceae) pada Bakteri Patogen yang Tahan Manusia. Eur Exp
Biol, 2017b; 7 (6): 1-7.
Nawrot DA, Randrianarivelojosia M, Langat MK, Mulholland DA. Coumarin dari Malagasy
Cedrelopsis rakotozafyi Pipi dan Lescot (Rutaceae). Biochem Syst Ecol, 2013; 50: 452-454.
Obasi SC, Njoku OU, Obidoa O, Ononogbu IC. Efek dosis tunggal scopoletin oral dan aflatoksin B1
pada waktu perdarahan, kadar kolesterol serum dan fosfolipid babi guinea. Nutr Res, 1996; 16: 667-
72.
Jurnal Resmi Uni Eropa, Keputusan Komisi 5 Juni 2003 yang mengesahkan penempatan "jus noni" di
pasaran (jus buah Morinda citrifolia L.) sebagai bahan makanan baru menurut Peraturan (EC) No
258/97. 2003. Tersedia di: https: // publikasi. europa.eu/en/publication-detail/-/publication/cbc08fa3-
7b1e-485c-9ee5- dcbc474b9f23 / language-en. [Diakses 5 April 2018].
Ojewole JAO, Adesina SK. Tindakan kardiovaskular dan neuromuskuler dari skopoletin dari
Tetrapleura tetraptera. Planta Med, 1983; 49: 99- 102.
Panda S, Kar A. Isolasi scopoletin dari daun Aegle marmelose dan evaluasi potensi antitiroid,
antioksidan dan antihiperglikemiknya pada tikus hipertiroid. Phytother Res, 2006; 20: 1103-5.
Rai PK, Lalramnghinglova H, tanaman etnomedisinal yang terancam dan kurang dikenal dari wilayah
hotspot Indo-Burma: implikasi konservasi. Environ Monit Assess, 2011; 178: 53-62.
Robbrecht E. Rubiaceae kayu tropis. Opera bot, 1988;
1: 132-193.
Souza SM, Monacheb FD, Artur SJ. Aktivitas Antibakteri Coumarins Z Naturforsch C, 2005; 60c:
693-700.
Tal B, Robeson DJ. Induksi, dengan inokulasi jamur ayapin dan biosintesis skopoletin di Helianthus
annuus. Phytochemistry, 1985; 25: 77-9.
Vajrodaya S. 1998. Analisis fitokimia komparatif dalam genus Glycosmis (Rutaceae-Citroideae).
Disertasi doktoral. Wina, Austria: Universitas Wina.
Vajrodaya S, Bacher M, Greger H, Hofer O. Perbedaan kimia organ khusus pada Glycosmis
trichantera. Phytochemistry, 1998; 48: 897-902.
Vasconcelos JMJ., Silva AMS., Cavalejro JAS. Kromoson dan flavanon dari Artemisia campestris
subsp. Maritima. Phytochemistry, 1998; 49: 1423-24.
Organisasi Kesehatan Dunia (WHO). 2017. WHO menerbitkan daftar bakteri yang membutuhkan
antibiotik baru. [ONLINE] Tersedia di: http://www.who.int/news-room/detail/27-02-2017-who-
menerbitkan-daftar-bakteri-untuk-mana-antibiotik-baru-sedang-mendesak- dibutuhkan. [Diakses 12
Maret 2018].
Xia Y, Dai Y, Wang Q, Liang H. Penentuan skopoletin dalam plasma tikus dengan metode
kromatografi cair kinerja tinggi dengan deteksi UV dan penerapannya pada studi farmakokinetik. J
Chromatogr B, 2007; 857: 332-6.
Zhu H, Roos MC, Ridsdale CE. Revisi taksonomi dari spesies Lasianthus (Rubiaceae) Mali. Blumea,
2012; 57: 1-102.