2 April 2001 Translate

2 April 2001
12: 7
Ulasan Tahunan
AR129-02
Annu. Rev. Plant Physiol. Menanam Mol. Biol. 2001. 52: 29–66
Hak Cipta c 2001 oleh Ulasan Tahunan. Seluruh hak cipta
A LKALOID B IOSYNTHESIS DALAM P LANTS :
Biokimia, Biologi Sel, Molekul
Regulasi, dan Rekayasa Metabolik
Aplikasi
Peter J Facchini
Departemen Ilmu Biologi, Universitas Calgary, Calgary, Alberta T2N 1N4,
Kanada; e-mail: pfacchin@ucalgary.ca
Kata kunci rekayasa metabolik, regulasi gen, metabolisme sekunder,
transduksi sinyal, kompartemenasi subselular
s Abstrak Kemajuan terbaru dalam sel, perkembangan, dan biologi molekuler
biosintesis alkaloid telah meningkatkan penghargaan kami untuk kompleksitas dan pentingnya
jalur tanaman sekunder. Beberapa gen biosintetik yang terlibat dalam
mation alkaloid tropane, benzylisoquinoline, dan terpenoid indole sekarang telah
terpencil. Peristiwa awal persepsi sinyal, jalur transduksi sinyal,
dan fungsi promotor gen telah dipelajari dalam kaitannya dengan regulasi
metabolisme alkaloid. Enzim yang terlibat dalam biosintesis alkaloid dikaitkan dengan
kompartemen subseluler beragam termasuk sitosol, vakuola, membran tonoplast,
retikulum endoplasma, stroma kloroplas, membran tilakoid, dan mungkin unik
"Biosintetik" atau mengangkut vesikel. Studi lokalisasi telah menunjukkan urutan itu
enzim biosintetik alkaloid juga dapat terjadi pada jenis sel yang berbeda, menunjukkan
transportasi antar sel dari perantara jalur. Gen yang terisolasi juga telah digunakan
untuk secara genetik mengubah akumulasi alkaloid spesifik dan sekunder tanaman lainnya
metabolisme. Modifikasi metabolik termasuk peningkatan kadar alkaloid indol, diubah
akumulasi alkaloid tropana, peningkatan sintesis serotonin, berkurangnya glukose indol
produksi nolate, metabolisme shikimate dialihkan, dan peningkatan dinding-terikat sel
pembentukan tyramine. Ulasan ini membahas biokimia, biologi sel, molekul
regulasi, dan rekayasa metabolisme biosintesis alkaloid pada tanaman.
ISI
PENDAHULUAN ................................................ 30
BIOCHEMISTRY DAN SEL BIOLOGI JALUR ALKALOID ........ 31
Alkaloid Indol Terpenoid ........................................ 31
Alkiloid Benzylisoquinoline .......................................... 36
Alkaloid dan Nikotin Tropana .................................... 41
Alkaloid purin ............................................... 43
1040-2519 / 01 / 0601-0029 $ 14,00
29
Annu. Rev. Plant. Physiol. Menanam. Mol. Biol. 2001.52: 29-66. Diunduh dari www.annualreviews.org
Akses disediakan oleh 140.213.54.160 pada 03/23/20. Hanya untuk penggunaan pribadi.
Halaman 2
2 April 2001
12: 7
Ulasan Tahunan
AR129-02
30
FACCHINI
Kompartemen Subseluler dari Enzim Biosintetik Alkaloid ............ 43
PERATURAN GEN BIOSYNTHETIC ALKALOID .................. 45
Regulasi Pengembangan dan Lokalisasi Jaringan-Khusus ................ 45
Transduksi Sinyal dan Ekspresi Inducible .......................... 47
Analisis Promotor .................................................. 49
APLIKASI TEKNIK METABOLIK ......................... 51
Alkaloid Indol Terpenoid ........................................ 51
Alkaloid Tropana, Nikotin, dan Turunan Poliamina Lainnya .............. 53
Alkaloid lain ................................................ 53
Penggunaan Lain dari Gen Biosintetik Alkaloid dalam Rekayasa Genetika ........... 54
PROSPEK MASA DEPAN ................................................ 55
PENGANTAR
Alkaloid adalah kelompok beragam senyawa dengan berat molekul rendah dan mengandung nitrogen.
pon ditemukan di sekitar 20% spesies tanaman. Banyak dari ∼12.000 alkaloid untuk
struktur yang telah dijelaskan fungsinya dalam pertahanan tanaman terhadap
herbivora dan patogen (19, 178). Aktivitas biologis yang kuat dari beberapa makanan
kelonggaran juga menyebabkan eksploitasi mereka sebagai obat-obatan, stimulan, narkotika,
dan racun. Alkaloid yang berasal dari tumbuhan yang saat ini digunakan secara klinis termasuk anal-
gesics morfin dan kodein, agen antikanker vinblastin dan taksol, asam urat
colchicine supresan, pelemas otot (+) - tubocurarine, antiarrythmic
ajmaline, sanguinarine antibiotik, dan skopolamin obat penenang. Penting lainnya-
Alkaloid yang berasal dari tumbuhan ini termasuk kafein, nikotin, kokain, dan sintetis
O, heroin turunan morfin yang diasetilasi.
Penelitian di bidang biokimia alkaloid tanaman dimulai dengan isolasi
morfin pada 1806. Hebatnya, struktur morfin tidak dijelaskan
hingga 1952 karena kompleksitas stereokimia dari molekul. Dari dulu,
tiga kemajuan teknis utama telah menyebabkan kemajuan substansial dalam pemahaman kami
pembentukan alkaloid tanaman. Yang pertama adalah pengantar di tahun 1950 - an
prekursor radiolabeled yang memungkinkan penjelasan kimia biosintesis alkaloid
jalur tesis. Yang kedua melibatkan peningkatan penggunaan selama tahun 1970-an pabrik
kultur sel sebagai sumber berlimpah enzim biosintesis yang bisa menjadi iso-
lated, dimurnikan, dan ditandai. Akhirnya, aplikasi tersebar luas pada 1990-an
teknik molekuler ke bidang alkaloid memfasilitasi isolasi beberapa
gen yang terlibat dalam biosintesis alkaloid alkaloid indole, tropane, dan benzylisoquinoline
(Tabel 1). Peristiwa awal persepsi sinyal, jalur transduksi sinyal
tion, dan fungsi promotor gen sejak itu telah diselidiki dalam kaitannya
untuk pengaturan metabolisme alkaloid. Studi lokalisasi spesifik jaringan miliki
menunjukkan bahwa enzim biosintetik sekuensial dapat terjadi pada tipe sel yang berbeda. Itu
prediksi translokasi jalur perantara antara sel-sel selanjutnya menunjukkan
menyatakan biologi sel rumit biosintesis alkaloid. Gen yang terisolasi juga demikian
telah digunakan untuk merekayasa genetika akumulasi alkaloid dan bagian lainnya
metabolit ondary pada tanaman. Dalam ulasan ini, kemajuan terbaru dalam biokimia,
Halaman 3
2 April 2001
12: 7
Ulasan Tahunan
AR129-02
ALKALOID BIOSYNTHESIS DALAM TANAMAN
31
biologi sel, regulasi molekuler, dan rekayasa metabolisme alkaloid tanaman
jalur dibahas.
Biokimia dan Biologi Sel
JALUR ALKALOID
Alkaloid Indol Terpenoid
Alkaloid indole terpenoid (TIA) terdiri dari keluarga ∼3000 senyawa itu
termasuk agen antineoplastik vinblastine dan camptothecin, antimalaria
obat kina, dan strychnine racun tikus. Beberapa TIA telah diusulkan
memainkan peran dalam pertahanan tanaman terhadap hama dan patogen (93). TIA terdiri
dari bagian indol yang disediakan oleh tryptamine dan komponen terpenoid yang diturunkan
dari secologanin iridoid glukosida. Tryptophan dikonversi menjadi tryptamine oleh
tryptophan decarboxylase (TDC; Gambar 1), yang dikodekan oleh satu gen dalam
Catharanthus roseus (31, 58) dan oleh dua gen yang diatur secara mandiri di Camp-
totheca acuminata (91). The C. roseus TDC gen pameran baik perkembangan
dan regulasi yang diinduksi. Sebaliknya, C. acuminata TDC1 diekspresikan dalam jaringan
mengandung tingkat tinggi camptothecin termasuk pucuk apeks dan kulit kayu, tetapi
gen tidak diinduksi sebagai respons terhadap pengobatan elisitor. Namun, TDC2 diinduksi pada
kultur sel C. acuminata yang diobati elicitor , tetapi tidak diekspresikan secara perkembangan.
Regulasi diferensial gen TDC dalam C. acuminata menunjukkan bahwa satu
pate di jalur pertahanan yang dikontrol secara perkembangan, sementara yang lain terlibat
dalam mekanisme pertahanan yang diinduksi.
Langkah komitmen pertama dalam biosintesis sekologanin adalah hidroksilasi
geraniol hingga 10-hidroksigeraniol. Enzim geraniol 10-hidroksilase (G10H) adalah
dicirikan sebagai monooxygenase P450 karena terikat membran, tergantung
pada NADPH dan O 2 , dan menampilkan penghambatan CO yang dapat dibalikkan cahaya (106). G10H adalah
spesifik untuk posisi C-10 dan menunjukkan afinitas yang sama untuk geraniol dan nerol,
yang cis -isomer geraniol. Konversi dari loganin ke secologanin mewakili
langkah terakhir di jalur dan juga dikatalisis oleh enzim yang bergantung pada P450
(180) Produksi prekursor terpenoid mungkin memainkan peran regulasi dalam
Biosintesis TIA sejak penambahan secologanin atau loganin ke sel C. roseus
biakan meningkatkan akumulasi alkaloid (111, 113). Apalagi level G10H
aktivitas berkorelasi positif dengan akumulasi alkaloid ketika C. roseus
kultur sel dipindahkan ke media produksi alkaloid (148). Enzimnya
3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase (HMGR), yang terlibat
dalam biosintesis mevalonate, dikloning dan dikarakterisasi dari C. roseus
(97) dan C. acuminata (16,99). Ekspresi diferensial gen HMGR di
respon terhadap luka dan metil jasmonat (MeJA) disarankan untuk berkontribusi
untuk regulasi biosintesis TIA. Namun, secologanin baru-baru ini ditunjukkan
berasal dari jalur triose fosfat / piruvat (22); dengan demikian, korelasinya
antara ekspresi HMGR dan akumulasi TIA kemungkinan terjadi secara kebetulan.
Halaman 4
2 April 2001
12: 7
Ulasan Tahunan
AR129-02
32
FACCHINI
T
SANGGUP
1
Alkaloid
biosintesis
enzim
untuk
yang
itu
sesuai
gen
memiliki
telah
dikloning
Enzim
Fungsi
Jenis
T
ya
Referensi
Monoterpenoid
indole
alkaloid
biosintesis
TDC
T
ryptophan
dekarboksilase
Catharanthus
roseus
Pyridoxal-5
-phospahate-
31
tergantung
dekarboksilase
Camptotheca
acuminata
91
STR
Strictosidine
synthase
Catharanthus
roseus
V
acuolar
glikoprotein
104
Rauwolfia
serpentina
84
SGD
Strictosidine
β
- -glukosidase
Catharanthus
roseus
Terkait membran
55
glukosidase
T16H
T
Abersonine
16-hidroksilase
Catharanthus
roseus
Tergantung P450
151
monooksigenase
D4H
Desacetoxyvindoline
4-hidroksilase
Catharanthus
roseus
Bergantung pada 2-Oxoglutarate
176
dioksigenase
D
SEBUAH
T
Deacetylvindoline
acetyltransferase
Catharanthus
roseus
Asetil
Ketergantungan CoA
164
acetyltransferase
Benzylisoquinoline
alkaloid
biosintesis
TYDC
T
yrosine
dekarboksilase
P
apaver
somniferum
Pyridoxal-5
-phospahate-
38
tergantung
dekarboksilase
6OMT
Norcoclaurine
Koptis
japonica
S
-Adenosyl-
L.
-methionine-
114
6-
HAI
-methyltransferase
tergantung
HAI
-methyltransferase
4
OMT
3
-Hydroxy-
N
-
Koptis
japonica
S
-Adenosyl-
L.
-methionine-
114
methylcoclaurine
tergantung
HAI
-methyltransferase
4
-
HAI
-methyltransferase
OMT
II; 1-4
Norcoclaurine
Thalictrum
tuberosum
S
-Adenosyl-
L.
-methionine-
49
6-
HAI
-methyltransferase
tergantung
HAI
-methyltransferase
D
Halaman 5
2 April 2001
12: 7
Ulasan Tahunan
AR129-02
33
CYP80A1
Berbamunine
synthase
Berberis
stolonifera
Tergantung P450
81
monooksigenase
CYP80B1
N
-Meth
ylcoclaurine
3
-
Eschscholzia
californica
Tergantung P450
133
-hidroksilase
monooksigenase
P
apaver
somniferum
72,
182
BBE
Berberin
jembatan
enzim
Eschscholzia
californica
Flavinilasi
oksidoreduktase
34
P
apaver
somniferum
41
Berberis
stolonifera
21
SOMT
Scoulerine
Koptis
japonica
S
-Adenosyl-
L.
-methionine-
171
9-
HAI
-methyltransferase
tergantung
HAI
-methyltransferase
COR
Codeinone
reduktase
P
apaver
somniferum
Aldo / k
eto
reduktase
173
T
kereta gantung
alkaloid
dan
nikotin
biosintesis
ODC
Ornithine
dekarboksilase
Datura
stamonium
Pyridoxal-5
-phospahate-
112
tergantung
dekarboksilase
PMT
Putresin
Atropa
beladonna
S
-Adenosyl-
L.
-methionine-
167
N
-methyltransferase
tergantung
N
-methyltransferase
Nikotina
tabacum
71
TR-I
T
ropinone
reductase-I
Datura
stramonium
Rantai pendek
dehydrogense
119
TR-II
T
ropinone
reduktase-II
Datura
stramonium
Rantai pendek
dehidrogenase
119
H6H
Hyoscyamine
Hyoscyamus
nig
er
Bergantung pada 2-Oxoglutarate
101
6
β
-hidroksilase
dioksigenase
Atropa
beladonna
168
Purine
alkaloid
biosintesis
CS
Kafein
synthase
Bunga kamelia
sinensis
S
-Adenosyl-
L.
-methionine-
-
tergantung
N
-methyltransferase
Halaman 6
2 April 2001
12: 7
Ulasan Tahunan
AR129-02
34
FACCHINI
Gambar 1 Reaksi dikatalisis oleh enzim yang terlibat dalam alkaloid indol monoterpenoid
biosintesis di mana gen yang sesuai telah dikloning. TDC, deklarasi tryptophan
boxylase; STR, strikosidin sintase; SGD, strictosidine β-D-glucosidase; T16H, taber-
sonine 16-hidroksilase; D4H, desacetoxyvindoline 4-hydroxylase; DAT, deacetylvindoline
4- O -acetyltransferase.
Tryptamine dan secologanin terkondensasi oleh strikosidin sintase (STR) menjadi
membentuk strictosidine, prekursor umum untuk semua TIA (Gambar 1). STR cDNA miliki
telah diisolasi dari Rauvolfia serpentina (84) dan C. roseus (104, 132). Enzimnya
dikodekan oleh gen tunggal dalam C. roseus , menunjukkan bahwa beberapa isoform STR
melaporkan sebelumnya hasil dari modifikasi posttranslational dari satu prekursor
(132). Strictosidine dideglukosilasi oleh strictosidine β-D-glucosidase (SGD),
yang telah dimurnikan dari kultur sel C. roseus (92). Enzim asli
menunjukkan massa molekul tinggi, menunjukkan bahwa itu ada sebagai agregat yang tersusun
dari beberapa subunit 63-kDa. Pencernaan SGD dengan trypsin menyebabkan kompleks
hancur, melarutkan enzim tanpa kehilangan aktivitas. SGD dikodekan oleh a
gen tunggal dalam C. roseus yang berbagi ∼60% homologi dengan glukosidase tanaman lainnya
(55) Strikosidin terdeglukosilasi diubah melalui beberapa zat antara yang tidak stabil
hingga 4,21-dehydrogeissoschizine. Meskipun beberapa TIA diproduksi dari 4,21-
dehydrogeissoschizine, beberapa enzim yang terlibat telah diisolasi (108).
Sebagai contoh, tidak ada enzim yang mengarah ke katarantin telah dijelaskan.
Halaman 7
2 April 2001
12: 7
Ulasan Tahunan
AR129-02
35
Namun, biosintesis vindoline telah ditandai dalam banyak hal
detail. Vindoline pada akhirnya digabungkan ke catharanthine oleh peroksidase yang tidak spesifik
untuk menghasilkan vinblastin (157).
Langkah pertama dari enam langkah yang terlibat dalam konversi tabersonine menjadi vindoline
daftar hidroksilasi pada posisi C-16 oleh tabersonine 16-hydroxylase (T16H;
Gambar 1), yang terdeteksi dalam ekstrak protein total daun muda C. roseus
(163). Berdasarkan persyaratannya untuk NADPH dan O 2 , dan penghambatannya oleh CO, cy-
tochrome c , dan inhibitor spesifik, T16H dicirikan sebagai ketergantungan P450
monooksigenase. CDNA T16H diisolasi dari kultur sel C. roseus menggunakan
strategi kloning berdasarkan aktivasi enzim oleh cahaya (151). Sev-
urutan P450 eral diperkuat oleh reaksi rantai polimerase (PCR), menggunakan
primer degenerasi khusus untuk domain pengikatan heme yang dikonservasi. PCR
produk-produknya digabungkan menjadi RNA dari sel-sel yang diinduksi dan yang tidak diinduksi, dan satu
menunjukkan kinetika induksi yang konsisten dengan T16H. CDNA yang terisolasi, pengkodean a
Homolog P450 yang ditunjuk CYP71D12, dinyatakan dalam Escherichia coli sebagai a
fusi translasi dengan sitokrom P450 reduktase (CPR) dari C. roseus (107).
CYP71D12 diidentifikasi sebagai T16H berdasarkan kemampuannya untuk mengubah tabersonine menjadi
16-methoxytabersonine. Analisis hibridisasi DNA genom memberi kesan bahwa
setidaknya dari dua gen T16H (151), tetapi hanya satu salinan gen CPR
(90), dalam C. roseus .
Setelah 16-hidroksilasi tabersonine, tiga langkah selanjutnya adalah
biosintesis vindoline sekarang diterima sebagai 16- O- metilasi, hidrasi
2,3 ikatan rangkap, dan N- metilasi nitrogen cincin-indol (8,27,28). Sebuah
S -adenosyl- L -methionine (SAM) -dependent O -methyltransferase (OMT) telah
melaporkan bahwa metilasi 16- O -demethyl-4- O -deacetylvindoline (45). Awalnya dua
hidroksilasi berturut-turut pada posisi C-3 dan C-4 diusulkan untuk diikuti
rendahkan 16-hidroksilasi tabersonine (45). Namun, isolasi SAM-
ketergantungan N- metiltransferase (NMT) khusus untuk nitrogen cincin-indol
16-metoksi-2,3-dihydro-3-hydroxytabersonine menunjukkan bahwa O- metilasi
langkah mendahului N- metilasi, dan bahwa 16-hydroxytabersonine adalah sub-alami
strate of the OMT (28, 33). Enzim yang terlibat dalam menghidrasi ikatan 2,3 rangkap
belum diisolasi.
Langkah kedua hingga terakhir dalam biosintesis vindoline dikatalisis oleh 2-
oksiglutarat-dioksigenase tergantung yang menghidroksilasi posisi C-4 dari
sacetoxyvindoline (D4H; Gambar 1) (23). Enzim ini membutuhkan ion besi dan
askorbat, muncul sebagai tiga isoform muatan unik, dan menunjukkan "ter ter"
mekanisme ter ”dengan pengikatan 2-oxoglutarate terlebih dahulu, diikuti oleh O 2 dan desace-
toxyvindoline (24). Primer degenerasi, dirancang dari sekuens asam amino
berasal dari protein yang dimurnikan, digunakan untuk mengisolasi cDNA dan klon genom
encoding D4H (174). Dua cDNA berbeda diisolasi, mewakili dimorfik
alel dari gen salinan tunggal.
Langkah terakhir dalam biosintesis vindoline dikatalisis oleh acetylcoenzyme A:
deacetylvindoline 4- O -acetyltransferase (DAT; Gambar 1) (26,44). Yang dimurnikan
Enzim sangat dihambat oleh tabersonine dan koenzim A (penghambatan 50% pada
Halaman 8
2 April 2001
12: 7
Ulasan Tahunan
AR129-02
36
FACCHINI
45 μM dan 37 μM, masing-masing), dan lemah dihambat oleh tryptamine, secolo-
ganin, dan vindoline (28%, 25%, dan 40% inhibisi, masing-masing, pada 500 μM),
menunjukkan bahwa aktivitas DAT dimodulasi oleh perintis jalur dan produk
(135). Pemurnian asli DAT menyebabkan kesimpulan yang salah bahwa
Enzim terdiri dari dua subunit dengan berat molekul 33 dan 21 kDa. Bagaimana-
pernah, gen DAT yang diisolasi mengkode polipeptida 50-kDa, menunjukkan bahwa gen tersebut
protein dibelah sebagai artifak pemurnian (164). Apalagi proteinnya
bereaksi silang dengan antibodi anti-DAT pada bibit dan daun juga memiliki molekul
berat 50 kDa (164).
Alkaloid Benzylisoquinoline
Alkaloid Benzylisoquinoline (BIAs) adalah kelompok alkaloid yang besar dan beragam
∼2500 struktur yang ditentukan. Aktivitas farmakologis BIA membuat banyak
mereka berguna sebagai obat-obatan dan sering merupakan petunjuk untuk peran biologis mereka di pabrik
(19) Misalnya, efektivitas morfin sebagai analgesik, colchicine sebagai a
mikrotubulus disrupter, dan (+) - tubocurarine sebagai blocker neuromuskuler
bahwa alkaloid ini berfungsi sebagai pencegah herbivora. Sifat antimikroba
Sanguinarine menunjukkan bahwa ia memberikan perlindungan terhadap patogen. BIA
berberine, sanguinarine, dan palmatine secara khusus ditunjukkan untuk memberikan perlindungan.
tion terhadap herbivora dan patogen (149).
BIA biosintesis dimulai dengan kisi metabolisme decarboxylations, orto -
hidroksilasi, dan deaminasi yang mengubah tirosin menjadi dopamin dan 4-
hydroxyphenylacetaldehyde (142). Satu-satunya enzim yang terlibat dalam langkah-langkah awal ini
yang telah dimurnikan (100), dan cDNA yang sesuai telah
kloning (38, 98), adalah aromatik L -amino acid decarboxylase (TYDC) yang mengubah
tirosin dan dopa untuk amina yang sesuai (Gambar 2). TYDC dikodekan
oleh keluarga ∼15 gen di Papaver somniferum (opium poppy) yang bisa
dibagi menjadi dua subkelompok berdasarkan identitas urutan (38). Meski bersifat katalitik
sifat isoform serupa, masing-masing subfamili TYDC menunjukkan perbedaan
pola ekspresi perkembangan dan diinduksi (38,40). CDNA TYDC miliki
juga telah dilaporkan dari parsley (80) dan Arabidopsis thaliana (172), yang tidak
menumpuk alkaloid yang diturunkan dari tirosin. MRNA TYDC terbukti cepat
diinduksi sebagai respons terhadap pengobatan elisitor (40,80.172) dan tantangan patogen
(150) di berbagai tanaman. Induksi TYR mRNA di peterseli dan Arabidopsis
menunjukkan bahwa tyramine berfungsi sebagai prekursor untuk kelas pertahanan di mana-mana
metabolit respons, selain BIA. Studi terbaru menunjukkan bahwa sintesis
dan pengendapan di dinding sel amida, terdiri dari asam hidroksisinamatik-
turunan dan tyramine, merupakan pusat respons pertahanan banyak tanaman (105).
Amida, bersama-sama dengan fenolik lainnya, diyakini mengurangi kecernaan dinding sel.
Peran ganda tyramine sebagai prekursor untuk BIA dan asam hidroksisinamat amida
biosintesis menunjukkan bahwa keluarga gen TYDC dalam opium poppy mengkodekan TYDC
isoform dengan peran metabolik yang beragam.
Halaman 9
2 April 2001
12: 7
Ulasan Tahunan
AR129-02
37
Dopamin dan 4-hydroxyphenylacetaldehyde dikondensasi oleh norco-
claurine sintase (NCS) untuk menghasilkan alkaloid trihydroxybenzylisoquinoline ( S ) -
norcoclaurine, yang merupakan prekursor utama untuk semua BIA dalam tanaman (Gambar 2)
(158, 159). Karena ketidakmampuan NCS untuk membedakan antara 4-hydroxyphenyl-
asetaldehida dan 3,4-dihidroksifenil asetaldehida, dan tidak spesifik dari
Gambar 2 Reaksi dikatalisis oleh enzim yang terlibat dalam biosintesis alkaloid benzylisoquinoline
tesis untuk gen yang sesuai telah dikloning. TYDC, tyrosine / dopa decar-
boxylase; 6OMT, norcoclaurine 6- O -methyltransferase; 4 OMT, 3 -hydroxy- N -methylcoclaurine
4 - O- metiltiltransferase; OMT II-1, O- metiltransferase II-1; CYP80A1, berbamunine synthase,
CYP80B1, ( S) -N -methylcoclaurine 3 -hydroxylase; BBE, enzim jembatan berberin; SOMT,
scoulerine N -methyltransferase; COR, kodeinon reduktase.
Halaman 10
2 April 2001
12: 7
Ulasan Tahunan
AR129-02
38
FACCHINI
selanjutnya reaksi methyltransferase, pada awalnya dianggap bahwa tetrahy-
droxybenzylisoquinoline alkaloid ( S ) -norlaudanosoline adalah prekursor BIA
(141). Namun, hanya norcoclaurine yang ditemukan terjadi pada tanaman.
( S ) -Norcoclaurine dikonversi menjadi ( S ) -reticuline oleh 6- O- metiltransferasease (49,
147), suatu N- metiltransferase (47), suatu hidroksilase P450 (133), dan 4 - O- metiltil-
transferase (48.147) SAM-dependen 6- O - dan 4 - O- metiltiltransferase
(6OMT dan 4 OMT, masing-masing) telah dimurnikan dari japon Coptis berbudaya
sel ica (147), dan cDNA yang sesuai diisolasi dan dikarakterisasi (114).
Meskipun kedua enzim tersebut memiliki sifat enzim yang mirip, mereka menunjukkan
kekhususan substrat yang berbeda. Selain itu, 6OMT mengikuti "ping-pong bi bi"
mekanisme, sedangkan 4 OMT mengkatalisasi reaksi "dipesan bi bi" (114). Empat
cDNA O- metiltiltransferase homolog (OMT II; 1-4) juga telah diisolasi
dari kultur sel Thalictrum tuberosum yang diobati dengan MeJA (49). Mantan heterolog
tekanan OMT II; 1-4 cDNA menunjukkan bahwa homodimer dan berbagai het
kombinasi erdimeric dari empat isoform menunjukkan spesifisitas substrat yang luas.
The O -methylated substrat termasuk sederhana katekol, phenylpropanoids, dan
berbagai BIA, menunjukkan bahwa beberapa isoform terlibat dalam kedua BIA
dan metabolisme fenilpropanoid. Misalnya, homodimer dari OMT II; 1 ef
ficiently O -methylates ( R, S ) -norcoclaurine (Gambar 2) dan berbagai katekol dan
turunan asam caffeic. Hebatnya, OMT II; 4 berbeda dari OMT II; 1 hanya
satu asam amino, tetapi homodimernya tidak mengkatalisasi metilasi alkaloid.
Baik 6OMT dan 4 OMT dari C. japonica menunjukkan identitas yang relatif rendah (24 dan
35%, masing-masing) ke berbagai isoform katekol OMT II (114). In vivo
kontribusi, jika ada, dari enzim OMT II terhadap biosintesis BIA masih tetap ada
mapan.
Awalnya, hidroksilasi cincin aromatik terlibat dalam konversi ( S ) -
norcoclaurine menjadi ( S ) -reticuline dianggap dikatalisis oleh fenol nonspesifik
oksidase (89). Namun, monooksigenase yang bergantung pada P450 (CYP80B1; Gambar 2)
diisolasi dari Eschscholzia californica (133) dan opium poppy (72, 182) pameran
a K m untuk ( S ) - N -methylcoclaurine 39 kali lipat lebih rendah dari phenolase tersebut; jadi,
CYP80B1 sekarang dikenal untuk mengubah ( S ) - N -metylcoclaurine ke ( S ) -3 -hydroxy- N -
methylcoclaurine. CYP80B1 dikodekan oleh dua hingga tiga gen di E. californica
(133) dan opium poppy (72, 182).
Intermediate dari ( S ) -reticuline pathway juga berfungsi sebagai prekursor
untuk 70270 alkaloid bisbenzylisoquinoline dimeric seperti berbamunine dan
(+) - tubocurarine. Sebuah oksidatif berbamunine yang tergantung fenol-kopling P450
sintase (CYP80A1) telah dimurnikan (160), dan iso- cDNA yang sesuai
lated (81), dari Berberis stolonifera . CYP80A1 memasangkan dua molekul ( R ) - N -
methylcoclaurine atau masing-masing dari ( R ) - dan ( S ) - N -methylcoclaurine oleh tautan eter-
usia untuk membentuk ( R, R ) -guattegaumerine atau ( R, S ) -berbamunine, masing-masing (Gambar 2).
Variasi tambahan dalam struktur alkaloid bisbenzylisoquinoline termasuk fenil
penggantian cincin, jumlah hubungan eter, dan pemilihan stereoseleksi
monomer. CPR juga telah dimurnikan dari opium poppy, dan yang sesuai
cDNA diisolasi dari opium poppy dan E. californica (139). Protein CPR
Halaman 11
2 April 2001
12: 7
Ulasan Tahunan
AR129-02
39
berbagi 69% identitas asam amino dan terjadi sebagai dua isoform pada setiap spesies. Coex-
penekanan E. californica CPR dan CYP80A1 dalam kultur sel serangga menghasilkan
profil produk yang diubah dibandingkan dengan yang diperoleh dari ekspresi CYP80A1
tanpa adanya reduktase tanaman.
( S ) -Reticuline adalah perantara titik cabang dalam biosintesis banyak BIA.
Banyak penelitian telah berfokus pada jalur cabang yang mengarah ke benzophenanthridine
alkaloid, seperti sanguinarine dan makarpine (85); alkaloid protoberberin, seperti
sebagai berberin dan palmatin (66); dan alkaloid morfinan, seperti morfin dan
kodein (37). Sebagian besar enzim yang terlibat dalam jalur ini telah diisolasi,
banyak yang telah dimurnikan, dan cDNA yang sesuai untuk tiga telah dikloning.
Langkah pertama yang dilakukan dalam benzophenanthridine, protoberberine, dan protopine
biosintesis alkaloid melibatkan konversi gugus N- metil dari ( S ) -reticuline
ke dalam bagian jembatan metilen ( S ) -kalsin oleh enzim jembatan berberin
(BBE; Gambar 2). Konversi ini sifatnya unik dan tidak dapat dicapai menggunakan
metode kimia sintetis. Enzim itu dimurnikan dari Berberis beaniana
(161), cDNA yang sesuai diklon dari E. californica (34) dan B.
gen stolonifera (21), dan BBE1 telah diisolasi dari opium poppy (41) dan
E. californica (68). Reaksi kopling fenol dikatalisis oleh heterolog ex-
BBE yang ditekan (82) baru-baru ini diidentifikasi sebagai mekanisme ionik dengan metilen
ion iminium sebagai zat antara reaksi (83).
( S ) -Scoulerine dapat dikonversi menjadi ( S ) -stylopine oleh dua oxi-
Dase, ( S ) -chelanthifoline synthase (CFS) dan ( S ) -stylopine synthase (SPS), yang
menghasilkan pembentukan dua kelompok methylenedioxy (9, 10). ( S ) -Stylopine adalah N -
dimetilasi oleh methyltransferase khusus substrat, tetrahydroprotoberberine-
cis-N- metiltransferase, yang telah diisolasi dari E. californica dan
Sel Corydalis vaginans (145), dan dimurnikan dari kultur Sanguinaria canadensis
(122). Langkah N- metilasi diikuti oleh monoksi-ketergantungan P450 ketiga
nase, ( S ) - cis-N -methylstylopine 14-hydroxylase (MSH), yang mengkatalisis
mation protopine dan telah diisolasi dari kultur C. vaginans (143). Menipu-
versi protopine ke sanguinarine melibatkan hidroksilasi oleh P450- lain
Enzim dependen, protopine-6-hydroxylase (PPH), diikuti oleh spontan
penataan ulang intramolekul untuk menghasilkan dihidrosanguinarin, alkaloid pertama dengan
inti benzophenanthridine (171). Dihydrobenzophenanthridine oxidase
(DBOX), enzim sitosolik yang awalnya diisolasi dari kultur E. californica (154)
dan baru-baru ini dimurnikan dari kultur S. canadensis (4), mengkatalisasi oksidasi
dari dihydrosanguinarine ke sanguinarine. Root eksudat dari banyak Papaver-
Spesies aceae, seperti S. canadensis dan E. californica , sangat berwarna merah
dengan akumulasi sanguinarine dan benzophenanthridine lainnya
alkaloid. Dua enzim baru, sebuah monooxygenase P450-dependen dihydrocheliru-
bine-12-hydroxylase dan 12-hydroxydihydrochelirubine- yang bergantung pada SAM
12- O -methyltransferase, telah ditemukan di rongga Thalictrum yang ditimbulkan ragi
budaya garicum (76). Enzim-enzim ini mengkatalisasi dua langkah terakhir dalam biosintesis
tesis makarpin, alkaloid benzylisoquinoline paling teroksidasi ditemukan
di alam.
Halaman 12
2 April 2001
12: 7
Ulasan Tahunan
AR129-02
40
FACCHINI
Pada beberapa tanaman, terutama di antara Berberidaceae dan Ranunculaceae, ( S ) -
scoulerine dimetilasi, daripada dioksidasi, untuk menghasilkan ( S ) -tetrahydrocolumbamine
(Gambar 2). Reaksi dikatalisis oleh enzim yang bergantung pada SAM, scoulerine-
9- O- metiltiltransferase (SOMT), yang telah dimurnikan dari sel C. japonica
(146) dan cDNA yang sesuai diisolasi (170). Ekspresi cDNA SOMT
pada E. coli menghasilkan protein dengan berat molekul lebih tinggi daripada enzim asli
(51); dengan demikian, SOMT mungkin diproses pasca-translasi. Meskipun hydropho-
bic N-terminal SOMT adalah karakteristik dari peptida sinyal, enzim
telah dilaporkan terjadi di sitosol (116) dan di lumen spesifik alkaloid
vesikel (52). Langkah selanjutnya dan langkah kedua hingga terakhir dalam biosintesis berberin
melibatkan pembentukan jembatan methylenedioxy (52, 66). Aktivitas enzim
awalnya dianggap mengkatalisasi reaksi ini sebenarnya adalah peroksidase nonspesifik
demetilasi yang dimediasi. Enzim kanadin sintase (CDS) yang bergantung pada P450
terdeteksi pada anggota genus Thalictrum dan Coptis dan ditunjukkan ke katrol
alyze pembentukan jembatan methylenedioxy di ( S ) -tetrahydrocolumbamine, tetapi tidak di
alkaloid columbamine kuaterner (144); dengan demikian, biosintesis berberin tidak bisa
lanjutkan melalui columbamine seperti yang pernah diusulkan. ( S ) -Canadine, juga dikenal sebagai ( S ) -
tetrahydroberberine, dioksidasi menjadi berberin baik oleh ( S ) -canadine oxidase (CDO)
atau ( S ) -tetrahydroprotoberberine oxidase (STOX; 3). Meskipun enzim ini
meskipun reaksi yang sama, sifat biokimia mereka sangat berbeda. STOX
dari Berberis adalah protein flavinilasi dengan kisaran substrat yang luas, sedangkan CDO
dari Coptis dan Thalictrum mengandung zat besi dan bukan flavin, hasil melalui berbeda
mekanisme, dan secara istimewa menerima ( S ) -canadine (66).
Dalam beberapa spesies dari genus Papaver , konversi ( S ) -reticuline ke ( R ) -
enantiomer mewakili langkah komitmen pertama dalam biosintesis alkaloid morphinan.
Enzim sitosol 1,2-dehydroreticuline reduktase yang tergantung NADPH, yang
mengkatalisis pengurangan stereospesifik 1,2-dehydroreticuline menjadi ( R ) -reticuline dan
hanya ditemukan pada tanaman yang mensintesis alkaloid morphinan, telah dimurnikan dari
opium poppy (25). Kopling fenol karbon-karbon intramolekul berikutnya
( R ) -reticuline oleh enzim salutaridine synthase (STS) yang tergantung pada P450
dalam pembentukan salutaridine (56). Enzim sitosol, salutaridine: NADPH
7-oksidoreduktase (SOR), hanya ditemukan dalam opium poppy dan P. bracteatum , berkurang
salutaridine to (7 S ) -salutaridinol (57). Transformasi (7 S ) -salutaridinol menjadi
morphinan alkaloid thebaine melibatkan penutupan jembatan oksida
C-4 dan C-5 oleh enzim asetil koenzim A: salutaridinol-7- O -acetyltransferase
(SAT), yang telah dimurnikan dari kultur sel opium poppy (87). SAT adalah
juga terdeteksi pada P. bracteatum , tetapi tidak pada spesies yang tidak menghasilkan morphinan
alkaloid.
Dalam langkah-langkah tersisa dari jalur utama menuju morfin, ayah adalah
dikonversi oleh pembelahan enol-eter menjadi codeinone, yang kemudian dikurangi
ke kodein. Pada akhirnya, kodein didemetilasi untuk menghasilkan morfin. Sitosolik
enzyme codeinone reductase (COR), yang mengkatalisis NADPH-dependent
pengurangan (-) - codeinone menjadi (-) - codeine, baru-baru ini telah dimurnikan (88) dan
cDNA yang sesuai diisolasi (173) dari opium poppy (Gambar 2). Empat cDNA
Halaman 13
2 April 2001
12: 7
Ulasan Tahunan
AR129-02
41
pengkodean isoform COR yang berbeda dikloning dan diekspresikan dalam E. coli . Itu
empat isoform adalah anggota keluarga setidaknya enam alel, dan menunjukkan
sifat fisik dan katalitik. COR berbagi 53% identitas asam amino dengan
6 -deoxychalcone synthase dari kedelai, lebih lanjut mendukung hubungan evolusi
antara enzim fenilpropanoid dan biosintesis alkaloid (49.173).
Baik COR dan 6 -deoxychalcone synthase adalah anggota dari aldo / keto reductase
keluarga oksidoreduktase NADPH-dependen ditemukan dalam beberapa metabolisme primer
jalur.
Alkaloid dan Nikotin Tropana
Alkaloid tropana (TPA) terjadi terutama di Solanaceae dan termasuk anti-
obat kolinergik atropin, hyoscyamine, dan skopolamin, dan narkotik
kokain anestesi ical. Meskipun nikotin bukan anggota kelas tropan,
yang N -methyl- 1 kation -pyrrolinium terlibat dalam biosintesis TPA juga di-
termediate di jalur nikotin. Pembentukan kation N- Metil- 1- pirolinium
dimulai dengan dekarboksilasi ornithine dan / atau arginine oleh ornithine decar-
boxylase (ODC; Gambar 3) dan arginine decarboxylase (ADC), masing-masing. Ini
Enzim terlibat dalam pembentukan putresin baik secara langsung oleh ODC, atau via
agmatine dan N -carbamoylputrescine dalam kasus ADC; demikian, langkah awal dari
TPA dan biosintesis nikotin juga umum terjadi pada metabolisme poliamina. ODC
terjadi pada semua organisme hidup, tetapi ADC tidak ditemukan pada mamalia dan banyak yang lebih rendah
Gambar 3 Reaksi dikatalisis oleh enzim yang terlibat dalam biosintesis alkaloid tropana
dimana gen yang sesuai telah dikloning. ODC, ornithine decarboxylase; PMT,
putresin N -methyltransferase; TR-I, tropinone reductase-I; TR-II, tropinone reductase-II;
H6H, hyoscyamine 6β-hydroxylase.
Halaman 14
2 April 2001
12: 7
Ulasan Tahunan
AR129-02
42
FACCHINI
eukariota. ODD cDNA yang diisolasi dari Datura stramonium (112) ditunjukkan
mirip dengan ODC eukariotik lainnya, dan keduanya ADC prokariotik dan eukariotik.
Dalam D. stramonium , ODC dikodekan oleh keluarga gen kecil dan mRNA ODC
paling banyak di akar dibandingkan dengan batang atau daun. CDNA ADC telah
diisolasi dari oat (11) dan tomat (136). Meskipun ada dua rute ke
trescine, arginine telah disarankan untuk memasok sebagian besar putresin untuk alkaloid
biosintesis (65).
Langkah komitmen pertama dalam TPA dan biosintesis nikotin dikatalisis oleh
putrescine N -methyltransferase yang tergantung pada SAM (PMT; Gambar 3). PMT
cDNA yang diisolasi dari tembakau (71) menunjukkan identitas kuat untuk spermidine sintase
dari manusia (73%), tikus (70%), dan E. coli (58%). Homologi seperti itu adalah
konsisten dengan model situs aktif yang sangat mirip yang ditentukan untuk sebagian
PMT murni dari Hyoscyamus albus dan spermidine synthase (70). Subse-
secara cepat, N — metiltputresin dideoksidasi secara oksidatif oleh oksida diamina menjadi
4-aminobutanol, yang mengalami siklisasi spontan untuk membentuk reaktif
N- metil- 1 -pirolrolinium (66). The N -methyl- 1 kation -pyrrolinium adalah
dianggap berkondensasi dengan asam asetoasetat untuk menghasilkan hygrine sebagai prekursor
cincin tropane, atau dengan asam nikotinat untuk membentuk nikotin, meskipun enzimatik
langkah-langkah ini tidak diketahui.
Tropinone terletak di titik cabang di jalur TPA dan merupakan
termediate dengan cincin tropane. Dua dehidrogenase terkait, tropinone reductase
I (TR-I) dan tropinone reductase II (TR-II), mengurangi kelompok 3-keto dari tropinone
untuk kelompok 3α- dan 3β- dari alkamines stereospecific tropine dan -tropine,
masing-masing (Gambar 3). klon cDNA untuk TR-I dan TR-II diisolasi dari D.
stramonium dan diekspresikan dalam E. coli (118). Protein menunjukkan asam amino 64%
identitas dan mirip dengan enzim dalam rantai pendek, dehidrogenase bukan logam
keluarga. Gen yang mengkode TR diidentifikasi pada spesies penghasil TPA lain, tetapi tidak
dalam tembakau, yang mengakumulasi nikotin daripada TPA. Pertukaran berbagai macam
domain TR-I dan TR-II dilakukan untuk membuat serangkaian enzim chimeric
yang bisa diekspresikan dalam E. coli (119). Domain C-terminal sekitar 120 amino
asam ditunjukkan untuk menentukan stereo dan substrat-spesifik masing-masing enzim.
Hasil ini menunjukkan bahwa stereospecificity dari TR ditentukan oleh orientasi
tion dari tropinone di situs yang mengikat substrat, terutama terdiri dari terminal-C
domain. Wilayah N-terminal merupakan situs pengikatan NADPH yang diperlukan untuk
dehidrogenase rantai pendek. Dasar untuk stereospesifikasi reaksi TR-
I dan TR-II ditentukan dari struktur kristal kedua enzim di
Resolusi 2,4- dan 2,3- respectively, masing-masing (121). Studi-studi ini menunjukkan bahwa lipatan
ing dari dua enzim hampir identik dan bahwa situs pengikatan NADPH dan
posisi residu situs aktif dilestarikan. Model struktural terungkap
peran asam amino yang bermuatan di antara residu hidrofobik yang dominan
yang terdiri dari situs yang mengikat media dalam menentukan orientasi pengikatan
tropinon.
Hyoscyamine diproduksi oleh kondensasi tropin dan fenilalanin-
berasal asam tropik menengah. Hyoscyamine dapat dikonversi menjadi epoksida-nya
Halaman 15
2 April 2001
12: 7
Ulasan Tahunan
AR129-02
43
skopolamin dengan 6-hidroksilasi cincin tropan diikuti oleh intramolekul
pembentukan epoksida melalui pengangkatan 7-hidrogen (Gambar 3). Kloning dan het-
Ekspresi erologous dari cDNA H6H dari Hyoscyamus niger menunjukkan keduanya
Reaksi dikatalisis oleh dioksigenase 2-oxoglutarate-dependen, hyoscyamine
6β-hydroxylase (H6H; 101).
Alkaloid purin
Alkaloid purin seperti kafein, theobromine, dan theacrine tersebar luas
di kerajaan tanaman. Studi metabolisme terbaru dalam teh dan kopi telah dijelaskan
biosintesis kafein. Rute utama dimulai dengan xanthosine dan dilanjutkan
melalui tiga N- metilasi melalui 7-methylxanthosine, 7-methylxanthine, dan
theobromine (5, 6, 169), meskipun sejumlah jalur minor juga telah disarankan
Gested (78, 152). Jalur ini mengandung tiga N- metiltransferase N yang bergantung pada SAM
kegiatan ditemukan pada daun teh muda, tetapi tidak ada pada daun berkembang sempurna (50).
Persiapan enzim yang dimurnikan secara parsial menunjukkan tiga aktivitas, menunjukkan
bahwa langkah-langkah N- metiltransferase dalam biosintesis kafein dikatalisis oleh
satu enzim, atau dengan banyak enzim dengan sifat yang serupa (78). Bagaimana-
pernah, N- metiltransferase dimurnikan dari endosperma dan daun kopi
hanya aktif terhadap 7-methylxanthine dan theobromine (102). Apalagi, sebuah
N- metiltransferase yang mengkatalisasi metilasi metilxantin dan
nated caffeine synthase (CS) dimurnikan dari daun teh muda (79). CS mengkatalisasi
dua metilasi berturut-turut yang terlibat dalam konversi 7-metilxantin
untuk kafein, tetapi tidak aktif terhadap xanthosine, menunjukkan bahwa metana pertama
tion dikatalisis oleh enzim yang berbeda. CSNA CS baru-baru ini telah diisolasi
dan diekspresikan dalam E. coli (H Ashihara, komunikasi pribadi). Diprediksi
urutan asam amino menunjukkan bahwa CS berbagi homologi yang lebih besar untuk asam salisilat O -
methyltransferase daripada N- , O -, dan S- metiltransferase lainnya, menunjukkan hal itu
CS milik kelas methyltransferase baru.
Kompartemen Subseluler dari Alkaloid
Enzim Biosintetik
Banyak enzim biosintesis alkaloid terjadi di kompartemen subseluler lainnya
dari sitosol. Kompartemen enzim ini secara efektif mengasingkan
alkaloid beracun dan zat antara biosintesisnya jauh dari sitosol. Itu
perdagangan subseluler perantara perantara juga menciptakan tingkat penting
regulasi metabolisme yang tidak dapat terjadi jika enzim dan substrat berdifusi
bebas di sitosol. Pemahaman tentang kompartemen subseluler
jalur alkaloid akan mengungkapkan apakah berbagai karakteristik enzim diamati pada
vitro, seperti penghambatan mereka oleh perantara jalur, merupakan peraturan yang benar
fungsi in vivo.
Enzim yang terlibat dalam biosintesis vindoline telah dilokalisasi ke tidak sedikit
dari lima kompartemen subseluler. Konversi triptofan menjadi trypamine
oleh TDC terjadi di sitosol (29.162). Karena STR terlokalisasi di vakuola,
Halaman 16
2 April 2001
12: 7
Ulasan Tahunan
AR129-02
44
FACCHINI
tryptamine harus diangkut melintasi tonoplast sebelum dipasangkan dengan secologanin
dapat terjadi (103). G10H, yang mengkatalisasi langkah awal dalam secologanin biosynthe-
sis, dikaitkan dengan membran provacuolar (94). SGD, enzim yang mengkatalisasi
deglukosilasi strikosidin, disarankan untuk setidaknya sebagian terikat
ke wajah eksternal tonoplast (162). Namun, studi lokalisasi in vivo
menunjukkan bahwa SGD dikaitkan dengan retikulum endoplasma (ER; 55). P450-
dependen monooxygenase T16H, yang terlibat dalam hidroksilasi C-16
tabersonine, juga terbukti berhubungan dengan ER (163). NMT mengkatalisasi
langkah ketiga hingga terakhir dalam biosintesis vindoline dan ditemukan terkait
dengan membran tilakoid (29, 33). Namun, pengembangan kloroplas tampaknya
tidak diperlukan karena aktivitas NMT juga terdeteksi pada bibit yang diisolasi.
Dua langkah terakhir dalam biosintesis vindoline, dikatalisis oleh D4H dan DAT, terjadi
dalam sitosol (23,29). Vindoline kemudian harus disalurkan kembali ke vakuola
di mana peroksidase nonspesifik diperlukan untuk menyambungkan vindoline ke catharanthine
dilokalisasi (157). Secara keseluruhan, kompartemen yang rumit dari jalur TIA
menyarankan perdagangan subselular yang luas dari perantara jalur. Meskipun
serapan vakuolar dari beberapa TIA, seperti ajmalisin dan serpentin, telah terjadi
mempelajari (15, 108), mekanisme yang terlibat dalam penyalur jalur perantara
untuk kompartemen subseluler tertentu kurang dipahami.
Beberapa enzim biosintetik BIA juga terjadi di lokasi subselular selain
sitosol. Dari lima enzim noncytosolic yang terlibat dalam konversi ( S ) -
reticuline menjadi dihydrosanguinarine, empat (BBE, CFS, SPS, dan MSH) terlokalisasi
ke fraksi membran dengan kepadatan spesifik δ = 1,14 g mL
−1
(3, 9, 10, 143),
sementara satu (PPH) dikaitkan dengan fraksi membran dengan kepadatan (δ =
1,11 g mL
−1
), konsisten dengan ER (171). Terkait dengan membran
Enzim STS, yang terlibat dalam biosintesis morfin, juga terlokalisasi pada a
fraksi mikrosomal dengan kepadatan δ = 1,14 g mL
−1
(56) Dengan pengecualian
BBE, enzim noncytosolic ini bergantung pada P450 (14); jadi, mereka harus
protein membran-terikat dari ER, atau kompartemen yang diturunkan ER.
BBE tampaknya berada sebagai protein larut dalam lumen sub-diskrit terpisah.
kompartemen seluler (3, 52). Peptida sinyal terminal-N yang diduga terdeteksi di
urutan asam amino yang disimpulkan BBE dari E. californica (34). Larut lainnya
enzim yang terlibat dalam biosintesis berberin juga dikaitkan dengan
dedak dengan kepadatan spesifik δ = 1,14 g mL
−1
, termasuk STOX (3), CDO (52), dan
columbamine O -methyltransferase (140). Asosiasi enzim-enzim ini dengan a
fraksi membran dengan kepadatan lebih besar daripada ER telah menyebabkan spekulasi yang berbeda
"Vesikel sintesis alkaloid" ditemukan pada tipe sel tertentu (3). Vesikel dengan
kepadatan δ = 1,14 g mL
−1
dan mengandung berbagai alkaloid dan biosintesis
Enzim telah divisualisasikan dalam kompartemen seperti vakuola (3). Bahkan,
BBE yang baru lahir ternyata mengandung domain penargetan yang terdiri dari terminal-N
sinyal peptida dan penentu penyortiran vakuolar yang berdekatan (D Bird & P Facchini,
hasil yang tidak dipublikasikan). Menggunakan protein fluorescent hijau sebagai reporter, BBE adalah
terbukti ditargetkan ke lumen ER melalui peptida sinyal. Selanjutnya,
protein diangkut dari UGD, mungkin sebagai komponen lumenal spesifik
Halaman 17
2 April 2001
12: 7
Ulasan Tahunan
AR129-02
45
vesikel, ke vakuola. BBE kemungkinan tidak aktif oleh kondisi asam di
vakuola, menunjukkan bahwa sintesis alkaloid terjadi sebelum enzim melintasi
membran tonoplast. Akumulasi vakuolar dari sanguinarine menunjukkan hal itu
seluruh isi vesikel pengangkut, termasuk BBE dan berbagai alkaloid
perantara, mungkin ditranslokasi langsung dari UGD ke vakuola.
Contoh lain dari kompartemen subselular novel melibatkan biosin-
tesis alkaloid kuinolizidin turunan lisin, yang terjadi pada mesofil
kloroplas dari legum seperti lupin (179). Baru-baru ini, lokasi biokimia-
zasiasi dua asiltransferase yang mengkatalisis dua asilasi terakhir dari (+) - p -
coumaroylepilupinine dan (-) - 13α-tigloyloxymultifluorine menunjukkan bahwa satu
zyme terjadi di sitoplasma, sedangkan yang lain berada di mitokondria
Lupinus albus (166). Dalam sel hewan, asil donor tigloyl-CoA berasal
isoleusin dalam mitokondria, mungkin menjelaskan lokaliza mitokondria
tion asiltransferase terminal pada tanaman. Meskipun inti quinolizidine
tampaknya disintesis dalam kloroplas, modifikasi selanjutnya dapat terjadi
hanya setelah intermediet alkaloid diangkut ke sitosol dan mitokondria.
Pada akhirnya, alkaloid quinolizidine diperkirakan menumpuk di vakuola lupin
sel epidermis, di mana sifat defensifnya paling efektif (178).
PERATURAN GEN BIOSYNTHETIC ALKALOID
Regulasi Pengembangan dan Lokalisasi Jaringan-Khusus
Jalur biosintesis alkaloid berada di bawah regulasi perkembangan yang ketat pada tanaman.
Fakta ini telah sangat membatasi eksploitasi sel-sel tanaman berbudaya untuk
penurunan metabolisme yang berharga. Sebagai contoh, kultur sel C. roseus menumpuk
tabersonine dan catharanthine, tetapi bukan vindoline atau vinblastine (108). Demikian pula,
kultur sel poppy opium dapat diinduksi untuk mengakumulasi sanguinarine, tetapi tidak
mensintesis morfin (37). Ketidakmampuan kultur sel yang berdiferensiasi untuk menghasilkan
vindoline atau morfin menunjukkan bahwa biosintesis banyak alkaloid memerlukan
diferensiasi jenis sel tertentu.
Regulasi perkembangan TDC, STR, dan empat enzim yang terlibat dalam
biosintesis vindoline (T16H, NMT, D4H, dan DAT) telah dipelajari dalam
detail yang masuk akal. Enzim ini dikendalikan secara perkembangan dalam pengembangan
Bibit C. roseus , dan beberapa diatur lebih lanjut oleh cahaya (27,30,163). Untuk
contohnya, bibit C. roseus yang ditanam di tempat gelap menumpuk taber
sonine dan jumlah yang lebih kecil dari empat perantara jalur vindoline lainnya (8).
Pemindahan bibit yang diisolasi ke cahaya menyebabkan pergantian tabersonine dan
zat antara lain ke vindoline, menunjukkan bahwa beberapa enzim dalam jalurnya adalah
cahaya diatur. Aktivasi cahaya yang ketat dari T16H dalam C. roseus seedlings (163)
dan kultur sel (151) terbukti diatur secara transkripsi. Kegiatan NMT
meningkat ∼30% ketika bibit C. roseus teriolasi terpapar cahaya (30).
Aktivitas D4H juga diinduksi cahaya (23), dan gen D4H telah terbukti
berada di bawah regulasi perkembangan bertingkat dan dimediasi cahaya (175, 174). Untuk
Halaman 18
2 April 2001
12: 7
Ulasan Tahunan
AR129-02
46
FACCHINI
Contohnya, aktivitas D4H rendah pada bibit yang diisolasi meskipun banyak D4H
transkrip. Paparan biji yang teriolasi terhadap cahaya menyebabkan peningkatan D4H yang cepat
aktivitas tanpa peningkatan level transkrip (174). Meski kehadirannya saja
satu gen D4H dalam C. roseus , beberapa isoform D4H terdeteksi secara etiolasi dan
bibit yang ditanam, menunjukkan bahwa cahaya memodulasi regulasi perkembangan
D4H di tingkat posttranskripsi (175). Aktivitas DAT juga ditampilkan
untuk meningkatkan sekitar sepuluh kali lipat dalam menanggapi cahaya, tetapi induksi terjadi
terutama di tingkat transkripsional (30, 164). Phytochrome jelas terlibat di dalamnya
aktivasi biosintesis vindoline oleh cahaya (1) dan telah terbukti mengontrol
ekspresi gen D4H (175).
TDC dan STR paling banyak terdapat pada akar C. roseus , tetapi juga terjadi pada foto-
organ sintetis (132). Sebaliknya, T16H (163), D4H (174), dan DAT (164) adalah
terbatas pada daun muda dan organ pucuk lainnya tempat biosintesis vindoline
terjadi. Hibridisasi in situ dan lokalisasi imunokytokimia miliki
menunjukkan bahwa TDC dan STR terlokalisasi pada epidermis batang, daun, dan bunga
tunas (32, 165). Pada akar, enzim ini terjadi dalam sel di dekat meristem apikal. Di
Sebaliknya, D4H dan DAT dikaitkan dengan laticifer dan idioblast shoot or-
Gans, tetapi tidak ada dari akar. Laticifer dan idioblast didistribusikan di seluruh
mesofil dalam daun C. roseus dan sering beberapa lapisan sel dari
kulit ari; dengan demikian, biosintesis vindoline melibatkan setidaknya dua jenis sel yang berbeda dan
membutuhkan translokasi antar sel dari jalur perantara. Diferensial
spesifisitas jaringan biosintesis strikosidin dan langkah-langkah akhir dari vindo-
jalur jalur sebagian menjelaskan mengapa vindoline tidak diproduksi secara terpisah
Kultur sel C. roseus .
Translokasi perantara jalur juga tampaknya terjadi di TPA biosynthe-
sis (32). TPA dan nikotin biasanya diproduksi di dekat puncak akar, tetapi
terlambat dalam vakuola daun dan akar (178). Lokalisasi histokimia dari
β-glucuronidase (GUS) aktivitas di transgenik belladonna Atropa tanaman mengekspresikan
sebuah PMT promotor-GUS fusion menunjukkan bahwa PMT ekspresi hanya terjadi di akar
pericycle (167). Immunolocalization (64) dan studi hibridisasi in situ (168)
juga mendemonstrasikan ekspresi H6H khusus periksel. Sebaliknya, TR-I adalah
immunolocalized ke endodermis dan korteks luar, sedangkan TR-II ditemukan pada
pericycle, endodermis, dan korteks luar (117). Serupa, tetapi tidak sepenuhnya teridentifikasi
Tical, pola ekspresi TR-I dan TR-II fusi promotor- GUS diamati
dalam transgenik H. niger (120). Lokalisasi TR-I ke tipe sel yang berbeda dari
PMT dan H6H menunjukkan bahwa perantara antara PMT dan TR-I bergerak
pericycle ke endodermis dan perantara antara TR-I dan H6H
bergerak kembali ke pericycle. Pelokalan PMT di pericycle memungkinkan
akses yang cukup ke prekursor putresin, ornithine, dan arginin diturunkan dari
floem. Demikian pula, skopolamin yang diproduksi dalam pericycle dapat dengan mudah ditranslokasi.
dikurung ke daun melalui xilem yang berdekatan. Lokalisasi histokimia GUS
aktivitas pada akar transgenik H. niger , A. belladonna , dan tembakau yang mengekspresikan suatu
Fusi promoter-GUS H6H menunjukkan bahwa ekspresi H6H khusus per- sepeda
dikendalikan oleh mekanisme yang khusus untuk pabrik penghasil skopolamin (77).
Halaman 19
2 April 2001
12: 7
Ulasan Tahunan
AR129-02
47
Lokalisasi spesifik jaringan TYDC telah ditunjukkan dalam opium
poppy (38). MRNA TYDC paling melimpah dalam metafloem opium poppy
batang dan akar, dan hanya ditemukan pada tingkat rendah dalam mengembangkan kapsul biji (39).
Metafloem terkait erat dengan latisifer dalam opium poppy (37); dengan demikian, deteksi
tion mRNA TYDC dalam metafloem mendukung asosiasi opium poppy
BIA biosintesis dengan sel-sel yang secara ontogenik terkait dengan latisifer. NCS, yang
alyzes langkah komitmen pertama dalam BIA biosintesis, juga paling aktif di root dan
batang opium poppy (N Samanani & P Facchini, hasil yang tidak dipublikasikan). CYP80B1
transkrip paling banyak terdapat di batang, diikuti oleh akar, daun, dan jaringan bunga
(72.182). Kegiatan STS dan SOR, yang mengubah ( R ) -reticuline menjadi salu-
taridinol, juga banyak terjadi di akar dan pucuk (56,57). Sebaliknya, COR,
yang mengkatalisasi langkah kedua dari belakang dalam biosintesis morfin, hadir melalui
keluar tanaman, tetapi paling melimpah di organ pucuk (72, 173). Hasil ini menyarankan
bahwa perantara jalur ditranslasikan antara akar dan berbagai menembak
organ. Awalnya, biosintesis morfin diduga terjadi pada latisifer (37).
Namun, baik STS maupun SOR tidak dapat dideteksi dalam fraksi lateks segar dari
opium poppy capsules (56, 57), menunjukkan bahwa laticifer adalah situs dari alkaloid ac-
akumulasi, tetapi bukan sintesis alkaloid. Selain itu, beberapa enzim (STS, SOR,
SAT, dan COR) telah dideteksi dalam kultur sel opium poppy yang berdiferensiasi
meskipun tidak ada peserta didik (56, 57, 87, 88).
Akumulasi spesifik sanguinarine dalam opium poppy (39) menunjukkan
bahwa enzim yang terlibat dalam biosintesisnya hanya terjadi pada akar. Namun demikian
tingkat substansial dari BBE mRNA (41) dan aktivitas enzim (161) dalam tunas atau-
Gans menyarankan bahwa perantara jalur yang terlibat dalam biosintesis sanguinarine adalah
dipindahkan dari pucuk ke akar. Demikian pula, meskipun berberin menumpuk di
akar utama Coptis japonica , rendahnya tingkat aktivitas SOMT menunjukkan hal itu
akar utama bukanlah situs utama biosintesis berberin (51). Memang, itu
kadar SOMT tertinggi ditemukan pada akar dan batang lateral.
Transduksi Sinyal dan Ekspresi Inducible
Perlindungan dari stres lingkungan adalah peran utama untuk metabolit sekunder
pada tanaman; dengan demikian, biosintesis mereka sering disebabkan oleh faktor-faktor seperti patogen
tantangan dan melukai (178). Akumulasi banyak alkaloid diinduksi oleh
pemilih jamur, ion logam berat, radiasi UV, dan syok osmotik (66, 85, 108).
Awalnya, penelitian difokuskan pada induksi biosintesis alkaloid di elisitor-
kultur sel yang diobati. Baru-baru ini, alat molekuler telah digunakan untuk menyelidiki
regulasi jalur alkaloid yang diinduksi.
Pengobatan kultur sel C. roseus dengan elisitor jamur meningkatkan jumlah
mulasi tryptamine dan alkaloid seperti catharanthine (35). Pemilih jamur
cepat menginduksi ekspresi gen TDC, STR , dan SGD (55, 132), menunjukkan bahwa
jalur transduksi sinyal yang dimediasi-elisitor terdiri dari beberapa langkah yang relatif
mengaktifkan faktor transkripsi yang sudah ada sebelumnya. Pemilih jamur juga menginduksi jasmonic
biosintesis asam (JA) dalam kultur sel C. roseus (110). JA berfungsi sebagai messenger
Halaman 20
2 April 2001
12: 7
Ulasan Tahunan
AR129-02
48
FACCHINI
dalam aktivasi metabolisme sekunder dan mekanisme pertahanan lainnya oleh en-
sinyal vironmental (61, 115). Pengobatan bibit C. roseus dengan metil jas-
monate (MeJA) menyebabkan peningkatan level aktivitas TDC, STR, D4H, dan DAT
meningkatkan akumulasi vindoline (2). Level transkrip TDC dan STR adalah
juga diinduksi dalam kultur sel C. roseus oleh MeJA atau prekursor JA α-linolenat
asam (110). Suatu penghambat biosintesis JA, asam diethyldithiocarbamic, tersumbat
pembentukan JA yang diinduksi oleh pemilih dan aktivasi TDC dan STR. Lebih-
lebih dari itu, biosintesis JA yang diinduksi oleh pemilih dan ekspresi TDC dan STR yang diinduksi MeJA
diblokir oleh protein kinase inhibitor K-252a, menunjukkan keterlibatan
fosforilasi protein dalam jalur transduksi. Induksi yang dimediasi oleh JA
tion dari TDC dan D4H dalam C. roseus semai terbukti melibatkan transkripsional
dan kontrol posttranslasional (176). Misalnya, pengobatan MeJA mengaktifkan TDC
ekspresi gen dan tampaknya meningkatkan stabilitas protein TDC, tetapi ternyata
tidak menghasilkan aktivitas TDC yang lebih tinggi pada bibit yang tumbuh terang dan gelap. Demikian pula,
MeJA eksogen menghasilkan aktivitas D4H dan kadar protein yang lebih tinggi, tetapi hanya pada
bibit yang ditanam ringan.
Diperlukan jalur octadecanoid fungsional JA untuk biosintesis TIA
tesis oleh sel C. roseus dikultur dalam medium auksin-kelaparan (53). Auksin terhambat
Akumulasi TIA dan mengurangi transkripsi TDC (58), tetapi biosintesis alkaloid
dapat diinduksi dengan mentransfer sel ke media bebas auksin. Eksogen
MeJA mengembalikan kemampuan sel yang tumbuh di hadapan auksin untuk menghasilkan
kaloids (53). Dalam sel yang dikultur dalam media bebas auksin, pengobatan MeJA atau JA disebabkan
peningkatan lebih lanjut dalam akumulasi alkaloid, sedangkan produksi alkaloid kembali
berkurang dalam sel auksin-kelaparan yang diobati dengan inhibitor jalur octadecanoid. Ini
hasil menunjukkan bahwa JA diproduksi sebagai tanggapan terhadap penipisan auksin dan fungsi dalam
mengkoordinasikan peristiwa biokimia yang mengarah pada biosintesis alkaloid. Meskipun JA
jelas terlibat dalam menghubungkan sinyal fisiologis dan lingkungan dengan alkaloid
biosintesis, pengobatan JA pada bibit yang diisolasi tidak meningkatkan aktivitas TDC,
juga tidak bisa menggantikan persyaratan cahaya untuk ekspresi D4H (176). JA tampaknya
memodulasi kejadian dalam biosintesis TIA yang sudah di bawah kendali peraturan lainnya
mekanisme.
Kerusakan daun yang disebabkan oleh herbivora meningkatkan kadar JA dan nikotin di Nicotiana
akar sylvestris (7). MeJA eksogen juga menginduksi produksi nikotin di akar,
menunjukkan bahwa fungsi JA dalam mentransfer sinyal kerusakan dari pemotretan
ke akar. MeJA juga menginduksi ODC, PMT, dan S- adenosylmethionine synthase
(SAMS) tingkat transkrip, dan akumulasi putresin, N- metilputresin,
dan nikotin dalam kultur sel tembakau (74). Namun, induksi dan SAMS
Ekspresi gen PMT oleh MeJA diblokir oleh cycloheximide, sedangkan ODC
ekspresi tidak, menunjukkan bahwa berbagai mekanisme pengaturan terlibat
dalam kontrol yang dimediasi MeJA terhadap gen biosintesis nikotin.
Kultur sel dari banyak spesies Papaveraceae menumpuk benzophenanthridine
alkaloid, seperti makarpin dan / atau sanguinarine, sebagai respons terhadap pengobatan dengan
pemilih jamur (36.95.153). Secara umum, biosintesis terkait membran
Enzim diinduksi oleh pemilih, sedangkan sebagian besar enzim sitosol tidak (14).
Halaman 21
2 April 2001
12: 7
Ulasan Tahunan
AR129-02
49
Beberapa anggota keluarga gen TYDC diekspresikan dengan cepat dan sementara
dalam kultur sel opium dalam menanggapi pengobatan elisitor (40, 42). CYP80B1
tingkat transkrip diinduksi lebih dari 20 kali lipat pada E. californica yang diobati dengan MeJA
sel (133) dan sel opium poppy diobati elicitor (72, 182). BBE juga
diaktifkan secara transkripsi dalam sel E. californica diobati dengan elisitor ragi (34)
atau MeJA (14, 85), dan sel opium diobati dengan elisitor jamur (41). Itu
induksi yang dimediasi oleh elicitor untuk enzim-enzim yang bergantung pada P450 lainnya (CFS, SPS, MSH,
dan PPH) di jalur sanguinarine juga telah diamati (10, 14, 171). Lebih-
lebih, aktivitas DBOX dilaporkan meningkat 4- dan 14 kali lipat pada S. canadensis
sel diperlakukan dengan MeJA atau asam asetilsalisilat, masing-masing (73).
Induksi biosintesis alkaloid benzophenanthridine di E. californica
telah terbukti terjadi pada konsentrasi pemilih di bawah ambang batas yang diperlukan
untuk merangsang kejadian yang terkait dengan respons hipersensitif, seperti
pengurangan senyawa fenolik (138). Produksi fenolik bisa selektif
diblokir oleh katalase pada konsentrasi pemilih yang lebih tinggi, menunjukkan bahwa alkaloid
biosintesis diinduksi oleh jalur transduksi sinyal yang tidak dimediasi
oleh spesies oksigen reaktif yang terlibat dalam mengaktifkan respon hipersensitif.
Mekanisme induksi tak terpisahkan untuk phenylalanine ammonia lyase, TYDC, dan
Enzim hilir biosintesis sanguinarine juga telah dibuktikan
dalam opium poppy (40). Induksi yang dimediasi oleh pemilih dari benzophenanthridine
biosintesis alkaloid membutuhkan penurunan sementara dalam pH sitosol yang disebabkan oleh
penghabisan proton dari vakuola (138). Pengasaman buatan sitosol
terbukti menginduksi biosintesis alkaloid tetapi tidak respon hipersensitif,
sedangkan penipisan proton vakuolar menghalangi peningkatan alkaloid ac-
penumpukan. Phospholipase A 2 , plasma redoks-dependen yang terkontrol protein-G
protein membran, mungkin memicu jalur transduksi sinyal menuju ke
efflux dari proton vakuolar (137). Peran protein-G dalam induksi protein
pembentukan alkaloid zophenanthridine juga ditunjukkan dengan mengobati S. canadensis
sel dengan modulator protein pengikat GTP dan aktivator protein G (96). Itu
induksi biosintesis alkaloid juga tampaknya bergantung pada sumber eksternal
Ca 2+ , menunjukkan bahwa Ca 2+ dan mungkin calmodulin berpartisipasi dalam sinyal
jalur transduksi (95).
Analisis Promotor
Studi terbaru telah mulai mengungkapkan lokasi cis- elemen dan identitas
faktor transkripsi yang terlibat dalam regulasi perkembangan dan diinduksi
dari TDC , STR1 , dan CPR . Aktivitas promotor TDC terkait dengan GUS
gen reporter awalnya diperiksa di pabrik tembakau transgenik dan ditransfusikan
protoplas (59). Progressive 5 -truncations secara bertahap mengurangi tingkat aktivitas GUS
Sampai penghapusan ke 12112 pada dasarnya dihilangkan aktivitas promotor TDC (59).
Tiga daerah fungsional yang terlibat dalam ekspresi yang diinduksi oleh basal atau elisitor adalah
diidentifikasi dalam promotor TDC dari 60160 hingga −37 dengan uji kehilangan fungsi
(125). Wilayah −160 hingga −99 terbukti bertindak sebagai transkripsi utama
Halaman 22
2 April 2001
12: 7
Ulasan Tahunan
AR129-02
50
FACCHINI
penambah untuk ekspresi basal, dan dua elemen respons-elisitor yang terpisah
ditemukan antara −99 dan −87, dan antara −87 dan −37. Ikatan in vitro
ing faktor nuklir ke wilayah 72572 ke −37 dari promotor TDC juga
telah dijelaskan (126). Dua aktivitas mengikat yang berinteraksi dengan beberapa program TDC
daerah moter diidentifikasi sebagai GT-1 dan 3AF1 dalam tembakau dan C. roseus nuklir
ekstrak protein. Mutagenesis dari situs pengikatan GT-1 tidak mempengaruhi basal atau
ekspresi yang diinduksi elicitor, tetapi mengurangi aktivasi promotor TDC oleh sinar UV.
Hanya panjang gelombang UV-B yang ditunjukkan untuk menginduksi akumulasi TIA dan TDC.
tekanan pada C. roseus , menunjukkan keterlibatan reseptor spesifik (123).
Analisis kehilangan fungsi mengungkapkan elemen responsif UV yang berlebihan dalam TDC
promotor antara −99 dan +198 (123).
Akumulasi transkrip koordinat menunjukkan bahwa TDC , STR , dan CPR
gen diatur oleh faktor nuklir umum sebagai respons terhadap pengobatan elisitor
dan sinar UV (108, 132). Penghapusan promotor CPR ke −366 menghilangkan
Ekspresi elicitor-inducible diamati dengan promotor 632-bp (90). −632 hingga
Wilayah −366 dari promotor CPR juga mengandung situs pengikatan GT-1 yang kuat. Itu
urutan utama responsif- pemilih promotor STR1 diidentifikasi dalam
−339 hingga −145 wilayah (131). Sekali lagi, GT-1 terbukti mengikat ini dan lainnya
wilayah promotor STR1 . Meskipun interaksi kuat GT-1 dengan TDC,
STR1 , dan promotor CPR , masih harus ditentukan apakah situs pengikatan GT-1
berperan dalam ekspresi gen in vivo.
Faktor transkripsi lainnya tidak diragukan lagi terlibat dalam ekspresi basal
dari TDC , str1 , dan CPR gen. Motif kotak-G di −105 ditunjukkan untuk diikat
Faktor pengikat G-box (GBF) in vitro, tetapi tidak penting untuk elicitor-induced
ekspresi STR1 in vivo (131). Elemen G-box ini juga berinteraksi dengan tembakau
faktor nuklir dan faktor pengikat G-box TAF-1 (124). Mutasi kotak-G
motif mencegah pengikatan faktor-faktor ini dan mengurangi aktivitas fungsional
konstruksi yang mengandung tetramer dari urutan STR1 G-box. Tetramer G-box
menyatu hanya untuk ekspresi spesifik biji-kotak TATA yang diberikan dalam tembakau transgenik,
tetapi diperlukan daerah penambah dari promotor CaMV untuk berekspresi di daun.
Hasil ini menunjukkan bahwa urutan mengapit motif G-box menentukan STR1
aktivitas promotor dalam jaringan yang berbeda (124).
Elemen mirip kotak GCC di wilayah −100 hingga −58 dari promotor STR1 adalah
diperlukan dan memadai untuk ekspresi responsif JA dan pemilih (109). Dua
cDNA mengkode protein C. roseus AP2-domain (ORCA) yang mengikat JA- dan
elemen-elemen pemilih-responsif dari STR1 diisolasi menggunakan layar satu-hibrida ragi.
Protein ORCA2 trans - aktifkan promotor STR1 , dan ekspresi dari
Gen ORCA2 diinduksi oleh elisitor dan pengobatan JA dari kultur sel C. roseus . Di
Sebaliknya, gen ORCA1 diekspresikan secara konstitutif. Hasil ini secara khusus
mengidentifikasi elemen seperti GCC-box dan ORCA2 di JA- dan respons elisitor
ekspresi gen STR1 .
Analisis penghapusan juga telah mengungkapkan lokasi domain pengaturan yang diperlukan
untuk TYDC7 dan BBE1 kegiatan promotor dalam sistem transien GUS assay berdasarkan
pada pengeboman mikroproyek sel opium yang dikultur (130). Itu
Halaman 23
2 April 2001
12: 7
Ulasan Tahunan
AR129-02
51
−393 hingga −287 wilayah promotor TYDC7 , dan −355 hingga −200 wilayah
Promotor BBE1 , terbukti diperlukan untuk fungsi promotor. Kursus waktu
untuk induksi mRNA TYDC7 dan BBE1 dalam sel opium yang terluka
hampir identik dengan aktivitas GUS dalam sel yang dibombardir dengan promotor-
GUS membangun ketika wilayah −393 ke −287 dari TYDC7 dan −355 hingga −200
wilayah BBE1 hadir. Hasil ini menunjukkan bahwa sinyal luka disebabkan
dengan masuknya mikrokontroler yang dilapisi DNA ke dalam sel poppy opium sudah cukup
untuk menginduksi elemen pengatur respons luka yang terletak dari −393 hingga −287 di
TYDC7 dan −355 hingga −200 di BBE1 . Analisis fungsional promotor BBE1
dari E. californica menunjukkan bahwa wilayah −496 hingga −455 diperlukan untuk aktivitas
(68). Perbandingan wilayah ini dengan wilayah −355 hingga −200 dari opium poppy
BBE1 mengungkapkan urutan dengan identitas nukleotida 55% (130).
APLIKASI TEKNIK METABOLIK
Rekayasa metabolik secara luas didefinisikan sebagai peningkatan aktivitas seluler.
ini dengan memanipulasi fungsi enzimatik, transportasi, atau penggunaan
teknologi DNA rekombinan. Beberapa gen biosintesis alkaloid telah ditemukan
digunakan untuk secara genetik mengubah produksi berbagai metabolit sekunder pada tanaman
(Meja 2). Tumbuhan transgenik dengan aktivitas enzim yang berubah atau baru juga
menjadi alat yang ampuh untuk mempelajari arsitektur kontrol metabolik alkaloid
jalur.
Alkaloid Indol Terpenoid
Sebuah TDC transgen pertama kali diperkenalkan ke C. roseus sel dengan menginfeksi bibit
dengan strain onkogenik dari Agrobacterium tumefaciens (60). Kalus tumororigenik
Mengekspresikan transgen TDC menunjukkan peningkatan aktivitas TDC dan kandungan tryptamine
tenda, tetapi tingkat alkaloid tidak terpengaruh dibandingkan dengan kontrol tipe liar. Ini
hasil bertentangan dengan kesimpulan sebelumnya bahwa tryptamine adalah substrat pembatas
untuk biosintesis TIA, setidaknya di beberapa jaringan (108).
Nontumorigenic C. roseus kultur sel berubah dengan str1 transgen
menunjukkan aktivitas STR sepuluh kali lebih tinggi dan mengakumulasi tingkat yang lebih tinggi dari strikosidin
dan TIA lainnya, dibandingkan dengan budaya tipe liar, tetapi aktivitas TDC tidak terpengaruh
(18) Sebaliknya, aktivitas TDC tinggi yang diberikan oleh transgen TDC diperkenalkan
sendiri, atau dalam kombinasi dengan transgene STR1 , tidak mempengaruhi accu alkaloid
mulasi. Hasil ini lebih lanjut menunjukkan bahwa STR mengkatalisasi langkah pembatasan tingkat
biosintesis alkaloid dalam kultur sel C. roseus (18). Pengaruh prekursor
ketersediaan akumulasi TIA diselidiki dengan memberi makan berbagai konsentrasi
dan kombinasi tryptamine dan loganin ke sel C. roseus transgenik
line overexpressing STR1 (177). Tingkat tinggi sintesis tryptamine ditemukan
terjadi bahkan ketika aktivitas TDC rendah. Selain itu, aktivitas STR yang efisien adalah
mungkin bahkan ketika kolam tryptamine kecil. Namun, formasi keseluruhan
Halaman 24
2 April 2001
12: 7
Ulasan Tahunan
AR129-02
52
FACCHINI
TABEL 2 Rekayasa metabolik tanaman transgenik dan kultur jaringan menggunakan gen
terlibat dalam biosintesis alkaloid
Direkayasa
Berubah bentuk
Sumber dari
Modifikasi metabolik
enzim
jenis
gen
Referensi
Peningkatan tryptamine
TDC
Nicotiana tabacum
Catharanthus
155
roseus
Peningkatan tyramine
TDC
Nicotiana tabacum
Catharanthus
156
roseus
Peningkatan serotonin
TDC
Peganum harmala
Catharanthus
13
roseus
Mengurangi indole
TDC
Brassica napus
Catharanthus
20
glukosinolat
roseus
Pengalihan shikimate
TDC
Solanum tuberosum
Catharanthus
181
metabolisme; berkurang
roseus
fenilalanin;
peningkatan penyakit
kerawanan
Peningkatan tryptamine di
TDC
Catharanthus roseus
Catharanthus
60
jaringan empedu
roseus
Peningkatan terpenoid
TDC; STR
Catharanthus roseus
Catharanthus
18
alkaloid indol
roseus
dalam kultur sel
Peningkatan quinoline
TDC; STR
Cinchona officinalis
Catharanthus
54
alkaloid di akar
roseus
budaya
Produksi strictosidine
TDC; STR
Nicotiana tabacum
Catharanthus
63
ketika disertakan dengan
roseus
eksogen
secologanin
Sel meningkat
TYDC
Brassica napus
Papaver
43
terikat dinding
somniferum
tyramine; menurun
kecernaan dinding sel
Peningkatan kadaver
LDC
Nicotiana tabacum
Hafnia alvei
46, 69
dan anabasine
Peningkatan putresin
ODC
Nicotiana tabacum
Saccharomyces
62
dan nikotin
cerevisiae
Peningkatan agmatine
ADC
Nicotiana tabacum
Avena sativa
17
Peningkatan skopolamin
H6H
Atropa belladonna
Hyoscyamus
67, 183
niger
Peningkatan skopolamin
H6H
Hyoscyamus
Hyoscyamus
75
muticus
niger
dari strikosidin terbukti membutuhkan pasokan secologanin dan
tryptamine, sedemikian rupa sehingga pemanfaatan yang efisien tergantung pada ketersediaan
dari yang lain. Karena ketersediaan prekursor adalah sifat khusus jaringan, laju yang berbeda
faktor pembatas harus terjadi pada berbagai garis sel, organ, dan tanaman.
Tembakau transgenik yang mengekspresikan C. roseus TDC dan STR1 digunakan untuk pembentukan
kultur sel dengan TDC konstitutif tinggi dan aktivitas STR (62). Transgenik ini
Halaman 25
2 April 2001
12: 7
Ulasan Tahunan
AR129-02
53
garis sel tembakau mengakumulasi tryptamine dan menghasilkan strictosidine ketika
ologanin ditambahkan ke media kultur. Hasil ini menunjukkan bahwa dua
langkah-langkah berturut-turut di jalur TIA dapat diekspresikan secara kooperatif dalam asing
spesies tanaman yang biasanya tidak menghasilkan metabolit ini. Pemeriksaan
frekuensi integrasi dan tingkat ekspresi TDC dan STR1 dalam tembakau
menunjukkan bahwa kedua transgen diekspresikan hanya dalam 33% dari tanaman (86). Jadi,
variasi fenotipik yang luas dalam produksi alkaloid dalam jaringan transgenik (18)
sebagian disebabkan oleh fenomena pembungkaman gen yang mempengaruhi TDC dan STR1 .
Alkaloid Tropana, Nikotin, dan Lainnya
Derivatif Poliamin
Beberapa upaya pertama untuk merekayasa produk sekunder tanaman secara metabolisme
melibatkan alkaloid yang diturunkan dari poliamin. Kultur akar Nicotiana rustica transgenik
mengekspresikan gen ODC ragi menghasilkan tingkat putresin dan nikotin yang lebih tinggi
(63). Namun, meskipun ekspresi ODC heterolog kuat , nikotin, putresin,
dan kadar N- metilputresin hanya meningkat dua kali lipat, menunjukkan bahwa ODC adalah
bukan langkah yang membatasi kadar dalam biosintesis nikotin. Ekspresi berlebihan dari oat ADC di
tembakau meningkatkan akumulasi agmatine, produk reaksi ADC (17).
Namun, peningkatan produksi nikotin tidak terdeteksi meskipun ada saran
putresin yang dibutuhkan untuk biosintesis nikotin dihasilkan melalui ADC daripada
ODC (66). Ada kemungkinan bahwa agmatine tambahan tidak dapat diakses oleh
jalur nikotin.
Kultur akar tembakau diubah dengan bakteri lisin dekarboksilase ( LDC )
gen menghasilkan tingkat kadaverin yang lebih tinggi, produk dari reaksi LDC, dan
alkaloid anabasine, diproduksi oleh kopling kadaverin dan N- metil-
putrescine (46). Aktivitas LDC, dan akumulasi cadaverine dan anabasine, bisa
ditingkatkan dengan menggabungkan LDC ke peptida transit RBCS (69), menunjukkan
pentingnya mengarahkan enzim asing ke lokasi subseluler yang sesuai.
The H6H gen dari H. niger itu konstitutif dinyatakan dalam hyoscyamine- yang
tanaman kaya A. belladonna (183). Tanaman transgenik menunjukkan aktivitas H6H tinggi
mengandung skopolamin hampir secara eksklusif. Hasil serupa diperoleh dalam
kultur akar genik A. belladonna (67) dan Hyoscyamus muticus (75). Besar
variasi dalam konten TPA diamati dalam budaya akar H. muticus , spesies dengan
kapasitas tinggi untuk akumulasi alkaloid tropana , mengekspresikan H6H . Satu baris pro-
mengurangi lebih dari 100 kali lipat skopolamin daripada kontrol, tetapi konversi hyoscyamine
masih belum lengkap (75). Tanaman tembakau transgenik yang mengekspresikan H6H juga
mampu mengubah hyoscyamine eksogen dan 6β-hydroxyhyoscyamine menjadi
skopolamin, yang terakumulasi dalam daun (184). Jenis tanaman tembakau liar
tidak dapat mengubah zat antara ini menjadi skopolamin.
Alkaloid lainnya
Kultur sel P. harmala mengakumulasi dua tryptamine sederhana dan saling terkait
alkaloid turunan: alkaloid harmane-typeβ-carboline dan serotonin. Serotonin
Halaman 26
2 April 2001
12: 7
Ulasan Tahunan
AR129-02
54
FACCHINI
kadar dalam kultur sel P. harmala transgenik dengan peningkatan TDC heterolog
tivitas adalah sepuluh hingga 20 kali lipat lebih tinggi daripada di budaya kontrol (13). Sebaliknya, β-
kadar alkaloid karbolin tidak terpengaruh, menunjukkan bahwa pasokan triptamin
membatasi untuk serotonin, tetapi tidak untuk alkaloid β-karbolin, biosintesis. Mech-
anisme untuk penyaluran metabolik triptofan ke serotonin dan β-karbolin
alkaloid dalam P. harmala tidak diketahui. Ada kemungkinan dua isoform TDC
terjadi di lokasi subseluler yang terpisah, dan tryptamine tambahan diproduksi
dalam kultur transgenik hanya tersedia untuk satu jalur.
Rekayasa metabolisme jalur BIA belum dilaporkan karena
kurangnya protokol transformasi sebelumnya untuk pabrik penghasil BIA. Namun, pro
cedures baru-baru ini telah dikembangkan untuk transformasi tanaman opium poppy
(128), kultur akar (129), dan kultur sel (12), dan tanaman E. californica (127)
dan budaya akar (129). Sistem transformasi ini memberikan peluang untuk
mengubah aktivitas masing - masing enzim biosintesis BIA, dan untuk memeriksa
konsekuensi dari modifikasi tersebut pada akumulasi produk akhir dan jalur
perantara jalan. Protokol transformasi yang efisien untuk spesies ini juga akan
memfasilitasi kemajuan dalam membedah regulasi molekuler gen biosintetik BIA.
Penggunaan Gen Biosintetik Alkaloid Lainnya
dalam Rekayasa Genetika
Enzim yang beroperasi pada antarmuka antara asam amino dan metabolisme alkaloid
telah digunakan untuk mengubah kolam substrat dan produk di berbagai tanaman. Ini
studi memberikan wawasan ke dalam arsitektur kontrol biosynthe- asam amino
sis dan proses fisiologis yang relevan. Akumulasi tryptamine dalam tembakau
tanaman yang mengekspresikan TDC heterolog sebanding dengan tingkat aktivitas TDC
(60.134.155). Hebatnya, pertumbuhan tanaman tidak terpengaruh meskipun dibuat
dari wastafel besar untuk tryptophan dan kolam besar tryptamine yang larut. Bahkan,
tidak ada perbedaan signifikan yang terdeteksi dalam aktivitas asam amino aromatik utama
enzim biosintetik (134), dan kadar IAA identik pada tryptamine yang tinggi dan
tanaman kontrol (155). Tembakau hasil transformasi yang mengekspresikan TDC juga dilaporkan
menumpuk lebih banyak tyramine dibandingkan dengan kontrol (156). Penjelasan yang paling masuk akal
bangsa untuk hasil ini adalah bahwa peningkatan permintaan untuk triptofan mengatur
jalur shikimate menghasilkan peningkatan biosintesis tirosin dan, akibatnya,
produksi tyramine yang lebih tinggi melalui aktivitas TYDC endogen.
Pengenalan TDC ke Brassica napus (kanola) menghasilkan pengalihan
dari tryptophan menjadi tryptamine daripada indole glucosinolates (20). Indole
Kandungan glukosinolat biji dari tanaman transgenik hanya 3% dari yang di alam liar.
ketik benih. Dalam minyak sayur, seperti kanola, adanya glukosinolat indol
mengurangi nilai tepung biji sebagai pakan ternak. Penelitian ini elegan
contoh bagaimana gen biasanya beroperasi pada titik masuk dalam biosintesis alkaloid
dapat digunakan untuk mengalihkan aliran metabolisme dan mengurangi tingkat produk yang tidak diinginkan pada tanaman
jenis. Sebaliknya, pengenalan TDC ke dalam kentang mengubah keseimbangan
Halaman 27
2 April 2001
12: 7
Ulasan Tahunan
AR129-02
55
substrat dan kumpulan produk yang terlibat dalam metabolisme fenilpropanoid (181). Itu
pengalihan triptofan menjadi trypamine menyebabkan penurunan kadar tipe liar
triptofan, fenilalanin, dan senyawa fenolik turunan fenilalanin tersebut
sebagai asam klorogenat dan lignin dalam umbi kentang transgenik; dengan demikian, metabolisme buatan
sink juga dapat mengubah ketersediaan media bahkan jika gen asing beroperasi di luar
jalur yang terlibat dalam suplai media.
Canola juga berubah dengan TYDC transgen encoding TYDC isoform
dari opium poppy (43). Tanaman yang mengekspresikan TYDC1 tingkat tinggi menunjukkan empat kali lipat
aktivitas TYDC yang lebih tinggi, penurunan 30% dalam kolam tirosin seluler, peningkatan dua kali lipat
dalam tyramine yang diikat dengan dinding sel, dan mengurangi daya cerna dinding sel dibandingkan dengan
jenis tanaman. Penelitian ini mendukung keterlibatan TYDC dan tyramine dalam sel
pembentukan dinding melalui sintesis amida asam hidroksisinamatik. Insinyur-
Metabolisme amida juga dapat memberikan strategi yang efektif untuk mengurangi panen
kerentanan terhadap spektrum patogen yang luas dengan mengurangi kecernaan dinding sel.
PROSPEK MASA DEPAN
Pemahaman kami tentang proses biologis yang memungkinkan sintesis dan
mulasi alkaloid pada tanaman telah meningkat pesat selama dekade terakhir.
Kemajuan pesat ini telah difasilitasi oleh ketersediaan koleksi yang mengesankan.
tion dari gen biosintesis alkaloid. Alat-alat ini, dikombinasikan dengan pengembangan terbaru
KASIH dalam genomika tanaman, tidak diragukan lagi akan mempercepat isolasi banyak
gen yang terlibat dalam beberapa jalur alkaloid. Kami telah mempelajari alkaloid tanaman itu
biosintesis lebih dari sekadar keingintahuan metabolik yang menghasilkan pembentukan
sejumlah besar produk yang aktif secara biologis. Jalur alkaloid sangat tinggi
diatur dan melibatkan sel baru, jaringan, pengembangan, dan khusus lingkungan
kontrol. Banyak aspek biosintesis alkaloid, seperti subselular yang rumit
kompartetasi enzim dan translokasi antar sel jalur antar
memediasi, mengungkapkan variasi baru yang menarik dalam kompleksitas metabolisme tanaman.
Perluasan kotak alat molekuler kami akan mempromosikan upaya untuk mengidentifikasi regulator
terkait dengan pengembangan jenis sel yang dapat mengakomodasi jalur alkaloid
cara. Pengetahuan kami tentang biokimia, biologi molekuler, dan sel
Biologi biosintesis alkaloid juga akan mengarah pada peluang menarik untuk merekayasa
metabolisme alkaloid pada tanaman transgenik. Kebaruan yang melekat dari jalur,
dan pentingnya sosial ekonomi produk, pasti akan mendorong lebih besar
tertarik pada biosintesis alkaloid.
UCAPAN TERIMA KASIH
Saya berterima kasih atas dukungan yang diterima dari Ilmu Pengetahuan Alam dan Teknik
Dewan Penelitian Kanada, Institut Penelitian Pertanian Alberta, Uni-
versity dari Calgary Research Grants Committee, dan Tasmanian Alkaloids Pty Ltd.
Halaman 28
2 April 2001
12: 7
Ulasan Tahunan
AR129-02
56
FACCHINI
Kunjungi halaman Beranda Ulasan Tahunan di www.AnnualReviews.org
DAFTAR PUSTAKA
1. Aerts R, De Luca V. 1992. Fitokrom adalah
terlibat dalam regulasi cahaya vindoline
biosintesis pada Catharanthus roseus . Menanam
Physiol. 100: 1029–32
2. Aerts R, Gisi D, E Carolis E, De Luca
V, Baumann TW. 1994. Methyl jasmonate
uap meningkatkan konsentrasi pembangunan
sintesis alkaloid terkontrol di Catha-
bibit ranthus dan Cinchona . Tanaman J.
5: 635–43
3. Amman M, Wanner G, Zenk MH. 1986.
Kompartemen intraseluler dua en-
zim biosintesis berberin dalam sel tanaman
budaya. Planta 167: 310-20
4. Arakawa H, Clark WG, Psenak M, Cos-
cia CJ. 1992. Pemurnian dan karakterisasi-
tion dihydrobenzophenanthridine oksidase
dari kultur sel Sanguinaria canadensis .
Lengkungan. Biokem. Biophys. 299: 1-7
5. Ashihara H, Gillies FM, Crozier A. 1997.
Metabolisme kafein dan purin terkait
alkaloid dalam daun teh ( Camillia sinensis
L.) Fisiol Sel Tumbuhan. 38: 413–19
6. Ashihara H, Monteiro AM, Gillies FM,
Crozier A. 1996. Biosintesis kafein di
daun kopi. Tumbuhan Physiol. 111: 747–53
7. Baldwin IT, Schmelz EA, Ohnmeiss TE.
1994. Luka menyebabkan perubahan pada root dan
menembak kolam asam jasmonat berkorelasi dengan
sintesis nikotin diinduksi di Nikotiana
sylvestris . J. Chem. Ecol. 20: 2139–58
8. Balsevich J, De Luca V, Kurz WGW.
1986. Mengubah pola alkaloid dalam gelap-
bibit yang tumbuh dari Catharanthus roseus .
Isolasi dan karakterisasi 4-
desacetoxyvindoline: a novel indole alka-
pelonggarkan dan usulan prekursor vindoline.
Heterocycles 24: 2415–21
9. Bauer W, Zenk MH. 1989. Pembentukan
kedua kelompok methylenedioxy di alka-
loid ( S ) -stylopine dikatalisis oleh cyto-
enzim krom P-450. Tetrahedron Lett.
30: 5257–60
10. Bauer W, Zenk MH. 1991. Dua metilen-
jembatan dioksi membentuk sitokrom P-450
enzim dependen terlibat dalam ( S ) -
biosintesis stilopin. Fitokimia
30: 2953–1991
11. Bell E, Malmberg RL. 1990. Analisis
dari cDNA encoding arginine decarboxy-
Lase dari oat mengungkapkan kesamaan dengan Es-
cherichia coli arginine decarboxylase dan
bukti untuk pemrosesan protein. Mol. Jenderal
Genet. 224: 431–36
12. Belny M, Herouart D, Thomasset B, David
H, Jacquin-Dubreuil A, David A. 1997.
Transformasi Papaver somniferum
kultur suspensi sel dengan sam-1 dari
A. thaliana menghasilkan garis sel yang berbeda-
ent S -adenosyl- L -methionine synthase ac-
sensitivitas. Physiol. Menanam. 99: 233–40
13. Berlin J, Rügenhagen C, Dietze P, Frecker
LF, Goddijn OJM, Hoge JHC. 1993
Peningkatan produksi serotonin oleh
suspensi dan kultur akar Peganum
harmala ditransformasikan dengan de- tryptophan
klon cDNA karboksilase dari Catharan-
demikian roseus . Res Transgenik. 2: 336–44
14. Blechert S, Brodschelm W, Hölder S,
Kammerer L, Kutchan TM, dkk. 1995. The
jalur octadecanoid — molekul sinyal
untuk pengaturan jalur sekunder.
Proc Natl. Acad. Sci. AS 92: 4099–
105
15. Blom TJM, Sierra M, van Vliet TB,
Franke-van Dijk MEI, de Koning P, dkk.
1991. Penyerapan dan akumulasi ajmali-
cine menjadi vakuola terisolasi berbudaya
sel Catharanthus roseus (L.) G. Don.
dan konversinya menjadi ular. Planta
183: 170–77
16. Burnett RJ, Maldonado-Mendoza IE,
McKnight TD, Nessler CL. 1993. Mantan
penekanan 3-hidroksi-3-metilglutaril
koenzim Gen reduktase dari Camp-
totheca acuminata
berbeda
Halaman 29
2 April 2001
12: 7
Ulasan Tahunan
AR129-02
57
diatur oleh luka dan metil
jasmonate. Tumbuhan Physiol. 103: 41–48
17. Burtin D, Michael AJ. 1997. Overexpres-
sion dari arginine decarboxylase dalam trans-
tanaman genik. Biokem. J. 325: 331-37
18. Canel C, MI Lopes-Cardoso, Whitmer S,
van der Fits L, Pasquali G, dkk. 1998
Efek dari ekspresi strikosidin berlebihan
synthase dan tryptophan decarboxylase aktif
produksi alkaloid oleh kultur sel
Catharanthus roseus . Planta 205: 414–19
19. Caporale LH. 1995. Ekologi kimia:
pemandangan dari industri farmasi.
Proc Natl. Acad. Sci. AS 92: 75–82
20. Chavadej S, Brisson N, McNeil JN, De
Luca V. 1994. Pengalihan triptofan
mengarah pada produksi glukose indole rendah
meniadakan kanola. Proc Natl. Acad. Sci. Amerika Serikat
91: 2166–70
21. Chou WM, Kutchan TM. 1998. Enzimatik
oksidasi dalam biosintesis kompleks
alkaloid. Plant J. 15: 289–300
22. Lanjutkan A, van der Heijden R, Lefeber AW,
Verpoorte R. 1998. iridoid glukosida
secologanin berasal dari triose novel
jalur fosfat / piruvat di sebuah Catha-
kultur sel ranthus roseus . FEBS Lett.
434: 413-16
23. E Carolis E, Chan F, Balsevich J, De Luca
V. 1990. Isolasi dan karakterisasi a
Dioksigenase 2-oxoglutarate-dependent
di langkah kedua ke terakhir di vindo-
biosintesis lini. Tumbuhan Physiol. 94: 1323–
29
24. De Carolis E, De Luca V. 1993. Purifica-
tion, karakterisasi, dan analisis kinetik
sis dari dioksi 2-oxoglutarate-dependen
genase yang terlibat dalam biosintesis vindoline
dari Catharanthus roseus . J. Biol. Chem
268: 5504-11
25. De-Eknamkul W, Zenk MH. 1992.
Pemurnian dan sifat 1,2-dehydro-
reticuline reductase dari Papaver somni-
bibit ferum . Fitokimia 31: 813–
21
26. De Luca V, Balsevich J, Kurz WGW. 1985.
Acetylcoenzyme A: deacetylvindoline O -
acetyltransferase, enzim baru dari
Catharanthus . J. Plant Physiol. 121: 417–
28
27. De Luca V, Balsevich J, Tyler RT, Eilert U,
Panchuk BD, Kurz WGW. 1986. Biosyn-
tesis alkaloid indol: pengembangan-
regulasi tal jalur biosintetik
dari tabersonine ke vindoline di Catharan-
demikian roseus . J. Plant Physiol. 125: 147–56
28. De Luca V, Balsevich J, Tyler RT, Kurz
WGW. 1987. Karakterisasi sebuah novel
N -methyltransferase (NMT) dari Catha-
tanaman ranthus roseus . Deteksi NMT
dan enzim lain dari alkaloid indol
jalur biosintesis di sus sel yang berbeda
sistem budaya pensiun. Rep sel tumbuhan
6: 458–61
29. De Luca V, Cutler AJ. 1987. Subcellu-
lokalisasi enzim yang terlibat dalam
membagikan biosintesis alkaloid di Catharanthus
roseus . Tumbuhan Physiol. 85: 1099-102
30. De Luca V, Fernandez JA, Camp-
bell D, Kurz WGW. 1988. Mengembangkan
regulasi mental enzim
membagikan biosintesis alkaloid di Catharanthus
roseus . Tumbuhan Physiol. 86: 447–50
31. De Luca V, Marineau C, Brisson N.
1989. Kloning dan analisis molekuler
sebuah cDNA yang mengkode triptofan tanaman
decarboxylase: perbandingan dengan hewan
dopa decarboxylase. Proc Natl. Acad. Sci.
AS 86: 2582–86
32. De Luca V, St-Pierre B. 2000. Sel dan
biologi perkembangan biosintesis alkaloid
tesis. Tren Tanaman Sci. 4: 168–73
33. Dethier M, De Luca V. 1993. Partial pu-
rifikasi suatu N- metiltransferase dalam-
terlibat dalam biosintesis vindoline di Catha-
ranthus roseus . Fitokimia 32: 673–
78
34. Dittrich H, Kutchan TM. 1991. Molekul
kloning, ekspresi, dan induksi lar
enzim jembatan berberin, suatu enzim
sential terhadap pembentukan benzofenan-
alkaloid tridin dalam respons tanaman
untuk serangan patogen. Proc Natl. Acad. Sci.
AS 88: 9969–73
Halaman 30
2 April 2001
12: 7
Ulasan Tahunan
AR129-02
58
FACCHINI
35. Eilert U, De Luca V, Constabel F, Kurz
WGW. 1987. Induksi yang dimediasi oleh elicitor
dari tryptophan decarboxylase dan stricto-
aktivitas sidine synthase dalam suspensi sel
budaya sion dari Catharanthus roseus . Lengkungan.
Biokem. Biophys. 254: 491–97
36. Eilert U, Kurz WGW, Constabel F. 1985.
Stimulasi akumulasi sanguinarine
dalam kultur sel Papaver somniferum oleh
pemilih jamur. J. Plant Physiol. 119: 65–
76
37. Facchini PJ, Bird DA. 1998. Pengembangan
regulasi tal dari benzylisoquinoline alka-
kendurkan biosintesis pada tanaman opium
dan kultur jaringan. Sel In Vitro. Dev. Biol.
Plant 34: 69–79
38. Facchini PJ, De Luca V. 1994. Beda
ekspresi gen spesifik dan jaringan
keluarga untuk tyrosine / dopa decarboxylase di
opium poppy. J. Biol. Chem 269: 26684–
90
39. Facchini PJ, De Luca V. 1995. Phloem-
ekspresi spesifik tyrosine / dopa decar-
gen boxylase dan biosintesis iso-
alkaloid kuinolin dalam opium poppy. Menanam
Sel 7: 1811–21
40. Facchini PJ, Johnson AG, Poupart J, De
Luca V. 1996. Ex gen pertahanan tidak terpisahkan
pression dan accu alkaloid antimikroba
mulasi pada kuman sel pium opium yang ditimbulkan
mendatang. Tumbuhan Physiol. 111: 687–97
41. Facchini PJ, Penzes C, Johnson AG,
Bull D. 1996. Karakterisasi molekuler
dari gen enzim jembatan berberin dari
opium poppy. Tumbuhan Physiol. 112: 1669-77
42. Facchini PJ, Penzes-Yost C, Samanani
N, Kowalchuk B. 1998. Ekspresi
pola yang diberikan oleh tirosin / dihidroksi-
promotor fenilalanin dekarboksilase
dari opium poppy dilestarikan dalam trans-
tembakau genik. Tumbuhan Physiol. 118: 69–81
43. Facchini PJ, Yu M, Penzes-Yost C. 1999.
Penurunan daya cerna dinding sel dalam kanola
ditransformasikan dengan decar- tyrosine chimeric
gen boxylase dari opium poppy. Menanam
Physiol. 120: 653-63
44. Fahn W, Gundlach H, Deus-Neumann
B, Stöckigt J. 1985. Enzim lanjut dari
biosintesis vindoline. Asetil-KoA: 17- O -
deacetylvindoline 17- O -acetyltransferase.
Reproduksi Sel Tanaman 4: 333-36
45. Fahn W, Laussermair E, Deus-Neumann
B, Stöckigt J. 1985. Enzim yang terlambat masuk
biosintesis vindoline. S -adenosyl- L -
methionine: -11- O -demethyl-17- O -deace-
tylvindoline 11- O -methyltransferase dan
asetilesterase yang tidak spesifik. Sel tanaman
Rep. 4: 337–40
46. Fecker LF, Rügenhagen C, Berlin J. 1993.
Peningkatan produksi kadaverin dan an-
abasine dalam kultur akar rambut Nicotiana
tabacum mengekspresikan de-lisin bakteri
gen karboksilase. Menanam Mol. Biol. 23: 11–
21
47. Frenzel T, Zenk MH. 1990. Pemurnian
dan karakterisasi tiga isoform S -
adenosyl- L -methionine: ( R, S ) -tetrahydro-
benzylisoquinoline N -methyltransferase
dari kultur sel Berberis koetineana .
Fitokimia 29: 3491-97
48. Frenzel T, Zenk MH. 1990. S -Adenosyl- L -
metionin: 3 -hidroksi- N- metil- ( S ) -co-
claurine 4 - O -metyltransferase, sebuah regio
dan enzim stereoselektif dari ( S ) -
jalur reticuline. Fitokimia 29:
3505-11
49. Frick S, Kutchan TM. 1999. Molekul
kloning dan ekspresi fungsional O -
methyltransferases umum untuk isoquino-
garis alkaloid dan fenilpropanoid biosin-
tesis. Plant J. 17: 329–39
50. Fujimori N, Suzuki T, Ashihara H. 1991.
Variasi musiman dalam kapasitas biosintesis
untuk sintesis kafein dalam teh
Daun-daun. Fitokimia 30: 2245–48
51. Fujiwara H, Takeshita N, Terano Y, Fitchen
JH, Tsujita T, dkk. 1993. Ekspresi
dari ( S ) -scoulerine-9- O -methyltransferase di
Tanaman Coptis japonica . Fitokimia
34: 949–54
52. Galneder E, Rueffer M, Wanner G, Tabata
M, Zenk MH. 1988. Langkah terakhir alternatif
dalam biosintesis berberin di Coptis japon-
kultur sel ica . Reproduksi Sel Tanaman 7: 1-4
Halaman 31
2 April 2001
12: 7
Ulasan Tahunan
AR129-02
59
53. Gantet P, Imbault N, Thiersault M, Doireau
P. 1998. Perlunya octade fungsional-
jalur canoic untuk sintesis alkaloid indol
sis oleh Catharanthus roseus cell suspen-
Sions dikultur dalam medium auksin-kelaparan.
Fisiol Sel Tanaman. 39: 220–25
54. Geerlings A, Hallard D, Martinez Ca-
ballero A, Lopes Cardoso I, dkk. 1999.
Produksi alkaloid oleh pejabat Cinchona
budaya akar rambut berbulu nalis 'Ledgeriana'
mempertahankan konstruksi konstitutif konstitutif
dari tryptophan decarboxylase dan strictosi-
makan cDNA synthase dari Catharanthus
roseus . Reproduksi Sel Tanaman 19: 191–96
55. Geerlings A, Martinez-Lozano Iba˜nez M,
Memelink J, van der Heijden R, Verpoorte
R. 2000. Kloning dan analisis molekuler
strictosidine β- D -glucosidase, suatu enzim
dalam biosintesis alkaloid indol terpenoid
di Catharanthus roseus . J. Biol. Chem
275: 3051–56
56. Gerardy R, Zenk MH. 1993. Formasi
salutaridine from ( R ) -reticuline oleh a
sitokrom P-450 yang terikat membran
zyme dari Papaver somniferum . Nabati-
kimia 32: 79-86
57. Gerardy R, Zenk MH. 1993. Purifica-
tion dan karakterisasi salutaridine:
NADPH 7-oksidoreduktase dari Papaver
somniferum . Fitokimia 34: 125–32
58. Goddijn OJM, de Kam RJ, Zanetti A,
Schilperoort RA, Hoge JHC. 1992. Auksin
dengan cepat mengatur transkripsi
gen tryptophan decarboxylase dari
Catharanthus roseus . Menanam Mol. Biol.
18: 1113–20
59. Goddijn OJM, Lohman FP, de Kam RJ,
Schilperoort RA, Hoge JHC. 1994.
urutan cleotide dari tryptophan de-
gen karboksilase dari Catharanthus roseus
dan ekspresi fusi gen tdc-gus A
di Nicotiana tabacum . Mol. Gen. Genet.
242: 217–25
60. Goddijn OJM, Pennings EJ, van der Helm
P, Schilperoort RA, Verpoorte R, Hoge
JHC. 1995. Ekspresi berlebihan dari trypto-
phan decarboxylase cDNA di Catharan-
dengan demikian kaps roseus mahkota empedu menghasilkan
peningkatan kadar tryptamine tetapi tidak di
produksi alkaloid terpenoid indol meningkat-
tion. Res Transgenik. 4: 315–23
61. Gundlach H, Mueller MJ, Kutchan TM,
Zenk MH. 1992. Asam Jasmonic adalah sig-
nd transduser pada tanaman yang diinduksi elisitor
kultur sel. Proc Natl. Acad. Sci. Amerika Serikat
89: 2389–93
62. Hallard D, van der Heijden R, Verpoorte
R, Lopes Cardoso MI, Memelink J, Hoge
JHC. 1997. Penangguhan transgenik berbudaya
sel-sel Nicotiana tabacum mengekspresikan
tryptophan decarboxylase dan strictosi-
makan cDNA synthase dari Catharanthus
roseus menghasilkan strikosidin saat menyusui
dari secologanin. Reproduksi Sel Tanaman 17: 50–54
63. Hamill JD, Robins RJ, Parr AJ, Evans
DM, Furze JM, Rhodes MJC. 1990. Over-
ekspresi ragi ornithine decarboxy-
lase gen dalam akar transgenik Nicotiana
rustica dapat menyebabkan peningkatan nikotin
penumpukan. Menanam Mol. Biol. 15: 27–38
64. Hashimoto T, Hayashi A, Amano Y, Kohno
J, Iwanari H, et al. 1991. Hysoscyamine
6β-hydroxylase, enzim yang terlibat dalam
biosintesis alkaloid tropana, terlokalisasi
di pericycle dari akar. J. Biol. Chem
266: 4648–53
65. Hashimoto T, Yamada Y. 1992. Tropane juga
biosintesis kaloid: regulasi dan aplikasi
kation. Dalam Proc. Annu. Penn. Simbol Negara
Plant Physiol., 7th , hlm. 122–34. Rockville:
Saya. Soc. Tumbuhan Physiol. tekan
66. Hashimoto T, Yamada Y. 1994. Alkaloid
biogenesis: aspek molekuler. Annu. Putaran.
Tumbuhan Physiol. Menanam Mol. Biol. 45: 257–85
67. Hashimoto T, Yun DJ, Yamada Y. 1993.
Produksi alkaloid tropana dalam genetika
kultur akar yang direkayasa. Phytochem-
istry 32: 713-18
68. Hauschild K, Pauli HH, Kutchan TM.
1998. Isolasi dan analisis gen bbe1
encoding enzim jembatan berberin
dari Eschscholzia poppy California
californica . Menanam Mol. Biol. 36: 473–
78
Halaman 32
2 April 2001
12: 7
Ulasan Tahunan
AR129-02
60
FACCHINI
69. Herminghaus S, Tholl D, Rügenhagen C,
Fecker LF, Leuschner C, Berlin J. 1996.
Tindakan metabolisme yang ditingkatkan dari bakteri
gen dekarboksilase lisin pada tembakau berbulu
membasmi kultur melalui fusi ke transit rbcS
urutan pengkodean peptida. Res Transgenik.
5: 193–201
70. Hibi N, T Fujita, Hatano M, Hashimoto
T, Yamada Y. 1992. Putresin N -methyl-
transferase di akar budidaya Hyoscya-
mus albus . Tumbuhan Physiol. 100: 826–35
71. Hibi N, Higashiguchi S, Hashimoto T, Ya-
mada Y. 1994. Ekspresi gen dalam tembakau
mutan rendah nikotin. Sel Tumbuhan 6: 723–35
72. Huang FC, Kutchan TM. 2000. Distribusi
tion dari morphinan dan benzo [ c ] phenanthri-
akumulasi transkrip gen alkaloid
di Papaver somniferum . Fitokimia
53: 555–64
73. Ignatov A, Clark WG, Cline SD, Psenak
M, Krueger RJ, Coscia CJ. 1996. Elici-
tation dari dihydrobenzophenanthridine
oksidase dalam sel Sanguinaria canadensis
budaya. Fitokimia 43: 1141-44
74. Imanishi S, Hashizume K, Nakakita M,
Kojima H, Matsubayashi Y, dkk. 1998
Induksi diferensial oleh metil jasmonat
gen yang mengkode ornithine decarboxylase
dan enzim lain yang terlibat dalam nikotin
biosintesis dalam kultur sel tembakau. Menanam
Mol. Biol. 38: 1101-11
75. Jouhikainen K, Lindgren L, Jokelainen T,
Hiltunen R, Teeri TH, Oksman-Caldentey
KM. 1999. Peningkatan skopolamin
produksi di Hyoscyamus muticus L.
budaya akar berbulu oleh rekayasa genetika.
Planta 208: 545–51
76. Kammerer L, De-Eknamkul W, Zenk MH.
1994. Enzimatik 12-hidroksilasi dan 12-
O- metilasi dihydrochelirubine pada di-
pembentukan hydromacarpine oleh Thalictrum
bulgaricum . Fitokimia 36: 1409–16
77. Kanegae T, Kajiya H, Amano Y,
Hashimoto T, Yamada Y. 1994. Spesies-
ekspresi bergantung dari hyoscyamine
Gen 6β-hidroksilase dalam pericycle.
Tumbuhan Physiol. 105: 483–90
78. Kato M, Kanehara T, Shimizu H, Suzuki
T, Gillies FM, dkk. 1996. Kafein biosin-
tesis dalam daun muda Camellia sinen-
sis : studi in vitro tentang N- metiltransferase
aktivitas yang terlibat dalam konversi xan-
thosine hingga kafein. Physiol. Plant 98: 629–
36
79. Kato M, Mizuno K, Fujimura T, Iwama M,
Irie M, dkk. 1999. Pemurnian dan karakteristik
asterisasi kafein sintase dari teh
Daun-daun. Tumbuhan Physiol. 120: 579–86
80. Kawalleck P, Keller H, Hahlbrock K,
Scheel D, Somssich IE. 1993. A patogen-
gen responsif dari peterseli mengkode ty-
rosine decarboxylase. J. Biol. Chem
268: 2189–94
81. Kraus PFX, Kutchan TM. 1995. Molekul
kloning dan ekspresi heterolog dari
sebuah pengkodean cDNA berbamunine synthase,
a CO fenol-coupling sitokrom P-450
dari tanaman tinggi Berberis stolonifera .
Proc Natl. Acad. Sci. AS 92: 2071–
75
82. Kutchan TM, Bock A, Dittrich H. 1994.
Ekspresi heterolog dari strikosidin
sintase dan enzim jembatan berberin di
kultur sel serangga. Phytochemistry 35: 353–
60
83. Kutchan TM, Dittrich H. 1995. Karakter
terisasi dan mekanisme berber-
inetelah menjembatani enzim, flaviny secara kovalen
oksidase benzophenanthridine yang terkontrol
biosintesis alkaloid pada tanaman tingkat tinggi.
J. Biol. Chem 270: 24475–81
84. Kutchan TM, Hampp N, Lottspeich F,
Beyreuther K, Zenk MH. 1988. cDNA
klon untuk strikosidin sintase dari Rau-
volfia serpentina : Penentuan urutan DNA
bangsa dan ekspresi dalam bahasa Escherichia coli .
FEBS Lett. 237: 40–44
85. Kutchan TM, Zenk MH. 1993. Enzy-
mologi dan biologi molekuler dari ben-
biosintesis alkaloid zophenanthridine. J.
Res Tanaman 3: 165–73
86. Leech MJ, May K, Hallard D, Verpoorte R,
De Luca V, Christou P. 1998. Ekspresi
dari dua gen berturut-turut dari yang sekunder
Halaman 33
2 April 2001
12: 7
Ulasan Tahunan
AR129-02
61
jalur metabolisme dalam tembakau transgenik:
keragaman molekuler memengaruhi tingkat
tekanan dan akumulasi produk. Menanam
Mol. Biol. 38: 765-74
87. Lenz R, Zenk MH. 1995. Asetil coen-
zyme A: salutaridinol-7- O -acetyltransfer-
ase dari Papaver somniferum plant cell-
budaya. J. Biol. Chem 270: 31091–96
88. Lenz R, Zenk MH. 1995. Pemurnian
dan sifat-sifat kodeinon reduktase
(NADPH) dari sel Papaver somniferum
budaya dan tanaman dibedakan. Eur. J.
Biokem. 233: 132–39
89. Loeffler S, Zenk MH. 1990. The hydrox-
langkah ylation di jalur biosintesis
mulai dari norcoclaurine ke reticuline.
Fitokimia 29: 3499-503
90. Lopes Cardoso MI, Meijer AH, Rueb S,
Machado JA, Memelink J, Hoge JHC.
1997. Wilayah promotor yang mengontrol
ekspresi basal dan elicitor-inducible lev-
elemen NADPH: sitokrom P450 kembali
gen ductase ( Cpr ) dari Catharanthus
roseus mengikat faktor nuklir GT-1. Mol.
Gen. Genet. 256: 674–81
91. López-Meyer M, Nessler CL. 1997. Tryp-
tophan decarboxylase dikodekan oleh dua
gen yang diatur secara mandiri di Camp-
totheca acuminata yang berbeda
diekspresikan selama perkembangan dan stres.
Plant J. 11: 1667–75
92. Luijendijk TJC, Stevens LH, Verpoorte R.
1998. Pemurnian dan karakterisasi
strictosidine β- D -glucosidase dari Catha-
kultur suspensi sel ranthus roseus .
Tumbuhan Physiol. Biokem. 36: 419–25
93. Luijendijk TJC, Vandermeijden E, Ver-
poorte R. 1996. Keterlibatan
sidine sebagai bahan kimia pertahanan di Catha-
ranthus roseus . J. Chem. Ecol. 22: 1355–66
94. Madyastha KM, Ridgway JE, Dwyer JG,
Coscia CJ. 1977. Lokasi subselular-
tion dari sitokrom P-450-dependen
monooxygenase dalam vesikel yang lebih tinggi
menanam Catharanthus roseus . J. Cell Biol.
72: 303–13
95. Mahady GB, Beecher CW. 1994. Elicitor-
alkaloid benzophenanthridine terstimulasi
biosintesis dalam suspensi akar darah
Tures dimediasi oleh kalsium. Phytochem-
istry 37: 415-19
96. Mahady GB, Liu C, Beecher CW. 1998
Keterlibatan protein kinase dan protein G
teins dalam transduksi sinyal
biosintesis alkaloid zophenanthridine.
Phytochemistry 48: 93-102
97. Maldonado-Mendoza IE, Burnett RJ,
López-Meyer M, Nessler CL. 1994. Reg-
ulasi 3-hydroxy-3-methylglutaryl-
coenzyme A reductase dengan melukai dan
metil jasmonate: implikasi untuk
produksi alkaloid anti-kanker. Menanam
Jaringan Sel. Kultus Organ. 38: 351–56
98. Maldonado-Mendoza IE, López-Meyer
M, Galef JR, Burnett RJ, Nessler CL.
1996. Analisis molekuler dari anggota baru
dari opium poppy tyrosine / 3,4-
dihydroxyphenylalanine decarboxylase
keluarga gen. Tumbuhan Physiol. 110: 43–49
99. Maldonado-Mendoza IE, Vincent RM,
Nessler CL. 1997. Karakter molekuler-
asi dari tiga berbeda diekspresikan
anggota dari Camptotheca acuminata
Pengurangan CoA 3-hydroxy-3-methylglutaryl
keluarga gen tase ( HMGR ). Menanam Mol.
Biol. 34: 781–90
100. MarquesIA, BrodeliusPE.1988.Elicitor-
diinduksi L -tyrosine decarboxylase dari
kultur suspensi sel tanaman: I. Induksi
dan pemurnian. Tumbuhan Physiol.
88: 47–51
101. Matsuda J, Okabe S, Hashimoto T,
Yamada Y. 1991. Kloning molekuler dari
hyoscyamine 6β-hydroxylase, a 2-
tergantung oxoglutarate
dioksigenase,
dari akar budidaya Hyoscyamus niger .
J. Biol. Chem 266: 9460-64
102. Mazzafera P, Wingsle G, Olsson O,
Sandberg G. 1994. S -Adenosyl- L -
metionin: theobromine
1- N- metil-
transferase, enzim yang mengkatalisasi
sintesis kafein dalam kopi. Nabati-
kimia 37: 1577–84
103. McKnight TD, Bergey DR, Burnett RJ,
Halaman 34
2 April 2001
12: 7
Ulasan Tahunan
AR129-02
62
FACCHINI
Nessler CL. 1991. Ekspresi rasa iri-
aktif secara matic dan tepat sasaran
strikosidin sintase dalam to- transgenik
tanaman tembakau. Planta 185: 148–52
104. McKnight TD, Roessner CA, Devagupta
R, Scott AI, Nessler CL. 1990. Nukleotida
urutan cDNA yang mengkode vaksin
protein urik strikosidin sintase dari
Catharanthus roseus . Asam Nukleat Res.
18: 4939
105. McLusky SR, Bennett MH, Beale MH,
Lewis MJ, Gaskin P, Mansfield JW. 1999.
Perubahan dinding sel dan akses lokal
mulasi feruloyl-3 -methoxytyramine
pada epidermis bawang di lokasi percobaan
penetrasi oleh Botrytis allii dikaitkan
dengan polarisasi aktin, aktivitas peroksidase
dan penindasan biosintesis flavonoid
tesis. Plant J. 17: 523–34
106. Meehan TD, Coscia CJ. 1973. Hidro-
xylation dari geraniol dan nerol oleh mono-
oksigenase dari Vinca rosea . Biokem.
Biophys. Res. Komunal. 53: 1043–48
107. Meijer AH, Cardoso MIL, Voskuilen JT,
de Waal A, Verpoorte R, Hoge JHC. 1993
Isolasi dan karakterisasi cDNA
klon dari Catharanthus roseus encod-
dalam NADPH: sitokrom P-450 reduksi
tase, enzim yang penting untuk reaksi
dikatalisis oleh sitokrom P-450 mono-
oksigenase dalam tanaman. Tanam J. 4: 47–60
108. Meijer AH, Verpoorte R, Hoge JHC.
1993. Regulasi enzim dan gen
terlibat dalam bio alkaloid alkaloid terpoloid indol
sintesis dalam Catharanthus roseus . J. Plant
Res. 3: 145–64
109. Menke FL, Juara A, Kijne JW,
Memelink J. 1999. Sebuah novel jasmonate-
dan elemen respons pemilih dalam
periwinkle biosit metabolit sekunder
gen thetic Str berinteraksi dengan jasmonate-
dan transi-domain AP2 yang tidak dapat digerakkan oleh pemilih
faktor skrip, ORCA2. EMBO J.
18: 4455–63
110. Menke FL, Parchmann S, Mueller MJ,
Kijne JW, Memelink J. 1999. Libatkan-
ment dari jalur octadecanoid dan
protein fosforilasi dalam elicitor- jamur
diinduksi ekspresi terpenoid indole
gen biosintesis alkaloid dalam Catharan-
demikian roseus . Tumbuhan Physiol. 119: 1289–96
111. Mérillon JM, Ouelhazi L, Doireau P,
Chénieux JC, Rideau M. 1989. Meta-
perubahan bolik dan produksi alkaloid
dalam sel-sel yang terhabituasi dan tidak terhabituasi dari
Catharanthus roseus tumbuh dalam hormon-
media bebas. Membandingkan hormon-
sel non-terhabituasi yang dirampas dengan
sel yang dikonsumsi. J. Plant Physiol. 134: 54–60
112. Michael AJ, Furze JM, Rhodes MJC,
Burtin D. 1996. Kloning molekuler dan
identifikasi fungsional tanaman atau-
nithine decarboxylase cDNA. Biokem. J.
314: 241–48
113. Moreno PRH, van der Heijden R,
Verpoorte R. 1993. Efek terpenoid
pemberian makan prekursor dan elisitasi pada
pembentukan alkaloid indol dalam sus sus
budaya pensiun Catharanthus roseus .
Reproduksi Sel Tanaman 12: 702–5
114. Morishige T, Tsujita T, Yamada Y, Sato F.
2000. Karakterisasi molekuler dari
S -adenosyl- L -methionine: 3 -hydroxy-
N -methylcoclaurine-4 - O -methyltransfe-
rase isoquinoline alkaloid bio-
sintesis dalam Coptis japonica . J. Biol.
Chem 275: 23398–405
115. Mueller MJ, Brodschelm W, Spannagl E,
Zenk MH. 1993. Pensinyalan dalam elicita-
Proses mediasi melalui mediasi
jalur tadecanoid menuju ke jasmonic
asam. Proc Natl. Acad. Sci. AS 90: 7490–
94
116. Muemmler S, Rueffer M, Nagakura
N, Zenk MH. 1985. S -Adenosyl- L -
methionine: ( S ) -scoulerine 9- O -methyl-
transferase, yang sangat stereo- dan
Enzim spesifik regio dalam tetrahydropro-
biosintesis toberberin. Rep sel tumbuhan
4: 36–39
117. Nakajima K, Hashimoto T. 1999. Dua
tropinone reductases, yang mengkatalisis oposisi
pengurangan stereospesifik di tropana
biosintesis alkaloid, terlokalisasi di
Halaman 35
2 April 2001
12: 7
Ulasan Tahunan
AR129-02
63
akar tanaman dengan pat-spesifik sel yang berbeda
terns. Fisiol Sel Tanaman. 40: 1099-107
118. Nakajima K, Hashimoto T, Yamada Y.
1993. Dua tropinone reductases dengan berbagai
stereospesifik ferent adalah rantai pendek
dehydrogenases berevolusi dari
leluhur mon. Proc Natl. Acad. Sci. Amerika Serikat
90: 9591-95
119. Nakajima K, Hashimoto T, Yamada Y.
1994. stereospecificity berlawanan dari dua
tropinone reductases diberikan oleh
situs pengikat media. J. Biol. Chem
269: 11695–98
120. Nakajima K, Oshita Y, Yamada Y,
Hashimoto T. 1999. Struktur dan bangunan
pola penekanan dua re- tropinon
gen duktase dari Hyoscyamus niger .
Biosci. Bioteknol. Biokem. 63: 1756-64
121. Nakajima K, Yamashita A, Akama H,
Nakatsu T, Kato H, dkk. 1998. Crys-
struktur tal dari dua reduktase tropinon:
stereospesifik reaksi berbeda dalam
lipatan protein yang sama. Proc Natl. Acad. Sci.
AS 95: 4876–81
122. O'Keefe BR, Beecher CWW. 1994. Isola-
tion dan karakterisasi S- adenosyl- L -
methionine :( S ) -tetrahydroberberine- cis-
N- metiltransferase dari suspensi
budaya Sanguinaria canadensis L.
Tumbuhan Physiol. 105: 395–403
123. Ouwerkerk PBF, Hallard D, Memelink
J. 1999. Identifikasi lampu UV-B-
daerah responsif dalam mempromosikan
41: 491–503
124. Ouwerkerk PB, Memelink J. 1999. A
Elemen G-box dari Catharanthus ro-
menggugat pro-gen gen strictosidine synthase ( Str )
moter menganugerahkan ekspresi spesifik benih
di tanaman tembakau transgenik. Mol. Jenderal
Genet. 261: 635–43
125. Ouwerkerk PB, Memelink J. 1999.
Wilayah promotor yang responsif-elit di
39: 129–36
126. Ouwerkerk PB, Trimborn TO, Hilliou F,
Memelink J. 1999. Faktor nuklir GT-1
dan 3AF1 berinteraksi dengan banyak
quences dalam promotor Tdc
gen dari Madagaskar periwinkle: GT-
1 terlibat dalam sinar UV yang diinduksi
tekanan. Mol. Gen. Genet. 261: 610–
22
127. Park SU, Facchini PJ. 2000. Agro-
transformasi genetik yang dimediasi bakteri
Poppy California, Eschscholzia
californica Cham., melalui embrio somatik
asal. Reproduksi Sel Tanaman 19: 1006-12
128. Taman
SU, Facchini PJ. 2000
Agrobacterium -mediated transformation
opium poppy, Papaver somniferum
L., melalui organogenesis pucuk. J. Plant
Physiol. 157: 207–14
129. Park SU, Facchini PJ. 2000. Agrobac-
terim rhizogenes -mediated transforma-
opium poppy, Papaver somniferum
L., dan poppy California, Eschscholzia
californica Cham., kultur akar. J. Exp.
Bot 51: 1005–16
130. Park SU, Johnson AG, Penzes-Yost C,
Facchini PJ. 1999. Analisis promotor
dari
tyrosine / dihydroxyphenylalanine
dekarboksilase dan jembatan berberin
gen enzim yang terlibat dalam benzyliso-
biosintesis alkaloid kuinolin dalam opium
opium. Menanam Mol. Biol. 40: 121–31
131. Pasquali G, Erven AS, Ouwerkerk PB,
Menke FL, Memelink J. 1999. The
promotor dari strikosidin sintase
gen dari periwinkle menganugerahkan elicitor-
ekspresi diinduksi dalam to- transgenik
tembakau dan mengikat faktor nuklir GT-1 dan
GBF. Menanam Mol. Biol. 39: 1299–310
132. Pasquali G, Goddijn OJM, de Waal A,
Verpoorte R, Schilperoort RA, et al. 1992.
Regulasi terkoordinasi dari dua industri indol
kendurkan gen biosintetik dari Catharan-
demikian roseus oleh auksin dan pemilih. Menanam
Mol. Biol. 18: 1121–31
133. Pauli HH, Kutchan TM. 1998. Molec-
kloning ular dan heterogenitas fungsional
ekspresi gous dari dua alel encoding
Halaman 36
2 April 2001
12: 7
Ulasan Tahunan
AR129-02
64
FACCHINI
( S ) - N -metylcoclaurine 3 -hydroxylase
(CYP80B1), sebuah metil jasmonate- baru
sitokrom yang diinduksi P-450 tergantung
mono-oxygenase dari benzylisoquinoline
biosintesis alkaloid. Plant J. 13: 793–
801
134. PoulsenC, GoddijnOJM, HogeJHC, Ver-
poorte R. 1994. Anthranilate synthase dan
kegiatan mutase chorismate dalam transgenik
tanaman tembakau mengekspresikan triptofan secara berlebihan
decarboxylase dari Catharanthus roseus .
Res Transgenik. 3: 43–49
135. Kekuatan R, Kurz WGW, De Luca V.
1990. Pemurnian dan karakterisasi
dari acetylcoenzyme A: deacetylvindo-
baris 4- O -acetyltransferase dari Catha-
ranthus roseus . Lengkungan. Biokem. Biophys.
279: 370–76
136. Rastogi R, Dulson J, Rothstein SJ. 1994
Kloning tomat ( Lycopersicon es-
culentum Mill.) arginine decarboxylase
gen dan ekspresinya selama pematangan buah
ing. Tumbuhan Physiol. 103: 829–34
137. Roos W, Dordschbal B, Steighardt J,
Hieke M, Weiss D, Saalbach G. 1999.
Bergantung pada redoks, berpasangan G-protein
fosfolipase A dari membran plasma
terlibat dalam elisitasi alkaloid
biosintesis di Eschscholtzia californica .
Biokim. Biophys. Acta 1448: 390-402
138. Roos W, Evers S, Hieke M, Tschoepe M,
Schumann B. 1998. Pergeseran intraseluler
distribusi pH lar sebagai bagian dari sinyal
nal mekanisme yang mengarah pada elisitasi
alkaloid benzophenenthridine. Menanam
Physiol. 118: 349-64
139. Rosco A, Pauli HH, Priesner W, Kutchan
TM. 1997. Kloning dan mantan heterolog
penekanan sitokrom P-450 reduktase
dari Papaveraceae. Lengkungan. Biokem.
Biophys. 348: 369–77
140. Rueffer M, Amman M, Zenk MH.
1986. S -Adenosyl- L -methionine: colum-
bamine- O- metil transferase, kompart
enzim mentalized dalam protoberberine
biosintesis. Reproduksi Sel Tanaman 3: 182–85
141. RuefferM, El-ShagiH, NagahuraN, Zenk
MH. 1981. ( S ) -Norlaudanosoline syn-
thase: enzim pertama dalam benzyliso-
jalur biosintetik kuinolin. FEBS
Lett. 129: 5–9
142. Rueffer M, Zenk MH. 1987. Pra-jauh
kursor dari alkaloid benzylisoquinoline
dan pembentukan enzim mereka. Z. Natur-
forsch. 42C: 319–32
143. Rueffer M, Zenk MH. 1987. Enzimatik
pembentukan protopin oleh mikrosomal
sistem sitokrom P-450 dari Corydalis
Vaginans . Tetrahedron Lett. 28: 5307-10
144. Rueffer M, Zenk MH. 1994. Canadine
sintase dari sel Thalictrum tuberosum
budaya mengkatalisasi pembentukan
jembatan methylenedioxy di berberine syn-
tesis. Fitokimia 36: 1219–23
145. Rueffer M, Zumstein G, Zenk MH. 1990.
Pemurnian parsial S- adenosyl- L -meth-
ionine :( S ) -tetrahydroprotober-berine- cis
N- metiltransferase dari suspensi
sel-sel yang dikultur dari Eschscholzia dan
Corydalis . Fitokimia 29: 3727–33
146. Sato F, Takeshita N, Fitchen JH, Fujiwara
H, Yamada Y. 1993. S -Adenosyl- L -meth-
ionine: scoulerine-9- O -methyltransferase
dari sel Coptis japonica yang dikultur .
Fitokimia 32: 659–64
147. Sato F, Tsujita T, Katagiri Y, Yoshida
S, Yamada Y. 1994. Pemurnian dan
karakterisasi S -adenosyl- L -methio-
sembilan: noncoclaurine 6- O -methyltransfer-
ase dari sel Coptis japonica yang dikultur .
Eur. J. Biochem. 225: 125–31
148. Schiel O, Witte I, Berlin J. 1987. Geran-
aktivitas 10-hidroksilase dan hubungannya
tion untuk monoterpene indole alkaloid ac-
akumulasi dalam kultur suspensi sel
dari Catharanthus roseus . Z. Naturforsch.
42c: 1075–81
149. Schmeller T, Latz-Brüning B, Wink M.
1997. Aktivitas biokimia dari berber-
In mediator mediasi palinina dan sanguinarine
pertahanan kimia terhadap mikroorganisme
dan herbivora. Phytochemistry 44: 257–
66
150. Schmelzer E, Kr üger-Lebus S, Hahlbrock
Halaman 37
2 April 2001
12: 7
Ulasan Tahunan
AR129-02
65
K. 1989. Pola temporal dan spasial
ekspresi gen di sekitar situs percobaan
infeksi jamur pada daun peterseli. Menanam
Sel 1: 993-1001
151. Schröder G, Unterbusch E, Kaltenbach
M, Schmidt J, Strack D, et al. 1999. Cahaya-
diinduksi sitokrom P450 tergantung en-
zyme dalam biosintesis alkaloid indol:
tabersonine 16-hydroxylase. FEBS Lett.
458: 97–102
152. Schulthess BH, Morath P, Baumann TW.
1996. Biosintesis kafein dimulai dengan
pembentukan metabolik yang disalurkan
7-metil-XMP: hipotesis baru. Nabati-
kimia 41: 169–75
153. Schumacher HM, Gundlach H, Fiedler
F, Zenk MH. 1987. Penggalian manfaat
sintesis alkaloid zophenanthridine di Indonesia
Kultur sel Eschscholtzia californica .
Reproduksi Sel Tanaman 6: 410–13
154. Schumacher HM, Zenk MH. 1988. Par-
pemurnian dan karakterisasi
hydrobenzophenanthridine oxidase dari
Penangguhan sel Eschscholtzia californica
budaya. Reproduksi Sel Tanaman 7: 43–46
155. SongstadDD, DeLucaV, BrissonN, Kurz
WGW, Nessler CL. 1990. Tingkat tinggi
akumulasi tryptamine dalam to- transgenik
bacco expressing tryptophan decarboxy-
lemah Tumbuhan Physiol. 94: 1410–13
156. Songstad DD, Kurz WGW, Nessler
CL. 1991. Akumulasi Tyramine di
Nicotiana tabacum ditransformasikan dengan a
gen decarboxylase tryptophan chimeric.
Fitokimia 30: 3245–46
157. Sottomayor M, Lopez-Serrano M, Di-
Cosmo F, Ros-Barcelo A. 1998. Purifi-
kation dan karakterisasi alfa-3 4 -
anhydrovinblastine synthase (peroxidase-
suka) dari Catharanthus roseus (L.) G.
Mengenakan. FEBS Lett. 428: 299–303
158. Stadler R, Kutchan TM, Loeffler S,
Nagakura N, Kasel B, Zenk MH. 1987.
Revisi langkah-langkah awal reticuline
biosintesis. Tetrahedron Lett. 28: 1251–
54
159. Stadler R, Kutchan TM, Zenk MH. 1989.
Norcoclaurine adalah perantara tengah
dalam benzylisoquinoline alkaloid biosynthe-
sis. Fitokimia 28: 1083–86
160. Stadler R, Zenk MH. 1993. The purifica-
dan karakterisasi dari suatu siklus unik
enzim tochrome P-450 dari Berberis
kultur sel tanaman stolinifera . J. Biol.
Chem 268: 823–31
161. Steffens P, Nagakura N, Zenk MH. 1985.
Pemurnian dan karakterisasi
enzim jembatan berberin dari Berberis
kultur sel beanian . Fitokimia
24: 2577–83
162. Stevens LH, Blom TJM, Verpoorte R.
1993. Lokalisasi subseluler dari tryp-
tophan decarboxylase, synos ketatosidin
thase dan strikosidin glukosidase dalam sus-
sel-sel berbudaya pensiun dari Catharanthus
roseus dan Tabernaemontana divaricata .
Reproduksi Sel Tanaman 12: 563-76
163. St-Pierre B, De Luca V. 1995. Sebuah cy-
tochrome P-450 monooxygenase cat-
alyzes langkah pertama dalam konversi
tabersonine hingga vindoline di Catharanthus
roseus . Tumbuhan Physiol. 109: 131–39
164. St-Pierre B, Laflamme P, Alarco A-
M, De Luca V. 1998. Terminal
O -acetyltransferase terlibat dalam vindo-
garis biosintesis mendefinisikan kelas baru
protein yang bertanggung jawab untuk koenzim A-
transfer asil tergantung. Plant J. 14: 703–
13
165. St-Pierre B, Vázquez-Flota FA, De Luca
V. 1999. Kompartemen multiseluler
dari Catharanthus roseus alkaloid biosyn-
tesis memprediksi translokasi antar sel
dari perantara jalur. Sel tanaman
11: 887–900
166. Suzuki H, Koike Y, Murakoshi I, Saito
K. 1996. Lokalisasi subseluler dari asil-
transferase untuk alkaloid quinolizidine
biosintesis pada Lupinus . Fitokimia
42: 1557–62
167. Suzuki K, Yamada Y, Hashimoto T. 1999.
Ekspresi Atropa belladonna pu-
trescine N -methyltransferase gen dalam root
pericycle. Fisiol Sel Tanaman. 40: 289–97
Halaman 38
2 April 2001
12: 7
Ulasan Tahunan
AR129-02
66
FACCHINI
168. Suzuki K, Yun DJ, Chen XY, Yamada
Y, Hashimoto T. 1999. An Atropa bel-
ladonna hyoscyamine 6-β-hydroxylase
gen secara diferensial diekspresikan dalam akar
pericycle dan kepala sari. Menanam Mol. Biol.
40: 141–52
169. Suzuki T, Ashihara H, Waller GR. 1992.
Metabolisme alkalin purin dan purin di Indonesia
Tanaman Camellia dan Coffea . Phytochem-
istry 31: 2575-84
170. Takeshita N, Fujiwara H, Mimura H,
Fitchen JH, Yamada Y, Sato F. 1995.
Kloning dan karakterisasi molekuler
dari S -adenosyl- L -methionine: scoulerine-
9- O- metiltransferase dari hasil kultur
sel-sel Coptis japonica . Sel tanaman
Physiol. 36: 29–36
171. Tanahashi T, Zenk MH. 1990. Peneliti di
duksi dan karakterisasi mikroba
mal protopine-6-hydroxylase, pusat
enzim dalam alkaloid benzophenanthridine
biosintesis. Fitokimia 29: 1113–
22
172. Trezzini GF, Horrichs A, Sommssich
YAITU. 1993. Isolasi pertahanan diduga
gen terkait dari Arabidopsis thaliana
dan ekspresi dalam pengobatan elisitor jamur
sel. Menanam Mol. Biol. 21: 385-89
173. Unterlinner B, Lenz R, Kutchan TM.
1999. Kloning molekuler dan fungsional
ekspresi kodeinon reduktase:
Enzim kedua dari belakang di biosin morfin
tesis dalam opium poppy Papaver
niferum . Plant J. 18: 465–75
174. Vázquez-Flota FA, De Carolis E, Alarco
AM, De Luca V. 1997. Kloning molekuler
dan karakterisasi deacetoxyvin-
doline 4-hydroxylase, 2-oxoglutarate
dioksigenase tergantung yang terlibat dalam
biosintesis vindoline di Catharan-
demikian roseus (L.) G. Don. Menanam Mol. Biol.
34: 935–48
175. Vázquez-Flota FA, De Luca V. 1998.
Peraturan pengembangan dan cahaya PT
desacetoxyvindoline 4-hydroxylase in
Catharanthus roseus (L.) G. Don. Menanam
Physiol. 117: 1351–61
176. Vázquez-Flota FA, De Luca V. 1998.
Jasmonate memodulasi pengembangan dan
biosintesis alkaloid yang diatur cahaya pada
Catharanthus roseus . Fitokimia
49: 395-402
177. Whitmer S, Canel C, Hallard D,
Goncalves C, Verpoorte R. 1998. Pengaruh
ence ketersediaan prekursor pada alkaloid
akumulasi oleh garis sel transgenik
dari Catharanthus roseus . Tumbuhan Physiol.
116: 853–57
178. Wink M. 1999. Metabo sekunder tanaman
lites dari tanaman tingkat tinggi: biokimia,
fungsi dan bioteknologi. Dalam Biochem-
Kesejahteraan Metabolisme Sekunder Tumbuhan,
Ulasan nual Plant , ed. M Wink, 2: 1-16.
Sheffield: Akademik Sheffield
179. Wink M, Hartmann T. 1982. Lokalisasi
dari enzim alkaloid quinolizidine
biosintesis dalam kloroplas daun Lupi
nus polyphyllus . Tumbuhan Physiol. 70: 74–77
180. Yamamoto H, Katano N, Ooi A, Inoue
K. 2000. Secologanin synthase yang
mengkatalisasi pembelahan oksidatif
loganin menjadi secologanin adalah sitokrom
P450. Phytochemistry 53: 7-12
181. Yao K, De Luca V, Brisson N. 1995. Cre-
asi sink metabolisme untuk triptofan
mengubah jalur fenilpropanoid dan
kerentanan kentang terhadap Phytoph-
thora infestans . Sel Tanaman 7: 1787-99
182. Yu M, Facchini PJ. 2000. cDNA
kloning dan karakterisasi ( S ) - N -
methylcoclaurine 3 -hydroxylase (CYP-
80B1) dari opium poppy yang dirawat elicitor
kultur suspensi sel. Tumbuhan Physiol.
122: 1457
183. Yun DJ, Hashimoto T, Yamada Y.
1992. Teknik metabolisme obat-obatan
nal tanaman: transgenik Atropa belladonna
dengan komposisi alkaloid yang ditingkatkan.
Proc Natl. Acad. Sci. AS 89: 11799–803
184. Yun DJ, Hashimoto T, Yamada Y. 1993.
Tanaman tembakau transgenik dengan dua con
reaksi oksidasi secutive dikatalisasi
oleh hyoscyamine 6β-hydroxylase. Biosci.
Bioteknologi. Biokem. 57: 502–3
Halaman 39
Tinjauan Tahunan Fisiologi Tumbuhan dan Biologi Molekuler Tumbuhan
Volume 52, 2001
ISI
LIMA TAHUN SEBAGAI FISIOLOGI TANAMAN, James HM Henderson
1
ALKALOID BIOSYNTHESIS DALAM TANAMAN: Biokimia, Biologi Sel,
Regulasi Molekuler, dan Aplikasi Teknik Metabolik, Peter J
Facchini
29
BAGAIMANA GIBBERELLIN MENGATUR PERTUMBUHAN TANAMAN DAN
PEMBANGUNAN: Analisis Genetik Molekuler Gibberellin
Pensinyalan, Donald E Richards, Kathryn E King, Tahar Ait-ali, Nicholas P
Harberd
67
METABOLISME DAN AKSI CYTOKININ, David WS Mok,
Machteld C Mok
89
METABOLISME SATU KARBON DALAM TANAMAN YANG LEBIH TINGGI, Andrew D
Hanson, Sanja Roje
119
Ritme CIRCADIAN DALAM TANAMAN, C Robertson McClung
139
PEMANFAATAN MACRONUTRIEN OLEH PHOTOSYNTHETIC
EUKARYOT DAN KAIN INTERAKSI, Arthur
Grossman, Hideki Takahashi
163
FOSFATIKA TANAMAN, Xuemin Wang
211
PENGEMBANGAN ENDOSPERM: Cellularisasi dan Nasib Sel
Spesifikasi, Odd-Arne Olsen
233
FITUR MEKANISTIK DARI MO-MENGANDUNG
NITROGENASE, Jason Christiansen, Dennis R Dean, Lance C Seefeldt
269
TEKNIK MOLEKULER FOTOSYNTHESIS C4, Makoto
Matsuoka, Robert T Furbank, Hiroshi Fukayama, Mitsue Miyao
297
MESIN DIVISI PLASTID, Katherine W Osteryoung,
Rosemary S McAndrew
315
VARIASI DALAM BIOSINESESIS BIBIT LIMBAH PENYIMPANAN,
Toni Voelker, Anthony J Kinney
335
CHLAMYDOMONAS SEBAGAI MODEL ORGANISME, Elizabeth H Harris
363
EMISI ISOPREN DARI TANAMAN, Thomas D Sharkey, Sansun
Yeh
407
BIOSINTHESIS ASAM ASKORBIK DALAM TANAMAN: A Renaissance,
Nicholas Smirnoff, Patricia L Conklin, Frank A Loewus
437
TONOPLAST TRANSPORTERS: Organisasi dan Fungsi,
Masayoshi Maeshima
469
MENDAFTARKAN METABOLISME TANAMAN DENGAN NMR, R George Ratcliffe,
Yair Shachar-Hill
499
FUNGSI DAN MEKANISME PEMERIKSAAN ANION ORGANIK
DARI ROOTS TANAMAN, PR Ryan, E Delhaize, DL Jones
527
MITOCHONDRIA TANAMAN DAN STRES OKSIDASI: Electron
Transport, Pergantian NADPH, dan Metabolisme Oksigen Reaktif
Spesies , Ian M Møller
561
FOTO SISTEM I: Fungsi dan Fisiologi, Parag R Chitnis
593
TRANSDUCTION SINYAL GUARD CELL, Julian I Schroeder, Gethyn
J Allen, Veronique Hugouvieux, Juni M Kwak, David Waner
627
Halaman 40
TRANSPORTER BERTANGGUNG JAWAB ATAS UPTAK DAN
PARTITIONING OF SOLITES NITROGEN, LE Williams, AJ
Tukang giling
659
RESIN DEFENSIF BIOSINESESIS DI KONIFER, Susan Trapp,
Rodney Croteau
689
BIOLOGI MOLEKULER DARI MATURASI BUAH DAN
RIPENING, Jim Giovannoni
725
CYTOKINESIS DAN BANGUNAN DARI PELAT SEL DALAM TANAMAN, Desh Pal S Verma
751
PROTEIN YANG MENGINAPASI RIBOSOME: Perspektif Tanaman, Kirsten
Nielsen, Rebecca S Boston
785
PLANT PLASMA MEMBRANE H + -ATPases: Powerhouses for Nutrient
Serapan, Michael G Palmgren
817
MEKANISME COHESION-TENSION DAN AKUISISI
AIR DENGAN AKAR TANAMAN, Ernst Steudle
847

2 April 2001 Translate

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

2 April 2001 Translate

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

2 April 2001

Anda mungkin juga menyukai